專利名稱：經修飾的多糖-脫乙酰殼多糖化合物的制備和用途以及hes-藥物化合物的改進生產方法
技術領域：
本發(fā)明涉及適用作醫(yī)藥物質的載體的結合產品，以及由其得到的 承載醫(yī)藥物質的化合物。本發(fā)明進一步涉及制備這種結合產品和化合 物的方法和設備。另外，本發(fā)明涉及含有這種結合產品和化合物的藥 物組合物，及其在制備用于治療疾病的不溶性藥物中的應用。
背景技術：
EP-A-1 230 935描述了向多糖中引入藥物分子，然而，在每個多 糖分子上所結合的藥物分子的頻率和這種分子的結合部位方面，是不 均勻的。因此，觀察到許多較小的藥物分子與單個多糖分子集合，而 其它的多糖分子仍保持實質上未被占據。在一方面，這實質上降低了 所需的結合產品的收率，并且另,一方面，分離所需的結合產品，艮P， 從不需要的結合產品中分離與所需數目的被引入分子配合的多糖的工 作非常繁重。如果進行的結合反應是其中藥物要通過連接基分子結合 到淀粉分子內，則可發(fā)生不希望的多糖自身的交聯。
在特定情況下有可能避免這種交聯，即，其中醫(yī)藥活性物質的一 個分子剛好要與一個多糖分子彼此結合。這時，有可能將該醫(yī)藥物質 結合到淀粉的末端葡萄糖單元的末端醛基上，如DE 102 09 822Al所 述。
然而，當多個藥物分子通過多價連接基分子被結合時，結合或置 換的區(qū)域選擇的可控性消失。醫(yī)藥物質與羥乙基淀粉(HES)的相應結合 (被稱作活性物質的HES化)，即，不同的HES變體與醫(yī)藥物質的化學 結合，公開在DE 101 12 825 Al中，據述反應過程在含水溶液中進行。在提到的方法中，或者是一個醫(yī)藥活性分子剛好與一個末端醛基 結合，或者是未知數目的醫(yī)藥活性分子通過連接基非特異性地共價結 合于羥乙基淀粉。
正如在藥物的主要部分中，在羥乙基淀粉中，羥基主要用于結合， 可使用雙官能羧酸作為連接基。眾所周知，二羧酸氯化物作為多糖的 交聯劑。當被二羧酸氯化物例如丙二酰氯酯化時，除了發(fā)生醫(yī)藥活性 物質與多糖通過酯鍵的所需結合之外，還發(fā)生多糖的相互交聯。
通過將醫(yī)藥物質結合于羥乙基淀粉，這種醫(yī)藥物質可被親水化。
另外，獲得的藥物-HES化合物具有膠體滲透活性，如羥乙基淀粉自身一樣。
然而，希望有另外的可用于控制和特異性影響被結合的醫(yī)藥物質 的活性的物理化學作用機制。
迄今為止，只有當使用復雜的蛋白質例如人白蛋白或實質上生物 學惰性的聚合物化合物時才能夠提供這種作用機制。
因此，本發(fā)明的目的是提供適用作醫(yī)藥物質的載體的化合物和由 其得到的承載醫(yī)藥物質的化合物，其中所述化合物另外具有良好的水 溶性，帶有正和負電荷(偶極)的特定帶電模式，和低的變態(tài)反應性和完 全降解性。
本發(fā)明的目的通過結合產品(I)實現，該結合產品(I)由m個多糖X分 子與一個多糖A分子組成，其中所述多糖A選自殼多糖或脫乙酰殼多糖， m是1-10,000的整數，并且X和A之間的連接基是胺和/或酰胺鍵。
本發(fā)明的另一個主題涉及權利要求36的裝置，權利要求45的方法，權利要求61的藥物組合物，以及權利要求62到64的本發(fā)明的化 合物的用途。


圖1表示本發(fā)明裝置的示例性實施方案的俯視圖。
圖2表示所述實施方案的剖視圖。
圖3表示用本發(fā)明裝置制備的脫乙酰殼多糖薄膜。
圖4表示在進行本發(fā)明的方法后的脫乙酰殼多糖薄膜。

發(fā)明內容
本發(fā)明涉及結合產品(I)，該結合產品(I)由m個多糖X分子與一個 多糖A分子組成，其中所述多糖A選自殼多糖或脫乙酰殼多糖，m是 l-10，000的整數，并且X和A之間的連接基是胺鍵和/或酰胺鍵。根據 本發(fā)明，醫(yī)藥物質即藥學活性化合物可與結合產品(I)共價結合。作為 替代，醫(yī)藥物質可通過復合物形成與所述結合產品(I)聚結。
因此，結合產品(I)描述了結合于脫乙酰殼多糖或殼多糖的多糖化 合物，其可用作載體，用于區(qū)域選擇性代替分別與脫乙酰殼多糖或殼
多糖結合的膠體。
根據本發(fā)明，"殼多糖"是指由(1—4)連接的2-乙酰胺基-2-脫氧 -P-D-卩比喃葡糖殘基構成的直鏈多糖，其中低于40%的乙酰胺基被脫乙 ?；纬砂坊?。脫乙酰殼多糖是水溶性的、完全或部分脫乙酰化的殼 多糖衍生物，艮卩，其由(1—4)連接的2-乙酰胺基-2-脫氧-P-D-吡喃葡糖 和2-氨基-2-脫氧-(3-D-吡喃葡糖殘基組成。優(yōu)選地，脫乙酰殼多糖的脫 乙?；潭葹?0%到40%，更優(yōu)選為75%到60%，
具有較低脫乙?；潭鹊拿撘阴ざ嗵?，g卩，具有較低比例的游 離氨基的脫乙酰殼多糖，特別適合分離一個脫乙酰殼多糖分子上的多 糖X分子，因為結合于脫乙酰殼多糖A的單獨的多糖X分子之間的距離因此被有利地增大了。
根據本發(fā)明，多糖A包含至少IO個單體單元，優(yōu)選至少35個單
體單元，最優(yōu)選至少50個單體單元，即，至少50個N-乙酰葡糖胺和/
或葡糖胺部分。
多糖A的N-乙酰葡糖胺和/或葡糖胺部分可任選地進行化學修飾。 有利的修飾包括甲基羧基化形成N，O-羧甲基脫乙酰殼多糖。還有利的 修飾是脫乙酰殼多糖鹽酸鹽。
結合的多糖X優(yōu)選被部分取代或完全取代。
