專利名稱：腫瘤壞死因子-α抑制肽及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物活性肽及其制備方法。本發(fā)明還涉及腫瘤壞死因子-a (TNF-a) 抑制肽及其制備方法。本發(fā)明還涉及包含所述肽分子的藥物組合物及其在治療腫瘤壞死因子-a (TNF-a)介導(dǎo)的炎性病癥例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、克羅恩氏(Crohn's) 病和敗血病等中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
細胞因子是一類由活化的免疫細胞即B細胞、T細胞、單核細胞和巨噬細胞產(chǎn)生的信號傳導(dǎo)蛋白。細胞因子包括白介素(IL-1至IL-23)、干擾素(α、β和Y)以及TNF-a 和 β 的家族(Janeway CA 等，1999，《免疫學(xué)》第四版(Immunobiology,4th Ed.)New York, Garland，1999 ;RoittI 等，2002，《免疫學(xué)》第五版(Immunology 5th ed.) London, Mosby, 2002)。已經(jīng)提出了 IL-I和TNF-α在疾病例如敗血病和自身免疫病癥例如RA、皮膚病、炎癥性腸病中作為炎性應(yīng)答的關(guān)鍵介導(dǎo)物的重要作用(Locksley RM等，2001，Cell 104(4) 487-501 ；Feldmann M 等，1996，Ann. Rev. Immunol. 14 :397-440 ；Buchan G 等，1988，Clin. Exp.Immunol. 73 :449-455 ；Canto E 等，2006, Clin.Immunol. 119(2) 156-165 ；Fantuzzi F 等，2008，Expert Opi. Ther. Targets 12 (9) : 1085-96)。細胞因子調(diào)控研究進一步表明，TNF-α是造成炎性病理的最重要的細胞因子(Feldmann等，1999，Ann. Rheum. Dis. 58 (Supp 1 1)127-131)。TNF-α最初是作為引起小鼠腫瘤出血性壞死的分子而被發(fā)現(xiàn)(Carswel 1等， 1975，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 72 :3666)。第二條路線研究據(jù)認(rèn)為造成惡病質(zhì)狀態(tài)的被稱為“惡液質(zhì)素”的血清蛋白，導(dǎo)致最終發(fā)現(xiàn)惡液質(zhì)素等同于TNF- α (Beutler等，1989， Annu. Rev. Immunol. 7 :625)?，F(xiàn)在，已確定TNF-α是涉及多種臨床病癥的活性廣泛的炎性介導(dǎo)物。TNF-a是由幾種細胞類型、特別是活化的巨噬細胞產(chǎn)生的分子量為17kD的蛋白。 TNF-a最初被合成為排列成穩(wěn)定的三聚體的跨膜蛋白。它然后被金屬蛋白酶——TNF-a 轉(zhuǎn)化酶(TACE)切割，形成同三聚體的可溶性TNF(sTNF)，與其遍在表達的關(guān)聯(lián)受體(TNFRI， p55和TNFRII，p7Q接合。TNF受體的遍在表達以及細胞特異性效應(yīng)子解釋了 TNF-α介導(dǎo)的細胞應(yīng)答的廣泛多樣性，其中某些細胞應(yīng)答是有害和危及生命的。這些受體當(dāng)從單核細胞上脫落時，通過肅清和作為天然抑制劑，降低了 TNF-a水平。TNF-a誘導(dǎo)廣泛的各種細胞應(yīng)答，其中許多導(dǎo)致有害的結(jié)果。例如，TNF-a誘導(dǎo)惡病質(zhì)，惡病質(zhì)是由失去脂肪和全身蛋白質(zhì)貧化所引起的病癥，伴有厭食引起的食物攝入不足。惡病質(zhì)常見于癌癥患者，并且也已在患有獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的患者中觀察到。此外，在動物中注射高劑量TNF-α產(chǎn)生了敗血性休克的大部分癥狀。TNF-a也已顯示出在自身免疫疾病例如多發(fā)性硬化癥和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、過敏癥、免疫復(fù)合物病和移植物抗宿主疾病以及移植排斥中發(fā)揮作用。甚至在瘧疾和肺纖維化中也牽涉TNF-a的參與。因此，在疾病狀況中定向阻斷TNF-a生產(chǎn)是相當(dāng)重要和有治療益處的。
