專利名稱：一種特女貞苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從中藥材女貞子中制備特女貞苷(nuezhenoside)的方法，屬于天然藥的有效成分提取分離領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
女貞子為木犀科植物女貞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果實(shí)，為常用中藥材。特女貞苷(nuezhenoside)是女貞子中主要的活性成分，屬于裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類成分，
其結(jié)構(gòu)如圖根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，女貞子中的環(huán)烯醚萜苷具有較好的保肝利膽、抗肝纖維化、抗菌消炎、抗腫瘤、降血脂、降血糖、降低血液粘度、增強(qiáng)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)等多種藥理作用。我們從女貞子中經(jīng)過一系列的分離純化，得到特女貞苷的純品，含量在98%以上。

發(fā)明內(nèi)容
1、發(fā)明目的本發(fā)明的目的是提供一種獲得特女貞苷的切實(shí)可行的制備方法。2、技術(shù)方案本發(fā)明所述的特女貞苷的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)將女貞子用80%乙醇水的溶劑加熱到85°C回流提取。(2)將(1)乙醇水提取的提取液濃縮蒸至無醇味后，用乙酸乙酯萃取后，水溶液用水飽和的正丁醇萃取。(3)將( 水飽和的正丁醇萃取液濃縮后用水溶解。(4)將(3)的水溶液過大孔樹脂柱，用10-30^^50% -70%甲醇水以此洗脫。(5)將(4)50%-70%甲醇水洗脫液濃縮至干，用少量甲醇溶解后過凝膠柱，用 30% -50%甲醇水洗脫。(6)收集(5)30% -50%甲醇水洗脫液中含有特女貞苷的餾分，濃縮后，重結(jié)晶即可得到高純度的目標(biāo)化合物特女貞苷。在步驟(1)中，所用的80%乙醇水溶液，其用量是藥材重量的10-15倍，藥材熱回流提取的時(shí)間是6-8小時(shí)，熱回流次數(shù)是3-5次。在步驟( 中，所用乙酸乙酯用量是被萃取液體積的1-3倍，所用水飽和的正丁醇用量是被萃取液體積的1-4倍。萃取2-4遍。在步驟(3)中，正丁醇萃取液濃縮至固體狀態(tài)，水的用量為藥材重量的0.5-1.0倍。在步驟(4)中，所用的吸附樹脂是DlOl和AB-8大孔樹脂，所用的溶液時(shí) 50% -70%甲醇水。在步驟(5)中，所用的是凝膠柱，所用的溶液時(shí)30% -50%重量甲醇水，所用的溶劑是水和有機(jī)溶劑，有機(jī)溶劑可以是甲醇或乙醇溶劑；重結(jié)晶的次數(shù)可以是1-3次。3、有益效果采用本發(fā)明的特女貞苷提取純化方法，(1)從女貞子中分離得到的特女貞苷得率在以上，純度在95%以上。(2)根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的高效液相檢測條件(《HPLC 法測定女貞子藥材中女貞苷的含量》(藥物分析雜志，2009，四:824-826))進(jìn)行測定，結(jié)果表明，所得的特女貞苷含量在98%以上，表明本工藝可行。
四

附圖是利用該方法制備出的特女貞苷的HPLC檢測圖譜。
五具體實(shí)施例方式下面是本發(fā)明的實(shí)施例，但本發(fā)明不僅限于所述實(shí)施例。實(shí)施例1 將女貞子用藥材重量10倍的80%乙醇水的溶劑加熱到85°C回流提取 8小時(shí)，將提取液濃縮蒸至無醇味后，用藥材重量1倍的乙酸乙酯萃取3遍，水溶液再用藥材重量1倍的正丁醇萃取3遍，正丁醇萃取液濃縮后用水溶解后過大孔樹脂柱用50%重量甲醇水洗脫，將50%重量甲醇水洗脫液濃縮后用水溶解后過凝膠柱，用30%重量甲醇水洗脫，30%重量甲醇水洗脫液濃縮后，用60%甲醇水重結(jié)晶即可得到高純度的目標(biāo)化合物特女貞苷，得率為0. 90%，純度為98. 1%。實(shí)施例2 將女貞子用藥材重量15倍的80%乙醇水的溶劑加熱到85°C回流提取 7小時(shí)，將提取液濃縮蒸至無醇味后，用藥材重量2倍的乙酸乙酯萃取2遍，水溶液再用藥材重量3倍的正丁醇萃取3遍，正丁醇萃取液濃縮后用水溶解后過大孔樹脂柱用60%重量甲醇水洗脫，將60%重量甲醇水洗脫液濃縮后用水溶解后過凝膠柱，用40%重量甲醇水洗脫，40%重量甲醇水洗脫液濃縮后，用80%乙醇水重結(jié)晶即可得到高純度的目標(biāo)化合物特女貞苷，得率為0. 95%，純度為99.0%。實(shí)施例3 將女貞子用藥材重量13倍的80%乙醇水的溶劑加熱到85°C回流提取7 小時(shí)，將提取液濃縮蒸至無醇味后，用藥材重量3倍的乙酸乙酯萃取2遍，水溶液再用藥材重量3倍的正丁醇萃取3遍，正丁醇萃取液濃縮后用水溶解后過大孔樹脂柱用60%重量甲醇水洗脫，將60%重量甲醇水洗脫液濃縮后用水溶解后過凝膠柱，用50%重量甲醇水洗脫，50%重量甲醇水洗脫液濃縮后，用90%甲醇水重結(jié)晶即可得到高純度的目標(biāo)化合物特女貞苷，得率為0. 93%，純度為98. 1%。特女貞苷的純度檢測取上述方法制備得到的特女貞苷單體適量，甲醇溶于容量瓶中，微孔濾膜過濾后， 待進(jìn)樣分析。色譜條件=Agilent 1200高效液相色譜儀器，Agilent G1314A紫外檢測器；色譜柱Welch Materials XB-C18，5 μ m，250*4. 6mm ；流動(dòng)相甲醇(A)-水(B)，梯度洗脫
