一種多肽分子及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種多肽分子，所述多肽分子包含：(a)多肽分子氨基酸序列：SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；(b)在(a)限定的多肽分子中經(jīng)過缺失、插入或置換一個或幾個氨基酸且與(a)所述多肽分子具有相同生物學功能的由(a)衍生的多肽分子；所述多肽分子分子量為2289.91g/mol，等電點為11.1；其可應用于制備抗菌和促進成骨細胞生長的材料中。本發(fā)明是一種多肽分子，能簡單的與其它化合物結合，可用于各種形式的材料，具有促進成骨細胞生長，抗菌的作用，對人體無毒害作用，這種多肽分子與大分子多肽相比合成方法簡便，可產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種多肽分子及其應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領域，特別涉及一種多肽分子及其應用。

【背景技術】
[0002] 牙種植體是植入人體的缺牙部位，按其材料不同，分為金屬與合金材料類，陶瓷材 料類，碳素材料類，高分子材料類，復合材料類。種植體材料主要應用在牙列缺損和骨頭損 失的治療，這種治療感染率很高，可能會導致大量抗生素治療、去除種植體甚至死亡等嚴重 后果。種植體相關感染高發(fā)的主要原因有兩點：菌斑在種植體表面聚集和種植體骨結合界 面抵抗能力低下。為了避免種植體相關感染，移植物應具有兩方面的優(yōu)良性能：優(yōu)異的抗菌 性能和促進成骨細胞生長功能，開發(fā)具有這兩種效果的材料對于相關疾病的治療具有重要 的意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明目的之一在于提供一種具有抗菌和促進成骨細胞生長的多肽分子；本發(fā)明 目的之二在于提供該多肽分子在制備抗菌和促進成骨細胞生長的材料中的應用。
[0004] 本發(fā)明提供的技術方案為：
[0005] -種多肽分子，所述多肽分子包含：
[0006] (a)多肽分子氨基酸序列：SEQIDNo. 1所示的氨基酸序列；
[0007] (b)在（a)限定的多肽分子中經(jīng)過缺失、插入或置換一個或幾個氨基酸且與（a)所 述多肽分子具有相同生物學功能的由（a)衍生的多肽分子。
[0008] 優(yōu)選的是，所述多肽分子分子量為2289. 91g/mol。
[0009] 優(yōu)選的是，所述多肽分子等電點為11. 1。
[0010] 優(yōu)選的是，其在制備抗菌和促進成骨細胞生長的材料中的應用。種植體的鈦表面 可用連接子預處理，并且可將含有-SH基團的氨基酸（例如半胱氨酸）引入本發(fā)明多肽分 子的N末端或C末端中，以結合所述連接子的官能團。也可用連接子對鈦表面預處理后連 接多肽分子中的-NH2基團，將多肽分子連接在鈦表面。例如，結合連接子，本發(fā)明多肽分子 在N末端含有半胱氨酸以便借助于連接子與半胱氨酸之間的相互作用容易地被引入種植 體中。另外，為了將本發(fā)明多肽分子穩(wěn)定地引入種植體的鈦（Ti)表面中，優(yōu)選利用硅烷-連 接子-肽的連接關系將這些多肽分子引入種植體表面中。這樣處理得到的鈦金屬可作為牙 種植體和骨種植體使用，由于其優(yōu)異的抗菌性能和促進成骨細胞生長功能，對于避免種植 體細菌感染和挽救病人生命有重大意義。
[0011] 此外，本發(fā)明的多肽分子也可簡單應用于其他日常使用的材料表面，如塑料、玻璃 和其他金屬表面，可有效預防日常接觸引起的細菌感染。
[0012] 本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供的一種多肽分子，具有良好的抗菌能力，可殺除 金黃色葡萄球菌達到99. 99 %，對于其它菌種殺菌率均能達到99 %;同時本發(fā)明的多肽分子 具備提高成骨細胞活性的能力，通過光密度值可知，加入本發(fā)明的多肽分子的骨細胞活性 比沒有加入本發(fā)明多肽分子的活性要大大提高，促進成骨細胞分化能力的作用；通過細胞 毒性分析，可知利用本發(fā)明制作的材料無毒，作用于人體不會造成健康危害；本發(fā)明提供的 多肽分子，穩(wěn)定性強，結構易于調(diào)控，易于與其它化合物結合，可以簡單應用于各種形式的 材料，具有很明顯的應用潛力，易于大規(guī)模生產(chǎn)。
[0013] 本發(fā)明所涉及到的術語定義
[0014] 除非另外定義，否則本文所用的所有技術及科學術語都具有與本發(fā)明所屬領域的 普通技術人員通常所了解相同的含義。雖然在本發(fā)明的實踐或測試中可使用與本文所述者 類似或等效的任何方法、裝置和材料，但現(xiàn)在描述優(yōu)選方法、裝置和材料。
[0015] 術語"氨基酸"意指構成蛋白質的基本單位，賦予蛋白質特定的分子結構形態(tài)，使 它的分子具有生化活性。蛋白質是生物體內(nèi)重要的活性分子，包括催化新陳代謝的酶，兩個 或兩個以上的氨基酸化學聚合成肽，一個蛋白質的原始片段，是蛋白質生成的前體，氨基酸 廣義上是指既含有一個堿性氨基又含有一個酸性羧基的有機化合物，正如它的名字所說的 那樣。但一般的氨基酸，則是指構成蛋白質的結構單位。在生物界中，構成天然蛋白質的氨 基酸具有其特定的結構特點，即其氨基直接連接在α-碳原子上，這種氨基酸被稱為α-氨 基酸。在自然界中共有300多種氨基酸，其中α-氨基酸21種，α-氨基酸是肽和蛋白質 的構件分子，也是構成生命大廈的基本磚石之一。
[0016] 術語"多肽"意指α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物，它也是蛋白質水 解的中間產(chǎn)物。由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽，同理類推還有三肽、四 肽、五肽等，通常由10?100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽，它們的分子量低于 10000道爾頓，能透過半透膜，不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀，也有文獻把由2?10個氨基 酸組成的肽稱為寡肽（小分子肽）；10?50個氨基酸組成的肽稱為多肽；由50個以上的氨 基酸組成的肽就稱為蛋白質。
[0017] 術語"缺失"意指一個正常染色體斷裂后丟失了一個片段，這片段上的基因也隨之 失去，在本發(fā)明中意指多肽分子除了為SEQIDNo. 1所示的氨基酸序列之外，還包括多肽分 子氨基酸序列中丟失一個或幾個氨基酸的不影響其功能的新的氨基酸序列的多肽分子。
[0018] 術語"插入"意指利用基因操作技術把一段DNA接入另一段DNA中或克隆載體中 去，在本發(fā)明中意指多肽分子除了為SEQIDNo. 1所示的氨基酸序列之外，還包括多肽分子 氨基酸序列中插入一個或幾個氨基酸的不影響其功能的新的氨基酸序列的多肽分子。
[0019] 術語"置換"意指一種基因重組載體，一般利用同源重組將基因組中的某段基因替 換，而達到基因敲除的目的，在本發(fā)明中意指多肽分子除了為SEQIDNo. 1所示的氨基酸序 列之外，還包括多肽分子氨基酸序列中一個或幾個氨基酸被其他種類的氨基酸置換后的不 影響其功能的新的氨基酸序列的多肽分子。
[0020] 術語"等電點"意指在某一pH的溶液中，氨基酸或蛋白質解離成陽離子和陰離子 的趨勢或程度相等，成為兼性離子，呈電中性，此時溶液的pH成為該氨基酸或蛋白質的等 電點，生物兩性分子如蛋白質即含有酸性的，也含有堿性的官能團。組成蛋白質的氨基酸可 能是帶正電荷的、帶負電荷的、中性的或者本生是兩性的，它們的電荷加在一起是蛋白質的 電荷，PH值小于等電點時蛋白質的總電荷是正的，大于等電點時是負的。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0021] 圖1為本發(fā)明所述多肽分子對成骨細胞增殖活性的影響與普通培養(yǎng)基對成骨細 胞增殖活性影響的比較結果對照圖；
[0022] 圖2為本發(fā)明所述多肽分子對初始細胞分化能力與普通培養(yǎng)基對初始細胞分化 能力的比較結果對照圖。