在優(yōu)選方案中，多糖X不是殼多糖和/或脫乙酰殼多糖(X^A)。更 優(yōu)選地，多糖X選自淀粉，直鏈淀粉，支鏈淀粉，醋孟南(acemannan)， 右旋糖酐，阿拉伯半乳聚糖，半乳甘露聚糖，半乳葡甘露聚糖，黃原 膠，角叉菜膠，藻酸鹽，瓜爾膠，金合歡膠，瓊脂糖，肝素，硫酸乙 酰肝素，硫酸軟骨素，透明質酸，阿拉伯樹膠，及其混合物。更優(yōu)選 地，多糖X選自含有半乳糖、甘露糖和古羅糖醛酸(guluronicacid)的多 糖，阿拉伯半乳聚糖，半乳甘露聚糖，半乳葡甘露聚糖，醋孟南和黃 原膠。
多糖X優(yōu)選選自天然存在的復合多糖類，諸如角叉菜膠，藻酸鹽， 瓜爾膠，金合歡膠，瓊脂糖和阿拉伯樹膠。
本發(fā)明的具體實施方案是內源性的生理活性多糖諸如肝素或硫酸 軟骨素作為多糖X反應形成本發(fā)明的結合產品(I)。
當肝素用作多糖X時，肝素抗凝活性和對巨噬細胞和粒細胞的局 部抑制作用與脫乙酰殼多糖的粘附性、表面活性和活化成膜性相結合。 引入硫酸軟骨素化合物作為多糖能夠制造由生物可降解型的低變態(tài)組織組成的人造成膜和軟骨樣覆蓋層。另一種修飾是將透明質酸作為多 糖X引入到本發(fā)明的結合產品中。
根據本發(fā)明，多糖X包含至少10個，優(yōu)選至少20個，更優(yōu)選至
少325個單體單元。優(yōu)選是葡萄糖單元，其更優(yōu)選經歷化學修飾。多
糖x還優(yōu)選包含半乳糖和/或甘露糖單元。
多糖X的水溶性，以及多糖X與其它膠體形成材料之間的親合性 可以受到半乳糖單元的比例的影響。眾所周知，多糖和半乳甘露聚糖(也 稱作半乳葡甘露聚糖)之間的分子間相互作用，以及蛋白質和半乳甘露 聚糖(也稱作半乳葡甘露聚糖)之間的分子間相互作用，以及半乳甘露聚 糖的水溶性可以實質上受到半乳糖單元與甘露糖單元的比的影響。因 此，得自半乳甘露聚糖或半乳葡甘露聚糖的特別有利的多糖X具有的 半乳糖對甘露糖的比為1:3到1:5。
糖苷連接的葡萄糖分子可在2、 3和6位被取代，優(yōu)選在C-2和 C-6位被取代。優(yōu)選地，X的取代基與X的摩爾比為最多IO，OOO。
摩爾取代度MS被定義為是取代基總數與單體單元總數的比。優(yōu) 選摩爾取代度為0.3到0.85，或低于0.3。進一步優(yōu)選摩爾取代度為0.4 到0.7，更優(yōu)選為0.5到0.6。
取代度DS被定義為是被取代單體單元總數與單體單元總數的比。 優(yōu)選取代度為0.3到0.75，或低于0.3。進一步優(yōu)選取代度為0.4到0.65， 更優(yōu)選0.5到0.55，其中取代度不大于摩爾取代度值。
"部分取代"是指多糖具有至少0.02的取代度DS。如果摩爾取 代度MS大于0.97則認為多糖被完全取代。
C2/C6取代比被定義為是結合于葡萄糖單元C2位的取代基總數與結合于葡萄糖單元C6位的取代基總數的比。優(yōu)選地，C2/C6取代比為 3到12，更優(yōu)選為4到6。
同其它的合成膠體類似，多糖X不是具有恒定分子量的單元物質。 而是，其經常是具有不同大小的分子的多分散混合物，其可通過例如 其分子量分布進行定義。分子量分布的寬度和最大值位置可受到現有 技術中常用的制備方法和純化方法的影響。
平均分子量Mw被定義為是總分子量與總粒子數的比。分子量分 布的數均值或中值Mn可直接通過滲透壓測定法測定。Mn是在50%的 粒子具有較大分子量且50%的粒子具有較低分子量處的值。
底部部分的Mw，艮卩，10%的最小多糖X分子的Mw，優(yōu)選超過 20,000，更優(yōu)選超過15,000，還優(yōu)選超過9,000，更優(yōu)選超過6，500。
頂部部分的Mw， g卩，10%的最大多糖X分子的Mw，優(yōu)選低于 2，160，000，更優(yōu)選低于1,000,000，還優(yōu)選低于550,000，甚至更優(yōu)選低 于150,000。
優(yōu)選地，多糖X的平均分子量Mw為10 kDa到500 kDa。在本發(fā) 明的一個實施方案中，多糖X的Mw為150kDa到350kDa。在另一個 實施方案中，多糖X的Mw為200 kDa。
更優(yōu)選地，作為多糖X的羥乙基淀粉具有低于30,000的分子量和 小于或等于0.3的取代度DS，其中m優(yōu)選為15到50。進一步優(yōu)選作 為多糖X的羥乙基淀粉具有低于4000的分子量，其中m優(yōu)選為100 到200。進一步優(yōu)選作為多糖X的羥乙基淀粉具有低于1500的分子量， 其中m優(yōu)選為300到750。
在一個實施方案中，表示多糖X的多分散性的商Mw/Mn低于9.5，優(yōu)選低于5.3，更優(yōu)選低于2.4。
多糖x的取代基優(yōu)選選自羥乙基和羧甲基。在一個實施方案中，
被羥乙基取代的多糖的羥基可通過連接基交聯，例如通過如下所述的
Zl和Z2交聯，其起始化合物優(yōu)選攜帶羧基、異氰酸酯、羧酸鹵，羧 基亞垸基和/或酯基作為官能團。
在另一個實施方案中，被一羧酸或二羧酸酯化的淀粉(形式上)例如 乙?；矸刍虮；矸塾米鞫嗵荴。根據另一個實施方案，羧酸可 通過醚鍵結合到多糖X中。優(yōu)選選自羧甲基淀粉、羧乙基淀粉、羧丙 基淀粉的羧基淀粉。適當的單羧酸包括例如乙酸，丙酸，苯甲酸，丁 酸，丙烯酸，水楊酸，戊酸，異戊酸，精氨酸，賴氨酸和組氨酸，及 其它們的Q-d。垸基酯，鹵化物和酐。適當的二羧酸包括例如己二酸， 庚二酸，壬二酸，癸二酸，山梨酸，鄰苯二甲酸，對苯二甲酸，間苯 二酸，松蕈酸，檸檬酸，草酸，丁二酸，富馬酸，馬來酸，戊二酸， 丙二酸，酒石酸，蘋果酸，谷氨酸，門冬氨酸，天冬酰胺和谷氨酰胺， 以及他們的d-d。垸基酯，鹵化物和酐。優(yōu)選丙二酰氯。.