TNF相關(guān)病癥的治療中和TNF-α的副作用的方法集中于使用抗TNF抗體和可溶性TNF-R。在動物模型中，使用特異性針對TNF-α的抗體治療與TNF-α相關(guān)的炎性病癥，已顯示出治療效能(Williams 等，1992，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 89 :9784-88 ；Baker 等，1994， Eur. J. Immunol. 24 :2040 ；Suitters 等，1994，J. Exp. Med. 179 :849)。已經(jīng)構(gòu)建了嵌合形式的抗TNF抗體用于人類臨床試驗(Lorenz等，1996，J. Immunol. 156 :1646 ；Walker 等，1996，J. Infect. Dis. 174 :63 ；Tak 等，1996，Arthritis Rheumat. 39 :1077)。此夕卜， 可溶性TNF-受體融合蛋白已作為TNF拮抗劑引入人類患者(P印pel等，1991，J.Exp. Med. 174 1483 ；WiIliams 等，1995, Immunol. 84 433 ；Baumgartner 等，1996, Arthritis Rheumat. 39(Supp1.)S74)。美國專利6265535涉及從TNF-受體超家族成員的結(jié)合環(huán)設(shè)計的環(huán)狀肽和肽類似物，其干擾TNF-α與TNF-受體之間的結(jié)合相互作用，表現(xiàn)出體外和體內(nèi)抑制活性，用于拮抗TNF的不需要的體內(nèi)生物活性。該發(fā)明優(yōu)選環(huán)化的肽，因為環(huán)和轉(zhuǎn)角在蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用中發(fā)揮功能上重要的作用。在具體實施方案中，從TNF-R p55的三個結(jié)合環(huán)設(shè)計了環(huán)狀肽，其與TNF-α結(jié)合并抑制TNF-α與其細胞受體的結(jié)合。最優(yōu)選的實施方案具有至少7個氨基酸，并且沒有提出更小的線性肽能夠用作TNF- α抑制劑。美國專利6344443涉及通過給藥有效量的抑制肽來抑制TNF- α與TNF受體的結(jié)合以及TNF-α功能的方法。該專利涉及與TNF受體結(jié)合并干擾TNF-α結(jié)合和活化細胞 TNF-α受體的能力的肽。具體來說，該發(fā)明涉及使用具有7和12個氨基酸殘基的肽來抑制 TNF-α與TNF受體的結(jié)合和TNF的功能?！?43文獻旨在篩選能夠與TNF受體結(jié)合的小肽。 已經(jīng)鑒定到的最小分子是7個氨基酸長的序列。沒有提出更小的肽能夠用作TNF-α抑制劑。美國專利6143866涉及源自尿液的TNF抑制肽。該專利還涉及具有抗TNF-α活性的純化形式的TNF抑制劑。該專利還涉及具有作為表現(xiàn)出抗TNF活性的藥物制品價值的純化形式的TNF抑制劑。它還涉及以其純化形式獲得的30kDa蛋白和40kDa蛋白。這些蛋白所公開的氨基酸序列不少于15個氨基酸長，因此沒有提出更小的肽能夠用作TNF-α抑制劑。美國專利6048543涉及使用至少一個選自甘氨酸、丙氨酸和絲氨酸的氨基酸或其生理可接受的鹽來制備藥物或營養(yǎng)制劑，用于在腫瘤壞死因子(TNF)水平升高到超過介導(dǎo)生理穩(wěn)態(tài)和局部炎癥的水平的患者中降低所述腫瘤壞死因子(TNF)水平。該專利公開了可以通過抑制或降低巨噬細胞類型細胞的TNF生產(chǎn)、或巨噬細胞類型細胞的TNF釋放、或TNF 被TNF受體的結(jié)合，來實現(xiàn)TNF水平的降低。該專利涉及僅使用甘氨酸、丙氨酸和絲氨酸制備用于降低TNF水平的藥物或營養(yǎng)制劑。專利沒有公開氨基酸組合或含有氨基酸組合的肽的任何應(yīng)用。美國專利6107273涉及TNF-α拮抗化合物，其包含與選自人類TNF-α的分子表面的至少一個人類TNF-α分子表面基本上相似的分子表面。該發(fā)明的化合物具有附著于兩端的連接部分和間隔部分。該發(fā)明的化合物公開了具有25個氨基酸以及連接部分和間隔部分的TNF- α抑制肽?！?73專利的TNF- α拮抗化合物與TNF ρ55受體和/或TNF ρ75 受體結(jié)合，并抑制TNF-α介導(dǎo)的細胞毒性?！?73專利沒有提出不具有間隔部分的更小肽。
本領(lǐng)域中目前可用的治療方法被設(shè)計成通過使用可溶性TNF受體或單克隆抗TNF 抗體來中和 TNF-α (Piguet 等，1992，Immunology 77 :510-514 ;Elliot 等，1993，Arthritis Rheum. 36 :1681-90)。它們與循環(huán)中的TNF-α結(jié)合，從而限制了后者對細胞表面上的TNF-R 的可接近性以及隨后對炎性途徑的活化。阻斷TNF-α水平的可用療法是(1)英利昔單抗(Remicade)小鼠人類嵌合的抗人類TNF-α單克隆抗體，(2)阿達木單抗完全人類抗 TNF-α單克隆抗體；(3)依那西普，可溶性P7MTNF-RII與人類IgG的Fc部分融合的二聚體融合蛋白。盡管這些分子在各種自體免疫病癥中已顯示效能，但它們苦于某些限制，即生物利用度和穩(wěn)定性差、誘導(dǎo)嚴(yán)重免疫反應(yīng)和高成本。提供阻斷TNF-α活性的可替代手段是適當(dāng)?shù)?。已?jīng)利用抗TNF抗體或TNF受體的序列來合成生物活性肽片段(Weisong Q等， 2006，Mol. Immunol. 43 :660-66 ；Zhang J 等，2003，Biochem. Biophy. Res. Comm. 7 :1181-87 ； Aoki等，2006，J.Clin· Invest. 116(6) :1525-34)；但是它們大并相對不溶。這突出了對可能采取小分子形式的改進的TNF-α抑制化合物的需要。