專利名稱：大環(huán)類似物及其使用和制備的方法
背景本發(fā)明涉及藥用活性大環(huán)內(nèi)酯。軟海綿素B是一種有效的抗癌劑，最初從海洋海綿Halichondria okadai中分離出，隨后在種名待定的小軸海綿(Axinella sp.)、Phakellia carteri和種名待定的扁矛海綿(Lissondendryx sp．)中發(fā)現(xiàn)。
1992年公布了軟海綿素B的全合成(Aicher,T.D．等，j.Am.Chem.Soc.114:3162-3164)。已經(jīng)證明軟海綿素B在體外抑制微管蛋白聚合、微管的裝配、βs-微管蛋白交聯(lián)、GTP和長(zhǎng)春花堿與微管蛋白的結(jié)合以及依賴于微管蛋白的GTP水解，并已經(jīng)顯示出體外和體內(nèi)抗癌特性。
發(fā)明概述本發(fā)明提供具有藥用活性的軟海綿素類似物，所述藥用活性諸如抗癌活性或抗有絲分裂(阻斷有絲分裂)活性。這些化合物比軟海綿素B小得多。本發(fā)明的特征在于具有式(Ⅰ)的化合物 式(Ⅰ)在式(Ⅰ)中，A為C1-6飽和或C2-6不飽和烴骨架，所述骨架為未取代的，或具有1-13個(gè)取代基，最好具有1-10個(gè)取代基，例如至少一個(gè)選自氰基、鹵基、疊氮基、Q1和氧代的取代基。每個(gè)Q1獨(dú)立地選自O(shè)R1、SR1、SO2R1、OSO2R1、NR2R1、NR2(CO)R1、NR2(CO)(CO)R1、NR4(CO)NR2R1、NR2(CO)OR1、(CO)OR1、O(CO)R1、(CO)NR2R1和O(CO)NR2R1。取代基的數(shù)目可以例如為1-6、1-8、2-5或1-4。在整個(gè)說(shuō)明書(shū)中，數(shù)字范圍應(yīng)理解為包括所述數(shù)字在內(nèi)。
R1、R2、R4、R5和R6中的每個(gè)都獨(dú)立地選自H、C1-6烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6羥烷基、C1-6氨烷基、C6-10芳基、C6-10鹵代芳基(例如對(duì)氟苯基或?qū)β缺交?、C6-10羥芳基、C1-4烷氧基-C6芳基(例如對(duì)甲氧基苯基、3,4,5-三甲氧基苯基、對(duì)乙氧基苯基或3,5-二-乙氧基苯基)、C6-10芳基-C1-6烷基(例如芐基或苯乙基)、C1-6烷基-C6-10芳基、C6-10鹵代芳基-C1-6烷基、C1-6烷基-C1-10鹵代芳基、(C1-3烷氧基-C6芳基)-C1-3烷基、C2-9雜環(huán)基、C2-9雜環(huán)基-C1-6烷基、C2-9雜芳基和C2-9雜芳基-C1-6烷基。如果A被兩個(gè)不同烷氧基(OR1)諸如丁氧基和2-氨基乙氧基取代，則可以例如有一個(gè)以上的R1。
A的實(shí)例包括2,3-二羥丙基、2-羥乙基、3-羥基-4-全氟丁基、2,4,5-三羥基戊基、3-氨基-2-羥丙基、1,2-二羥基乙基、2,3-二羥基-4-全氟丁基、3-氰基-2-羥丙基、2-氨基-1-羥乙基、3-疊氮基-2-羥丙基、3,3-二氟-2,4-二羥基丁基、2,4-二羥基丁基、2-羥基-2-(對(duì)氟苯基)-乙基、-CH2(CO)(取代的或未取代的芳基)、-CH2(CO)(烷基或取代的烷基，諸如鹵代烷基或羥烷基)和3,3-二氟-2-羥基戊-4-烯基。
Q1的實(shí)例包括-NH(CO)(CO)-(雜環(huán)基或雜芳基)、-OSO2-(芳基或取代的芳基)、-O(CO)NH-(芳基或取代的芳基)、氨烷基、羥烷基、-NH(CO)(CO)-(芳基或取代的芳基)、-NH(CO)(烷基)(雜芳基或雜環(huán)基)、O(取代的或未取代的烷基)(取代的或未取代的芳基)和-NH(CO)(烷基)(芳基或取代的芳基)。
D和D’中的每一個(gè)獨(dú)立地選自R3和OR3，其中R3為H、C1-3烷氧基或C1-3鹵代烷基。D和D’的實(shí)例為甲氧基、甲基、乙氧基和乙基。在某些實(shí)施方案中，D和D’之一為H。
n的值為1，最好為0，由此形成或者6元環(huán)或5元環(huán)。該環(huán)可以是未取代的或是取代的，例如，其中E為R5或OR5，并且可以是雜環(huán)基或環(huán)烷基，例如G為S、CH2、NR6，或最好為O。
J和J’中的每一個(gè)獨(dú)立地為H、C1-6烷氧基或C1-6烷基；或J和J’結(jié)合在一起為=CH2或-O-(直鏈或支鏈C1-5亞烷基或(1,1)亞烷基)-O-，諸如環(huán)外亞甲基(exocyclic methylidene)、亞異丙基、亞甲基或亞乙基。Q為C1-3烷基，最好為甲基。T為亞乙基或亞乙烯基，任選地用(CO)OR7取代，其中R7為H或C1-6烷基。U和U’中的每一個(gè)獨(dú)立地為H、C1-6烷氧基或C1-6烷基；或U和U’結(jié)合在一起為=CH2或-O-(直鏈或支鏈C1-5亞烷基或(1,1)亞烷基)-O-。X為H或C1-6烷氧基。Y和Y’中的每一個(gè)獨(dú)立地為H或C1-6烷氧基；或Y和Y’結(jié)合在一起為=O、=CH2或-O-(直鏈或支鏈C1-5亞烷基或(1,1)亞烷基)-O-。Z和Z’中的每一個(gè)獨(dú)立地為H或C1-6烷氧基；或Z或Z’結(jié)合在一起為=O、=CH2或-O-(直鏈或支鏈C1-5亞烷基或(1,1)亞烷基)-O-。
本發(fā)明的特征在于足夠穩(wěn)定以適于研制藥物的化合物。本發(fā)明的特征也在于所公開(kāi)的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、公開(kāi)的新合成的中間體、含有一種或多種所公開(kāi)化合物的藥用組合物、制備所公開(kāi)的化合物或中間體的方法、所公開(kāi)的化合物或組合物的使用方法。使用方法包括可逆或不可逆地抑制細(xì)胞有絲分裂的方法以及體外、體內(nèi)或在患者體內(nèi)抑制癌或腫瘤生長(zhǎng)的方法。本發(fā)明的特征也在于鑒定諸如可逆或不可逆(最好是不可逆)藥劑的抗有絲分裂或抗癌劑的方法。
附圖簡(jiǎn)述

圖1是一幅圖，顯示在有絲分裂阻斷測(cè)定中隨化合物B1939的濃度而變的完成有絲分裂并回復(fù)到G1期的細(xì)胞百分比。于0小時(shí)完成有絲分裂阻斷所需的最低濃度為10nM。于10小時(shí)(洗出后)完成有絲分裂所需的最低濃度也是10nM。B1939的可逆性比率因此為1。在該圖上疊加曲線，該曲線顯示隨化合物B1939濃度而變的于第5天存活的細(xì)胞百分比。在10小時(shí)有絲分裂阻斷的相同濃度下，存活率下降至非常低的水平。
圖2是一幅圖，顯示在有絲分裂阻斷可逆性測(cè)定中隨化合物B2042的濃度而變的完成有絲分裂并回復(fù)到G1期的細(xì)胞百分比。于0小時(shí)完成有絲分裂阻斷所需的最低濃度為3nM。于10小時(shí)完成有絲分裂所需的最低濃度是100nM。B2042的可逆性比率因此為33。在該圖上疊加曲線，該曲線顯示隨化合物B2042濃度而變的于第5天存活的細(xì)胞百分比。在10小時(shí)有絲分裂阻斷的相同濃度下，存活率下降至非常低的水平。
圖3是一幅圖，顯示在LOX黑素瘤異種移植物生長(zhǎng)抑制測(cè)定中隨時(shí)間(天數(shù))而變的平均腫瘤體積(微升)。這描述了一種式(Ⅰ)化合物-B1939的抗腫瘤活性。使用紫杉醇和載體對(duì)照。
圖4是一幅圖，顯示在圖3描述的測(cè)定中隨時(shí)間(天數(shù))而變的每只小鼠的平均體重。
圖5是一幅圖，顯示在COLO 205人結(jié)腸癌異種移植物生長(zhǎng)抑制測(cè)定中隨時(shí)間(天數(shù))而變的平均腫瘤體積(微升)，說(shuō)明長(zhǎng)春花堿和長(zhǎng)春新堿的抗腫瘤活性。
發(fā)明詳述A．定義B．軟海綿素類似物C．軟海綿素類似物的合成D．藥理學(xué)活性E．應(yīng)用A．定義以下部分定義以下術(shù)語(yǔ)，并根據(jù)本文的用法定義所述術(shù)語(yǔ)。
烴骨架含有碳原子和氫原子，可以為線性、支鏈或環(huán)狀。不飽和烴包括1、2、3或更多的C-C雙鍵(sp2)或C-C三鍵(sp)。不飽和烴基的實(shí)例包括乙炔基、2-丙炔基、1-丙烯基、2-丁烯基、1,3-丁二烯基、2-戊烯基、乙烯基、烯丙基和異丙烯基。二價(jià)不飽和烴基的實(shí)例包括亞烯基和亞烷基，諸如次甲基、亞乙基、次乙基、亞乙烯基和亞異丙基。一般而言，本發(fā)明的化合物具有取代了的的烴骨架(式(Ⅰ)中的“A”)，例如被羥基、氨基、氰基、疊氮基、雜芳基、芳基和本文描述的其它部分取代。烴骨架的成對(duì)的氫原子可以被二價(jià)羰基氧原子-氧代基(=O)取代，或被環(huán)形成取代基取代，所述環(huán)形成取代基諸如-O-(直鏈或支鏈亞烷基或(1,1)亞烷基)-O-，以形成縮醛或縮酮。
C1-6烷基包括線性、支鏈和環(huán)狀烴，諸如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、仲戊基、新戊基、叔戊基、環(huán)戊基、己基、異己基、仲己基、環(huán)己基、2-甲基戊基、叔己基、2,3-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基和2,3-二甲基丁-2-基。烷氧基(-OR)、烷硫基(-SR)和其它烷基衍生部分(取代的、不飽和或二價(jià))類似于烷基(R)。烷基和烷基衍生基團(tuán)諸如代表性烷氧基、鹵代烷基、羥烷基、烯基、(1,1)亞烷基和亞烷基可以是C2-6、C3-6、C1-3或C2-4。
用鹵基、羥基、氨基、氰基、疊氮基等取代的烷基可以具有1、2、3、4、5或更多個(gè)取代基，所述取代基獨(dú)立地選擇(可以相同或可以不同)，并且可以在相同或不同碳原子上取代。例如，鹵代烷基為用至少一個(gè)選自氟、氯、溴和碘的取代基取代的烷基。鹵代烷基可以具有兩個(gè)或兩個(gè)以上的鹵基取代基，所述取代基可以是相同或不同的鹵素，可以在相同或不同碳原子上取代。實(shí)例包括氯甲基、全碘甲基、3,3-二氯丙基、1,3-二氟丁基和1-溴-2-氯丙基。
雜環(huán)基和雜芳基包括呋喃基、吡喃基、異苯并呋喃基、色烯基、占噸基、吩惡噻吩基、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基(例如1-、2-或4-咪唑基)、吡唑基、異噻唑基、異惡唑基、吡啶基(例如1-、2-或3-吡啶基)、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、中氮茚基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基(例如1-、2-或3-吲哚基)、吲唑基、嘌呤基、4H-quinolixinyl、異喹啉基、喹啉基、2,3-二氮雜萘基、1,5-二氮雜萘基、喹喔啉基、噌啉基、喋啶基、吡咯啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌啶基、哌嗪基、二氫吲哚基、異二氫氮茚基和嗎啉基。雜環(huán)基和雜芳基可以于沿環(huán)的任何位置連接至該分子的其余部分。雜環(huán)基和雜芳基可以是C2-9或更窄，諸如C3-6、C2-5或C3-7。
芳基包括苯基、芐基、萘基、甲苯基、米基、二甲苯基和枯烯基。
應(yīng)該理解，“雜環(huán)基”、“芳基”和“雜芳基”包括那些具有1、2、3、4或更多的取代基的基團(tuán)，所述取代基獨(dú)立地選自低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、氨基、鹵基、氰基、硝基、疊氮基和羥基。雜環(huán)基、雜芳基和芳基也可以是式(Ⅰ)中烴骨架“A”的二價(jià)取代基。
B．軟海綿素類似物關(guān)于概述一節(jié)中的式(Ⅰ)，本發(fā)明的實(shí)施方案包括這樣的化合物，其中n為0；其中D和D’中的每個(gè)獨(dú)立地選自R3、C1-3烷氧基和C1-3鹵代烷氧基；其中R5選自H、C2-6烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6羥烷基、C1-6氨烷基、C6-10芳基、C6-10鹵代芳基、C6-10羥芳基、C1-3烷氧基-C6芳基、C6-10芳基-C1-6烷基、C1-6烷基-C6-10芳基、C6-10鹵代芳基-C1-6烷基、C1-6烷基-C6-10鹵代芳基、(C1-3烷氧基-C6芳基)-C1-3烷基、C2-9雜環(huán)基、C2-9雜環(huán)基-C1-6烷基、C2-9雜芳基和C2-9雜芳基-C1-6烷基；和它們的組合。
其它實(shí)施方案包括具有一個(gè)或多個(gè)以下特征的化合物(a)其中A為C1-6飽和或C2-6不飽和烴骨架，所述骨架具有至少一個(gè)選自氰基、鹵基、疊氮基、Q1和氧代的取代基；(b)每個(gè)Q1獨(dú)立地選自O(shè)R1、SR1、SO2R1、OSO2R1、NR2R1、NR2(CO)R1、NR2(CO)R1和O(CO)NR2R1；(c)Z和Z’結(jié)合在一起為=O或=CH2；(d)其中每個(gè)Q1獨(dú)立地選自O(shè)R1、SR1、SO2R1、OSO2R1、NH(CO)R1、NH(CO)(CO)R1和O(CO)NHR1；(e)每個(gè)R1獨(dú)立地選自C1-6烷基、C1-6鹵代烷基、C6芳基、C6鹵代芳基、C1-3烷氧基-C6芳基、C6芳基-C1- 3烷基、C1-3烷基-C6芳基、C6鹵代芳基-C1-3烷基、C1-3烷基-C6鹵代芳基、(C1-3烷氧基-C6芳基)-C1-3烷基、C2-9雜環(huán)基、C2-9雜芳基和C2-9雜芳基-C1-6烷基；(f)D和D’中的一個(gè)是甲基或甲氧基，而另一個(gè)是H；(g)n為0；(h)G為O；(i)J和J’結(jié)合在一起為=CH2；(j)Q為甲基；(k)T為亞乙基；(1)U和U’結(jié)合在一起為=CH2；(m)X為H；(n)Y和Y’中的每個(gè)為H；且(o)Z和Z’結(jié)合在一起為=O。組合的實(shí)例為(h)-(m)的組合、(a)和(b)的組合、(f)和(h)的組合以及(h)和其中D和D’之一為甲基、而另一個(gè)為H的組合。兩個(gè)特別優(yōu)選的化合物為B1793和B1939。
另一實(shí)施方案包括這樣的化合物，其中Q1獨(dú)立地選自O(shè)R1、SR1、SO2R1和OSO2R1；其中每個(gè)R1獨(dú)立地選自C1-6烷基、C1-6鹵代烷基、C6芳基、C6鹵代芳基、C1-3烷氧基-C6芳基、C6芳基-C1-3烷基、C1-3烷基-C6芳基、C6鹵代芳基-C1-3烷基、C1-3烷基-C6鹵代芳基和(C1-3烷氧基-C6芳基)-C1-3烷基。其它實(shí)施方案包括這樣的化合物，其中D和D’中的一個(gè)是烷基或烷氧基，其中n為1；(f)如上，其中n為1；E為烷氧基，其中n為1；n為0，其中D和D’中的一個(gè)為羥基，而另一個(gè)為H；和(f)如上，其中n為1，而E為甲基。
本發(fā)明的特征也在于這樣的化合物，其中(1)A具有至少一個(gè)選自羥基、氨基、疊氮基、鹵基和氧代的取代基；(2)A為飽和烴骨架，具有至少一個(gè)選自羥基、氨基和疊氮基的取代基(例如B1793、B1939、B2042、B1794和B1922)；(3)A具有至少兩個(gè)獨(dú)立地選自以下羥基、氨基和疊氮基的取代基(例如B2090和B2136)；(4)A具有至少兩個(gè)獨(dú)立地選自羥基和氨基的取代基(例如B2042和B2090)；(5)A具有至少一個(gè)羥基取代基和至少一個(gè)氨基取代基(例如B1939和B2136)；(6)A具有至少兩個(gè)羥基取代基(例如B1793和B1794)；(7)A為被取代的C2-4烴骨架(例如B2004、B2037、B1920、B2039、B2070、B2090和B2043)；(8)A為被取代的C3烴骨架(例如B1793、B1920、B1984、B1988、B1939、B1940、B2014)；(9)A在相對(duì)于將A連接至含G環(huán)的碳原子的α位碳原子上具有(S)-羥基(例如B1793、B1939或B1920)或(R)-羥基(例如B2102、B2013、B2042)；和(10)A為C1-6飽和烴骨架，具有至少一個(gè)選自羥基和氰基的取代基(例如B2013、B2037、B2102、B2086和B2091)。(S)-羥基是指具有羥基的碳原子的構(gòu)型為(S)。本發(fā)明的實(shí)施方案也包括在相對(duì)于將A連接至含G環(huán)的碳原子的(1)α和γ,(2)β和γ或最好是(3)α和β碳原子上具有至少兩個(gè)取代基的化合物。α、β和γ碳原子可以具有(R)或(S)構(gòu)型。
本發(fā)明還提供具有以下顯示的式(1)-A的優(yōu)選化合物，其中所述取代基與上述定義的取代基相同。 式1-A本發(fā)明的特征還在于具有式(Ⅱ)的單糖中間體 式(Ⅱ)其中R為甲基或甲氧基，P1、P2和P3中的每個(gè)獨(dú)立地選自H和伯醇保護(hù)基。最好是，二醇側(cè)鏈在環(huán)平面之下，而OP2在環(huán)平面之上。伯醇保護(hù)基包括酯、醚、甲硅烷基醚、烷基醚和烷氧基烷基醚。
酯的實(shí)例包括甲酸酯、乙酸酯、碳酸酯和磺酸酯。具體實(shí)例包括甲酸酯、苯甲酰甲酸酯、氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、對(duì)氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯、4,4-(亞乙基二硫基)戊酸酯、新戊酸酯、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆酸酯、苯甲酸酯、對(duì)苯基苯甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯、碳酸酯，諸如甲酯、9-芴基甲酯、乙酯、2,2,2-三氯乙酯、2-(三甲基甲硅烷基)乙酯、2-(苯基磺酰)乙酯、乙烯酯、烯丙酯和對(duì)硝基芐酯。
甲硅烷基醚的實(shí)例包括三甲基甲硅烷基醚、三乙基甲硅烷基醚、叔丁基二甲基甲硅烷基醚、叔丁基二苯基甲硅烷基醚、三異丙基甲硅烷基醚和其它的三烷基甲硅烷基醚。烷基醚包括甲基醚、芐基醚、對(duì)甲氧基芐基醚、3,4-二甲氧基芐基醚、三苯甲基醚、叔丁基醚、烯丙基醚和烯丙氧羰基醚或衍生物。烷氧基烷基醚包括縮醛，諸如甲氧基甲基醚、甲硫基甲基醚、(2-甲氧基乙氧基)甲基醚、芐氧基甲基醚、β-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基醚和四氫吡喃基醚。芐基醚的實(shí)例包括對(duì)甲氧基芐基醚(MPM)、3,4-二甲氧基芐基醚、O-硝基芐基醚、對(duì)硝基芐基醚、對(duì)鹵基芐基醚、2,6-二氯芐基醚、對(duì)氰基芐基醚、2-和4-吡啶甲基醚。P1和P2中的每個(gè)最好為TBS，且P3為MPM(參見(jiàn)以下的醇19)。一方面，可以修改式(Ⅱ)，使得羥乙基側(cè)鏈也可以是受保護(hù)的羥基、-CH2CH2O-P4，其中P4獨(dú)立地從P1的值選擇。一種相關(guān)的中間體為醇17，其中所述羥乙基側(cè)鏈為羥甲基側(cè)鏈?？梢韵嗨频刂苽湎鄳?yīng)的羥丙基側(cè)鏈或氨烷基側(cè)鏈。
P1和P2結(jié)合在一起可以是二醇保護(hù)基，諸如環(huán)縮醛和縮酮(亞甲基、亞乙基、亞芐基、異亞丙基、亞環(huán)己基和亞環(huán)戊基)；亞甲硅基衍生物，諸如二叔丁基亞甲硅基和1,1,3,3-四異丙基二亞硅氧烷基衍生物；環(huán)碳酸酯和環(huán)硼酸酯。