多糖X優(yōu)選是淀粉、直鏈淀粉和/或支鏈淀粉，更優(yōu)選羥乙基淀粉 (HES)。
在本發(fā)明的一個實施方案中，多糖X是HES 200/0.5。 HESx/y是 具有x kDa的平均分子量Mw和y的摩爾取代度MS的羥乙基淀粉，即， HES 200/0.5是具有200 kDa的平均分子量Mw和0.5的摩爾取代度MS。
因為殼多糖和脫乙酰殼多糖自身是不溶于水的，因此親水性多糖 X與這種疏水性的聚合物型殼多糖或脫乙酰殼多糖A結合形成本發(fā)明 的結合產品(I)用于親水性處理。分子的極性從而顯著增加。除了通過 引入羥乙基淀粉進行親水性處理，還可通過脫乙?；@著改善殼多糖 的水溶性，即將殼多糖轉化為脫乙酰殼多糖。殼多糖的堿性脫乙?；玫矫撘阴ざ嗵?，其在低于6.5的pH下溶于有機溶劑。
眾所周知，可通過結合于氨基的乙酰胺基的皂化反應從殼多糖制 備脫乙酰殼多糖。反應通過例如謹慎地加熱懸浮在0.5NNaOH中的殼 多糖進行。這一皂化反應的程度可容易地通過控制反應溫度進行控制。 例如，將懸浮在2 N乙酸中的殼多糖與0.5 N的NaOH在惰性氣氛中混 合，并加熱。脫乙酰殼多糖的游離氨基的比可通過Van Slyke反應確認。
殼多糖和脫乙酰殼多糖化合物的優(yōu)點在于可完全生物降解。該化 合物被殼多糖酶、溶菌酶和其它的溶菌酶類所降解。生物相容性和可 酶促降解的殼多糖和脫乙酰殼多糖化合物可通過使用本發(fā)明的任選被 取代的多糖進行修飾而被改善，用作許多適應癥用輸注物質。就此而 論，m，即X與A的摩爾比起到關鍵作用。
脫乙酰殼多糖己知具有復合性質并與例如過渡金屬諸如銅、鋅和 鎘選擇性地形成復合物。另外，脫乙酰殼多糖具有吸附內毒素、核酸 和納米粒子的性質。脫乙酰殼多糖吸附粒子和染料的能力已經被廣泛 用在化妝品工業(yè)和廢水技術中。在人體中這些性質的使用與脫乙酰殼 多糖的溶解度性質有沖突。脫乙酰殼多糖在有機酸的存在下在低于6.5 的低pH下可有利地溶解，因為該聚合物化合物在這種條件下作為可溶 性多聚陽離子存在。本發(fā)明的結合產品(I)可用于附著粒子、毒素、微 生物和病毒。在附著之后，結合產品(I)被網狀組織細胞系統的細胞所 吞噬，從而吸附物質可被從身體清除。
在本發(fā)明的一個實施方案中，醫(yī)藥物質R3配位結合于(復合于)結 合產品(I)。 R3優(yōu)選是金屬離子。更優(yōu)選地，R3是鐵，優(yōu)選是Fe11，鉀， 鎂，鋅，鈣，釓和/或銅。
根據本發(fā)明，可以選擇復合結合產品(I)，使得復合物可在體內釋 放R3并且將R3作為微量元素和/或重要礦物質提供。在另一個實施方案中，選擇復合結合產品(I)，使得復合物不能在體內釋放R3，例如， 為了能夠將復合物用作造影劑，優(yōu)選R3-釓。
不僅是那些含有基于葡萄糖單元及其變體如羥乙基淀粉、羧乙基
淀粉和右旋糖酐的多糖X的本發(fā)明的結合產品(I)，而且主要是那些含 有基于半乳糖和甘露糖及其變體的多糖X的結合產品(I)都適用于引入
到人體內和非腸道給藥。
可有利地用作多糖X的羥乙基淀粉的Mw<130,000和DS為0.3 到0.7。要用作多糖X的羥乙基淀粉的C2/C6比有利地是4到6。如果 結合產品(I)被用于吸附抗原和其調理作用，可使用分子量<60,000道爾 頓的羥乙基淀粉，更有利地為1500到IO，OOO道爾頓的羥乙基淀粉作為 多糖X。另一方面，被引入到多糖A中的多糖單元X的數字m應當足 夠高以確保化合物的相應親水化。數字m的大小根據多糖A的大小及 其游離氨基數目的不同而實質上不同。在巨噬細胞中的噬菌作用下， 多糖X在溶酶體中迅速地水解并被腎排泄，S卩，不被儲存。已知的大 紅細胞溶酶體的酶清單可以水解A和X之間的胺和/或酰胺鍵， 一方面 根據A和X的性質，另一方面根據m的大小的不同而異。釋放的羥乙 基淀粉顯然低于腎的排除閾值(60,000道爾頓)。
根據本發(fā)明的結合產品(I)的可計算的和可測量的理化性質，本發(fā) 明的結合產品(I)可用作各種適應癥的不溶性藥物，作為病毒抑制藥， 抗生素特別是抗霉菌劑，作為離子交換劑，帶電粒子和分子的吸附介 質，和作為膠體血液代用品和抗凝劑。重要的理化性質是溶液的粘度、 動態(tài)粘度、膠體滲透壓、電導率、電阻抗、熱穩(wěn)定性和可高壓滅菌能 力(autoclavability)，以及光傳輸，吸附，在電泳期間的行為，吸附性和 水結合量。本發(fā)明的結合產品(I)的溶液優(yōu)選是熱穩(wěn)定的和可高壓滅菌 的。對于吸附，本發(fā)明的結合產品(I)優(yōu)選具有對于待吸附物質的足夠 的結合量。對于帶電粒子的吸附性也可通過電泳進行估算。根據本發(fā)明，結合產品(I)可被與X共價結合的式(II)的殘基取代
-Z1CR1 (II) 和/或被與A共價結合的式(III)的殘基取代
-Z2dR2 (III), 其中Rl是藥學活性分子殘基，R2是藥學活性分子殘基，且Rl 和R2可相同或不同，并且其中Zl是與Rl和X 二者共價結合的連接 基，Z2是與R2和A二者共價結合的連接基，()=1或0, (1=1或0，并 且其中式(II)的殘基與X的摩爾比是a，式(III)的殘基與A的摩爾比是b， a是0至U 1000的整數，b是0至U 1000的整數，并且a和b至少之一不 是0。