在一個這樣的研究中，Takasaki等，1997 (Nat Biotechnol. 1997，Nov ；15(12) 1266-70)研究了從TNF-RI的三個結(jié)合環(huán)設(shè)計的肽類似物。這些肽基于形成結(jié)合環(huán)的氨基酸序列來產(chǎn)生。已發(fā)現(xiàn)，一個肽序列，即TNF-RI的結(jié)構(gòu)域3的環(huán)1上的環(huán)狀WP9(序列為 WSENL) (107-114位殘基)具有最明顯的TNF- α阻斷活性。WP9的序列WSENL被Takasaki 等用作模板，設(shè)計了環(huán)狀肽模擬物WP9Q、WP9ELY、WP9Y和WP9QY。肽模擬物WP9QY顯示出治療價值，并在小鼠中降低了實驗性自身免疫腦脊髓炎(EAE)和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的嚴(yán)重性。然而，其在生理緩沖液中相對不良的溶解性是其用作潛在的人類治療劑的限制因素 (Takasaki 等，1997，Nat. Biotechnol. Nov. 15(12) :1266-70)。盡管肽的環(huán)化和芳構(gòu)化增強了穩(wěn)定性和生物利用度，但Takasaki等，1997注意到對增強溶解性或增強活性效果只有很少或沒有。Takasaki陳述了 WP9QY是迄今為止開發(fā)的最小的肽模擬物，并且它可以用作下一代非肽類抑制劑的先導(dǎo)化合物。因此，該參考文獻建議本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員基于當(dāng)時已知的最小肽嘗試非肽類TNF抑制劑。這些觀察著重說明了需要開發(fā)改進的下一代TNF- α抑制劑，其目的在于設(shè)計具有在生理緩沖液中具有可溶性、更好的穩(wěn)定性和生物利用度并具有最小的副作用和降低的成本的肽。發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明，提供了具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)γ、\各自獨立地是0-2個氨基酸是單個氨基酸殘基；并且氨基酸可以選自親水性氨基酸、疏水性氨基酸和半胱氨酸樣氨基酸。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了具有下式的TNF-α抑制肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)γ、\各自獨立地是0-2個氨基酸是單個氨基酸殘基；并且氨基酸可以選自親水性氨基酸、疏水性氨基酸和半胱氨酸樣氨基酸。本發(fā)明還涉及使用本發(fā)明的生物活性肽治療TNF-α相關(guān)疾病狀況。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的生物活性肽的藥物組合物。
附圖簡述

圖1顯示了利用生物測定法測定的肽的抗TNF- α活性。X軸上的數(shù)字1_10 表示序列ID-I到10的肽。Y軸表示每次運行兩個平行樣的三次獨立實驗的TNF-α介導(dǎo)細胞毒性的抑制百分率的平均值士SE。在X軸上，“+ve”表示陽性對照，即已知的TNF-α抑制月太，即環(huán)狀 WSQYL (cy Trp-Ser-Gln-Tyr-Leu)。圖2顯示了序列ID-2和序列ID-6的線性肽、序列ID_9和序列ID-10的環(huán)狀肽以及陽性對照即環(huán)狀WSQYL (cy Trp-Ser-Gln-Tyr-Leu)肽抑制TNF-α誘導(dǎo)的細胞毒性的比較。結(jié)果表示成每次運行三個平行樣的三次獨立實驗的TNF-α介導(dǎo)細胞毒性的抑制百分率的平均值士 SE。圖3顯示了序列ID-6的肽與依那西普(Et)對TNF- α介導(dǎo)的細胞毒性的抑制的比較。結(jié)果表示成每次運行三個平行樣的兩次獨立實驗的TNF-α介導(dǎo)細胞毒性的抑制百分率的平均值士 SE。圖4顯示了通過流式細胞術(shù)進行的肽與TNF-α的結(jié)合的定量。圖如中顯示了在序列ID-2和序列ID-6的肽存在下與細胞受體結(jié)合的TNF-α的熒光活化細胞分揀(FACS) 分析。Y-軸表示三次獨立實驗的TNF-RI表達陽性細胞的百分率的平均值士SE。在柱狀圖 (圖4a)或流式細胞術(shù)直方圖(圖4b)中X軸上的數(shù)字1-5意義如下1 =用抗小鼠IgG FITC作為第二抗體染色的U937細胞，2 =用小鼠抗人類TNF-受體抗體和抗小鼠IgG FITC染色的U937細胞，3 =用重組TNF- α處理并用小鼠抗人類TNF-受體抗體和抗小鼠IgG FITC染色的 U937細胞，4 =用重組TNF- α與序列ID-2的復(fù)合物處理并用小鼠抗人類TNF-受體抗體和抗小鼠IgG FITC染色的U937細胞，5 =用重組TNF- α與肽序列ID-6的復(fù)合物處理并用小鼠抗人類TNF-受體抗體和抗小鼠IgG FITC染色的U937細胞。圖5顯示了序列ID-6的肽與U937細胞上的TNF-Rl的結(jié)合圖5中顯示了具有序列ID-6的肽與U937細胞上表達的TNF-Rl的結(jié)合的熒光活化細胞分揀(FACS)分析。