專利名稱：一種蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的說，涉及一種保護(hù)蛋白質(zhì)不會(huì)失活的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
蛋白質(zhì)是一種具有復(fù)雜的空間立體結(jié)構(gòu)的大分子物質(zhì)，易受外界條件的影響發(fā)生變性。蛋白質(zhì)穩(wěn)定性與組成中的氨基酸種類有關(guān)系，例如含有巰基的氨基酸，最常見的是半胱氨酸，會(huì)降低蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，尤其在某些金屬離子，Cu2 +、Zn2+等存在時(shí)，蛋白質(zhì)對(duì)空氣中的氧更為敏感，而易發(fā)生不可逆變性。蛋白質(zhì)活性的保存已經(jīng)成為生物技術(shù)領(lǐng)域的重大難題。目前，蛋白質(zhì)的長(zhǎng)期保存一般用真空冷凍干燥方法保存，該保存方法的優(yōu)點(diǎn)是，活性保存效果理想，保存時(shí)間長(zhǎng)，但是存在缺點(diǎn)是操作繁瑣，需要特殊的儀器，成本高， 需要水做復(fù)溶劑等。

發(fā)明內(nèi)容
為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明目的之一在于提供一種成本低廉，能長(zhǎng)時(shí)間保護(hù)蛋白質(zhì)活性的保護(hù)劑。本發(fā)明目的之二在于提供一種蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑的制備方法。本發(fā)明目的是這樣實(shí)現(xiàn)的
一種蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑按重量份數(shù)由下列原料組成 PH值為7. 2的磷酸鹽緩沖液100份 BSA (牛血清白蛋白)2 15份蔗糖1 8份二硫蘇糖醇0. 1 1份乙二胺四乙酸0.2 1.2份。上述磷酸鹽緩沖液按重量份數(shù)由磷酸氫二鈉0. 07 0. 142份溶于100份純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀0. 068 0. 136份溶于100份純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20制得。磷酸鹽緩沖液保持溶液的酸堿度，使用BSA，蔗糖給蛋白“穿上”一層蛋白外衣盡量隔斷目標(biāo)蛋白與空氣結(jié)合，二硫蘇糖醇的加入是中和溶液中的氧化物雜質(zhì)，乙二胺四乙酸的加入是去除溶液中的重金屬離子，通過以上各組分的綜合作用達(dá)到保護(hù)蛋白活性的目的。上述磷酸氫二鈉0. 07 0. 142份。上述磷酸二氫鉀0. 068 0. 136份。一種蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑的制備方法，其特征在于按如下步驟進(jìn)行
(1)稱取磷酸氫二鈉0. 07 0. 142份溶于100份純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀0. 068 0. 136份溶于100份純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成磷酸鹽緩沖液；
(2)量取磷酸鹽緩沖液100份，稱取BSA 2 15份，蔗糖1 8份，二硫蘇糖醇(DTT) 0. 1 1份，乙二胺四乙酸(EDTA)O. 2-1. 2份加入磷酸鹽緩沖液中，攪拌均勻，得到蛋白穩(wěn)定劑。有益效果本發(fā)明能長(zhǎng)時(shí)間保護(hù)蛋白質(zhì)活性，是一種非常好的蛋白質(zhì)保護(hù)劑，且穩(wěn)定劑組成成分常見，價(jià)格相對(duì)便宜，整個(gè)制備也比較方便，制備工序簡(jiǎn)單容易操作。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例(1)稱取磷酸氫二鈉0. 07克溶于100毫升純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀 0. 068克溶于100毫升純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C 100毫升，稱取BSA 2克，蔗糖1克，二硫蘇糖醇(DTT)O. 1克，乙二胺四乙酸(EDTA) 0. 2克加入溶液C中，攪拌均勻，配成蛋白穩(wěn)定劑； 實(shí)施例2
(1)稱取磷酸氫二鈉0.09克溶于100毫升純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀0. 08 克溶于100毫升純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，稱取BSA 4克，蔗糖2克，二硫蘇糖醇(DTT)O. 2克，乙二胺四乙酸(EDTA) 0. 4克加入溶液C中，攪拌均勻，配成蛋白穩(wěn)定劑；
實(shí)施例3
(1)稱取磷酸氫二鈉0.1克溶于100毫升純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀0. 1 克溶于100毫升純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，稱取BSA 5克，蔗糖3克，二硫蘇糖醇(DTT)O. 3克，乙二胺四乙酸(EDTA)O. 5克加入溶液C中，攪拌均勻，配成蛋白穩(wěn)定劑；
實(shí)施例4
(1)稱取磷酸氫二鈉0.11克溶于100毫升純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀0. 11 克溶于100毫升純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，稱取BSA 7克，蔗糖4克，二硫蘇糖醇(DTT)O. 5克，乙二胺四乙酸(EDTA) 0. 7克加入溶液C中，攪拌均勻，配成蛋白穩(wěn)定劑；
實(shí)施例5
(1)稱取磷酸氫二鈉0.12克溶于100毫升純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀0. 12 克溶于100毫升純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，稱取BSA 9克，蔗糖5克，二硫蘇糖醇(DTT)O. 6克，乙二胺四乙酸(EDTA) 0. 8克加入溶液C中，攪拌均勻，配成蛋白穩(wěn)定劑；
實(shí)施例6
(1)稱取磷酸氫二鈉0.13克溶于100毫升純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀0. 13 克溶于100毫升純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，稱取BSA 10克，蔗糖6克，二硫蘇糖醇(DTT) 0. 7克，乙二胺四乙酸(EDTA) 0. 9克加入溶液C中，攪拌均勻，配成蛋白穩(wěn)定劑；實(shí)施例7