優(yōu)選地，a=l、 2、 3、 4或最多150、 350或750的整數。優(yōu)選地， b=l、 2、 3、 4或最多150、 350或750的整數。
作為Rl和/或R2要與結合產品(I)結合的藥學活性分子R，可使用 所有的那些可共價結合于本發(fā)明的結合產品(I)的物質，即，所述物質 具有能與X和/或A的互補官能團反應的官能團，例如形成羧酸酯，羧 酸酰胺和/或氨基甲酸酯，根據官能團的不同而異。能與結合產品(I)形 成羧酸酯的藥學活性分子是優(yōu)選的。更優(yōu)選地，R1和/或R2選自氨基 酸殘基、肽殘基和蛋白質殘基。
更優(yōu)選地，R選自抗生素，化療劑，細胞生長抑制劑，抗原，寡 核苷酸，遞質，偽代謝底物和細胞毒物質。這些醫(yī)藥物質共價結合于 結合產品(I)并被巨噬細胞所吞噬。
對于R與X和與A的共價結合，原則上兩種結合都是可能的。R 可經歷與脫乙酰殼多糖的游離氨基的結合。R也可結合于X和/或A的 羥基之一上。
從攜帶氨基(-NH2)的基礎多糖X和/或A開始，對于具有選自以下的官能度的藥學活性物質R可進行R的結合 羧基(-COOH);
羧酸鹵化物(-C(0)C1， -C(0)Br和/或-C(0)I); 羧基亞垸基(-(CH2)q-COOH， q=l-10);或 酯基(-COOAlk，其中Alk是含1-7個碳原子的烷基)。
相反地，具有這些官能度的X和/或A可以經歷與攜帶氨基的(-NH》 的藥學活性物質R的結合。
從攜帶羥基(-OH)的基礎多糖X和/或A開始，對于具有選自以下 的官能度的藥學活性物質R可進行R的結合 異氰酸酯(-NCO); 羧基(-COOH);
羧酸鹵化物(-C(O)Cl， -C(0)Br和/或-C(O)I); 羧基亞垸基(-(CH2)q-COOH， q=l-10);或 酯基(-COOAlk其中Alk為含1-7個碳原子的烷基)。
相反地，具有這些官能度的X和/或A可以經歷與攜帶羥基的(-OH) 的藥學活性物質R的結合。
如果c=0，則Rl優(yōu)選通過羧酸酯、羧酸酰胺和/氨基甲酸酯鍵直接 與X結合。如果d-()，則R2優(yōu)選通過羧酸酯、羧酸酰胺和/氨基甲酯 鍵直接與A結合。
在本發(fā)明的另外的實施方案中，可使用另外的二官能、三官能或 多官能分子來形成連接基，其在藥學活性物質R和X和/或A之間形成 連接基。
用于連接基Zl和/或Z2的適合的起始化合物選自直鏈或支鏈的、 飽和或不飽和的、脂肪族或脂環(huán)族的烴基，其具有l(wèi)-22個、優(yōu)選2-15個、更優(yōu)選3-8個碳原子；芳基、芳基-d-C4-烷基和芳基-C2-CV烯基，
其在芳基殘基中具有5到12個、優(yōu)選6到12個、更優(yōu)選6個碳原子， 其可以任選地被d-CV烷基和/或C2-CV烷氧基取代；或雜芳基、雜芳 基-Q-CV烷基和雜芳基-C2-CV烯基，其中在雜芳基殘基中具有3-8個碳 原子和一個或兩個選自N、 O和S的雜原子，其可以被CVC6-垸基和/ 或C2-CV垸氧基取代；和
其中連接基Zl的起始化合物包含2到20個用于與Rl和X形成 共價鍵的官能團，并且其中連接基Z2的起始化合物包含2到20個用 于與R2和A形成共價鍵的官能團，其中所述官能團各自獨立地選自
圣基(-OH)，
氨基(-NH2)，
羧基(-COOH)，
異氰酸酯(-NCO)，
羧酸鹵化物(一C(O)Cl, -C(O)Br禾口/或-C(0)1)， 羧基亞烷基(-(CH2)q-COOH，其中q^l-10)，或 酯基(-COOAlk，其中Alk是含l-7個碳原子的垸基)。
在優(yōu)選實施方案中，采用雙官能分子形成連接基。還優(yōu)選用于形 成連接基的三官能分子。更優(yōu)選具有相同官能團的用于形成連接基的 雙官能和三官能分子。
特別適合的化合物包括例如二羧酸類，例如草酸、丙二酸、琥珀 酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、壬二酸、癸二酸、馬來酸、富馬酸、 山梨酸、鄰苯二甲酸、對苯二甲酸、間苯二酸、松蕈酸、檸檬酸、和 它們的d-do垸基酯、鹵化物和酸酐；二異氰酸酯類，例如二苯乙烯 二異氰酸酯、雙(二苯乙烯二異氰酸酯)、二茴香胺二異氰酸酯、四亞 甲基二異氰酸酯、六亞甲基二異氰酸酯、間亞苯基二異氰酸酯、亞(間 二甲苯基)二異氰酸酯、d-C6垸基苯二異氰酸酯、l-氯苯-2，4-二異氰 酸酯、環(huán)己基甲烷二異氰酸酯、3，3'-二甲氧基二苯基甲烷4，4'-二異氰 酸酯、l-硝基苯2,4-二異氰酸酯、1-烷氧基苯2，4-二異氰酸酯、亞乙基二異氰酸酯、亞丙基二異氰酸酯、亞環(huán)己基1，2-二異氰酸酯、3,3'-二氯