加入和去除這類羥基保護(hù)基和其它保護(hù)基的方法是本領(lǐng)域眾所周知的，并且可得自例如P.J.Kocienski,Protecting Groups,Thieme,1994和T.W.Greene和P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis，第2版，John Wiley & Sons,1992。
下一小節(jié)提供式(Ⅱ)中間體和式(Ⅰ)軟海綿素類似物的代表性合成。
C．軟海綿素類似物的合成以下提供概述，然后提供合成流程1-16和幾種詳細(xì)的方案。
可以用流程1中概述的途徑制備通式4的化合物。可以按照Kishi等的方法(軟海綿素B和去甲軟海綿素(norhalichondrin)B的全合成，Aicher,T.D.；Buszek,K.R.；Fang,F.G.；Forsyth,C.J.；Jung,S.H.；Kishi,Y.；Matelich,M.C.；Scola,.M.；Spero,D.M.；Yoon,S.K.J.Am.Chem.Soc.1992,114,3162-4)，制備實(shí)例為碘代乙烯化合物X2的關(guān)鍵片段F-2。 碘代乙烯X2 按照Stamos等的方法制備相應(yīng)的甲酯XF3，通過(guò)DIBALH還原相應(yīng)的甲酯XF3可以獲得關(guān)鍵片段F-3(流程2)。[對(duì)軟海綿素的合成研究C.1-C.13片段的實(shí)際合成。Stamos,D.P.；Kishi,Y.Tetrahedron Lett.1996,37,8643-8646]。可以如流程3或流程4中所述，進(jìn)行實(shí)例為化合物20的關(guān)鍵片段F-1的合成。
采用B1793作為代表性實(shí)例，如流程5中概述進(jìn)行所述三個(gè)片段的偶合片段20和X2 Nozaki-Hiyama-Kishi偶合，然后進(jìn)行分子內(nèi)Williamson醚形成，得到四氫吡喃B2318。如流程5或者流程6中所述的保護(hù)基的改性，提供伯碘化物B2313。鹵素-金屬交換反應(yīng)和與關(guān)鍵片段F-3的偶合，得到非對(duì)映體醇B2308的混合物。另外的保護(hù)基操作和氧化，然后進(jìn)行分子內(nèi)Nozaki-Hiyama-Kishi反應(yīng)，得到一種中間體，該中間體當(dāng)氧化并用TBAF處理時(shí)，進(jìn)行分子內(nèi)異-Michael(hetero-Michael)環(huán)合反應(yīng)。PPTs間介的縮醛形成，得到B1793。
如流程7例舉的，可以將芳基引入C32側(cè)鏈(例如B2043)。將中間體B2318去保護(hù)，將所得的二醇氧化性切割，得到相應(yīng)的醛。用格氏試劑(例如p-F-PhMgBr)處理，分離所得的非對(duì)映體并甲硅烷化，得到204，將其以流程6中所述的類似方式轉(zhuǎn)化為終產(chǎn)物。
通過(guò)用合適的烷化劑處理，可以由B1793制備醚類似物(例如流程8)。同樣，可以通過(guò)用活化羰基組分處理，由B1793制備磺酸酯、酯、氨基甲酸酯等。氧化性二醇切割和還原或選擇性羥基氧化，分別提供諸如B2037和B1934的衍生物。
或者，可以將一個(gè)或多個(gè)羥基轉(zhuǎn)化為相應(yīng)氨基，隨后與活化羰基組分偶合(流程9)。也可以容易地實(shí)現(xiàn)用碳或雜原子親核體代替對(duì)磺酰中間體(例如B1920)(流程10)。
可以如流程11所概述制備C31甲基類似物。溴代烯丙酯(allylbromide ester)與2,3-O-(3-異亞丙基)-D-甘油醛的銦間介偶合，得到內(nèi)酯103。異Michael加成、內(nèi)酯還原、Wittig偶合和分子內(nèi)Michael加成，得到四氫呋喃107。Pummerer重排、保護(hù)基調(diào)節(jié)和DIBALH還原，得到關(guān)鍵片段1(例如114)，以流程6中所述方法的類似方式將其轉(zhuǎn)化為最終化合物。
可以如流程12-14所述引入氟原子。以合適的四氫呋喃中間體開(kāi)始，獲得氟化關(guān)鍵片段1，并以流程6中所述方法的相似方式將其轉(zhuǎn)化為最終化合物。
可以同樣由所述四氫呋喃中間體制備三醇衍生物。例如，如流程15中概述，將烯丙基三丁基錫烷與醛X32加成，得到高烯丙醇33，以流程6中所述方法的相似方式將其轉(zhuǎn)化為最終化合物。如流程6中例舉的，可以將這些三醇進(jìn)一步改性。
可以由先前描述的中間體制備1,3-二醇衍生物。例如，可以將B2086氧化性切割并還原，得到1,3-二醇B2091(流程16)。
流程1
流程2
流程3
流程4
流程5
流程6
流程7
流程8
流程9
流程10
流程11
流程12
流程13
流程14
流程15
流程16
試驗(yàn)部分關(guān)鍵片段F-3的合成 關(guān)鍵片段F-3．將DIBALH(1M甲苯溶液，3.86ml)于-78℃加入XF-3(1.46g,1.93mmol)的甲苯(37ml)溶液中。攪拌10分鐘后，通過(guò)小心加入MeOH(0.46ml)和水(0.21ml)猝滅反應(yīng)，溫至室溫并攪拌15分鐘。白色懸浮液通過(guò)Celite過(guò)濾，用1∶1二氯甲烷/乙醚洗滌。將濾液濃縮，并經(jīng)色譜柱純化(10％EtOAc-己烷)，得到油狀物的關(guān)鍵片段F-3(1.34g,96％)。B1793的合成 三醇1．將TBDPSCl(444ml,1.7mol)的DMF(0.5L)溶液分3份加入L-阿拉伯糖(250.0g,1.66mol)、咪唑(231.4g,3.40mol)和DMY(2.5L)的懸浮液中。每份的加入需1.5h，分別以30分鐘和15小時(shí)的間隔分開(kāi)加入第二份和第三份。將產(chǎn)生的溶液攪拌3小時(shí)，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(5％-33％EtOAc-己烷)，得到三醇1(394g,61％)。 三乙酸酯2．在1.5h內(nèi)將乙酸酐(6.06mol)于15℃下加入三醇1(1.01mol)的吡啶(1.0L)溶液中。將溶液攪拌1小時(shí)，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(15％-25％EtOAc-己烷)，得到三乙酸酯2(518g,97％)。 二乙酸酯3．在1.5小時(shí)內(nèi)將烯丙基三甲基甲硅烷(1.11mol)繼之以BF3·Oet2(1.11mmol)于0℃加入三乙酸酯2(164g,0.32mol)的甲苯(1.5L)溶液中。將橙色溶液于0℃攪拌1小時(shí)，然后于室溫下攪拌2小時(shí)。于0℃將混合物緩慢傾至飽和碳酸氫鈉水溶液(1.7L)中，然后攪拌30分鐘。分離的水層用EtOAc萃取(3×600ml)，合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(5％-10％EtOAc-己烷)，得到二乙酸酯3的混合物(108g,69％)。 二醇4a．將固體碳酸鉀(72mmol)于室溫下加入二乙酸酯3(108g,218mmol)的MeOH(0.5L)溶液中。將懸浮液攪拌2.5小時(shí)，然后濃縮。將橙色殘余物懸浮于飽和氯化銨水溶液(150ml)中，用EtOAc萃取(3×150ml)，合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(15％-50％EtOAc-己烷)，得到α-異構(gòu)體4a(33.86g,37％)和β-異構(gòu)體4b(58g,63％)。 醇5．將咪唑(16.75g,246mmol)和TBSCl(16.08g,107mmol)于0℃下加入二醇4a(33.86g,82mmol)的二氯甲烷(250ml)溶液中。于0℃18小時(shí)和于室溫下5小時(shí)后，反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(250ml)稀釋，攪拌30分鐘，讓各層分離。水層用EtOAc萃取(3×250ml)，合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(2％-50％EtOAc-己烷)，得到醇5(36.0g,83％)。 甲基醚6．將碘甲烷(16.5ml,265mmol)和NaH(60％礦物油溶液，5.28g,132mmol)于0℃下加入醇5(34.93g,66mmol)、THF(320ml)和DMF(80ml)的溶液中。于0℃19小時(shí)后，用飽和氯化銨水溶液和飽和Na2S2O3水溶液猝滅反應(yīng)。將產(chǎn)生的混合物攪拌20分鐘，讓各層分離。水相用EtOAc萃取(3×200ml)，合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(3％-50％EtOAc-己烷)，得到甲基醚6(34.23g,96％)。 二醇7．于室溫下將Hcl(37％水溶液，12.75ml,153mmol)加入甲基醚6(32.93g,61mmol)的MeOH(110ml)溶液中。17小時(shí)后，將碳酸氫鈉(17g)加入反應(yīng)混合物中。將混合物攪拌30分鐘，濃縮，懸浮于EtOAc中并過(guò)濾。將濾液濃縮并經(jīng)快速色譜純化(50％EtOAc-己烷至EtOAc)，得到二醇7(10.0g,87％)。 醇8．將新戊酰氯(8.4ml,67mmol)的吡啶(50ml)溶液在15小時(shí)內(nèi)于0℃加入二醇7(12.24g,65mmol)的吡啶(100ml)溶液中。于0℃1小時(shí)和于室溫下18小時(shí)后，混合物用飽和氯化銨水溶液稀釋，用EtOAc萃取(3×800ml)。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(50％EtOAc-己烷)，得到醇8(16.9g,96％)。 烯烴9．將芐基溴(62ml,521mmol)和Bu4NHSO4(10.6g,31mmol)于0℃加入醇8(16.9g,62mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中。將NaOH(9.95g,248mmol)的水(10ml)溶液在15分鐘內(nèi)加入反應(yīng)混合物中。于0℃30分鐘和于室溫下18小時(shí)后，反應(yīng)混合物用飽和氯化銨水溶液稀釋，用二氯甲烷萃取(3×100ml)。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(己烷至30％EtOAc-己烷)，得到烯烴9(22.1g,98％)。 二醇10．于0℃下將OsO4(0.1M甲苯溶液，7.3ml,0.73mmol)和烯烴9(24.9g,69mmol)的t-BuOH(165ml)溶液加入碳酸鉀(31.2g,161mmol)、K3Fe(CN)6(74.4g,161mmol)、(DHQ)2PYR(1.33g,1.50mmol)、水(500ml)和t-BuOH(330ml)的溶液中。于0℃3小時(shí)后，加入Na2S2O5·5H2O(37.3g,150ml)。將反應(yīng)混合物溫至室溫，攪拌1小時(shí)，用EtOAc萃取(3×300ml)。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(5％異丙醇-二氯甲烷)，得到二醇10(17.98g,75％)。 甲硅烷基醚11．將咪唑(21g,308mmol)和TBSCl(26.5g,176mmol)于室溫下加入二醇10(17.4g,44mmol)的DMF(90ml)溶液中。18小時(shí)后，反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(250ml)稀釋，攪拌1小時(shí)，周二氯甲烷萃取(3×100ml)。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(3％EtOAc-己烷)，得到甲硅烷基醚11(25.7g,94％)。 醇12．于室溫、1個(gè)大氣壓氫氣下，將甲硅烷基醚11(21.2g,33.8mmol)、Pd(OH)2(20％,4.7g,33.8mml)和EtOAc(200ml)的混合物攪拌3小時(shí)。將混合物通過(guò)Celite過(guò)濾，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(10％-20％EtOAc-己烷)，得到醇12(17.4g,96％)。 烯烴13．于0℃將4-甲基嗎啉N-氧化物(7.66g,65mmol)和TPAP(1.15g,3.26mmol)在20分鐘內(nèi)分4次加入醇12(17.4g,32.5mmol)的二氯甲烷(145ml)溶液中。20分鐘后，反應(yīng)混合物用Et2O(50ml)和飽和Na2S2O3水溶液(50ml)稀釋，并通過(guò)Celite過(guò)濾。分離有機(jī)層，用飽和CuSO4水溶液-鹽水(1∶1)和鹽水依次洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，通過(guò)Celite過(guò)濾并濃縮，得到所需的粗制酮。
通過(guò)將雙(環(huán)戊二烯基)鈦(11.36g,45.6mmol)和Me3Al(2.0M甲苯溶液，45.6ml,91.2mmol)于室溫下攪拌4天，制備Tebbe試劑。將該材料冷卻至-25℃，加入粗制酮的THF(150ml)溶液。將反應(yīng)混合物溫至0℃，攪拌30分鐘，通過(guò)緩慢加入0.1NNaOH(3.5ml)猝滅，然后于室溫下再攪拌20分鐘。混合物用Et2O稀釋，通過(guò)Celite過(guò)濾并濃縮。將殘余物溶于二氯甲烷中，通過(guò)堿性氧化鋁過(guò)濾，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(5％EtOAc-己烷)，得到烯烴13(12.8g，兩步的收率為74％)。 醇14．于0℃下將9-BBN(0.5MTHF溶液，165ml,83mmol)加入烯烴13(12.78g,24mmol)的THF(280ml)溶液中。于室溫下攪拌5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物再冷卻至0℃，此時(shí)加入水(200ml)、THF(100ml)和NaBO3·4H2O(75g)。將混合物溫至室溫，攪拌16小時(shí)，然后濃縮。水性殘余物用EtOAc萃取(4×300ml)，合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥。濃縮并經(jīng)快速色譜純化(20％-35％EtOAc-己烷)，得到醇14(12.05g,91％)。 醇15 將DMSO(9ml,127mmol)于-78℃下加入草酰氯(5.6ml,64mmol)的二氯甲烷(350ml)溶液中。攪拌15分鐘后，加入醇14(11.7g,0.021mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液，繼續(xù)攪拌1小時(shí)，此后加入Et3N(26.7ml,192mmol)。將反應(yīng)混合物溫至0℃，攪拌15分鐘，用飽和氯化銨水溶液稀釋，用二氯甲烷萃取(3×200ml)。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到所需的粗制醛。
將該材料溶于二氯甲烷(200ml)中，用Et3N(20ml)于室溫下處理。攪拌過(guò)夜后，反應(yīng)混合物用飽和氯化銨水溶液稀釋，用二氯甲烷萃取(3×200ml)。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥、濃縮并通過(guò)短SiO2柱過(guò)濾(20％EtOAc-己烷)，得到粗制差向異構(gòu)化產(chǎn)物。
將該醛溶于Et2O-EtOH(1∶1,100ml)中，冷卻至0℃，并用硼氫化鈉(1.21g,32mmol)處理。將混合物攪拌20分鐘，小心地用飽和氯化銨水溶液稀釋，于室溫下攪拌30分鐘，并用二氯甲烷萃取(3×150ml)。合并的萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥、濃縮并經(jīng)快速色譜純化(20％EtOAc-己烷)，得到醇15(9.95g，三步的收率為85％)。 MPM-醚16 將BF3·OEt2(0.1M二氯甲烷溶液，1.8ml,0.18mmol)于0℃加入醇15(9.87g,18mmol)、MPM-三氯亞氨酸酯(trichloroimidate)(4.9ml,27mmol)和二氯甲烷(175ml)的溶液中。40分鐘后，將第二份BF3·OEt2(0.1M二氯甲烷溶液，0.9ml,0.09mmol)加入反應(yīng)混合物中。20分鐘后，用飽和氯化銨水溶液猝滅反應(yīng)，于室溫下攪拌1小時(shí)，并用Et2O(600ml)稀釋。分離有機(jī)層，水層用Et2O(150ml)萃取。合并的有機(jī)萃取液用0.1N NaOH水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液、鹽水順序洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、濃縮并經(jīng)快速色譜純化(20％EtOAc-己烷)，得到MPM-醚16(10.20g,85％)。 醇17 將LAH(1M THF溶液，22.5ml,22.5mmol)于0℃加入MPM-醚16(10.05g,15mmol)的Et2O(1.0L)溶液中。30分鐘后，小心地用水(1.3ml)和1N NaOH水溶液(1.3ml)猝滅反應(yīng)。于室溫下攪拌1小時(shí)后，懸浮液通過(guò)Celite過(guò)濾，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(20％EtOAc-己烷)，得到醇17(8.18g,93％)。 烯烴18 將DMSO(5.8ml,82.4mmol)于-78℃加入草酰氯(3.6ml,41.2mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中。15分鐘后，將醇17(7.94g,13.5mmol)的二氯甲烷(35ml)溶液加入反應(yīng)混合物中。攪拌1小時(shí)后，加入Et3N(17ml,122mmol)，將混合物溫至0℃，攪拌20分鐘，用飽和氯化銨水溶液稀釋，然后用二氯甲烷(3×100ml)萃取。合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥、濃縮并通過(guò)短SiO2柱過(guò)濾(20％EtOAc-己烷)，得到所需的粗制醛。