Y-軸表示兩次獨立實驗的TNF-RI表達陽性細胞的百分比的平均值士SE。在柱狀圖或流式細胞術(shù)直方圖(圖5)中X軸上的數(shù)字表示下列樣品1 未處理的U937細胞，2 :U937 細胞 +TNF- α，3 :U937細胞+序列ID-6的肽。圖6顯示了來自介質(zhì)(CFA)血清、對照(PBS)血清和膠原蛋白免疫的小鼠血清的抗膠原蛋白IgG水平的估算。圖7顯示了在膠原蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的鼠類模型中，使用具有序列ID-6的肽的不同劑量和方案進行治療之前(Pre Tx)和治療之后(Post Tx)右踝中爪厚度值的平均值。每個組包含4-5只動物。Y軸上的值表示相應(yīng)組中爪厚度的平均值士SE。動物組用X軸上的字母表示，即A 用1. 25mg/kg具有序列ID-6的肽以每周三次、然后三周每周一次的方案治療的關(guān)節(jié)炎小鼠，
B 用2. 5mg/kg具有序列ID_6的肽以每周三次、然后三周每周一次的方案治療的關(guān)節(jié)炎小鼠，C 用5mg/kg具有序列ID-6的肽以每周三次、然后三周每周一次的方案治療的關(guān)節(jié)炎小鼠，D 用7. 5mg/kg具有序列ID-6的肽以每周一劑共四周的方案治療的關(guān)節(jié)炎小鼠，E 用7. 5mg/kg具有序列ID-6的肽以第一周一劑然后在三周后第二劑的方案治療的關(guān)節(jié)炎小鼠，F(xiàn) 使用作為對照的PBS治療的關(guān)節(jié)炎小鼠，G 對照動物，即健康的雄性C57BL/6小鼠。計算了治療之前和之后的ρ值。#表示ρ值<0.01，*表示ρ <0.05。圖8(a)顯示了用序列ID-6的肽、序列ID_2的肽和依那西普(Et)治療之前(Pre Tx)和治療之后(Post Tx)左和右踝中爪厚度值的平均值士SE。PBS治療的動物被當(dāng)作未治療動物，對照表示健康的雄性C57BL/6小鼠。計算了治療之前和之后的ρ值。^"表示ρ值
<0. 01, * 表示 P < 0. 05。圖8(b)顯示了在用序列ID-6的肽、序列ID-2的肽和依那西普(Et)治療的動物中治療后抗膠原蛋白IgGl/IgGh的比率比較。PBS治療的動物被當(dāng)作未治療動物，對照表示健康的雄性C57BL/6小鼠。計算了治療之前和之后的ρ值。”表示ρ值<0.01，*表示ρ
<0. 05。圖9(a)顯示了用序列ID-6的肽和依那西普(Et)治療之前(Pre Tx)和治療之后 (Post Tx)右踝和右關(guān)節(jié)中爪厚度值的平均值。PBS治療的動物被當(dāng)作未治療動物。每個組包括3只動物。圖9(b)顯示了在佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的大鼠模型中用序列ID-6的肽和依那西普 (Et)治療之前(Pre Tx)和治療之后(Post Tx)的比較性臨床分值。PBS治療的動物被當(dāng)作未治療動物。每個組包括3只動物。計算了治療之前和之后的ρ值。#表示ρ值<0.01， * 表示 ρ < 0. 05。圖10顯示了在用序列ID-6、依那西普或作為陰性對照的PBS治療之前和之后關(guān)節(jié)炎大鼠中爪和關(guān)節(jié)腫脹的代表性照片。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)γ、\各自獨立地是0-2個氨基酸是單個氨基酸殘基；并且氨基酸可以選自親水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸樣氨基酸。本發(fā)明還涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)γ、\各自獨立地是0-2個氨基酸是單個氨基酸殘基；并且氨基酸可以選自親水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸樣氨基酸。本發(fā)明還涉及用作TNF-α抑制劑的生物活性肽。本發(fā)明的生物活性肽可以通過不同機制起作用，所述機制例如但不限于下述a)本發(fā)明的肽能夠結(jié)合TNF- α以形成復(fù)合物，導(dǎo)致阻止TNF- α與TNF-Rl受體的？口口。b)本發(fā)明的肽能夠直接結(jié)合TNF-Rl受體并能阻止TNF- α與TNF-Rl受體的結(jié)合。本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)γ、\各自獨立地是0-2個氨基酸是單個氨基酸殘基；并且氨基酸可以選自親水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸樣氨基酸。本發(fā)明還涉及治療TNF-α相關(guān)疾病狀況的方法，所述方法包含給藥具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)γ、\各自獨立地是0-2個氨基酸是單個氨基酸殘基；并且氨基酸可以選自親水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸樣氨基酸。