-4，4'-亞聯苯基二異氰酸酯、二亞苯基二異氰酸酯、2-氯三亞甲基二異 氰酸酯、亞丁基1,2-二異氰酸酯、乙叉基二異氰酸酯、二苯基甲垸4,4'-二異氰酸酯、二苯基乙烷二異氰酸酯、1,5-萘二異氰酸酯、環(huán)己烷二異 氰酸酯和異佛爾酮二異氰酸酯；二醇類，例如乙二醇、丙二醇、丁二 醇和新戊二醇、1，5-戊二醇、3-甲基-l，5-戊二醇、雙酚A、 1，2-或1,4-環(huán)己垸二醇、己內酯二醇(己內酯和乙二醇的反應產物)、羥基垸基化 的雙酚、三羥甲基丙垸、三羥甲基乙烷、季戊四醇、1，6-己二醇、1,7-庚二醇、1,8-辛二醇、1，4-丁二醇、2-甲基-l，8-辛二醇、1，9-壬二醇、 1,10-癸二醇、環(huán)己烷二甲醇、二-、三-和四-乙二醇、二-、三-和四-丙 二醇、平均分子量為150到15,000的聚乙二醇和聚丙二醇、三羥甲基 乙垸、三羥甲基丙垸和季戊四醇；和/或二胺類，例如1,2-二氨基乙垸、 1，2-或1,3-二氨基丙垸、1，2-、 1,3-或1，4-二氨基丁烷、1,5-二氨基戊烷、 2,2-二甲基-1,3-二氨基丙烷、六亞甲基二胺、1，7-二氨基庚垸、l，S-二氨 基辛烷、三甲基-l，6-二氨基己烷、1,9-二氨基壬垸、1,10-二氨基硅垸、 1,12-二氨基十二烷、1,2-二氨基環(huán)己垸、1，4-二氨基環(huán)己烷、1,3-環(huán)己垸 雙(甲基胺)、1,2-亞苯基二胺、1，3-亞苯基二胺、1,4-亞苯基二胺、4，4'-亞乙基二苯胺、4，4'-亞甲基二苯胺、4,4'-二氨基-1，2-二苯乙烯、4，4'-硫 代二苯胺、4-氨基二硫二苯、2，6-二氨基吡啶、2，3-二氨基吡啶、3,4-二氨基吡啶、2,4-二氨基嘧啶、4,5-二氨基嘧啶、4，6-二氨基嘧啶。
這種連接基的使用尤其使得在化合物帶有與X和/或A相同的官能 團例如各自為醇或者由于某些其它原因彼此不能直接反應以形成鍵的 情況下X和/或A與藥學活性分子殘基Rl和/或R2的組合能夠用作藥 學活性分子R。優(yōu)選適合的連接基與X和/或A 二者以及與活性物質 R1和/或R2形成羧酸酯、羧酸酰胺和/或氨基甲酸酯。特別優(yōu)選的是與 選自羧酸酯的雙官能連接基的結合。
有利地，可以將允許化學結合藥學活性物質Rl的另外的特異性 殘基引入到X中，例如生物素、氨基酸或帶有硫化物基團的殘基例如半胱氨酸。
根據本發(fā)明，作為R1和/或R2結合于結合產品(I)的藥學活性分子
R，可以另外采用選自以下的藥物減食欲劑、抗酸中毒劑、氨基酸
(例如組氨酸)或修飾的氨基酸、強壯劑/抗缺氧劑、鎮(zhèn)痛藥/抗風濕病 藥、驅蟲劑、抗變態(tài)反應藥、抗貧血藥、抗心律失常藥、抗生素/抗感 染藥、抗老年癡呆藥(促智藥)、抗糖尿病藥、解毒劑、止吐藥/抗眩暈 藥、抗癲癇藥、止血藥(抗纖維蛋白溶解藥和其它止血藥)、抗高血壓 藥、抗低血糖藥、抗低滲藥、抗凝劑、抗真菌藥、抗寄生蟲藥(內用)、 抗炎劑、鎮(zhèn)咳藥/祛痰藥、動脈硬化藥、浴療劑和熱療用藥物、卩阻斷 劑、鈣通道阻斷劑和腎素-血管緊張素系統抑制劑、毛細支氣管擴張藥/ 止喘藥、利膽劑、和膽道治療劑、膽堿能藥、皮質激素(內用)、皮膚用 藥(內用)、食療藥/營養(yǎng)治療劑、診斷劑和診斷助劑、利尿劑、血流興 奮藥、脫癮藥、酶抑制劑、酶制劑和轉運蛋白、溶纖藥、老年病用藥、 痛風治療劑、流感治療劑、婦科用藥、抗痔瘡藥(直腸病學)、肝用藥、 安眠藥/鎮(zhèn)靜劑、垂體和下丘腦激素、調節(jié)肽及其抑制劑、免疫治療劑 和細胞因子、輸注和標準注溶液、器官灌流液、心臟治療藥、齲齒和 牙周病治療劑和其它牙科制劑、冠狀動脈用藥、通便劑、脂質抑制劑、 神經治療劑、胃腸用藥、偏頭痛鎮(zhèn)痛藥、礦物質代謝制劑、肌肉松弛 藥、麻醉劑、甲狀旁腺激素、鈣代謝調節(jié)劑、骨質疏松癥用藥、神經 病制劑和其它親神經藥物、神經遞質(例如，多巴胺)或修飾的神經遞質、 眼科用藥、耳用藥、抗帕金森病藥和用于錐體外系病癥的其它藥物、 精神治療藥、竇炎用藥、強壯劑/補養(yǎng)藥、甲狀腺治療劑、血清、免疫 球蛋白和疫苗、性激素及其抑制劑、解痙藥、血小板聚集抑制劑、抗 肺結核藥、免疫刺激藥、泌尿科用藥、血管治療劑、維生素、傷口治
療劑、細胞生長抑制劑和轉移抑制劑。也就是說，R1和/或R2為選自 上述組中的藥物。
更優(yōu)選地，R選自肌醇、地高辛和丙泊酚。在另一個變體中，R選自神經氨酸化合物。
本發(fā)明的結合產品(I)可以用作生物相容性物質，即，身體可耐受 的物質。優(yōu)選地，將它們用作植入物、手術助劑或藥用裝置中的組件。
作為植入物的優(yōu)選用途是長期的或短期的植入物，例如人造血管、 血管植入物、人造心臟瓣膜、心臟二尖瓣、腱和韌帶代用品、軟骨代 用品或用于在手術過程中封閉不希望的開口的貼片和傷口覆蓋物。
作為手術助劑的優(yōu)選用途是手術工具、以短期方式體內使用的一 次性制品、導管、導管通道、縫合材料、生物可降解的縫合材料、注 射器、體外血液通道、血液袋或用于靜脈內使用的溶液的袋、或袋的 片材。
作為醫(yī)療裝置組件的優(yōu)選用途是作為人工心肺機和透滲析機或過 濾器、血液袋、輸注通道、蠕動泵或透析膜的部件。