將n-BuLi(1.6M,20ml,30mmol)于0℃下滴加至CH3PPh3Br(10.1g,30mmol)在THF(350ml)和DMSO(100ml)中的溶液中。1小時(shí)后，加入粗制醛的THF(50ml)溶液。將反應(yīng)混合物溫至室溫并攪拌3小時(shí)。加入飽和氯化銨水溶液，混合物用EtOAc萃取(3×500ml)。合并的萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮，并經(jīng)快速色譜純化(7％EtOAc-己烷)，得到烯烴18(5.57g，兩步的收率為71％)。 醇19 將9-BBN(0.5M THF溶液，65ml,33mmol于0℃下加入烯烴18(5.56g,9.6mmol)的THF(85ml)溶液中。將混合物于室溫下攪拌5小時(shí)，然后再冷卻至0℃。順序加入水(200ml)、THF(100ml)和NaBO3·4H2O(30g)。于室溫下攪拌過(guò)夜后，減壓去除有機(jī)揮發(fā)物。水性殘余物用EtOAc萃取(3×200ml)，合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(30％EtOAc-己烷)，得到醇19(12.05g,92％)。 醛20 將DMSO(1.36ml,19.2mmol)于-78℃下在4分鐘內(nèi)滴加至草酰氯(1.26ml,14.4mmol)的二氯甲烷(120ml)溶液中。攪拌10分鐘后，通過(guò)導(dǎo)管加入醇19(5.76g,9.61mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液。通過(guò)用額外的二氯甲烷沖洗(2×5ml)完成轉(zhuǎn)移。攪拌20分鐘后，混合物用Et3N(5.36ml,38.4mmol)處理，于-78℃下攪拌10分鐘，于0℃攪拌30分鐘，并于室溫下攪拌10分鐘。將反應(yīng)混合物傾至飽和碳酸氫鈉水溶液(200ml)中，分離的水層用二氯甲烷萃取(3×)，然后用EtOAc(100ml)萃取。合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(10％-20％EtOAc-己烷)，得到油狀物的醛化合物20(5.28g,92％)。 B2318于室溫下，在手套箱中將0.1％NiCl2/CrCl2(w/w,3.21g)和1％NiCl2/CrCl2(w/w,4.31g)加入醛20(3.73g,6.25mmol)、實(shí)例為碘代乙烯X2的關(guān)鍵片段F-2(5.10g,9.16mmol)、THF(85ml)和DMF(21ml)溶液中。將反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)，從手套箱中取出，冷卻至0℃，用EtOAc(100ml)稀釋，用飽和氯化銨(200ml)猝滅并攪拌30分鐘。分離的水相用EtOAc萃取(6×)，合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％-30％)，得到污染緊密洗脫的雜質(zhì)的B2318(～3g)和未環(huán)化中間體(4.61g)。將后者(4.61g,4.48mmol)溶于THF(150ml)中，冷卻至0℃并在2分鐘內(nèi)用KHMDS(0.5M甲苯溶液，14ml,7.0mmol)處理。于0℃下攪拌15分鐘后，反應(yīng)物用飽和氯化銨水溶液(150ml)猝滅并溫至室溫。分離的水層用EtOAc萃取(3×)，合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、濃縮并與以上獲得的部分純化的產(chǎn)物混合。柱色譜(10％EtOAc-己烷)，得到不可分離的～3∶1 C27非對(duì)映體混合物的B2318(3.17g,55％)。 B2317．于室溫下，將DDQ(1.45g,6.42mmol)在30分鐘內(nèi)分次加入攪拌的B2318(3.12g,3.35mmol)在二氯甲烷(50ml)和pH7磷酸緩沖液(5ml)中的溶液中。用飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)猝滅反應(yīng)，攪拌5分鐘，用額外的飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)和水(200ml)稀釋，并用Et2O(5×)萃取。合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、濃縮并經(jīng)柱色譜純化(15％-30％EtOAc-己烷)，得到回收的B2318(1.40g)和C27異構(gòu)體產(chǎn)物的混合物?；厥盏腂2318再經(jīng)過(guò)上述反應(yīng)條件，獲得額外的產(chǎn)物?；厥盏脑牧显偻ㄟ^(guò)去保護(hù)條件循環(huán)。合并所有所需材料并經(jīng)MPLC分離，得到B2317(1.65g,61％)。 B2316．將TsCl(0.63g,3.30mmol)于室溫下加入B2317(1.60g,1.97mmol)在二氯甲烷(8ml)和吡啶(2ml)中的溶液中。攪拌29小時(shí)后，用飽和碳酸氫鈉水溶液(30ml)和水(10ml)猝滅反應(yīng)。分離的水層用Et2O萃取，合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥、濃縮并經(jīng)柱色譜純化(15％-30％EtOAc-己烷)，得到油狀物的B2316(2.01g,92％)以及回收的B2317(92mg,5.8％)。 B2315．于0℃下，將LAH(1M THF溶液，2.61ml,2.61mmol)在1分鐘內(nèi)加入B2316(1.68g,1.74mmol)的Et2O(80ml)溶液中。攪拌7分鐘后，通過(guò)小心加入MeOH(0.42ml,10.4mmol)和水(0.19ml,10mmol)猝滅反應(yīng)，將反應(yīng)物溫至室溫并攪拌20分鐘。通過(guò)Celite過(guò)濾用1∶1二氯甲烷-Et2O沖洗，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(30％-40％EtOAc-己烷)，得到油狀物的B2315(1.38g,90％)。 B2314．將MMTrCl(0.70g,2.26mmol)于室溫下加入B2315(1.33g,1.51mmol)在二氯甲烷(25ml)和iPr2NEt(0.79ml,4.53mmol)中的溶液中。將所得的混合物攪拌1小時(shí)，然后傾至飽和碳酸氫鈉水溶液(20ml)、水(10ml)和Et2O(50ml)的混合物中。分離的水層用Et2O萃取(3×)。合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、濃縮并經(jīng)柱色譜純化(二氯甲烷，然后15％-30％EtOAc-己烷)，得到固體泡沫狀物的B2314(1.65g,95％)。 B2313．將B2314(1.60g,1.39mmol)和NaI(3.10g,20.8mmol)在丙酮(50ml)中的混合物于回流下加熱13小時(shí)。冷卻至室溫后，反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋并濃縮。加入水(5ml)、鹽水(20ml)和Na2S2O3(200mg)，所得的混合物用Et2O萃取(4×)。合并的萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥、濃縮并經(jīng)柱色譜純化(10％EtOAc-己烷)，得到油狀物的B2313(1.50g,97％)。 B2308．于-78℃下，將叔丁基鋰(1.7M戊烷溶液，1.00ml,1.7mmol)在1分鐘內(nèi)加入B2313(0.90g,0.81mmol)的Et2O(14ml)溶液中。攪拌9分鐘后，將混合物在4分鐘內(nèi)通過(guò)導(dǎo)管轉(zhuǎn)移至關(guān)鍵片段F-3(0.83g,1.14mmol)的Et2O(4ml)溶液中。通過(guò)用額外的Et2O(2ml)沖洗完成轉(zhuǎn)移。將所得的混合物于-78℃攪拌5分鐘，然后于0℃攪拌10分鐘，用飽和碳酸氫鈉水溶液(30ml)猝滅，并溫至室溫。分離的水層用Et2O萃取(3×)，合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。殘余物與其它2批殘余物(相當(dāng)于0.11g和0.44gB2313)混合，并經(jīng)柱色譜純化(10％-20％EtOAc-己烷)，得到固體泡沫狀物的B2307和B2308的混合物(1.86g,83％)。盡管可以經(jīng)制備型TLC分離所述異構(gòu)體(20％EtOAc-己烷)，但將它們作為混合物進(jìn)入下一步反應(yīng)。 B2305和B2306．將B2307/B2308的混合物(1.80g,1.05mmol)溶于EtOH(20ml)中，用PPTS(10.0mg,0.04mmol)處理，于室溫下攪拌11小時(shí)并用碳酸氫鈉(20.0mg,0.24mmol)猝滅。攪拌15分鐘后，將混合物濃縮，與甲苯(15ml)共沸，并經(jīng)柱色譜純化(20％-30％EtOAc-己烷)，得到固體泡沫狀物的B2305和B2306的混合物(1.22g,81％)。盡管可以經(jīng)制備型TLC分離所述異構(gòu)體(20％EtOAc-己烷)，但將它們作為混合物進(jìn)入下一步反應(yīng)。 B2304．將B2305/B2306的混合物(1.16g,0.68mmol)和Dess-Martin periodinane(0.61g,1.44mmol)的二氯甲烷(35ml)溶液于室溫下攪拌1小時(shí)。將額外的Dess-Martin periodinane(0.54g,1.27mmol)加入混合物中，并再繼續(xù)攪拌1小時(shí)?；旌衔镉肊t2O(100ml)稀釋，攪拌20分鐘，并通過(guò)Celite過(guò)濾，用Et2O沖洗。無(wú)色的濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)洗滌，分離的水層用Et2O萃取(3×)。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(10％-15％EtOAc-己烷)，得到固體泡沫狀物的B2304(0.98g,84％)。
或者，可以如下制備B2304，事實(shí)上下述的合成優(yōu)于上述合成。 向2.4mg的所述醇的29ml二氯甲烷溶液中加入770mg三氟乙酸酐(triflic anhgdride)。將混合物攪拌15分鐘，用飽和碳酸氫鈉萃取，干燥并經(jīng)色譜，得到2.737g,100％。 向所述甲磺酸酯(405mg)的DMF(0.06ml)溶液中加入二異丙基乙胺(0.130ml)，然后加入苯硫醇(0.061ml)。4小時(shí)和22小時(shí)后，加入額外的胺(0.03ml)和苯硫醇(0.015ml)。24小時(shí)后，混合物用5％乙酸乙酯/己烷(1ml)稀釋并經(jīng)色譜分離，得到409mg。 向所述硫化物(1.97g)的乙腈(16ml)溶液中加入氧化N-甲基嗎啉(NMO)，然后力加入過(guò)釕酸(Ⅶ)四丙基銨(1.02g)、(TPAP)(38mg)的乙腈(1ml)溶液中。于室溫下3.5小時(shí)后，將混合物加熱至40℃達(dá)1小時(shí)。將混合物冷卻，加入飽和硫代硫酸鈉水溶液，將混合物分配于水和乙酸乙酯之間。常規(guī)處理得到1.567g褐色油狀物。 于-78℃下，向所述新戊酸酯(1.567g)的二氯甲烷(11.2ml)溶液中加入2.5ml 1M DIBAL的甲苯溶液。15分鐘后，加入額外的DIBAL(0.8ml)。再經(jīng)5分鐘后，緩慢加入0.46ml甲醇，然后緩慢加入0.2ml水?；旌衔锿ㄟ^(guò)Celite過(guò)濾并經(jīng)色譜分離，得到1.386g油狀物。 于-40℃下，向所述砜(36mg)的DME(1ml)溶液中加入正丁基鋰(2.8相當(dāng)量)。35分鐘后，加入所述醛(42mg)的DME(0.5ml)溶液。40分鐘后，加入飽和氯化銨水溶液并用乙酸乙酯萃取該混合物。常規(guī)處理，然后經(jīng)色譜分離，得到52mg油狀物。 向所述醇(42mg)的二氯甲烷(2ml)溶液中加入Dess Martin試劑(36.4mg)。將混合物攪拌30分鐘，然后加入乙醚?；旌衔锿ㄟ^(guò)Celite過(guò)濾，用飽和碳酸氫鈉、飽和硫代硫酸鈉洗滌，以常規(guī)方式進(jìn)行處理并經(jīng)色譜分離，得到38mg油狀物。 SmI2溶液的制備將1,2-二碘乙烷的THF(10ml)溶液加入Sm(0.16g)的THF(1ml)懸浮液中。將混合物攪拌1小時(shí)。
于-78℃將0.03ml等份的該溶液加入到所述砜的THF溶液中。5分鐘后，加入額外的SmI試劑(0.05ml)。再經(jīng)數(shù)分鐘后，再加入0.25ml試劑。去除冷卻浴，加入3ml飽和碳酸氫鈉水溶液。將混合物分配于乙醚和水之間，常規(guī)處理得到9.1mg油狀物(81％)。 B2302和B2303．在手套箱中，將NiCl2/CrCl2(1％w/w,1.09g,8.86mmol)于室溫下加入B2304(1.01g,0.70mmol)的THF(600ml)和DMF(150mml)溶液中。攪拌2天后，從手套箱中取出反應(yīng)混合物，冷卻至0℃，用飽和氯化銨水溶液(300ml)猝滅，并于0℃下攪拌20分鐘。加入水(100ml)后，分離兩層，水層用EtOAc萃取(5×)。合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥、濃縮并經(jīng)柱色譜純化(15％EtOAc-己烷)，得到固體泡沫狀物的B2302和B2303的混合物(0.84g,92％)。盡管可以經(jīng)制備型TLC分離(20％EtOAc-己烷)所述異構(gòu)體，但將它們作為混合物進(jìn)入下一步反應(yīng)中。 B2301．將B2302/B233的混合物(0.79g,0.60mmol)和Dess-Martin periodinane(0.26g,0.60mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液于室溫下攪拌30分鐘。將額外的Dess-Martin periodinane(0.26g,0.60mmol)加入混合物中并再繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)。然后混合物用Et2O(100ml)稀釋，攪拌15分鐘并通過(guò)Celite過(guò)濾。濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)洗滌，分離的水層用Et2O萃取(3×)。合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥、濃縮并經(jīng)柱色譜純化(10％-15％EtOAc-己烷)，得到油狀物的B2301(0.67g,85％)。 B1793．于室溫下將TBAF(1MTHF溶液，含0.5M鹽酸咪唑，4.60ml,4.60mmol)在2分鐘內(nèi)加入B2301(0.62g,0.48mmol)的THF(29ml)溶液中，將所得的混合物攪拌18小時(shí)。用己烷(10ml)稀釋后，將反應(yīng)混合物直接上樣至用50％EtOAc-己烷填充的SiO2柱中，用50％EtOAc-己烷(1L)洗脫，然后用10％MeOH/EtOAc洗脫，收集中間體混合物。去除溶Z劑后，將殘余物溶于二氯甲烷(15ml)中并用PPTS(645mg)處理。于室溫下攪拌1小時(shí)后，加入額外的PPTS(414mg)，將所得的白色懸浮液攪拌4.5小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物直接上樣至用70％EtOAc-己烷填充的SiO2柱中，用70％EtOAc-己烷(0.5L)、EtOAc(1L)洗脫。用5％-10％MeOH/EtOAc洗脫，得到純的B1793(181mg)，用15％MeOH/EtOAc洗脫，得到額外的半純產(chǎn)物，該半純產(chǎn)物經(jīng)制備型TLC純化(10％MeOH-EtOAc)后，得到額外的純的B1793(42mg)。獲得白色固體的B1793(總共223mg,64％)。HRMS:C40H58O12+Na的計(jì)算值753.3826。實(shí)測(cè)值753.3808。B1794的合成 B1794．除了立體化學(xué)和保護(hù)基不同(流程3和5)外，以類似于用于B1793的方式(參見(jiàn)流程4和5)，將阿拉伯糖轉(zhuǎn)化為B1794。HRMS:C40H58O12+Na的計(jì)算值753.3826。實(shí)測(cè)值753.3856。代表性B1793類似物的合成 B1920和B1921．將TsCl(9.9mg,0.052mmol)于室溫下加入二醇B1793(7.6mg,0.010mmol)的二氯甲烷(1ml)和吡啶(0.1ml)溶液中。48小時(shí)后，反應(yīng)物用飽和碳酸氫鈉水溶液-鹽水的1∶4混合物猝滅，用二氯甲烷萃取(4×)。合并的萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。經(jīng)制備型TLC純化(80％EtOAc-己烷)，得到單甲苯磺酸酯B1920(6.0mg,67％)和二甲苯磺酸酯B1921(1.8mg,18％)。 B2294．于0℃下，將MsCl(0.3M二氯甲烷溶液，98μl,0.030mmol)在40分鐘內(nèi)滴加至可力丁(7μl,0.054mmol)、B1793(20.8mg,0.028mmol)和二氯甲烷(1ml)的混合物中。于4℃76小時(shí)后，用飽和碳酸氫鈉水溶液-鹽水的1∶4混合物猝滅反應(yīng)，用二氯甲烷萃取(4×)。合并的萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。將粗制產(chǎn)物溶于甲苯(3ml)中，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(1.5％MeOH-EtOAc)，得到甲磺酸酯B2294(21.4mg,95％)。 B2014和B2015．將0.016M的4-氟芐基溴的Et2O(800μl,13μmol)溶液和Ag2O(10mg,43μmol)分別分3份以1小時(shí)的間隔，加入于室溫下的B1793(1.7mg,2.3μmol)的Et2O(1.2ml)溶液中。使混合物避光，攪拌7小時(shí)，然后通過(guò)Celite過(guò)濾。濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(EtOAc)，得到伯醚B2014(1.1mg,56％)和仲醚B2015(0.6mg,31％)。HRMS(FAB):C47H63FO12+Na的計(jì)算值861.4201。實(shí)測(cè)值B2014為861.4178,B2015為861.4160。 通用方法．將B1793(1mg,1.37微摩爾)、Et3N(10微升，72微摩爾)和ArNCO(2-4相當(dāng)量)在二氯甲烷(0.2ml)中的混合物于室溫下攪拌4小時(shí)至過(guò)夜，直至經(jīng)TLC判斷反應(yīng)完成。反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉(3ml)稀釋，用二氯甲烷(3×)和EtOAc(2×)萃取，經(jīng)硫酸鈉干燥并經(jīng)制備型TLC純化(5％MeOH-二氯甲烷)，得到下述產(chǎn)物B1984．(1.0mg,86％)HRMS(FAB):C47H63NO13+Na的計(jì)算值872.4197。實(shí)測(cè)值872.4214。
B1990．(1.1mg,92％)HRMS(FAB):C47H62ClNO13+Na的計(jì)算值906.3807。實(shí)測(cè)值906.3826。