本發(fā)明還涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)γ、\各自獨立地是0-2個氨基酸是單個氨基酸殘基；并且氨基酸可以選自親水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸樣氨基酸，并且其中Xp X2 和\當(dāng)加在一起時不少于2個氨基酸。本發(fā)明涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)γ、\各自獨立地是0-2個氨基酸是單個氨基酸殘基；并且氨基酸可以選自親水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸樣氨基酸，并且其中Xp X2 和\當(dāng)加在一起時不少于2個氨基酸。本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)γ、\各自獨立地是0-2個氨基酸是單個氨基酸殘基；并且氨基酸可以選自親水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸樣氨基酸，并且其中Xp X2 和\當(dāng)加在一起時不少于2個氨基酸。本發(fā)明還涉及治療TNF-α相關(guān)疾病狀況的方法，所述方法包含給藥具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)γ、\各自獨立地是0-2個氨基酸是單個氨基酸殘基；并且氨基酸可以選自親水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸樣氨基酸，并且其中Xp X2 和\當(dāng)加在一起時不少于2個氨基酸。本發(fā)明涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中X1J2各自獨立地是0-2個選自Trpjer、Gin、Asn、 Tyr和Leu的氨基酸是單個氨基酸殘基；并且氨基酸可以選自Trp、Ser, Gin、Asn、Tyr 和Leu，并且其中Xp X2和\當(dāng)加在一起時不少于2個氨基酸。本發(fā)明涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3
8
或其可藥用鹽和衍生物，其中X1J2各自獨立地是0-2個選自Trpjer、Gin、Asn、 Tyr和Leu的氨基酸是單個氨基酸殘基；并且氨基酸可以選自Trp、Ser, Gin、Asn、Tyr 和Leu，并且其中Xp X2和\當(dāng)加在一起時不少于2個氨基酸。本發(fā)明涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中Χ:、)(2和)(3各自獨立地是選自Trp、kr、Gin、Asru Tyr和Leu的單個氨基酸殘基。本發(fā)明涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中Xp )(2和)(3各自獨立地是選自Trp、kr、Gin、Asru Tyr和Leu的單個氨基酸殘基。本發(fā)明涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的0_2個氨基酸；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的0_2個氨基酸；并且是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；并且其中\(zhòng)γ、\和1、當(dāng)加在一起時不少于2個氨基酸。本發(fā)明涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的0_2個氨基酸；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的0_2個氨基酸；并且是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；并且其中\(zhòng)γ、\和1、當(dāng)加在一起時不少于2個氨基酸。本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的0_2個氨基酸；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的0_2個氨基酸；并且是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；并且其中\(zhòng)、\和當(dāng)加在一起時不少于2個氨基酸；以及可藥用載體。本發(fā)明還涉及治療TNF-α相關(guān)疾病狀況的方法，所述方法包含給藥具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的0_2個氨基酸；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的0_2個氨基酸；并且是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；并且其中\(zhòng)γ、\和1、當(dāng)加在一起時不少于2個氨基酸。本發(fā)明還涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的氨基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果X1是Trp，那么X2是Ser或Gin。本發(fā)明還涉及具有下式的TNF-α抑制肽X1-X2-X3