另外優(yōu)選的是其作為隱形眼鏡用物質，作為護發(fā)素、保濕霜或指 甲油的美容添加劑，用于固定細胞和酶，作為親和色譜法和蛋白質分 離的載體，用于受控的治療系統(受控的藥物遞送系統)，用于選擇性藥 物釋放的系統或用于體外組織培養(yǎng)的技術(組織工程)。
本發(fā)明的結合產品(I)的特別適應癥是在免疫學應用范圍內提供微 球體和在結合于其它醫(yī)藥活性化合物時作為調節(jié)藥物活性的載體材
料。本發(fā)明的結合產品(I)使得可以得到以下的組件，所述組件具有廣 泛用于生物學(用于甲殼類動物、昆蟲和真菌)的尺寸上穩(wěn)定的外殼，作 為完全生物可降解的血管支架和植入物，這取決于多糖X的取代程度
和殼多糖化合物A的進一步相互交聯。殼多糖組分還有可能進行另一 種交聯，例如通過在引入x之前和之后并入上述二價連接基。對于這
種應用，植入物也可以通過對帶電體的靜電聚集而成形。原則上，任何帶靜電的帶電體或導體都可以用作在電化學方面不 與要聚集的脫乙酰殼多糖薄膜反應的帶電體。銀、鉑和金最適合作為 電極材料。在下文中說明適合作為聚集表面的陰極射線管屏和可用作 帶電體的帶電回轉支承板。
優(yōu)選結合產品(I)可通過殼多糖或脫乙酰殼多糖A與多糖X的兩步 反應得到。
其中
(a) 所述結合是胺鍵，則該過程包括以下步驟
- 使多糖A與多糖X反應以形成亞胺；和
- 隨后將亞胺還原為相應的胺；或 其中
(b) 所述結合是酰胺鍵，則該過程包括以下步驟
- 將多糖X的酸基氧化；和
- 隨后使氧化產物與多糖A反應。
在(a)中，在第一步驟中，殼多糖或脫乙酰殼多糖A的氨基與多糖 X的末端醛基反應以形成希夫堿。在第二步驟中，用還原劑將希夫堿
還原為相應的胺。亞胺還原得到胺是本領域技術人員公知的且在已知
條件下進行。適合的還原劑包括例如鹽樣的氫化物例如LiAlH4、LiBH4、 NaBH4、或NaBH3CN。然而，也可以使用本領域技術人員已知的其它 還原劑。
為了形成酰胺鍵(b)，首先將多糖X的醛基氧化，在隨后的步驟中， 使得到的作為內酯和/或羧酸的氧化產物與多糖A反應，形成羧酸酰胺 (得自內酯和/或羧酸與多糖A的氨基的反應)。對于氧化，可使用本領 域技術人員已知的任何適合的方法。優(yōu)選地，使用Hashimoto的方法(描 述在Hashimoto等人，Kunststoffe， Kautschuk， Fasern， Vol. 9(1992)，第1271-1279中)，其中可以選擇性地將糖的還原型醛端基氧化，得到反應
性的酯(內酯)。多糖x的末端醛基優(yōu)選通過在氫氧化鉀水溶液的存在下
與碘反應而被選擇性地氧化。優(yōu)選地，將0.1 N碘溶液和/或0.1 N KOH 溶液用作試劑。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，反應在有機溶劑中進行， 例如DMSO或乙基二甲胺基丙基碳二亞胺。
在制備本發(fā)明的結合產品(I)形成希夫堿((a)的步驟l)時，認為殼多 糖/脫乙酰殼多糖A和多糖X二者都必須在分子中具有還原性端基。因 此，在合成本發(fā)明的化合物時，必須阻止殼多糖和脫乙酰殼多糖化合 物A的還原性端基本身與殼多糖和/或脫乙酰殼多糖A的氮原子反應。 優(yōu)選通過形成脫乙酰殼多糖和/或殼多糖薄膜以高的程度阻礙末端醛基 與脫乙酰殼多糖的氨基的這種反應。這將形成與結合產品(I)競爭的偶 聯產物。
盡管可以通過使用沒有溶解于有機溶劑的脫乙酰殼多糖而使第一 步驟的平衡狀態(tài)向有利于形成結合產品(I)的方向轉化，但是由此形成 的化合物保持為更大的集料(aggregates)和集簇(clusters)，從而期望的進 一步的反應強烈地受到位阻的影響。例如，形成這種集料或集簇的化 合物幾乎不可能進行化合物的區(qū)域選擇性官能化。
可以在酸性介質中避免集料和集簇形成，因為脫乙酰殼多糖易溶 于酸例如乙酸中。優(yōu)選多糖A溶解于選自稀的弱有機和無機酸的溶劑 中，所述溶劑具有小于6.5的pH，優(yōu)選小于5.5，更優(yōu)選小于5.0。更 優(yōu)選地，pH為2.0-6.0。特別優(yōu)選的溶劑是在人和/或動物代謝中可降解 的溶劑，例如乙酸和乳酸。
將脫乙酰殼多糖溶液施用于支承板，以形成薄膜。因為形成的脫 乙酰殼多糖薄膜是要用作進一步反應的固體基質，并且希夫堿的形成 受到溶液中殘留酸的干擾，所以必須盡可能完全地除去溶液中的殘留 酸。這是通過用蒸餾水或pH大于7.0的磷酸鹽緩沖劑洗滌薄膜進行的。通過本發(fā)明支承板上的強的負電荷，阻止了在低pH下仍可溶的聚陽離 子脫乙酰殼多糖被從支承板洗掉。相比之下，對于帶正電荷的板，可 以觀察到脫乙酰殼多糖薄膜經常是完全地漂浮遠離。對于相應地正電 極化的陰極射線管可以觀察相同的現象。另外，為了避免脫乙酰殼多 糖被洗掉，從外周到中心依次施加洗脫劑。流出的洗脫溶液的pH顯示 酸性有機溶劑的完全除去。
除去溶劑的另一個可能的方法是將用作溶劑的乙酸和/或另外的 溶劑蒸發(fā)。