B1992．(1.0mg,83％)HRMS(FAB):C48H65NO14+Na的計(jì)算值902.4303。實(shí)測(cè)值902.4269。 B2042．將DEAD(0.4M乙醚溶液，50μl,19μmol)于室溫下加入B1793(2.0mg,2.7μmol)、三苯膦(5mg,19μmol)、4-硝基苯甲酸(3.2mg,19μmol)和Et2O(500μl)的溶液中。22小時(shí)后，將反應(yīng)混合物直接上樣至制備型TLC板上，用60％EtOAc-己烷洗脫，得到中間體二酯(3.0mg)。將該材料溶于MeOH(300μl)中，用碳酸鉀(約1mg)處理。于室溫下攪拌30分鐘后，反應(yīng)混合物用鹽水稀釋并用二氯甲烷萃取(5×)。合并的萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(5％MeOH-EtOAc)，得到B2042(1.2mg，兩步的收率為60％)。HRMS(FAB):C40H58O12+Na的計(jì)算值753.3826。實(shí)測(cè)值753.3810。 B1896和B1897．將NaBH4(3mg,0.08mmol)于室溫下加入B1793(2.30mg,3.15μmol)的1∶1二氯甲烷-MeOH(0.2ml)溶液中。濃縮反應(yīng)混合物并經(jīng)制備型TLC純化(8％MeOH-EtOAc)，得到B1896(0.80mg,35％)和B1897(2∶1混合物，0.15mg,6.5％)。B1896的HRMS(FAB):C40H60O12+Na的計(jì)算值755.3983。實(shí)測(cè)值753.3969。 B1918．將B1793(2.0mg,2.74μmol)、NaIO4(35mg,0.16mmol)、MeOH(0.8ml)和水(0.2ml)的混合物于室溫下攪拌40分鐘。反應(yīng)混合物用水(1ml)稀釋，用二氯甲烷萃取(6×)，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(5％MeOH-二氯甲烷)，得到B1918(1.9mg,100％)。 B2037．將0.034M NaBH4的EtOH溶液(0.1ml,3.4μmol)于-78℃至室溫下分次加入B1918(1.9mg,2.72μmol)的MeOH(0.8ml)和二氯甲烷(0.2ml)的溶液中，直至經(jīng)TLC判斷反應(yīng)完成。于-78℃下反應(yīng)物用飽和氯化銨水溶液(2ml)猝滅，溫至室溫，用二氯甲烷萃取(6×)，經(jīng)硫酸鈉干燥并經(jīng)制備型TLC純化(5％MeOH-二氯甲烷)，得到B2037(1.7mg,89％)。HRMS(FAB):C39H56FO11+Na的計(jì)算值723.3720。實(shí)測(cè)值723.3749。 B2035將NaIO4(35mg,0.16mmol)加入B1793(1.7mg,0.0023mmol)、MeOH(800μl)和水(200μl)的溶液中，15分鐘后，混合物用水稀釋并用二氯甲烷萃取(5×)。有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥、濃縮，將中間體醛立即溶于DMF(300μl)中。加入3-溴-3,3-二氟丙烯(3μl,0.023mmol)和銦粉(3mg,0.23mmol),24小時(shí)后加入額外的3-溴-3,3-二氟丙烯(1μl,0.008mmol)。18小時(shí)后，加入水，混合物用EtOAc萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用水和鹽水順序洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(80％EtOAc-己烷)，得到作為異構(gòu)體混合物的B2035(0.74mg，兩步的收率為41％)。HRMS(FAB):C42H58F2O11+Na的計(jì)算值799.3845。實(shí)測(cè)值799.3883。 B2008,B2011將NaBH4(2mg,0.05mmol)于室溫下加入B1793(2.2mg,0.003mmol)的1∶1二氯甲烷-MeOH(200μl)溶液中。15分鐘后，加入飽和氯化銨水溶液和水，混合物用二氯甲烷(6×)和EtOAc(2×)萃取。合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(10％MeOH-EtOAc)，得到中間體三醇，將其溶于MeOH(800μl)和水(200μl)中。加入NaIO4(35mg,0.16mmol),20分鐘后，混合物用水稀釋并用二氯甲烷萃取(6×)。有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮，將中間體醛立即溶于THF(500μl)中。加入4-氟苯基溴化鎂(2M Et2O溶液，12μl,0.024mmol),20分鐘后用飽和氯化銨水溶液猝滅反應(yīng)。混合物用二氯甲烷萃取(6×)，合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。經(jīng)制備型TLC純化(EtOAc)，得到作為4種異構(gòu)體混合物的所需產(chǎn)物(1.32mg,3步的收率為55％)。
將Dess-Martin periodinane(～3mg,0.007mmol)加入上述產(chǎn)物(0.95mg,0.0012mmol)的二氯甲烷(300μl)溶液中，于室溫下將混合物攪拌20分鐘。加入額外的Dess-Martin periodinane(～3mg,0.007mmol)和二氯甲烷(300μl)，再經(jīng)40分鐘后，加入Et2O、飽和碳酸氫鈉水溶液(4ml)和飽和Na2S2O3水溶液(1ml)?；旌衔镉肊t2O萃取(3×)，合并的萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％EtOAc-己烷)，得到B2008(0.58mg,61％)。HRMS(FAB):C45H57FO11+Na的計(jì)算值815.3783。實(shí)測(cè)值815.3758。
B2011．以相似方式，將B1793(1.9mg,0.003mmol)轉(zhuǎn)化為B2011(0.87mg,4步的收率為42％)。HRMS(FAB):C45H58O11+Na的計(jì)算值797.3877。實(shí)測(cè)值797.3877。 B2013將B1920(1.4mg,0.0016mmol)、KCN(1mg,0.016mmol)和DMSO(500μl)的溶液于60℃加熱8小時(shí)。冷卻至室溫后，加入水，混合物用EtOAc萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液順序用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(80％EtOAc-己烷)，得到B2013(0.78mg,67％)。HRMS(FAB):C42H57NO11+Na的計(jì)算值762.3829。實(shí)測(cè)值762.3848。 X1920將B1920(1.3mg,1.47mmol)、NaI(30mg,過(guò)量)和丙酮(1ml)的混合物于60℃加熱3.5小時(shí)。冷卻至室溫后，反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(3ml)稀釋，用二氯甲烷(5×)和EtOAc萃取，經(jīng)硫酸鈉干燥，并經(jīng)柱色譜純化(50％EtOAc-二氯甲烷至80％EtOAc-己烷)，得到碘化物X1920(1.3mg,100％)。
X1920B1998:Ar=p-Cl-PhB2010:Ar=p-MeO-PhB2019:Ar=2-咪唑通用方法．于室溫下攪拌碘化物X1920(1.0相當(dāng)量)、iPr2EtN(11-22相當(dāng)量)和ArSH(9-46相當(dāng)量)和DMF(0.3ml)的混合物，直至經(jīng)TLC判斷反應(yīng)完成(通常為24-48小時(shí))。反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(2ml)稀釋，用二氯甲烷和EtOAc萃取，經(jīng)硫酸鈉干燥并經(jīng)制備型TLC純化(80％EtOAc-己烷或5％MeOH-二氯甲烷)，得到下述產(chǎn)物B1998．(1.3mg得到1.1mg,85％)HRMS(FAB):C46H61ClO11S+Na的計(jì)算值897.3521。實(shí)測(cè)值897.3533。
B2010．(1.1mg得到0.7mg,59％)HRMS(FAB):C47H64O12S+Na的計(jì)算值875.4016。實(shí)測(cè)值875.4057。
B2019．(1.1mg得到0.7mg,61％)HRMS(FAB):M+Na B1998:Ar=p-Cl-Ph B2016:Ar=p-Cl-PhB2010:Ar=p-MeO-PhB2030:Ar=p-MeO-Ph
通用方法．將0.01M mCPBA(1.2相當(dāng)量)的二氯甲烷溶液于0℃加入硫化物(1.0相當(dāng)量)的二氯甲烷(0.5ml)溶液中達(dá)30分鐘。反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉(2ml)稀釋，用二氯甲烷和EtOAc萃取，經(jīng)硫酸鈉干燥并經(jīng)制備型TLC純化(80％EtOAc-己烷或EtOAc)，得到下述產(chǎn)物B2016．(0.9mg得到0.7mg,74％)B2030．(1.0mg得到0.6mg,61％)HRMS(FAB):C47H64O14S+Na的計(jì)算值907.3914。實(shí)測(cè)值907.3950。 B1934．將TBDPSCl(3.0μl,12μmol)于室溫下加入B1793(1.3mg,1.78μmol)、咪唑(10mg,166μmol)和DMF(0.10ml)的溶液中。攪拌1小時(shí)后，反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(2ml)稀釋，用二氯甲烷(3×)和EtOAc(2×)萃取，經(jīng)硫酸鈉干燥，并經(jīng)制備型TLC純化(5％MeOH-二氯甲烷)，得到中間體甲硅烷基醚(1.3mg,77％)。
將該材料溶于二氯甲烷(0.5ml)中并用Dess-Martin periodinane(10mg,24μmol)于室溫下處理1.5小時(shí)，用Et2O稀釋，并通過(guò)Celite過(guò)濾。將濾液濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(50％EtOAc-己烷)，得到二酮中間體(1.0mg,77％),將其溶于THF(0.5ml)中并用含0.01M鹽酸咪唑的0.02M TBAF(THF溶液，75μl,1.5μmol)于室溫下處理15分鐘。反應(yīng)混合物通過(guò)SiO2柱洗脫(50％EtOAc-己烷至5％MeOH-二氯甲烷)，得到B1934(0.75mg,100％)。HRMS(FAB):C40H56FO12+Na的計(jì)算值751.3669。實(shí)測(cè)值751.3690。B1939的合成 B1922將疊氮化四正丁基銨(0.2M DMF溶液，0.5ml,0.10mmol)于室溫下加入甲磺酸酯B2294(21.4mg,0.026mmol)的DMF(2ml)溶液中。于83℃3.5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(80％乙酸乙酯-己烷)，得到B1922(18mg,92％)。 B1939將Me3P(1M THF溶液)和水(0.8ml)于室溫下順序加入疊氮化物B1922(24.6mg,0.032mmol)的THF(3.2ml)溶液中。將混合物攪拌22小時(shí)，用甲苯稀釋，濃縮并經(jīng)快速色譜純化[階梯式梯度，10％MeOH-EtOAc，然后MeOH-EtOAc-30％氫氧化銨水溶液(9∶86∶5)]，得到所需的伯胺(23.3mg)，其經(jīng)1H-NMR檢測(cè)含有～1％氧化三甲基膦。從苯中凍干并在高度真空下靜置2天，得到B1939(20.3mg,87％)。
代表性B1939類似物的合成B1930,B1940,B1973,B1987,B1988,B1991,B2003,B2004 B1930將Me3P(1M THF溶液，13μl,0.013mmol)于室溫下加入B1922(1.6mg,2.1μmol)、THF(400μl)和水(100μl)的溶液中。將混合物攪拌22小時(shí)，用甲苯稀釋，濃縮并與甲苯共沸干燥(2×)，得到粗制胺，將其直接用于下一步。
將EDC(0.06M二氯甲烷溶液，100μl,11μmol)于室溫下加入所述粗制胺、苯甲酰甲酸(0.8mg,5.3μmol)和二氯甲烷(200μl)的溶液中。30分鐘后，反應(yīng)物用飽和碳酸氫鈉水溶液-鹽水的1∶4混合物猝滅，并用二氯甲烷萃取(5×)。合并的萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(EtOAc)，得到B1930(1.5mg，兩步的收率為83％)。HRMS(FAB):C48H63NO13+Na的計(jì)算值884.4197。實(shí)測(cè)值884.4166。
B1940采用上述用于B1930的方法，將B1922還原，與3-吡啶乙酸鹽酸鹽偶合，并經(jīng)制備型TLC純化[(MeOH-EtOAc-30％氫氧化銨水溶液(9∶86∶5)]，得到B1940(0.8mg，兩步的收率為67％)。HRMS(FAB):C47H64N2O12+Na的計(jì)算值871.4357。實(shí)測(cè)值871.4362。
B1973采用上述方法，將B1922(0.9mg,1.2μmol)還原，與苯乙酸偶合，并經(jīng)制備型TLC純化(5％MeOH-EtOAc)，得到B1973(0.44mg，兩步的收率為44％)。HRMS(FAB):C48H65NO12+Na的計(jì)算值870.4404。實(shí)測(cè)值870.4447。
B1987采用上述方法，將B1922(0.9mg,1.2μmol)還原，與3-吲引哚基二羥乙酸偶合，并經(jīng)制備型TLC純化(3％MeOH-EtOAc)，得到B1987(0.8mg，兩步的收率為75％)。HRMS(FAB):C50H64N2O12+Na的計(jì)算值923.4306。實(shí)測(cè)值923.4338。
B1991采用上述方法，將B1922(1.0mg,1.3μmol)還原，與4-氯苯甲酸偶合，并經(jīng)制備型TLC純化(3％MeOH-EtOAc)，得到B1991(0.8mg，兩步的收率為70％)。HRMS(FAB):C47H62ClNO12+Na的計(jì)算值890.3858。實(shí)測(cè)值890.3843。
B2003采用上述方法，將B1922(1.0mg,1.3μmol)還原，與3,4,5-三甲氧基苯甲酰甲酸偶合，并經(jīng)制備型TLC純化(EtOAc)，得到B2003(0.7mg，兩步的收率為56％)。HRMS(FAB):C51H69NO16+Na的計(jì)算值974.4514。實(shí)測(cè)值974.4525。
B2004采用上述方法，將B1922(1.0mg,1.3μmol)還原，與3,4,5-三甲氧基苯甲酸偶合，并經(jīng)制備型TLC純化(5％MeOH-EtOAc)，得到B2004(0.7mg，兩步的收率為58％)。HRMS(FAB):C49H65NO13+Na的計(jì)算值946.4565。實(shí)測(cè)值946.4599。 B1988 將Dess-Martin periodinane(1mg,2.3μmol)于室溫下加入B1930(0.80mg,0.93μmol)的二氯甲烷(500μl)溶液中。1小時(shí)后，反應(yīng)物用Et2O稀釋并通過(guò)Celite過(guò)濾。濾液順序用飽和碳酸氫鈉水溶液-Na2S2O3的1∶9混合物和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(80％EtOAc-己烷)，得到B1988(0.45mg,56％)。HRMS(FAB):C48H61NO13+Na的計(jì)算值882.4041。實(shí)測(cè)值884.4012。B2090的合成 化合物103．將銦粉(1.35g,11.8mmol)于室溫下加入102(3.38g,17.6mmol)的DMF(20ml)溶液中。攪拌30分鐘后，將反應(yīng)混合物冷卻至0℃。然后加入純?nèi)?01(3.72g,28.6mmol)，將混合物攪拌過(guò)夜，同時(shí)讓溫度溫至室溫。將反應(yīng)混合物再冷卻至0℃，然后小心地用飽和氯化銨水溶液(100ml)猝滅。攪拌30分鐘后，得到的混合物用Et2O萃取(3×)，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(10％-20％EtOAc-己烷)，得到純晶體103(2.20g,59％)。 化合物104．將Et3N(72μl,0.51μmol)加入103(1.09g,5.13mmol)和苯硫酚(0.63ml,7.16mmol)的二氯甲烷溶液中，將所得的混合物于0℃攪拌1小時(shí)。通過(guò)SiO2過(guò)濾，得到104和105的混合物，該混合物在MPLC(15％-20％EtOAc-己烷)后，得到104(0.53g,32％)和105(0.92g,56％)。 化合物106．將DIBALH(1M甲苯溶液，3.28ml,3.28mmol)于-78℃下加入104(0.53g,1.64mmol)的甲苯(10ml)溶液中，將混合物于-78℃下攪拌10分鐘。通過(guò)小心地加入MeOH(0.40ml,9.84mmol)和水(0.17ml,9.84mmol)猝滅反應(yīng)，溫至室溫并攪拌20分鐘。白色的懸浮液通過(guò)Celite和SiO2的混合物過(guò)濾，用1∶1二氯甲烷-Et2O沖洗，濃縮，得到油狀物的106(0.53g,100％)。
