專利名稱：一種c-端修飾為氟甲基酮的肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及肽衍生物的制備方法，尤其涉及C-端修飾為氟甲基酮的肽的制備方法。
背景技術(shù)：
許多疾病的治療需要對疾病相關(guān)的細(xì)胞凋亡進(jìn)行控制或加以改變。胱冬肽酶 (Caspase)是一類天冬氨酸殘基特異性的半胱氨酸蛋白酶，在細(xì)胞凋亡過程中起關(guān)鍵作用， 它們對B細(xì)胞淋巴瘤/白血病家族成員具有重要的酶解修飾作用，目前已發(fā)現(xiàn)十余種成員， 包括Caspasel 10等。研究表明，用胱冬肽酶抑制劑來緩減和控制細(xì)胞凋亡，從而可使某些疾病得到有效的治療，例如腫瘤細(xì)胞常呈凋亡不足，化療和放療可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞進(jìn)入凋亡，通過活化胱冬肽酶系統(tǒng)或活化死亡受體啟動胱冬肽酶系統(tǒng)，可以進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡；在治療腦缺血時，可以用胱冬肽酶抑制劑來防止本不該發(fā)生的神經(jīng)細(xì)胞的凋亡； 新生兒窒息以及老年癡呆癥等疾病也可以使用胱冬肽酶藥物預(yù)防正常細(xì)胞的凋亡，從而達(dá)到治療目的。因此，胱冬肽酶在治療腫瘤、腦缺血及新生兒窒息、老年癡呆癥等領(lǐng)域中具有廣闊的應(yīng)用前景。國外胱冬肽酶抑制劑(Caspase inhibitor)的篩選和研究對象主要為C-端修飾醛肽(ρ印tide aldehyde)、活性多肽片斷、C-端修飾為氯甲基酮的(chloromethylketone) 肽、C-端修飾為氟甲基酮的肽(fluoromethylketone)等，其中C端修飾為氟甲基酮的肽近年來被發(fā)展為胱冬肽酶抑制劑，是一類抗細(xì)胞衰老和凋亡的生化產(chǎn)品，當(dāng)前主要被用于生化試劑盒、抗體、抑制劑、生物制藥、生物工程等。現(xiàn)有技術(shù)中，采用有機(jī)合成方法制備光學(xué)活性的或外消旋的C端修飾為氟甲基酮的肽，產(chǎn)率低，合成工藝很復(fù)雜，而且工藝不穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種制備C端修飾為氟甲基酮的肽的方法，工藝簡單，產(chǎn)率高,而且工藝穩(wěn)定。本發(fā)明提供一種制備C端修飾為氟甲基酮的肽的方法，所述C端修飾為氟甲基酮的肽的結(jié)構(gòu)如式6或式6-1，其中R是可變基團(tuán)，A1 An為各種構(gòu)型的帶有保護(hù)基的氨基酸殘基，A'工 A' n為選擇性脫保護(hù)后的各種構(gòu)型的氨基酸殘基，包括如下步驟(1)、采用偶聯(lián)劑L將式1化合物與樹脂連接，得到式2化合物，所述式1化合物中的&、&、&、R4各自獨(dú)立地選自H、Br、Cl、I、F、N02、CN、NH2、烷基、烷氧基、C00H或OH ；(2)、將C端受保護(hù)的氨基酸與式2化合物進(jìn)行還原胺化反應(yīng)，得到式3化合物，式 3化合物中的&為保護(hù)基；(3)、采用常規(guī)的Fmoc固相合成方法，在式3化合物的氨基酸殘基的N端進(jìn)行延伸，得到式4化合物；0)、將式4化合物脫除保護(hù)基&，獲得α羧基，然后將該α羧基轉(zhuǎn)化成氟甲基酮基，獲得式5化合物；(5)、將式5化合物進(jìn)行切割反應(yīng)，獲得產(chǎn)品為式6化合物，或在切割反應(yīng)前、切割反應(yīng)中或切割反應(yīng)后，進(jìn)行選擇性脫保護(hù)，獲得產(chǎn)品為式6-1化合物；所述反應(yīng)步驟(1) (5)用結(jié)構(gòu)式表示如下
權(quán)利要求
1. 一種制備C端修飾為氟甲基酮的肽的方法，所述C端修飾為氟甲基酮的肽的結(jié)構(gòu)如式6或式6-1，其中R是可變基團(tuán)，A1 An為各種構(gòu)型的帶有保護(hù)基的氨基酸殘基，A' i A' n為選擇性脫保護(hù)后的各種構(gòu)型的氨基酸殘基，包括如下步驟(1)、采用偶聯(lián)劑L將式1化合物與樹脂連接，得到式2化合物，所述式1化合物中的隊(duì)、 R2> R3> R4 各自獨(dú)立地選自 H、Br、Cl、I、F、NO2、CN、NH2、烷基、烷氧基、COOH 或 OH ；(2)、將C端受保護(hù)的氨基酸與式2化合物進(jìn)行還原胺化反應(yīng)，得到式3化合物，式3化合物中的&為保護(hù)基；(3)、采用常規(guī)的Fmoc固相合成方法，在式3化合物的氨基酸殘基的N端進(jìn)行肽鏈延伸，得到式4化合物；G)、將式4化合物脫除保護(hù)基&，獲得α羧基，然后將該α羧基轉(zhuǎn)化成氟甲基酮基， 獲得式5化合物；(5)、將式5化合物進(jìn)行切割反應(yīng)，獲得產(chǎn)品為式6化合物，或在切割反應(yīng)前、切割反應(yīng)中或切割反應(yīng)后，進(jìn)行選擇性脫保護(hù)，獲得產(chǎn)品為式6-1化合物；所述反應(yīng)步驟(1) (5) 用結(jié)構(gòu)式表示如下