優(yōu)選地，使用不與起始材料或產物反應的溶劑。特別地，應該使 用不干擾希夫堿形成的官能團例如羧基的溶劑。
在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，將二氯甲烷、四氫呋喃、甲醇、乙 醇、二甲基亞砜或其混合物用作第一和/或第二反應步驟的溶劑。特別 優(yōu)選二氯甲烷作為亞胺形成的第一步驟的溶劑。對于第二步驟的還原， 特別優(yōu)選甲醇作為溶劑。
對于第一反應步驟并且由此對于本發(fā)明化合物的制備，制備的脫 乙酰殼多糖薄膜的表面結構是關鍵性的。在制備薄膜結構時，必須實 質上避免集料和集簇的形成。特別優(yōu)選薄的或單層的脫乙酰殼多糖薄 膜。薄的和/或單層的薄膜使得以更高的收率得到結合產品(1)。另外， 有可能通過光學裝置例如激光和熒光檢測器、光學和電子顯微鏡來進 一步評價覆蓋密度。
本發(fā)明的方法產生具有很少不勻度的脫乙酰殼多糖薄膜。相比之
下，通過浸漬或條涂(stripping)制備的脫乙酰殼多糖薄膜的顯微鏡評價 表現出得到的薄膜結構具有強的不勻度。另外，有機溶劑隨蒸餾水或 磷酸鹽緩沖劑的滲漏另外引起制備的薄膜起皺和分離。相比之下，如 果只在薄膜已經干燥之后除去溶劑，則促進了裂紋和顯微鏡可見不勻
30度的形成。
通過將回轉支承板上的成膜結構離心，可以制備具有可選擇的層 厚度的非常均勻的薄膜。然而，在這種方法中，脫乙酰殼多糖分子A 的氨基的位置和取向基本上是隨機的。在薄膜形成過程中，氨基可以 面對支承板或自由表面。在隨后的第一反應步驟中，由于位阻，只有 那些面對自由表面的氨基能夠與多糖X的醛反應。
根據本發(fā)明，通過使支承板表面帶靜電而控制質子化形式的氨基 (銨基團)的位置和取向。在帶正電荷的表面上，由于靜電排斥，脫乙酰 殼多糖分子取向為使得它們的銨基團面向遠離支承板表面的方向。
本發(fā)明的脫乙酰殼多糖薄膜的最大厚度使得其中陽離子基團的取 向剛好由支承板的電荷模式決定。對于更厚的脫乙酰殼多糖薄膜，質 子化基團的取向只由脫乙酰殼多糖分子的相互作用決定。因此，可允 許的最大層厚度取決于支承板的電極化程度。
由脫乙酰殼多糖分子的銨基團取向所導致的它們的排列在除去酸 溶劑過程中脫乙酰殼多糖轉變?yōu)槠洳蝗苄孕问綍r得到保持，其中氨基 沒有質子化并且因此不帶有任何正電荷。
在一個實施方案中，支承板的表面通過陰極射線而靜電帶電。
在得到的(固體)脫乙酰殼多糖薄膜中，有顯著更多的氨基取向為遠 離支承板表面而不是朝向支承板表面。向薄膜添加其中溶解或懸浮多 糖X的液體。所述溶液的pH范圍優(yōu)選為使得脫乙酰殼多糖不溶解并且
其中其氨基不處于質子化狀態(tài)。優(yōu)選的pH范圍是最低為6.5，優(yōu)選為 6.8-10，更優(yōu)選最低為7.0，更優(yōu)選為7.5或更高到8.0。優(yōu)選溶液包括 緩沖劑，更優(yōu)選緩沖劑為磷酸鹽緩沖劑。通過攪動支承板，優(yōu)選通過旋轉或振動，要彼此反應的多糖A與 X之間的接觸得到優(yōu)化。在多糖X與脫乙酰殼多糖A已經反應完全或
在已經達到所要達到的平衡狀態(tài)時，在約30分鐘之后，除去過量的多糖x。
另一個實施方案包括使羧甲基-取代的多糖x結合于脫乙酰殼多
糖。除了多糖分子的末端醛基之外，羧基之一還可以與脫乙酰殼多糖 的氨基反應，形成希夫堿。
為了表征該化合物，除羥乙基或羧甲基之外，還可以將多糖用熒 光素或其它指示劑取代。
通過其中在本領域技術人員公知的條件下將形成的希夫堿還原為 相應胺的第二步驟，得到結合產品(I)。優(yōu)選地，將鹽樣的氫化物用于
還原更優(yōu)選使用氫化鋁鋰(LiAlH4)、硼氫化鋰(LiBH4)、氰基硼氫化鈉 (NaBH3CN)或硼氫化鈉(NaBH4)。
在一個實施方案中，羥基乙基取代的多糖X的羥基可以與二羧酸 或二羧酸鹵化物反應，從而使結合的多糖殘基交聯，或者交聯的多糖X 與脫乙酰殼多糖A反應。對于交聯，草酸、丙二酸、琥珀酸、己二酸、 和它們的鹵化物是尤其適合的?？梢愿鶕磻M行酯化，得到結合產 品(I)，其中可以將分子間交聯用作構成部分。
根據本發(fā)明，如果A作為薄膜存在或者作為粒子結合，取決于它 們的濃度、A的脫乙?；挠坞x氨基數和A的固定結構上的帶電模式， 多糖分子X可以以任何期望的距離分離，使得可以根據A的氨基的分 布自由地選擇結合產品(I)中多糖X的單獨的結合分子的相互距離。在 結合于A的單獨的多糖殘余物之間的距離充分大時，在加入例如二羧 酸鹵化物時不能發(fā)生交聯。反而是藥學活性物質可以結合于X以形成 連接基而不導致交聯，這在這種情況下是不希望的。這個實施方案優(yōu)選使用具有>800，000的充分大MW的殼多糖和/或脫乙酰殼多糖分子A 和<150,000相對低MW的多糖X,其中優(yōu)選A是過量的。
在一個實施方案中，本發(fā)明的方法另外包括以下步驟-用式(II)的殘基取代X
<formula>formula see original document page 33</formula> (II)
和/或.