化合物107．將106(0.53g,1.64mmol)和(三苯基亞膦基(triphenylphosphoranylidene))乙酸乙酯(1.15g,3.29mmol)在甲苯(10ml)中的混合物加熱至80℃達(dá)15小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，并引入DBU(25μl,0.16mmol)。將混合物加熱至80℃達(dá)1.5小時(shí)，冷卻至室溫，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(10％-20％EtOAc-己烷)，得到油狀物的107(0.54g,83％)(α∶β異構(gòu)體為3∶1)。 化合物108．將mCPBA溶液(～55％,450mg溶于4.5ml二氯甲烷中，1.44mmol)于-78℃下力加入107(0.54g,1.36mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(50ml)、水(10ml)和Et2O(60ml)稀釋，然后溫至室溫。分離的水層用EtOAc萃取(4×)，合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(50％EtOAc-己烷)，得到油狀物的108(0.51g,92％)。 化合物109．將108(0.51g,1.24mmol)和NaOAc(1.00g,12.4mmol)在Ac2O(10ml)中的混合物于140℃下攪拌12小時(shí)，冷卻至室溫，然后濃縮。將殘余物分配于飽和碳酸氫鈉水溶液(20ml)和Et2O(30ml)之間，于室溫下劇烈攪拌30分鐘。分離的水層用Et2O萃取(2×)，合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(5％-15％EtOAc-己烷)，得到油狀物的109(0.41g,73％)。 化合物110．將109(0.41g,0.91mmol)和碳酸鉀(44.3mg,0.32mmol)在EtOH(5ml)中的混合物加熱至60-70℃達(dá)1小時(shí)。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物濃縮并通過(guò)SiO2柱洗脫(10％-20％EtOAc-己烷)，得到部分純化的醛中間體。將該材料溶于EtOH(2.5ml)中，用NaBH4(50mg,1.32mmol)處理，并于室溫下攪拌30分鐘。將混合物濃縮并經(jīng)柱色譜純化(40％EtOAc-己烷)，得到110(181mg,66％)。 化合物111．將BF3·OEt2(0.05M二氯甲烷溶液，175μl,8.75μmol)于0℃下加入110(181mg,0.60mmol)和2,2,2-三氯乙酰亞氨酸(trichloroacetidate)對(duì)甲氧基芐酯(0.50ml,1.80mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中。將所得的混合物于0℃攪拌1.5小時(shí)，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，直至反應(yīng)完成?；旌衔镉蔑柡吞妓釟溻c水溶液(25ml)猝滅，用Et2O萃取(5×)。合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(二氯甲烷，然后20％EtOAc-已烷)，得到油狀物的半純111(0.37g,＞100％)。 化合物112．將111(0.37g，最大=0.60mmol)和TsOH·H2O(36mg)在EtOH(5ml)中的混合物最初于室溫下攪拌過(guò)夜，然后于60℃攪拌1小時(shí)。于室溫下加入額外的TsOH·H2O(31mg)，將反應(yīng)混合物于室溫下攪拌1小時(shí)。然后濃縮混合物，用飽和碳酸氫鈉水溶液猝滅并用EtOAc萃取(5×)。合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％-50％EtOAc-己烷，然后5％MeOH-二氯甲烷)，得到油狀物的112(121mg,53％)和回收的111(49mg,21％)。 化合物113．將TBSOTf(250μl,1.09mmol)于0℃下加入112(121mg,0.32mmol)和Et3N(176μl,1.26mmol)的二氯甲烷溶液中，將所得的混合物攪拌25分鐘。反應(yīng)物用飽和碳酸氫鈉水溶液(15ml)猝滅，分離的水層用乙醚萃取(3×)。合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(5％-10％EtOAc-己烷)，得到油狀物的113(165mg,85％)。 化合物114．將DIBALH(1M甲苯溶液，0.54ml,0.54mmol)于-78℃下加入113(165mg,0.27mmol)的甲苯(5ml)溶液中，將所得的混合物于-78℃攪拌10分鐘。通過(guò)小心地加入MeOH(65μl,0.81mmol)和水(29μl,0.81mmol)猝滅反應(yīng)物，將其溫至室溫并攪拌25分鐘。白色的懸浮液通過(guò)Celite過(guò)濾，用1∶1二氯甲烷-Et2O洗滌。濃縮并經(jīng)柱色譜純化(10％-20％EtOAc-己烷)，得到油狀物的114(153mg,100％)。 B2090．以類似于流程6中用于合成B1794的方式，將中間體114轉(zhuǎn)化為B2090。HRMS(FAB):C39H56O11+Na的計(jì)算值723.3720。實(shí)測(cè)值723.3731。 B2136．以類似于用于B1939的方式，將B2090轉(zhuǎn)化為B2136。HRMS(FAB):C39H57NO10+Na的計(jì)算值722.3880。實(shí)測(cè)值722.3907。B2039/B2043的合成 二醇201．將TBAF(1M THF溶液，383μl,0.383mmol)加入X2318(350-LS-218)(80.0mg,0.0765mmol)的THF(7ml)溶液中，并于室溫下攪拌16小時(shí)。部分濃縮后，將殘余物直接上樣至用30％EtOAc-己烷填充的SiO2柱。梯度洗脫(30％EtOAc-己烷至EtOAc)，得到二醇201(49.7mg,92％)。 醛202．將二醇201(49.7mh,0.0707mmol)、NaIO4(100mg,0.47mmol)、MeOH(10ml)和水(2.5ml)的混合物于室溫下攪拌30分鐘。加入水，混合物用二氯甲烷萃取(4×)。合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(30％EtOAc-己烷)，得到醛202(41.7mg,88％)。 醇203將4-氟苯基溴化鎂(2M Et2O溶液，155μl,0.31mmol)加入醛202(41.7mg,0.062mmol)的THF(6ml)溶液中。于室溫下15分鐘后，反應(yīng)物用飽和氯化銨水溶液猝滅，并用二氯甲烷萃取(4×)。合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(40％EtOAc-己烷)，得到作為C34異構(gòu)體1∶1混合物的醇203(32.4mg,68％)。在此階段分離出少量不想要的C27異構(gòu)體，從其中也分離出C34異構(gòu)體的1∶1混合物(8.4mg,18％)。 醚204將Et3N(18μl,0.13mmol)和TBSOTf(15μl,0.063mmol)于0℃下加入醇203(32.4mg,0.042mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中。20分鐘后，通過(guò)加入飽和氯化銨水溶液猝滅反應(yīng)物，并用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％EtOAc-己烷)，得到醚204(33.1mg,89％)。 醇205將LAH(1M THF溶液，113μl,0.113mmol)于0℃下滴加至醚204(33.1mg,0.0375mmol)的Et2O(10ml)溶液中。20分鐘后，加入水和1M NaOH，將混合物于室溫下攪拌10分鐘。通過(guò)Celite過(guò)濾，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(40％EtOAc-己烷)，得到醇205(28.4mg,95％)。 醚206將二異丙基乙胺(31μl,0.18mmol)和MMTrCl(22mg,0.071mmol)于0℃加入醇205(28.4mg,0.0356mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中。于室溫下15分鐘后加入水，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(40％EtOAc-己烷)，得到作為C34差向異構(gòu)體～1.5∶1混合物的醚206(45mg，定量)，該混合物含有少量緊密洗脫的雜質(zhì)。 醇207將DDQ(40mg,0.18mmol)于0℃下加入醚206(37mg,0.034mmol)在二氯甲烷(4ml)和tBuOH:pH7磷酸緩沖液的1∶10混合物(2ml)中的溶液中。將混合物在黑暗中劇烈攪拌15分鐘。以10分鐘的間隔再加入3份DDQ(40mg,0.18mmol),然后反應(yīng)物用飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋并用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(30％EtOAc-己烷)，得到醇207(19.2mg,59％)以及回收的醚206(9.7mg,26％)。 甲磺酸酯208A和208B將Et3N(19μl,0.13mmol)和Ms2O(10mg,0.056mmol)于0℃下順序加入醇207(21.3mg,0.022mmol)的二氯甲烷(6ml)溶液中。30分鐘后，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(30％EtOAc-己烷)，得到作為單一C34異構(gòu)體的甲磺酸酯208A(11.7mg,51％)和208B(6.5mg,28％)。 B2039和B2043．類似于流程6中用于合成B1794的方式，將非對(duì)映體208A和208B獨(dú)立地轉(zhuǎn)化為B2039和B2043。HRMS(FAB):C45H59FO11+Na的計(jì)算值817.3939。實(shí)測(cè)值B2039為8817.3896,B2043為817.3910。B2086、B2088、B2091的合成 醇X-20將NaIO4(1.16g,5.4mmol)于0℃下加入二醇10a,b(1.19g,3.0mmol)的MeOH-H2O(4∶1,75ml)溶液中。讓反應(yīng)混合物溫至室溫。攪拌40分鐘后，混合物用EtOAc稀釋，通過(guò)Celite過(guò)濾，濃縮并分配于鹽水和二氯甲烷之間。分離的水層用二氯甲烷萃取(2×)。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到粗制醛中間體。
將NaBH4(228mg,6.0mmol)于0℃下加入所述醛的MeOH-Et2O(1∶1,40ml)溶液中。將混合物攪拌30分鐘，小心地用飽和氯化銨水溶液猝滅，于室溫下攪拌20分鐘，并用二氯甲烷萃取(3×)。合并的萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(40％-50％EtOAc-己烷)，得到醇X-20(1.02g，兩步的收率為93％)。 甲硅烷基醚21將咪唑(0.94g,13.9mmol)和TBSCl(0.59g,3.89mmol)于室溫下順序加入醇X-20(1.02g,2.78mmol)的DMF(10ml)溶液中。14小時(shí)后，反應(yīng)混合物用飽和氯化銨水溶液稀釋并用EtOAc萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(5％-15％EtOAc-己烷)，得到甲硅烷基醚21(1.3g,98％)。 醇22將Pd(OH)2(20％,0.8g)、甲硅烷基醚21(1.3g,2.70mmol)和EtOAc(30ml)的混合物在1個(gè)大氣壓的氫氣、室溫下攪拌1小時(shí)，通過(guò)Celite過(guò)濾，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(20％-40％EtOAc-己烷)，得到醇22(0.96g,91％)。 醇25將N-氧化4-甲基嗎啉(980mg,8.4mmol)和TPAP(131mg,3.26mmol)于室溫下順序加入醇22(1.78g,4.6mmol)的二氯甲烷(45ml)溶液中。為了控制放熱必需冷卻浴。20分鐘后，反應(yīng)混合物用己烷稀釋，通過(guò)短SiO2柱過(guò)濾(15％EtOAc-己烷)并濃縮，得到粗制酮。
于0℃下將Tebbe試劑(14.9ml,9.0mmol)在10分鐘內(nèi)加入粗制酮的THF(60ml)溶液中。20分鐘后，將反應(yīng)混合物傾至預(yù)冷卻至-78℃的Et2O(100ml)中，通過(guò)緩慢加入水(30ml)猝滅，溫至室溫，攪拌30分鐘，并用Et2O萃取(4×)。合并的萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(10％EtOAc-己烷)，得到污染有偕二甲基產(chǎn)物的所需烯烴(1.07g)。將該混合物直接用于下一步中。
將9-BBN(0.5M THF溶液，11.6ml,5.8mmol)于0℃下加入所述烯烴的THF(15ml)溶液中。讓反應(yīng)混合物溫至室溫，攪拌5小時(shí)，然后再冷卻至0℃。加入水(60ml)、THF(60ml)和NaBO3·4H2O(5.7g)。于室溫下攪拌5小時(shí)后，減壓去除THF，水性殘余物用EtOAc萃取(4×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(20％-40％EtOAc-己烷)，得到醇25(605mg,3步的收率為18％)。 醇26采用先前描述的方法，將醇25(604mg,1.49mmol)按順序氧化、異構(gòu)化和還原。經(jīng)快速色譜純化(20％-40％EtOAc-己烷)，得到醇26(550mg,3步的收率為91％)。 MPM-醚27將BF3·OEt2(0.05M二氯甲烷溶液，270μl,0.013mmol)于0℃下加入醇26(545mg,1.35mmol)和MPM-三氯亞氨酸酯(1.14g,4.0mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中。1小時(shí)后反應(yīng)物用飽和碳酸氫鈉水溶液猝滅，用二氯甲烷萃取，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(10％-15％EtOAc-己烷)，得到MPM-醚27(580mg,82％)。 醇28將LAH(1M THF溶液，1.9ml,1.9mmol)于0℃下加入MPM-醚27(580mg,1.11mmol)的Et2O(100ml)溶液中。30分鐘后，小心用水(0.5ml)和1N NaOH水溶液(0.5ml)猝滅反應(yīng)物，于室溫下攪拌1小時(shí)，通過(guò)Celite過(guò)濾，濃縮經(jīng)快速色譜純化(30％-50％EtOAc-己烷)，得到醇28(460mg,95％)。 烯烴29于-78℃下將DMSO(441μl,6.23mmol)加入草酰氯(272μl,3.12mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中。15分鐘后，將醇28(458mg,1.04mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液加入反應(yīng)混合物中。于-78℃下攪拌1小時(shí)后，加入Et3N(1.3ml,9.35mmol)。將反應(yīng)混合物溫至0℃，攪拌10分鐘，用飽和氯化銨水溶液稀釋并用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并通過(guò)短SiO3柱過(guò)濾(20％-30％EtOAc-己烷)，得到粗制醛。
于0℃下將n-BuLi(1.63M,1.4ml,2.28mmol)滴加至CH3PPh3Br(815mg,2.28mmol)、THF(20ml)和DMSO(7.5ml)的溶液中。1小時(shí)后，加入所述醛的THF(10ml)溶液。將反應(yīng)混合物溫至室溫并攪拌3小時(shí)。加入飽和氯化銨水溶液，混合物用EtOAc萃取(4×)。合并的有機(jī)萃取液用水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(10％-15％EtOAc-己烷)，得到烯烴29(380mg，兩步的收率為95％)。 化合物31于0℃將9-BBN(0.5M THF溶液，6ml,3mmol)加入到烯烴29(370mg,0.85mmol)的THF(7ml)溶液中。使混合物溫至室溫并攪拌1小時(shí)。再冷卻至0℃后，加入水(30ml)、THF(20ml)和NaBO3·4H2O(2.8g)。于室溫?cái)嚢?小時(shí)后，減壓除去THF。用EtOAc萃取水性殘余物(4×)，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(25％-50％EtOAc-己烷)，得到醇30，將其直接用于下一步。
于室溫下將新戊酰氯(157μl,1.27mmol)加入到醇30的二氯甲烷-吡啶(1∶1混合物，10ml)溶液中。18小時(shí)后，加入另外的新戊酰氯(100μl,0.81mmol)。1小時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，用MeOH(0.5ml)猝滅，濃縮，用鹽水稀釋并用二氯甲烷萃取(4×)。合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(10％-15％EtOAc-己烷)，得到化合物31(410mg，兩步的收率為90％)。 醇32于室溫下將TBAF(1M THF溶液，1.14ml,1.14mmol)加入31(410mg,0.761mmol)的THF(5ml)溶液中。1.5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物濃縮并經(jīng)快速色譜純化(40％EtOAc-己烷至100％EtOAc)，得到醇32(320mg,100％)。
醇33a和33b于室溫下將Dess-Martin periodinane(925mg,2.18mmol)加入醇32(309mg,0.727mmol)的二氯甲烷(19ml)溶液中。1小時(shí)后，反應(yīng)物用Et2O稀釋并通過(guò)Celite過(guò)濾。濾液順序用飽和碳酸氫鈉水溶液-Na2S2O3的1∶9混合物和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(20％-30％EtOAc-己烷)得到所需醛，將其立即用于下一步。