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述偶聯(lián)劑L為如下鏈狀結(jié)構(gòu)之-XCH2 (CH2) n-C00-， XCH2 (CH2) n-CO-， XCH2 (CH2) η-ΝΗ-,XCH2 (CH2) n「NH-C0- (CH2CH) m-COO-，XCH2 (CH2) n「NH-C0- (CH2CH) m-CO-，XCH2CH2-O (CH2CH2O) Ii1CH2CH2-NH-,XCH2CH2-O (CH2CH2O) Ii1CH2-CO2-,XCH2CH2-O (CH2CH2O) Ii1CH2-CO-,XCH2CH2-O (CH2CH2O) Ii1CH2-CH2O-CO- (CH2CH) m—COO—，XCH2CH2-O (CH2CH2O) Ii1CH2-CH2O-CO- (CH2CH) m-CO-,XCH2CH2-O (CH2CH2O) Ii1CH2-CO2-,XCH2CH2-O (CH2CH2O) Ii1CH2-CO-,XCH2CH2-O (CH2CH2O) Ii1CH2CH2-NH-CO- (CH2CH) m—COO—，XCH2CH2-O (CH2CH2O) Ii1CH2CH2-NH-CO- (CH2CH) m-CO-；其中，X 為 F、Cl、Br 或 I，η = 1 20，叫=1 5000，m = 1 20.
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(1)中所述樹脂的取代度為 O· 2 L 5mmol/g0
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述樹脂的取代度為0.8mmol/g。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述C端受保護(hù)的氨基酸為L型或D 型氨基酸或外消旋的各種氨基酸，其中保護(hù)基&為甲基、乙基、異丙基、叔丁基、芐基、5-羥基吡啶基、3-萘酚基或三苯甲基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于步驟(4)所述將α羧基轉(zhuǎn)化成氟甲基酮基的方法為先利用重氮甲烷將所述α羧基轉(zhuǎn)換為重氮甲基酮基，然后進(jìn)行氟化反應(yīng)； 其中氟化劑是質(zhì)量濃度為5% 80%的氟化氫/吡啶溶液，氟化溫度為-10°C 30°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于所述的氟化氫/吡啶溶液的質(zhì)量濃度為 20% 45%。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于步驟(4)所述將α羧基轉(zhuǎn)化成氟甲基酮基的方法為以三氟乙酸酐為氟化劑，將α羧基直接氟化成氟甲基酮基，三氟乙酸酐摩爾總量與每克樹脂的取代度為1 10 1，氟化溫度為-10°C 30°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于所述三氟乙酸酐的摩爾總量與每克樹脂的取代度之比為7 1。
10.根據(jù)權(quán)利要求6或7或8或9所述的制備方法，其特征在于所述的氟化溫度為-2V 10°C。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種C-端修飾為氟甲基酮的肽的制備方法。本方法將待修飾成氟甲基酮的保護(hù)氨基酸的α位氨基用3-亞甲基吲哚保護(hù)，然后在樹脂上直接將羧基轉(zhuǎn)化成甲基酮，從而避免了一般均相合成中易發(fā)生的一些副反應(yīng)。本發(fā)明可以合成得到光學(xué)純或外銷旋C端修飾為氟甲基酮的肽，同時還可以用于肽鏈較長的C端修飾為氟甲基酮的肽的制備，所得粗產(chǎn)品Z-Tyr-Val-Asp-FMK的純度較高。
文檔編號C07K5/113GK102234309SQ20101015056
公開日2011年11月9日 申請日期2010年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月20日
發(fā)明者向雙春, 李云平 申請人:張家港阿拉寧生化技術(shù)有限公司