或其可藥用鹽和衍生物，其中&是選自Trp、Ser, Gln的氨基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果X1是Trp，那么X2是Ser或Gin。本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的氨基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果X1是Trp，那么X2是Ser或Gln ；以及可藥用載體。本發(fā)明還涉及治療TNF-α相關(guān)疾病狀況的方法，所述方法包含給藥具有下式的生物活性肽X1--X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的氨基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果X1是Trp，那么X2是Ser或Gin。本發(fā)明還涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的氨基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果\是kr，那么I2是Asn或Gin。本發(fā)明還涉及具有下式的TNF-α抑制肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的氨基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果\是kr，那么I2是Asn或Gin。本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包含具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的氨基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果\是Ser,那么\是Asn或Gln ；以及可藥用載體。本發(fā)明還涉及治療TNF-α相關(guān)疾病狀況的方法，所述方法包含給藥具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的氨基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果\是kr，那么I2是Asn或Gin。本發(fā)明還涉及具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的氨基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果X1是Gln，那么X2是Asn或Tyr。本發(fā)明還涉及具有下式的TNF- α抑制肽X1--X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的氨基酸殘基；X2是選自 Ser, Gin, Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果&是Gln，那么\是Asn或Tyr。本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包含具有下式的生物活性肽X1--X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的氨基酸殘基；X2是選自 Ser, Gln、Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自Gln、Leu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果\是Gln，那么\是Asn或Tyr ；以及可藥用載體。本發(fā)明還涉及治療TNF-α相關(guān)疾病狀況的方法，所述方法包含給藥具有下式的生物活性肽X1-X2-X3或其可藥用鹽和衍生物，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser, Gln的氨基酸殘基；X2是選自 Ser, Gln、Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自Gln、Leu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果&是Gln，那么\是Asn或Tyr。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“肽”是指由天然存在的氨基酸亞基通過肽鍵相連所形成的聚合物。術(shù)語氨基酸也可以是指具有與天然存在的肽相似的部分(portions)但是也具有非天然存在的部分(portions)的組成部分(moieties)。因此，肽可以具有改變的氨基酸或連鍵。術(shù)語生物活性肽是指當(dāng)給藥于哺乳動物時顯示出任何種類/量的藥理學(xué)或生物學(xué)效應(yīng)的肽。上面使用的術(shù)語“氨基酸/氨基酸殘基”可以是遺傳編碼的L-氨基酸、天然存在的非遺傳編碼的氨基酸、合成的L-氨基酸或所有上述的D-對映異構(gòu)體或其可藥用鹽/衍生物。本文使用的20種遺傳編碼的L-氨基酸和常見的非編碼氨基酸的氨基酸表示法是常規(guī)的，并如下所示表-權(quán)利要求