于-78℃下，將BF3·OEt2(135μl,1.1mmol)加入所述粗制醛、三正丁基烯丙基錫(337μl,1.08mmol)和二氯甲烷(16ml)的溶液中。1小時(shí)后，反應(yīng)物用飽和碳酸氫鈉水溶液猝滅，用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)MPLC純化(25％-30％EtOAc-己烷)，得到主要的極性較強(qiáng)的醇33a(165mg，兩步的收率為49％)和次要的極性較弱的產(chǎn)物33b(90mg，兩步的收率為27％)。 化合物34 于0℃下將TBSOTf(163μl,0.710mmol)加入醇33a(165mg,0.355mmol)、Et3N(247μl,1.78mmol)和二氯甲烷(5ml)的溶液中。25分鐘后，反應(yīng)物用飽和碳酸氫鈉水溶液猝滅，用二氯甲烷萃取(3×)，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(15％-20％EtOAc-己烷)，得到化合物34(200mg,98％)。 二醇35a和35b 于0℃下將OsO4(0.1M甲苯溶液，32μl,3.2μmol)加入碳酸鉀(168mg,1.22mmol)、K3Fe(CN)6(400mg,1.22mmol)、(DHQ)2PYR(11mg,12μmol)、水(3.2ml)和t-BuOH(2.2ml)的溶液中。然后將烯烴34(200mg,0.345mmol)的t-BuOH(1ml)溶液加入反應(yīng)混合物中。于0℃ 5小時(shí)后，加入Na2S3O5·5H2O(200mg)。將反應(yīng)混合物溫至室溫，攪拌30分鐘，并用二氯甲烷萃取(5×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(70％EtOAc-己烷)，得到主要的極性較低的二醇35a(118mg,56％)和次要的極性較強(qiáng)的非對(duì)映體產(chǎn)物35b(74mg,35％)。各種非對(duì)映體分別用于隨后的反應(yīng)中。 化合物36于0℃下將TBSOTf(177μl,0.77mmol)加入二醇35a(118mg,0.192mmol)、Et3N(267μl,1.92mmol)和二氯甲烷(5ml)的溶液中。25分鐘后，反應(yīng)物用飽和碳酸氫鈉水溶液猝滅，用二氯甲烷萃取(3×)，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(10％-15％EtOAc-己烷)，得到化合物36(161mg,100％)。 醇37采用上述用于制備醇28的方法，由化合物36(161mg,0.192mmol)開(kāi)始，在經(jīng)快速色譜純化(20％-40％EtOAc-己烷)后，得到醇37(135mg,93％)。 醛38 將Dess-Martin periodinane(227mg,0.535mmol)于室溫下加入醇37(135mg,0.178mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中。1小時(shí)后，反應(yīng)混合物用Et2O稀釋并通過(guò)Celite過(guò)濾。濾液順序用飽和碳酸氫鈉水溶液-Na2S2O3的1∶9混合物和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(10％-20％EtOAc-己烷)，得到醛38(127mg,95％)。 B2086,B2102．以類似于流程6中用于B1794所述方法的方式，將上述獲得的每種非對(duì)映體分別轉(zhuǎn)化為終產(chǎn)物。由非對(duì)映體35a得到B2086。由非對(duì)映體35b得到B2102。 B2088 將NaIO4于室溫下加入B2086(1mg,1.29μmol)的MeOH-水(4∶1,1ml)溶液中。30分鐘后，反應(yīng)混合物用水稀釋，用二氯甲烷萃取(6×)，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到B2088(1.2mg)。 B2091 于-78℃下，將NaBH4(0.013M EtOH溶液，20μl,0.27μmol)加入B2088(1mg,1.29μmol)的MeOH-二氯甲烷(4∶1,0.5ml)溶液中。定期加入額外的NaBH4，同時(shí)經(jīng)TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)(總共需要220μlNaBH4溶液)。反應(yīng)混合物于0℃用飽和氯化銨水溶液猝滅，于室溫下攪拌20分鐘，并用二氯甲烷萃取(6×)。合并的萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(7％MeOH-EtOAc)，得到B2091(0.40mg,50％)。B1933的合成 醇303 于0℃下，將9-BBN(0.5M THF溶液，23ml,0.012mol)在30分鐘內(nèi)滴加至鏈烯302(1.51g,0.00386mol)的THF(40ml)溶液中。于室溫下攪拌80分鐘后，將混合物冷卻至0℃，小心加入水(80ml)，然后加入NaBO3·4H2O(4.2g,0.027mol)。將混合物于室溫下劇烈攪拌2.3小時(shí)，用EtOAc萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(50％EtOAc-己烷)，得到醇303(1.37g,87％)。 醛304于-78℃下，將草酰氯(88μl,1.00mmol)滴加至DMSO(142μl,2.00mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中。30分鐘后，加入醇303(137mg,0.335mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液，并于-78℃攪拌1小時(shí)。加入Et3N(420μl,3.01mmol),10分鐘后，將反應(yīng)物于0℃下攪拌10分鐘，此時(shí)加入飽和氯化銨水溶液，所得的混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(50％EtOAc-己烷)，得到中間體醛304(0.114g,84％)，將其立即用于下一步。 醇305 于0℃下將TBAF(1M THF溶液，5μl,0.005mmol)加入醛304(0.114g,0.27mmol)的CF3TMS(0.5M THF溶液，1.1ml,0.54mmol)溶液中。20分鐘后，加入第二份TBAF(1M THF溶液，100μl,0.1mmol),將混合物攪拌10分鐘，此時(shí)滴加過(guò)量的TBAF(1M THF溶液，270μl,0.27mmol)以切割所述中間體甲硅烷基醚。30分鐘后，混合物用水稀釋并用EtOAc萃取(3×)。有機(jī)萃取液用水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(50％EtOAc-己烷)，得到作為不可分離的1∶1異構(gòu)體混合物的醇305(123mg,95％)。 甲硅烷基醚306于0℃下，將TBSOTf(265μl,1.16mmol)加入醇305(123mg,0.257mmol)和Et3N(430μl,3.08mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液中。于室溫下攪拌20分鐘后，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％EtOAc-己烷)，得到甲硅烷基醚306(148mg,97％)。 醇307于0℃下，將LAH(1M THF溶液，220μl,0.22mmol)滴加至甲硅烷基醚306(131mg,0.22mmol)的Et2O(5ml)溶液中。20分鐘后，小心地加入水和1M NaOH。將混合物于室溫下攪拌30分鐘，通過(guò)玻璃棉過(guò)濾，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(50％EtOAc-己烷)，得到醇307(112mg，定量)。 鏈烯309 于-78℃下，將草酰氯(58μl,0.66mmol)滴加至DMSO(94μl,1.3mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。30分鐘后，加入醇307(112mg,0.22mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液。1小時(shí)后，加入Et3N(276μl,1.98mmol)，于-78℃下10分鐘后，將反應(yīng)物于0℃攪拌10分鐘。加入飽和氯化銨水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(50％EtOAc-己烷)，得到醛308(101mg,91％)，將其立即用于下一步。
于0℃下將nBuLi(1.63M THF溶液，200μl,0.33mmol)滴加至CH3PPh3Br(118mg,0.33mmol)的THF(3ml)和DMSO(1.2ml)溶液中。70分鐘后，加入醛308(10lmg,0.20mmol)的THF(3ml)溶液，于0℃10分鐘后，將反應(yīng)物于室溫下攪拌1小時(shí)。加入飽和氯化銨水溶液，混合物用EtOAc萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％EtOAc-己烷)，得到鏈烯309(90.9mg,90％)。 醇310于0℃下，將9-BBN(0.5M THF溶液，17ml,8.45mmol)滴加至鏈烯309(1.06g,2.11mmol)的THF(30ml)溶液中。于室溫下攪拌2.5小時(shí)后，將反應(yīng)物冷卻至0℃，小心加入水(80ml)，然后小心加入NaBO3·4H2O(3.25g,21.1mmol)。將混合物于室溫下劇烈攪拌2小時(shí)，然后用水稀釋并用EtOAc萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％-30％EtOAc-己烷)，得到醇310(0.920g,84％)。 新戊酸酯(pivaloate)311 將醇310(65.8mg,0.0126mmol)、吡啶(61μl,0.76mmol)和PvCl(23μl,0.189mmol)在二氯甲烷(3ml)中的混合物于室溫下攪拌5小時(shí)。在相似條件下進(jìn)行利用醇310(0.92g,1.76mmol)的第二個(gè)反應(yīng)，在以下處理期間合并兩個(gè)反應(yīng)物加入飽和氯化銨水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％EtOAc-己烷)，得到新戊酸酯311(1.08g，定量)。 醇312 將醚311(0.811g,1.33mmol)、DDQ(6.1g,27mmol)和tBuOH:pH7磷酸緩沖液的10∶1混合物(42ml)在二氯甲烷(84ml)中的混合物在黑暗中于室溫下劇烈攪拌1.5小時(shí)，此時(shí)加入額外的DDQ(1.0g,4.4mmol)。1小時(shí)后，加入飽和碳酸氫鈉水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(4×)。合并的有機(jī)萃取液用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水順序洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％EtOAc-己烷)，得到醇312(0.56g,87％)以及回收的原材料311(97mg,12％)。 酮313 將草酰氯(21μl,0.12mmol)于-78℃下滴加至DMSO(23ul,0.48mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中。1小時(shí)后，加入醇312(39.4mg,0.081mmol)的二氯甲烷(1.5ml)溶液，將混合物攪拌1.5小時(shí)。加入Et3N(100μl,0.73mmol),10分鐘后將混合物溫至0℃。加入飽和氯化銨水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(30％EtOAc-己烷)，得到酮313(36.6mg,93％),將其立即用于下一步。 鏈烯314 于0℃下，將Tebbe試劑(～0.65M甲苯溶液，720μl,0.47mmol)滴加至酮313(151mg,0.31mmol)的THF(5ml)溶液中。15分鐘后，小心地加入水，混合物用EtOAc萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(10％EtOAc-己烷)，得到鏈烯314(139mg,93％)。 醇315于0℃下，將9-BBN(0.5MTHF溶液，6.0ml,2.9mmol)滴加至鏈烯314(468mg,0.97mmol)的THF(10ml)溶液中。將混合物于室溫下攪拌2小時(shí)，此時(shí)加入額外的9-BBN(0.5M THF溶液，500μl,0.25mmol)。2.5小時(shí)后，將反應(yīng)物冷卻至0℃，小心加入水(10ml)，然后小心地加入NaBO3·4H2O(1.5g,9.7mmol)。將混合物于室溫下劇烈攪拌5小時(shí)，用水稀釋并用EtOAc萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(梯度20％-30％EtOAc-己烷)，得到醇315(0.47g,97％)。 醇316將草酰氯(246μl,2.82mmol)于-78℃下滴加至DMSO(400μl,5.64mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中。1小時(shí)后，加入醇315(0.47g,0.94mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液，將混合物攪拌1小時(shí)。加入Et3N(1.2ml,8.5mmol),10分鐘后將混合物溫至0℃并攪拌10分鐘。加入飽和氯化銨水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。于室溫下將粗制醛在二氯甲烷(20ml)和Et3N(2ml)中劇烈攪拌過(guò)夜。加入飽和氯化銨水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(30％EtOAc-己烷)，得到差向異構(gòu)化醛，將其立即溶于1∶1 EtO∶EtOH(10ml)中并冷卻至0℃。加入NaBH4(35mg,0.94mmol),10分鐘后反應(yīng)物用飽和氯化銨水溶液猝滅。混合物用EtOAc萃取(3×)，合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(30％EtOAc-己烷)，得到醇316(0.410g,3步的收率為87％)。 醚317 于0℃下，將醇316(60.7mg,0.12mmol)和MPMOTCI(0.10g,0.36mmol)混合，從甲苯中共沸(3×)，并在高度真空下干燥過(guò)夜。加入二氯甲烷(3ml)，將混合物冷卻至0℃。加入BF3·OEt2(約1μl,0.01mmol)，攪拌10分鐘后，反應(yīng)物用飽和氯化銨水溶液猝滅。混合物用二氯甲烷萃取(3×)，合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(30％EtOAc-己烷)，得到醚317(55.4mg,74％)。 醇318 于0℃下，將LAH(1M THF溶液，104μl,0.104mmol)滴加至醚317(54mg,0.087mmol)的Et2O(5ml)溶液中。30分鐘后，小心地加入水和1M NaOH。將混合物于室溫下攪拌10分鐘，通過(guò)玻璃棉過(guò)濾，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(30％-50％EtOAc-己烷)，得到醇318(45.5mg,98％)。 醛319 將草酰氯(11μl,0.13mmol)于-78℃下滴加至DMSO(18μl,0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中。1.8小時(shí)后，加入醇318(22.6mg,0.042mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液，將混合物攪拌1小時(shí)。加入Et3N(53μl,0.38mmol),10分鐘后將混合物溫至0℃并攪拌10分鐘。加入飽和氯化銨水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(20％EtOAc-己烷)，得到醛319(21.7mg,97％)。 B1933．類似于流程6中用于合成B1794的方式，將中間體319轉(zhuǎn)化為B1933。HRMS(FAB):C41H57F3O11+H的計(jì)算值783.3931。實(shí)測(cè)值783.3940。 B1942．將B1897(2mg,2.73μmol)、NaIO4(35mg,0.16mmol)、MeOH(0.8ml)和水(0.2ml)的混合物于室溫下攪拌30分鐘。然后反應(yīng)混合物用水(3ml)稀釋，并用二氯甲烷(6×)和EtOAc(2×)萃取。合并的有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥并經(jīng)柱色譜純化(5％MeOH-二氯甲烷)，得到所需醛。
將該材料溶于THF(0.1ml)中，冷卻至0℃，并用0.5M CF3TMS的THF(30μl,15mmol)溶液處理，然后用0.05M TBAF的THF(5ml,0.025mmol)溶液處理。攪拌30分鐘后，反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液(2ml)和水(1ml)稀釋，用EtOAc萃取(6×)，經(jīng)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮，得到粗制雙TMS醚。
將該材料溶于THF(5ml)中并用含有0.5M鹽酸咪唑(8μl,8μmol)的1M TBAF的THF溶液于室溫下處理30分鐘。反應(yīng)混合物通過(guò)SiO2柱洗脫(50％EtOAc-己烷至EtAOc)，得到二醇中間體。
將該產(chǎn)物和Dess-Martin periodinane(10mg,24mmol)在二氯甲烷(0.5ml)中的混合物于室溫下攪拌1小時(shí)，用Et2O(5ml)稀釋并通過(guò)Celite過(guò)濾。將濾液濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(50％EtOAc-己烷)，得到B1942(1.5mg,5步的收率為72％)。HRMS(FAB):C40H55F3O11+H的計(jì)算值767.3516。實(shí)測(cè)值767.3542。
B2070/2073的合成 醇401將NaIO4(375mg,1.74mmol)、X400(674mg,1.58mmol)、MeOH(16ml)和水(4ml)的混合物于室溫下攪拌1小時(shí)。用水稀釋后，混合物用二氯甲烷萃取(4×)，合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(30％EtOAc-己烷)，得到中間體醛(570mg)，將其立即溶于DMF(15ml)中。加入銦(275mg,2.4mmol)和3-溴-3,3-二氟丙烯(240μl,2.4mmol)，于室溫下攪拌17小時(shí)后加入水和0.1M HCl。混合物用EtOAc萃取(3×)，合并的有機(jī)萃取液順序用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(20％-30％EtOAc-己烷)，得到作為C34異構(gòu)體的1∶1混合物的醇401(605mg，兩步的收率為81％)。 二醇402 將OsO4(1個(gè)晶體)、醇401(605mg,1.28mmol)、N-氧化4-甲基-嗎啉(0.45g,3.84mmol)、丙酮(30ml)和水(6ml)的混合物于室溫下攪拌29小時(shí)。加入額外的OsO4(3個(gè)晶體)和N-氧化4-甲基嗎啉(0.1g,0.8mmol),2天后加入飽和Na2S2O3水溶液?；旌衔镉枚燃淄檩腿?6×)，合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。將粗制中間體三醇立即溶于4∶1MeOH水(25ml)中并加入NaIO4(0.41g,1.9mmol)。于室溫下劇烈攪拌2小時(shí)后，混合物用水稀釋，用二氯甲烷萃取(3×)，合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮，得到中間體醛，將其立即溶于1∶1 EtOH-Et2O(30ml)中，并冷卻至0℃。加入NaBH4(48mg,1.3mmol),20分鐘后，反應(yīng)物用水猝滅并用二氯甲烷萃取(4×)。合并的有機(jī)萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(50％EtOAc-己烷)，得到二醇402(485mg,3步的收率為80％)。 甲硅烷基醚403 將TBSOTf(2.3ml,10mmol)于0℃下滴加至二醇402(485mg,1.0mmol)、Et3N(2.8ml,20mmol)和二氯甲烷(30ml)的混合物中。于室溫下攪拌1小時(shí)后，加入飽和氯化銨水溶液，混合物用二氧甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％EtOAc-己烷)，得到甲硅烷基醚403(668mg,95％)。 醇404 于0℃將LAH(1M THF溶液，2.8ml,2.8mml)滴加至甲硅烷基醚403(668mg,0.948mmol)的Et2O(60ml)溶液中。15分鐘后，小心地加入水和1M NaOH。將混合物于室溫下攪拌20分鐘，通過(guò)玻璃棉過(guò)濾，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(30％EtOAc-己烷)，得到醇404(500mg,85％)。