(1)稱取磷酸氫二鈉0.14克溶于100毫升純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀0. 13 克溶于100毫升純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，稱取BSA 11克，蔗糖7克，二硫蘇糖醇(DTT) 0. 8克，乙二胺四乙酸(EDTA) 1. 0克加入溶液C中，攪拌均勻，配成蛋白穩(wěn)定劑；
實(shí)施例8
(1)稱取磷酸氫二鈉0.142克溶于100毫升純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀 0. 136克溶于100毫升純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，稱取BSA 12克，蔗糖8克，二硫蘇糖醇(DTT) 0. 9克，乙二胺四乙酸(EDTA) 1. 1克加入溶液C中，攪拌均勻，配成蛋白穩(wěn)定劑；
實(shí)施例9
(1)稱取磷酸氫二鈉0.142克溶于100毫升純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀 0. 136克溶于100毫升純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，稱取BSA 13克，蔗糖8克，二硫蘇糖醇(DTT) 1. 0克，乙二胺四乙酸(EDTA) 1. 2克加入溶液C中，攪拌均勻，配成蛋白穩(wěn)定劑；
實(shí)施例10
(1)稱取磷酸氫二鈉0.142克溶于100毫升純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀 0. 136克溶于100毫升純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，稱取BSA 13克，蔗糖8克，二硫蘇糖醇(DTT) 1. 0克，乙二胺四乙酸(EDTA) 1. 2克加入溶液C中，攪拌均勻，配成蛋白穩(wěn)定劑；
實(shí)施例11
(1)稱取磷酸氫二鈉0.142克溶于100毫升純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀 0. 136克溶于100毫升純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，稱取BSA 14克，蔗糖8克，二硫蘇糖醇(DTT) 1. 0克，乙二胺四乙酸(EDTA) 1. 2克加入溶液C中，攪拌均勻，配成蛋白穩(wěn)定劑；
實(shí)施例12
(1)稱取磷酸氫二鈉0.142克溶于100毫升純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀 0. 136克溶于100毫升純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成溶液C
(2)量取溶液C100毫升，稱取BSA 15克，蔗糖8克，二硫蘇糖醇(DTT) 1. 0克，乙二胺四乙酸(EDTA) 1. 2克加入溶液C中，攪拌均勻，配成蛋白穩(wěn)定劑；
表1是本發(fā)明實(shí)施例1-12的測(cè)試部分結(jié)果
表1中用于測(cè)試的原料分別為
抗原胱抑素C (上海藍(lán)韻生物技術(shù)有限公司生產(chǎn))
BSA =Roche公司生產(chǎn)
檢測(cè)試劑胱抑素C檢測(cè)試劑盒(重慶中元生物技術(shù)有限公司生產(chǎn))
所用的一般化學(xué)試劑均為分析純級(jí)別
測(cè)試時(shí)把胱抑素C加入蛋白質(zhì)活性保護(hù)劑中，在奧林巴斯生化分析儀AU400上用胱抑素C檢測(cè)試劑盒檢測(cè)胱抑素C的濃度，然后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
表1:測(cè)試結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑按重量份數(shù)由下列原料組成 PH值為7. 2的磷酸鹽緩沖液100份BSA 2 15份蔗糖1 8份二硫蘇糖醇0. 1 1份乙二胺四乙酸0.2 1.2份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，其特征在于所述磷酸鹽緩沖液按重量份數(shù)由磷酸氫二鈉0. 07 0. 142份溶于100份純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀 0. 068 0. 136份溶于100份純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20制得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，其特征在于所述磷酸氫二鈉0.07 0. 142 份。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，其特征在于所述磷酸二氫鉀0.068 0. 136 份。
5.一種如權(quán)利要求1或2所述蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑的制備方法，其特征在于按如下步驟進(jìn)行(1)稱取磷酸氫二鈉0.07 0. 142份溶于100份純化水中，配成溶液A ；稱取磷酸二氫鉀0. 068 0. 136份溶于100份純化水中，配成溶液B ；用溶液B調(diào)溶液A至pH7. 20，配成磷酸鹽緩沖液；(2)量取磷酸鹽緩沖液100份，稱取BSA2 15份，蔗糖1 8份，二硫蘇糖醇0.1 1份，乙二胺四乙酸0. 2-1. 2份加入磷酸鹽緩沖液中，攪拌均勻，得到蛋白穩(wěn)定劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑及其制備方法，按重量份數(shù)磷酸氫二鈉0.07～0.142份溶于100份純化水中，配成溶液A；磷酸二氫鉀0.068～0.136份溶于100份純化水中，配成溶液B；用溶液B調(diào)溶液A至pH7.20，配成磷酸鹽緩沖液；磷酸鹽緩沖液100份、BSA2～15份、1～8份、二硫蘇糖醇0.1～1份，乙二胺四乙酸0.2-1.2份加入磷酸鹽緩沖液中，攪拌均勻，得到蛋白穩(wěn)定劑。本發(fā)明能長(zhǎng)時(shí)間保護(hù)蛋白質(zhì)活性，是一種非常好的蛋白質(zhì)保護(hù)劑，且穩(wěn)定劑組成成分常見，價(jià)格相對(duì)便宜，整個(gè)制備也比較方便，制備工序簡(jiǎn)單容易操作。
文檔編號(hào)C07K1/00GK102229642SQ20111014110
公開日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月30日
發(fā)明者吉權(quán), 李民友, 潘能科 申請(qǐng)人:吉權(quán), 李民友