，檢測波長240nm，流速:lml/min ；進(jìn)樣量:10μ 1 ；具體分析譜圖請見說明書附圖。對照品特女貞苷自制，經(jīng)1H-NMR、13C-NMR、MS等測定，其數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)一致，鑒定為特女貞苷。TLC圖譜為一個(gè)斑點(diǎn)，HPLC檢測為單峰，歸一化含量在98%以上，理論塔板數(shù)在 8000以上。以上描述了本發(fā)明中的特女貞苷的提取方法，但需要理解其中包含了本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的變化和改變。這些變化和改變也包含在權(quán)利要求所限定的本發(fā)明的范圍內(nèi)。對照品的波譜數(shù)據(jù)以及解析IUVmax(Me0H/H20 1 1) :240，280nm。2IR(KRr) Vmax :3421,1707，1630，1516，1442cm_103ESIMS :[M+1] = 625。4 1H-WR(DMSO-Cl) δ 7. 49 (1Η, s, 3-H), 7. 01, 7. 00 (2H, d, J = 8. 4Hz), 6. 64 (2H, d, J = 8. 4Hz)，5. 95 (1H, q, 8_H)，4. 92 (1H, d, J = 7. 5Hz)，3. 64 (3H, s, -OCH3-)，1. 67 (3H, d, IO-CH3)。5 13C-NMR (DMSO-d) δ 92. 9 (C-I) , 153. 3 (C-3) , 107. 71 (C-4) , 30. 0 (C-5), 39. 5 (C-6) , 170. 6 (C_7) , 123. 0 (C_8) , 129. 6 (C_9) , 13. 0 (C-IO) , 166. 1 (C-Il)， 70. 0(a -CH2-)，34. 8 ( β -CH2-) ,51. 1 (-0CH3)，98. 9 (C-Γ )，73. 2 (C~2') , 76. 5 (C_3~)，
69.9 (C-4、)，76. 4 (C-5、),61. 0 (C_6、)，102. 8 (C-廣)，73. 5 (C_2—)，77. 3 (C_3—)，
70.0 (C-4~ ~ )，73. 5 (C-5~ ~)，64. 0 (C_6~ ~)，128. 6 (C-1 …)，129. 6 (C~2''')，
114. 9(C-3~
)，155. 5 (C-4~
)，114. 9(C-5~
權(quán)利要求
1.一種特女貞苷的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)將女貞子用80%乙醇水的溶劑加熱到85°C回流提取。(2)將(1)乙醇水提取的提取液濃縮蒸至無醇味后，用乙酸乙酯萃取后，水溶液用水飽和的正丁醇溶液萃取。(3)將( 正丁醇提取的提取液濃縮后用水溶解。(4)將(3)的水溶液過大孔樹脂柱用50%-70%甲醇水洗脫。(5)將(4)50%-70%甲醇水洗脫液濃縮至干，用少量甲醇溶解后過凝膠柱，用 30% -50%甲醇水洗脫。(6)將-50%甲醇水洗脫液中含有沙特女貞苷的餾分，濃縮后，重結(jié)晶即可得到高純度的目標(biāo)化合物特女貞苷，純度在98%以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種特女貞苷的制備方法，其特征在于在步驟(1)中，所用的乙醇水溶液中乙醇比可在40% -95%之間，其用量是藥材的6-15倍；藥材熱回流提取的時(shí)間是6-12小時(shí)，熱回流次數(shù)是3-5次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種特女貞苷的制備方法，其特征在于在步驟( 中，所用乙酸乙酯用量是被萃取液體積的1-3倍，萃取2-3遍；所用水飽和的正丁醇用量是被萃取液體積的1-4倍，萃取2-4遍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種特女貞苷的制備方法，其特征在于在步驟(3)中，濃縮至固體狀態(tài)；水的用量為藥材重量的0. 4-0. 8倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種特女貞苷的制備方法，其特征在于在步驟(4)中，所用的吸附樹脂是DlOl和AB-8的大孔樹脂；所用的溶液是50% -70%甲醇水。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種特女貞苷的制備方法，其特征在于在步驟( 中，所用的凝膠柱；所用的溶液是30% -50%甲醇水；所用的溶劑是水和有機(jī)溶劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種特女貞苷的制備方法，其特征在于在步驟(6)中，有機(jī)溶劑可以是甲醇或乙醇溶劑；重結(jié)晶的次數(shù)可以是1-3次。
全文摘要
本文公開了一種從中藥女貞子中提取分離特女貞苷的方法。該方法的步驟是從中藥女貞子中用80％乙醇水提取，提取液濃縮后用乙酸乙酯萃取，再用水飽和的正丁醇萃取，正丁醇萃取液濃縮后用水溶解，經(jīng)大孔樹脂用10％-30％、50％-70％甲醇水洗脫，收集50％-70％甲醇水洗脫液，濃縮至干，用少量甲醇溶解，上凝膠柱，用30％-50％甲醇水洗脫后，收集含有特女貞苷洗脫液，揮干溶劑后，重結(jié)晶即可得到高純度的目標(biāo)化合物特女貞苷，純度在98％以上。這種方法成功得到特女貞苷滿足了市場上對中藥對照品特女貞苷的需要，方法較為簡單。
文檔編號C07H17/04GK102260307SQ20101018686
公開日2011年11月30日 申請日期2010年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月28日
發(fā)明者何玉琴, 王新亮, 程萍, 許紀(jì)鋒, 謝天培, 錢勇, 魏國志 申請人:上海特善食品科技有限公司