醛405將草酰氯(210μl,2.42mmol)于-78℃下滴加至DMSO(345μl,4.84mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中。1小時(shí)后，加入醇404(500mg,0.806mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液。40分鐘后加入Et3N(1.0ml,7.2mmol)。于-78℃下攪拌10分鐘后，將反應(yīng)混合物溫至0℃并再攪拌10分鐘。加入飽和氯化銨水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液順序用水、鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。經(jīng)快速色譜純化(30％EtOAc-己烷)，得到醛405(486mg,98％)，將其立即用于下一步。 鏈烯406 于0℃下將nBuLi(1.63M,860μl,1.4mmol)滴加至CH3PPh3Br(500mg,1.4mmol)的THF(15ml)和DMSO(6ml)溶液中。1小時(shí)后，加入醛405(486mg)的THF(15ml)溶液。將反應(yīng)混合物溫至室溫并攪拌30分鐘。加入飽和氯化銨水溶液，混合物用EtOAc萃取(3×)，合并的萃取液順序用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％EtOAc-己烷)，得到鏈烯406(450mg,93％)。 酯407 于0℃下，將9-BBN(0.5M THF溶液，9.0ml,4.5mmol)滴加至鏈烯406(0.460g,0.746mmol)的THF(10ml)溶液中。溫至室溫后，將混合物攪拌3小時(shí)，以30分鐘的間隔加入另2份9-BBN(0.5MTHF溶液，3.0ml,1.5mmol)。將反應(yīng)物再冷卻至0℃，此時(shí)小心加入THF(10ml)、水(10ml)和NaBO3·4H2O(1.72g,11.2mmol)。將混合物于室溫下劇烈攪拌1.5小時(shí)，加入額外的NaBO3·4H2O(1.0g,6.5mmol)。2小時(shí)后混合物用水稀釋并用EtOAc萃取(3×)。合并的萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％-30％EtOAc-己烷)，得到中間體醇(509mg)，將其立即溶于二氯甲烷(10ml)中，并用吡啶(600μl,7.5mmol)和PvCl(275μl,2.2mmol)處理。6小時(shí)后，加入飽和氯化銨水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％-30％EtOAc-己烷)，得到酯407(423mg，兩步的收率為79％)。 醇408 于室溫下，在氫氣氛圍下，將酯407(11mg,0.015mmol)和Pd(OH)2/C(10mg)在EtOAc(500μl)中的混合物劇烈攪拌6小時(shí)。將混合物通過(guò)Celite過(guò)濾，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(30％EtOAc-己烷)，得到醇408(9.4mg，定量)。 鏈烯409 于-78℃、氮?dú)庀聦⒉蒗Ｂ?7μl,0.075mmol)滴加至DMSO(11μl,0.15mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中。40分鐘后，加入醇408(15.2mg,0.025mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液，將反應(yīng)物于-78℃下攪拌1小時(shí)。加入Et3N(31μl,0.22mmol)，攪拌10分鐘后，將混合物溫至0℃。10分鐘后，反應(yīng)混合物用飽和氯化銨水溶液猝滅并用二氯甲烷萃取(3×)。合并的萃取液順序用水和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮?？焖偕V(30％EtOAc-己烷)后，將中間體酮(13mg)立即溶于THF(500μl)中，并用Tebbe試劑(～0.65M甲苯溶液，62μl,0.040mmol)于0℃處理。1.5小時(shí)后加入另外的Tebbe試劑(～0.65M甲苯溶液，62μl,0.040mmol)，10分鐘后，小心地加入水，然后小心地加入鹽水?；旌衔镉肊tOAc萃取(3×)，合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(10％EtOAc-己烷)，得到鏈烯409(11.9mg,兩步的收率為80％)。 醇410 于0℃下，將9-BBN(0.5M THF溶液，1.5ml,0.72mmol)滴加至鏈烯409(0.144g,0.242mmol)的THF(2ml)溶液中。溫至室溫后，將混合物攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物再冷卻至0℃，此時(shí)小心地加入THF(2ml、水(2ml)和NaBO3·4H2O(0.38g,2.4mmol)。將混合物于室溫下劇烈攪拌4小時(shí)，用水稀釋并用EtOAc萃取(3×)。合并的萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％EtOAc-己烷)，得到醇410(0.140g,94％)。 醇411 將草酰氯(26μl,0.30mmol)于-78℃下滴加至DMSO(43μl,0.60mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中。1小時(shí)后，加入醇410(57mg,0.093mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液。45分鐘后，加入Et3N(125μl,0.90mmol)。于-78℃下攪拌10分鐘后將混合物溫至0℃并再攪拌10分鐘。加入飽和氯化銨水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。將粗制產(chǎn)物溶于二氯甲烷(4ml)中，用Et3N(400μl)處理并于室溫下攪拌15小時(shí)。加入飽和氯化銨水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(30％EtOAc-己烷)，得到中間體醛(48mg)，將其立即溶于1∶1 Et2O∶EtOH(4ml)中，冷卻至0℃并用固體NaBH4(～4mg,0.09mmol)處理。攪拌15分鐘后，小心地加入飽和氯化銨水溶液，混合物用EtOAc萃取(3×)。合并的萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)柱色譜純化(20％-30％EtOAc-己烷)，得到醇411(45.6mg,3步的收率為80％)。 412A和412B 將醇411(120mg,0.196mmol)和MPMOTCI(0.17g,0.59mmol)混合，從甲苯中共沸(3×)并在高度真空下干燥1小時(shí)。加入二氯甲烷(9ml)并將混合物冷卻至0℃。滴加BF3·OEt2(0.016M二氯甲烷溶液，125μl,0.002mmol)，攪拌20分鐘后，反應(yīng)物用飽和氯化銨水溶液猝滅?；旌衔镉枚燃淄檩腿?3×)，合并的萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(20％EtOAc-己烷)，得到中間體MPM醚，其含有某些緊密洗脫的雜質(zhì)。將該材料立即溶于Et2O(10ml)中，于0℃下用LAH(1M THF溶液，300μl,0.300mmol)處理。10分鐘后，加入水和1M NaOH，于室溫下攪拌10分鐘后，將混合物通過(guò)Celite過(guò)濾，濃縮并經(jīng)制備型TLC純化(35％EtOAc-己烷)，得到作為單一C34異構(gòu)體的412A(49mg，兩步的收率為39％)和作為C34異構(gòu)體的約9∶1混合物的412B(46mg，兩步的收率為36％)。 B2070和B2073．類似于流程4和6中用于合成B1794的方式，將中間體412A和412B分別轉(zhuǎn)化為B2070和B2073。對(duì)于B2070:HRMS(FAB):C41H58F2O12+Na的計(jì)算值803.3794。實(shí)測(cè)值803.3801。對(duì)于B2073:HRMS(FAB):C41H58F2O12+Na的計(jì)算值803.3793。實(shí)測(cè)值803.3781。B1963的合成 二醇501(64) 將飽和碳酸氫鈉水溶液(21ml)和KBr(89mg,0.75mmol)加入二醇10(1.35g,3.4mmol)的二氯甲烷(34ml)溶液中。將混合物冷卻至0℃，順序加入4-甲氧基-2,2,6,6-四甲基-1-哌啶氧基(0.05M二氯甲烷溶液，7.45ml,0.37mmol)和NaOCl(0.07M水溶液，5.6ml,0.39mmol)。1小時(shí)后，反應(yīng)混合物用飽和Na2S2O3水溶液猝滅，用飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋，并用二氯甲烷萃取(3×)。合并的萃取液經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并溶于THF(21ml)中。
冷卻至0℃后，順序加入CF3TMS(1.5g,10.5mmol)和TBAF(0.1M THF溶液，680μl,0.068mmol)。攪拌40分鐘后，加入額外的TBAF(1M THF溶液，8.3ml,8.3mmol)。30分鐘后，反應(yīng)物用水猝滅并用EtAOc萃取(3×)。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥，濃縮并經(jīng)快速色譜純化(30％、40％、50％EtOAc-己烷，然后EtOAc),得到2∶1的二醇混合物(553mg,35％)。經(jīng)MPLC分離(1.5％MeOH-二氯甲烷)，得到主要的極性較強(qiáng)的異構(gòu)體501(64)(340mg,22％)和次要的極性較低的異構(gòu)體(152mg,10％)。 B1963．以類似于流程4和6中描述的用于B1794合成的方式，將中間體501轉(zhuǎn)化為B1963。
B2320和相關(guān)類似物的合成 通過(guò)在諸如甲醇的溶劑中用合適的胺處理B2294數(shù)小時(shí)至數(shù)天，制備這些化合物。通過(guò)薄層色譜監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的一種標(biāo)準(zhǔn)處理方法提供所需的化合物。以下方法制備ER803868；然而，該方法是通用的，并且可以用來(lái)制備任何所需的類似物。
ER803868的合成向B2294(1.2mg)的甲醇(0.5ml)溶液中加入嗎啉(0.012ml)。將化合物攪拌10天，在第1、2、3、4和8天加入額外的嗎啉(0.012ml)。然后將混合物色譜分離，得到1.4mg所需化合物。 B2320R=N,N-二甲氨基B2330R=N-異丙基氨基B2336R=N-甲基氨基B2339R=N-叔丁基氨基B2417R=N-2-羥乙基氨基B2418R=N-哌嗪基B2489R=N,N-雙-(2-羥乙基)氨基B2490R=N-1,3-二羥基-2-丙氨基B2491R=N-芐氨基ER803834 R=N-哌啶基ER803835 R=N-吡咯烷基ER803836 R=N-3-(R)-羥基吡咯烷基ER803843 R=N-高哌啶基ER803845 R=N-對(duì)甲氧基芐氨基ER803846 R=N-苯乙氨基ER803851 R=N-2-(S-羥甲基)吡咯烷基ER803852 R=N-2-(R-羥甲基)吡咯烷基ER803868 R=N-嗎啉基ER803869 R=N-乙氨基ER803870 R=N-咪唑基(imidazoyl)ER803883 R=N,N-二乙氨基ER803884 R=N-對(duì)氯芐氨基D．藥理學(xué)活性測(cè)試許多所述各個(gè)公開(kāi)的藥物的體外和體內(nèi)活性(參見(jiàn)以下表1)。篩選方法包括在96孔微量滴定板形式中采用DLD-1人結(jié)腸癌細(xì)胞(ATCC保藏號(hào)CCL 221)的標(biāo)準(zhǔn)的體外細(xì)胞生長(zhǎng)抑制測(cè)定(Finlay,G.J.等Analytical Biochemistry 139:272-277,1984)、U397(ATCC保藏號(hào)CRL 1593)有絲分裂阻斷可逆性測(cè)定(下述的)和在某些情況下采用LOX人黑素瘤腫瘤異種移植物體內(nèi)生長(zhǎng)抑制測(cè)定(參見(jiàn)表1)。也檢查了抗酯酶降解的化學(xué)穩(wěn)定性。U937有絲分裂阻斷可逆性側(cè)定將U937人組織細(xì)胞性淋巴瘤細(xì)胞以2.5×106細(xì)胞加入75cm2組織培養(yǎng)瓶的含有10％胎牛血清的22.5ml RPMI培養(yǎng)基1640中。在含5％CO2的潮濕氛圍中，在37℃下36小時(shí)培養(yǎng)期間讓細(xì)胞適應(yīng)培養(yǎng)。然后將每種試驗(yàn)藥物以2.5ml10×終濃度加入瓶中。達(dá)到的終濃度為0.1-1000nM，以半對(duì)數(shù)增加，總共10個(gè)濃度階梯，包括接受2.5ml培養(yǎng)基的無(wú)藥物對(duì)照瓶。在含5％CO2的潮濕氛圍中，在37℃下將細(xì)胞與藥物一起溫育12小時(shí)的預(yù)處理期。
取出每瓶的內(nèi)容物，于室溫下以300×g離心10分鐘，此后從細(xì)胞沉淀中去除含藥物的培養(yǎng)基。將細(xì)胞再懸浮于25ml溫的無(wú)藥物培養(yǎng)基中并于室溫下以300×g離心10分鐘。從細(xì)胞沉淀中去除培養(yǎng)基后，將細(xì)胞再懸浮于35ml溫的無(wú)藥物培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)移至新培養(yǎng)瓶中，立即從每個(gè)培養(yǎng)瓶中取出10ml細(xì)胞樣品，立即如下所述進(jìn)行處理，并貯存用于以后的細(xì)胞周期分析(藥物洗出的0小時(shí))。
將剩余的無(wú)藥物培養(yǎng)基中含有的25ml細(xì)胞再培養(yǎng)10小時(shí)。從每個(gè)培養(yǎng)瓶中取出10ml細(xì)胞樣品，立即處理并貯存用于以后的細(xì)胞周期分析(藥物洗出的10小時(shí))，并將10ml新鮮更換培養(yǎng)基加入每個(gè)培養(yǎng)瓶中。將無(wú)藥物培養(yǎng)基中的細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)5天。第2天，從每個(gè)培養(yǎng)瓶中取出20ml培養(yǎng)基和細(xì)胞，用20ml新鮮培養(yǎng)基取代。5天后，采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器，通過(guò)錐蟲(chóng)藍(lán)排除技術(shù)定量測(cè)量細(xì)胞存活率。
采用Becton Dickinson Immunocytometry Systems原始資料1.11節(jié)中公開(kāi)的方法(由懸浮液制備醇固定的全細(xì)胞用于DNA分析)的修改方法，進(jìn)行細(xì)胞的細(xì)胞周期分析。簡(jiǎn)而言之，于藥物洗出0小時(shí)和10小時(shí)，從培養(yǎng)瓶中取出每種細(xì)胞樣品10ml，分別以300×g離心10分鐘。去除細(xì)胞沉淀的培養(yǎng)基后，將細(xì)胞再懸浮于3ml冷鹽水中。在劇烈渦旋攪拌下緩慢加入7毫升冷100％乙醇。將得自化合物洗出期0小時(shí)和10小時(shí)的乙醇處理的細(xì)胞樣品于4℃貯存過(guò)夜。將乙醇處理的細(xì)胞以300×g離心10分鐘，去除乙醇，然后將細(xì)胞在10ml磷酸緩沖鹽溶液(PBS)中洗滌。將細(xì)胞重懸浮于0.5ml 0.2mg/ml核糖核酸酶A(Sigma No.R-5503)的PBS溶液中，并在37℃水浴中溫育30分鐘。
將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至合適的流式細(xì)胞儀試管中，每個(gè)試管加入0.5ml 10mg/ml碘化丙錠(propidium iodide)(PI)(Sigma No.P4170)的PBS溶液。在用流式細(xì)胞儀(Becton Dickison FACScan流式細(xì)胞儀或等同物)分析之前，將細(xì)胞與PI一起于室溫、黑暗中溫育至少15分鐘。應(yīng)當(dāng)在1小時(shí)內(nèi)分析細(xì)胞并將細(xì)胞保持在4℃、黑暗中，直至準(zhǔn)備就緒。在0小時(shí)和10小時(shí)，用流式細(xì)胞儀測(cè)量細(xì)胞熒光強(qiáng)度，進(jìn)行細(xì)胞周期分析。在線性放大的規(guī)模上測(cè)量每個(gè)細(xì)胞的碘化丙錠熒光，采用雙峰鑒別法忽略雙峰事件。根據(jù)分析15,000個(gè)細(xì)胞獲得的結(jié)果以直方圖顯示，在X軸上為增加的熒光強(qiáng)度，而在y軸上為特定強(qiáng)度水平的細(xì)胞數(shù)。