1.具有下式的TNF-α抑制肽 X1 __X2 __X3或其可藥用鹽和衍生物，其中各自獨立地是0-2個氨基酸A3是單個氨基酸殘基； 其中氨基酸選自親水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸樣氨基酸，并且其中和\當(dāng)加在一起時不少于2個氨基酸。
2.權(quán)利要求1的TNF-α抑制肽，其中親水氨基酸、疏水氨基酸和半胱氨酸樣氨基酸選自遺傳編碼的氨基酸和非遺傳編碼的氨基酸。
3.權(quán)利要求2的TNF-α抑制肽，其中氨基酸是遺傳編碼的氨基酸。
4.權(quán)利要求3的TNF-α抑制肽，其中氨基酸選自Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gin、Glu、 Gly、His、lie、Leu、Lys> Met> Phe> Pro、Ser> Thr> Trp> Tyr 禾口 Val。
5.權(quán)利要求1的TNF-α抑制肽，其中各自獨立地是選自Trp、Ser、Gln、Asn、Tyr 和Leu的1-2個氨基酸；X3是單個氨基酸殘基并選自Trp、Ser, Gin、Asn、Tyr和Leu。
6.權(quán)利要求1的TNF-α抑制肽，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser,Gln的1-2個氨基酸；X2是選自kr、Gin、Asn和Tyr的1_2個氨基酸；并且是選自Gin、Leu和Tyr的氨基酸殘基。
7.權(quán)利要求1的TNF-α抑制肽，其中&是選自Trp、Ser,Gln的氨基酸殘基；X2是選自Ser、Gin、Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自GlruLeu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果X1是Trp，那么X2是Ser或Gin。
8.權(quán)利要求1的TNF-α抑制肽，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser,Gln的氨基酸殘基；X2是選自Ser、Gin、Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自GlruLeu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果&是％r，那么\是Asn或Gin。
9.權(quán)利要求1的TNF-α抑制肽，其中\(zhòng)是選自Trp、Ser,Gln的氨基酸殘基；X2是選自Ser、Gin、Asn和Tyr的氨基酸殘基；并且\是選自GlruLeu和Tyr的氨基酸殘基；前提是如果&是Gln，那么\是Asn或Tyr。
10.權(quán)利要求1的TNF-α抑制肽，其中X^A和)(3各自獨立地是選自Trp、kr、Glru Asn、Tyr和Leu的單個氨基酸殘基。
11.權(quán)利要求1m TNF- α抑制肽，其選自SEQ ID No :1_38。
12.權(quán)利要求1的TNF-α抑制肽，其中肽是線性肽或環(huán)狀肽。
13.一種用于制備權(quán)利要求1的TNF-α抑制肽的方法，其中所述肽通過固相合成來制備。
14.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1或權(quán)利要求11的TNF-α抑制肽和可藥用載體。
15.一種治療TNF-α相關(guān)疾病狀況的方法，其包含給藥權(quán)利要求1或權(quán)利要求11的 TNF-α抑制肽。
16.權(quán)利要求1或權(quán)利要求11的TNF-α抑制肽，其中所述肽能經(jīng)局部、經(jīng)腸胃外、經(jīng)粘膜、經(jīng)口、經(jīng)頰、經(jīng)直腸、吸入、鼻內(nèi)、經(jīng)直腸、經(jīng)陰道或經(jīng)舌下途徑給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)抑制肽及其制備方法。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的TNF-α抑制肽的藥物組合物及其在TNF-α介導(dǎo)的炎性疾病治療中的應(yīng)用。
文檔編號C07K5/06GK102282163SQ200980154542
公開日2011年12月14日 申請日期2009年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月20日
發(fā)明者拉杰什·賈殷, 拉胡爾·賈殷, 施維塔·杜比, 維倫達·庫馬爾·維納雅克, 維賈伊·戈埃爾, 蘇哈南德·普拉薩德 申請人:萬能藥生物有限公司