【具體實施方式】
[0023] 下面結合附圖對本發(fā)明做進一步的詳細說明，以令本領域技術人員參照說明書文 字能夠據(jù)以實施。
[0024] 實施例1 :
[0025] -種多肽分子，氨基酸序列如SEQIDNo. 1所示；
[0026] SEQIDNo.I:KKPVPIIYCNKKRGKCQRM。
[0027] 實施例2 :
[0028] 多肽分子的制備：
[0029] 選用氨基酸-王樹脂作為載體（樹脂），用二氯甲烷將樹脂充分溶脹，用二甲基甲 酰胺清洗幾遍，用適當濃度的DBLK，將Fmoc-保護基團脫出，之后用二甲基甲酰胺清洗數(shù) 遍，洗去DBLK，稱取適合的縮合劑苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸鹽和活 化劑甲基嗎啉以及C端第二個Fmoc-保護氨基酸（Fmoc-Pro-OH)進行偶聯(lián)，通過茚三酮檢 測法進行檢測確保連接比較完全，用二甲基甲酰胺清洗幾遍，洗去殘留的各種殘基，活化劑 及縮合劑，依氨基酸序列進行偶聯(lián)，將所有的氨基酸連接結束后，脫去最后的Fmoc-保護基 團，用切割液裂解，去除樹脂和氨基酸保護基團，得到多肽分子的粗品，送質譜確認產(chǎn)品分 子量2289. 91g/mol符合理論值。
[0030] 實施例3 :
[0031] 抗菌能力實驗：
[0032] 一、實驗方法
[0033] 在滅菌試管中加入ImL濃度為IXIO6個/mL的菌液，加入Img本發(fā)明所提供的多 肽分子，37°C培養(yǎng)24小時后，培養(yǎng)基收集起來用倍比稀釋，稀釋倍數(shù)為10倍和涂布培養(yǎng)法 檢測活菌數(shù)。
[0034] 二、實驗結果：
[0035] 表1本發(fā)明所述多肽分子的殺菌率（％ )
[0036]

【權利要求】
1. 一種多肽分子，其特征在于，所述多肽分子包含： (a) 多肽分子氨基酸序列：SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列； (b) 在（a)限定的多肽分子中經(jīng)過缺失、插入或置換一個或幾個氨基酸且與（a)所述多 肽分子具有相同生物學功能的由（a)衍生的多肽分子。
2. 根據(jù)權利要求1所述的多肽分子，其特征在于，所述多肽分子分子量為2289. 91g/ mol 〇
3. 根據(jù)權利要求1所述的多肽分子，其特征在于，所述多肽分子等電點為11. 1。
4. 權利要求1所述的多肽分子，其特征在于，其在制備抗菌和促進成骨細胞生長的材 料中的應用。
【文檔編號】C07K7/08GK104327165SQ201410512789
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年9月29日 優(yōu)先權日:2014年9月29日
【發(fā)明者】李培源, 蘇煒, 霍麗妮, 陳睿 申請人:廣西中醫(yī)藥大學