PI染色的強(qiáng)度取決于細(xì)胞中DNA的量，因此鑒別處于細(xì)胞周期的不同時(shí)期的細(xì)胞是可能的，所述細(xì)胞諸如由于最后的有絲分裂而尚未合成DNA(G1期)的細(xì)胞、處于DNA合成中期(S期)的細(xì)胞和具有加倍的DNA互補(bǔ)物且準(zhǔn)備進(jìn)行分裂(G2期)的細(xì)胞。與G1期細(xì)胞相比，在細(xì)胞周期的有絲分裂期被阻斷的細(xì)胞也具有雙倍的DNA量。如果所有的細(xì)胞均在有絲分裂中被阻斷，則沒(méi)有G1期細(xì)胞，但如果當(dāng)去除化合物時(shí)阻斷被解除，則細(xì)胞完成有絲分裂并再出現(xiàn)于G1期中。如此再出現(xiàn)于G1期或S期中的細(xì)胞數(shù)目因此成為最近已經(jīng)完成有絲分裂的細(xì)胞數(shù)目的測(cè)量手段。對(duì)于去除化合物后0小時(shí)和10小時(shí)的每種樣品，定量測(cè)定完成有絲分裂的細(xì)胞百分比(作為再出現(xiàn)于G1期中的細(xì)胞的數(shù)目)，并作為在12小時(shí)預(yù)處理期間使用的化合物的原始濃度的函數(shù)作圖。將在藥物洗出后5天仍存活的細(xì)胞百分比疊加在同一圖中，參見(jiàn)例如圖1和圖2?？梢詼y(cè)定在0小時(shí)在有絲分裂中完全阻斷所有細(xì)胞所需的化合物濃度和在去除化合物后10小時(shí)保持阻斷所需的濃度之間的比率。將其作為化合物可逆性測(cè)量的方法，接近或等于1的比率表示可能是有效的體內(nèi)抗腫瘤化合物(參見(jiàn)表1的4-6欄以及圖3和圖4)。
表1體外抑制和可逆性數(shù)據(jù) *=體外細(xì)胞生長(zhǎng)抑制**=在洗出前=在洗出后本發(fā)明的特征也在于一種鑒定藥物的方法，所述藥物在將細(xì)胞短暫暴露于藥物后，在該細(xì)胞中誘導(dǎo)持續(xù)阻斷有絲分裂。本發(fā)明的特征在于如下所述通過(guò)使步驟(d)的測(cè)量與步驟(f)的測(cè)量相關(guān)，測(cè)定試驗(yàn)化合物的相對(duì)可逆性。該測(cè)定可以是一種比率，或例如是算術(shù)差。一方面，該方法包括(a)將第一細(xì)胞樣品與預(yù)定濃度的試驗(yàn)化合物一起溫育一段時(shí)間間隔，所述間隔介于足以排空G1期群體的時(shí)間和相當(dāng)于1個(gè)細(xì)胞周期的時(shí)間之間(例如通常為8-16小時(shí)，或約12小時(shí))；(b)將所述試驗(yàn)化合物與所述第一細(xì)胞樣品大致分離(例如通過(guò)洗出或更換培養(yǎng)基)；(c)將所述第一樣品在無(wú)試驗(yàn)化合物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間間隔，所述間隔足以讓從高度可逆性有絲分裂抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂阻斷中釋放的至少80％(例如85％、90％和最好95％、98％或99％)的細(xì)胞完成有絲分裂并回到G1期(例如通常為6-14小時(shí)，或分離步驟(b)后約10小時(shí))；和(d)測(cè)量來(lái)自步驟(c)的短暫暴露的細(xì)胞已經(jīng)完成有絲分裂并回到G1期的百分比(例如測(cè)量細(xì)胞周期標(biāo)記，諸如依賴于DNA的PI熒光)。
該篩選方法的一個(gè)方面包括以下其它步驟(e)將第二細(xì)胞樣品與濃度不高于步驟(a)中所用濃度的所述試驗(yàn)化合物一起溫育一段時(shí)間間隔，所述間隔介于足以排空G1期群體的時(shí)間和相當(dāng)于1個(gè)細(xì)胞周期的時(shí)間之間；(f)測(cè)量來(lái)自步驟(e)的細(xì)胞已經(jīng)完成有絲分裂并回到G1期的百分比；和(g)測(cè)定所述試驗(yàn)化合物的可逆性比率。
在該方法的一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一和第二細(xì)胞樣品為選自例如人白血病、人淋巴瘤、鼠白血病和鼠淋巴瘤細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。所述第一和第二細(xì)胞樣品可以同時(shí)溫育(步驟(a)和(e))或以單獨(dú)的部分溫育。其它實(shí)施方案在步驟(a)之前還包括步驟(ⅰ)估計(jì)將所述第一細(xì)胞樣品與可逆性有絲分裂阻斷劑(或者所述試驗(yàn)化合物)一起溫育的理想的時(shí)間間隔，以達(dá)到令人滿意的大部分的收集到的細(xì)胞的有絲分裂均被阻斷；并且其中步驟(a)的溫育時(shí)間為在步驟(ⅰ)中估計(jì)的時(shí)間間隔。該方法的另一實(shí)施方案在步驟(c)之前還包括步驟(ⅱ)估計(jì)步驟(c)的無(wú)所述試驗(yàn)化合物溫育的理想的時(shí)間間隔，所述步驟(ⅱ)包括確定該時(shí)間間隔，在此間隔之后用高度可逆性抗有絲分裂劑預(yù)處理的細(xì)胞的至少80％完成有絲分裂并再進(jìn)入G1期；并且其中步驟(c)的溫育時(shí)間為在步驟(ⅱ)中確定的時(shí)間間隔。該方法的另一實(shí)施方案利用非懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，例如通過(guò)任何合適的方法于細(xì)胞培養(yǎng)瓶脫附的人或鼠的貼壁癌細(xì)胞。
該方法的一個(gè)方面還包括采用多種相對(duì)濃度的試驗(yàn)化合物重復(fù)步驟(a)-(f)，以測(cè)定哪兩種基本上最低濃度的所述試驗(yàn)化合物分別在步驟(d)和步驟(f)中達(dá)到大致完全阻斷有絲分裂。這些足夠的最低濃度之比為可逆性指標(biāo)(參見(jiàn)詳述的用于制備示例性劑量反應(yīng)曲線的U937方案)。通過(guò)外推細(xì)胞百分比(來(lái)自步驟(d)和(f)的細(xì)胞)隨濃度而變的曲線(例如通過(guò)僅測(cè)試幾種濃度，諸如3種或更少)，或通過(guò)憑借經(jīng)驗(yàn)測(cè)試全范圍的濃度，可以確定這些濃度。
上述方法可用于鑒定抑制有絲分裂的藥物(試驗(yàn)化合物)，用于鑒定在去除后大致保持其有絲分裂阻斷效力的有絲分裂阻斷劑，以及用于預(yù)測(cè)例如有絲分裂阻斷劑的IC50或IC95。當(dāng)與相對(duì)可逆性抗有絲分裂劑相比時(shí)，大致不可逆的抗有絲分裂劑(換句話說(shuō)，為在僅短暫暴露于所述藥物的細(xì)胞中繼續(xù)阻斷有絲分裂的藥物)可能在體內(nèi)可能更有效，在體內(nèi)多個(gè)天然過(guò)程，包括多種藥物抗性(MDR)泵和代謝途徑或其它降解途徑，防止暴露時(shí)間延長(zhǎng)。相對(duì)可逆性抗有絲分裂劑的效力可以取決于持續(xù)暴露的時(shí)間。
從研制藥物的成本的觀點(diǎn)來(lái)看，如上所述測(cè)定可逆性比率的經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢(shì)是相當(dāng)大的。上述方法例如可以用來(lái)預(yù)定具有良好體外活性的試驗(yàn)化合物是否在體內(nèi)有效，諸如在臨床試驗(yàn)中是否有效。預(yù)計(jì)相對(duì)可逆性藥物的性能不可能與不可逆藥物一樣好。例如通過(guò)對(duì)比兩種已知化合物即相對(duì)不可逆性抗有絲分裂劑長(zhǎng)春新堿和高度可逆性抗有絲分裂劑長(zhǎng)春花堿的數(shù)據(jù)，表明這一點(diǎn)。
表2長(zhǎng)春花堿和長(zhǎng)春新堿的可逆性特征完全阻斷有絲分裂所需的藥物濃度，nM化合物 0小時(shí)10小時(shí)可逆性比率解釋(在洗出前) (在洗出后)長(zhǎng)春花堿10600 60 高度可逆長(zhǎng)春新堿1010 1不可逆抗有絲分裂劑長(zhǎng)春花堿和長(zhǎng)春新堿在U937有絲分裂阻斷可逆性測(cè)定中的分析表明，盡管誘導(dǎo)初始有絲分裂阻斷的效力(0小時(shí)值)相同，但這兩種藥物在藥物洗出后持續(xù)10小時(shí)誘導(dǎo)有絲分裂阻斷的能力(10小時(shí)值)非常不同長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)不可逆性有絲分裂阻斷，而長(zhǎng)春花堿誘導(dǎo)的有絲分裂阻斷是高度可逆的。
抗有絲分裂劑長(zhǎng)春花堿和長(zhǎng)春新堿在無(wú)免疫應(yīng)答小鼠(裸鼠)中抗皮下生長(zhǎng)的COLO 205人結(jié)腸癌異種移植物的體內(nèi)抗癌活性分析表明，在相同的劑量1mg/kg下，長(zhǎng)春新堿表現(xiàn)出相當(dāng)大的癌生長(zhǎng)抑制活性，而長(zhǎng)春花堿無(wú)活性(圖5)。在較低劑量0.3mg/kg下，長(zhǎng)春新堿仍產(chǎn)生中等生長(zhǎng)抑制，而長(zhǎng)春花堿卻再次無(wú)活性。長(zhǎng)春新堿的體內(nèi)活性較大與其相對(duì)于長(zhǎng)春花堿的高度可逆性的不可逆性相關(guān)。
E．應(yīng)用所公開(kāi)的化合物具有藥理學(xué)活性，如以上D節(jié)中證明的，包括抗腫瘤活性和抗有絲分裂活性。腫瘤的實(shí)例包括黑素瘤、纖維肉瘤、單核細(xì)胞性白血病、結(jié)腸癌、卵巢癌、乳癌、骨肉瘤、前列腺癌、肺癌和ras轉(zhuǎn)化的成纖維細(xì)胞。
本發(fā)明的特征在于藥用組合物，所述組合物包括式(Ⅰ)化合物和一種藥學(xué)上可接受的載體。組合物也可以包括所公開(kāi)的化合物的組合，或一種或多種所公開(kāi)化合物和其它藥用活性藥物的組合，其它藥用活性藥物諸如抗腫瘤藥、免疫刺激劑、干擾素、細(xì)胞因子、抗MDR藥或抗血管生成劑。組合物可以配制用于經(jīng)口、局部、胃腸外、靜脈內(nèi)或肌內(nèi)給藥，或通過(guò)注射或吸入給藥。也可以制備用于控釋的制品，包括經(jīng)皮貼劑。
抑制患者的腫瘤生長(zhǎng)的方法包括給予所述患者有效抗腫瘤量的所公開(kāi)的化合物或組合物的步驟。本發(fā)明也設(shè)想了聯(lián)合療法，包括在給予另一藥用活性藥物之前、期間或之后共同給予式(Ⅰ)化合物。給藥方法可以相同或不同。對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制包括暴露于所述試驗(yàn)化合物的細(xì)胞或組織的生長(zhǎng)比對(duì)照生長(zhǎng)(無(wú)已知抑制劑或試驗(yàn)化合物)低至少20％、最好30％、50％或75％。
其它實(shí)施方案根據(jù)以上描述和以下的權(quán)利要求書(shū)，可以容易地了解本發(fā)明的基本特征。根據(jù)完整的說(shuō)明書(shū)，在不偏離權(quán)利要求書(shū)和說(shuō)明書(shū)的精神和范圍的情況下，可以設(shè)計(jì)并改變本發(fā)明的所公開(kāi)的化合物和方法的變化形式。本文描述的參考文獻(xiàn)和出版物的全部?jī)?nèi)容均通過(guò)引用結(jié)合到本文中。
權(quán)利要求
1．具有下式的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中A為C1-6飽和或C2-6不飽和烴骨架，所述骨架為未取代的，或具有1-10個(gè)并包括1個(gè)和10個(gè)在內(nèi)的取代基，獨(dú)立地選自氰基、鹵基、疊氮基、氧代和Q1；每個(gè)Q1獨(dú)立地選自O(shè)R1、SR1、SO2R1、OSO2R1、NR2R1、NR2(CO)R1、NR2(CO)(CO)R1、NR4(CO)NR2R1、NR2(CO)OR1、(CO)OR1、O(CO)R1、(CO)NR2R1和O(CO)NR2R1；R1、R2、R4、R5和R6中的每個(gè)都獨(dú)立地選自H、C1-6烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6羥烷基、C1-6氨烷基、C6-10芳基、C6-10鹵代芳基、C6-10羥芳基、C1-3烷氧基-C6芳基、C6-10芳基-C1-6烷基、C1-6烷基-C6-10芳基、C6-10鹵代芳基-C1-6烷基、C1-6烷基-C6-10鹵代芳基、(C1-3烷氧基-C6芳基)-C1-3烷基、C2-9雜環(huán)基、C2-9雜環(huán)基-C1-6烷基、C2-9雜芳基和C2-9雜芳基-C1-6烷基；D和D’中的每一個(gè)獨(dú)立地選自R3和OR3，其中R3為H、C1-3烷基或C1-3鹵代烷基；n為0或1；E為R5或OR5；G為O、S、CH2或NR6；J和J’中的每一個(gè)獨(dú)立地為H、C1-6烷氧基或C1-6烷基；或J和J’結(jié)合在一起為=CH2或-O-(直鏈或支鏈C1-5亞烷基)-O-；Q為C1-3烷基；T為亞乙基或亞乙烯基，任選地用(CO)OR7取代，其中R7為H或C1-6烷基；U和U’中的每一個(gè)獨(dú)立地為H、C1-6烷氧基或C1-6烷基；或U和U’結(jié)合在一起為=CH2或-O-(直鏈或支鏈C1-5亞烷基)-O-；X為H或C1-6烷氧基；Y和Y’中的每一個(gè)獨(dú)立地為H或C1-6烷氧基；或Y和Y’結(jié)合在一起為=O、=CH2或-O-(直鏈或支鏈C1-5亞烷基)-O-；和Z和Z’中的每一個(gè)獨(dú)立地為H或C1-6烷氧基；或Z或Z’結(jié)合在一起為=O、=CH2或-O-(直鏈或支鏈C1-5亞烷基)-O-。
2．權(quán)利要求1的化合物，其中N為0。
3．權(quán)利要求1的化合物，其中D和D’中的每一個(gè)獨(dú)立地選自R3、C1-3烷氧基或C1-3鹵代烷氧基。
4．權(quán)利要求1的化合物，其中R5選自H、C1-6烷基、C1-6鹵代烷基、C1-6羥烷基、C1-6氨烷基、C6-10芳基、C6-10鹵代芳基、C6-10羥烷基、C1-3烷氧基-C6芳基、C6-10芳基-C1-6烷基、C1-6烷基-C6-10芳基、C6-10鹵代芳基-C1-6烷基、C1-6烷基-C6-10鹵代芳基、(C1-3烷氧基-C6芳基)-C1-3烷基、C2-9雜環(huán)基、C2-9雜環(huán)基-C1-6烷基、C2-9雜芳基和C2-9雜芳基-C1-6烷基。
5．權(quán)利要求1的化合物，其中A包括C1-6飽和或C2-6不飽和烴骨架，所述骨架具有至少一個(gè)選自氰基、鹵基、疊氮基、氧代和Q1的取代基；每個(gè)Q1獨(dú)立地選自O(shè)R1、SR1、SO2R1、OSO2R1、NR2R1、NR2(CO)R1和O(CO)NR2R1；n為0；G為O；J和J’結(jié)合在一起為=CH2；Q為甲基；T為亞乙基；U和U’結(jié)合在一起為=CH2；X為H；Y和Y’中的每一個(gè)為H；和Z或Z’結(jié)合在一起為=O或=CH2。
6．權(quán)利要求1的化合物，其中每個(gè)Q1獨(dú)立地選自O(shè)R1、SR1、SO2R1、OSO2R1、NH(CO)R1、NH(CO)(CO)R1和O(CO)NHR1；每個(gè)R1獨(dú)立地選自C1-6烷基、C1-6鹵代烷基、C6芳基、C6鹵代芳基、C1-3烷氧基-C6芳基、C6芳基-C1-3烷基、C1-3烷基-C6芳基、C6鹵代芳基-C1-3烷基、C1-3烷基-C6鹵代芳基、(C1-3烷氧基-C6芳基)-C1-3烷基、C2-9雜環(huán)基、C2-9雜芳基和C2-9雜芳基-C1-6烷基；D和D’中之一為甲基或甲氧基，而另一個(gè)為H；n為0；G為O；J和J’結(jié)合在一起為=CH2；Q為甲基；T為亞乙基；U和U’結(jié)合在一起為=CH2；X為H；Y和Y’中的每一個(gè)為H；和Z或Z’結(jié)合在一起為=O。
7．權(quán)利要求6的化合物，其中A具有至少一個(gè)選自羥基、氨基、疊氮基、鹵基和氧代的取代基。
8．權(quán)利要求7的化合物，其中A包括具有至少一個(gè)選自羥基、氨基和疊氮基的取代基的飽和烴骨架。
9．權(quán)利要求8的化合物，其中A具有至少兩個(gè)獨(dú)立地選自羥基、氨基和疊氮基的取代基。
10．權(quán)利要求8的化合物，其中A具有至少兩個(gè)獨(dú)立地選自羥基和氨基的取代基。
11．權(quán)利要求8的化合物，其中A具有至少一個(gè)羥基取代基和至少一個(gè)氨基取代基。
12．權(quán)利要求8的化合物，其中A具有至少兩個(gè)羥基取代基。
13．權(quán)利要求8的化合物，其中A包括一個(gè)C2-4烴骨架。
14．權(quán)利要求8的化合物，其中A包括一個(gè)C3烴骨架。
15．權(quán)利要求13的化合物，其中A在相對(duì)于將A連接至含G環(huán)的碳原子的α碳原子上具有一個(gè)(S)-羥基。
16．權(quán)利要求6的化合物，其中A包括一個(gè)具有至少一個(gè)選自羥基和氰基的取代基的C1-6飽和烴骨架。
17．權(quán)利要求6的化合物，其中Q1獨(dú)立地選自O(shè)R1、SR1、SO2R1和OSO2R1，其中每個(gè)R1都獨(dú)立地選自C1-6烷基、C1-6鹵代烷基、C6芳基、C6鹵代芳基、C1-3烷氧基-C6芳基、C6芳基-C1-3烷基、C1-3烷基-C6芳基、C6鹵代芳基-C1-3烷基、C1-3烷基-C6鹵代芳基和(C1-3烷氧基-C6芳基)-C1-3烷基。
18．以下結(jié)構(gòu)的化合物
19．以下結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽
20．一種鑒定藥物的方法，所述藥物在將細(xì)胞短暫暴露于所述藥物后，在所述細(xì)胞中誘導(dǎo)持續(xù)阻斷有絲分裂，所述方法包括(a)將第一細(xì)胞樣品與預(yù)定濃度的試驗(yàn)化合物一起溫育一段時(shí)間間隔，所述間隔介于足以排空G1期群體的時(shí)間和相當(dāng)于1個(gè)細(xì)胞周期的時(shí)間之間；(b)將所述試驗(yàn)化合物與所述第一細(xì)胞樣品大致分離；(c)將所述第一樣品在無(wú)所述試驗(yàn)化合物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間間隔，所述間隔足以讓從高度可逆性有絲分裂抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂阻斷中釋放的至少80％的細(xì)胞完成有絲分裂并回到G1期；和(d)測(cè)量來(lái)自步驟(c)的短暫暴露的細(xì)胞已經(jīng)完成有絲分裂并回到G1期的百分比。
21．權(quán)利要求20的方法，還包括以下步驟(e)將第二細(xì)胞樣品與濃度不高于步驟(a)中所用濃度的所述試驗(yàn)化合物一起溫育一段時(shí)間間隔，所述間隔介于足以排空G1期群體的時(shí)間和相當(dāng)于1個(gè)細(xì)胞周期的時(shí)間之間；(f)測(cè)量來(lái)自步驟(e)的細(xì)胞已經(jīng)完成有絲分裂并回到G1期的百分比；和(g)通過(guò)使步驟(d)的測(cè)量與步驟(f)的測(cè)量相關(guān)，測(cè)定所述試驗(yàn)化合物的相對(duì)可逆性。
全文摘要
本發(fā)明提供具有藥理學(xué)活性諸如抗癌活性或抗有絲分裂(有絲分裂阻斷)活性的軟海綿素類似物,提供在將細(xì)胞短暫暴露于所述藥物后在所述細(xì)胞中誘導(dǎo)持續(xù)阻斷有絲分裂的藥物的鑒定方法。
文檔編號(hào)C07D493/22GK1312804SQ99809658
公開(kāi)日2001年9月12日 申請(qǐng)日期1999年6月16日 優(yōu)先權(quán)日1998年6月17日
發(fā)明者B·A·利特菲爾德, M·帕爾梅, B·M·瑟勒特斯基, M·J·托勒, M·J·余, W·鄭 申請(qǐng)人:衛(wèi)材株式會(huì)社