用式(III)的殘基取代A
<formula>formula see original document page 33</formula> (III)
其中Ri是藥學活性分子殘基，R2是藥學活性分子殘基，和Rl 和R2可相同或不同，和
其中Zl是共價結合于Rl和X 二者的連接基，Z2是共價結合于 R2和A二者的連接基，c^或0， (1=1或者0，和
其中式(II)的殘基與X的摩爾比是a， (ni)的殘基與A的摩爾比是 b， a是0至ij 1000的整數，b是0至U 1000的整數，并且a和b中至少一 個不是零。
用于引入醫(yī)藥物質的合成方法的特例是其中上述式(II)的殘基共 價結合于X的結合產品(I)的取代，其中在另外的步驟中，通過將胺和/ 或酰胺鍵裂解而使A和X分開。換句話說，在將X用式(II)的殘基取 代之后，在另外的步驟中使X和A彼此分開。本領域技術人員知道可 以用于方便地進行選擇性裂解A-X鍵的條件，S卩，對式(II)的殘基與之 結合的X的結構沒有或有很少的影響。取決于Rl和X與A之間的鍵， 適合的方法包括但不限于任選地在金屬催化劑的存在下進行的在堿性 介質中的水解、酶促水解，優(yōu)選采用蛋白酶和vonBraun胺裂解。
這種裂解反應的產物至少是被式(II)的殘基取代的多糖X，相當于 在EP-A-1 230 935中被描述為改性膠體的化合物。因此，本發(fā)明的方 法是EP-A-1 230 935所述方法的改進或生產EP-A-1 230 935所述化合 物的中間步驟。根據該方法，通過使脫乙酰殼多糖薄膜上的多糖通過多糖的末端醛基與由于其電荷取向的脫乙酰殼多糖薄膜的游離氨基共 價結合以形成希夫堿而進行的分離和取向，使得多糖被醫(yī)藥活性物質 或殘基區(qū)域選擇性地取代。該方法可以由裝置進行和控制。
在另外的步驟中，有可能將物質Rl和/或R2區(qū)域選擇性地引入到 結合產品(I)中，任選地使用連接基進行。對于取代基的區(qū)域選擇性引 入，化合物可以.以電荷依賴性的方式聚集到具有非常復雜的帶電模式 的電極結構上。形成薄膜的脫乙酰殼多糖分子的電荷依賴性取向可以 通過聚集到帶電的平面納米結構電極上來實現?？梢酝ㄟ^電子顯微鏡 法在高真空下將這種納米結構印刷電路燒制成電極。
除了選擇多糖A的脫乙酰作程度即其反應性氨基數目之外，還可
以在多糖A與多糖X反應形成結合產品(I)之前借助大分子的方式影響 要結合于多糖A的多糖X的分離，所述大分子通過分子間吸引力與多 糖X聚結并且由此起到多糖X的單獨分子之間的間隔基的作用。適合 的是任何大分子，條件是其可以與多糖X聚結并且形成平行分子的大 的聚集物并且同時沒有使其在隨后工藝步驟中與多糖X和/或多糖A反 應以形成共價鍵的官能團。也就是說，對于不與結合產品(I)共價結合 的大分子的聚結，可以使用一方面不能與脫乙酰殼多糖的氨基形成共 價鍵以形成希夫堿并且另一方面具有充分強的對多糖X的分子間吸引 力的那些大分子，特別是多糖。
眾所周知，在k -角叉菜膠和醋孟南之間有非常強的分子間吸引 力，引起兩種多糖聚集在一起。因此，例如k-角叉菜膠可以與醋孟南 形成平行分子的聚結物，如在特別實施方案中那樣。根據本發(fā)明，在X 和A成鍵的上游步驟中，多糖X與大分子形成平行分子的聚結物，所 述大分子優(yōu)選為k-角叉菜膠、糖蛋白或得自細胞膜的大分子。這種大 分子不應該包含任何使得它們在隨后步驟的反應條件下與多糖X和/或 多糖A反應以形成共價鍵的官能團。
34根據本發(fā)明，可以首先在沒有脫乙酰殼多糖分子A的存在下將k -角叉菜膠的末端醛基還原，例如通過與鹽樣的氫化物例如硼氫化鈉反 應進行。不含還原性醛基的k -角叉菜膠可以隨后與醋孟南形成更大的 集簇。在醋孟南與多糖A的反應過程中，k-角叉菜膠起到間隔基的作 用而不共價結合于胺基。多糖A的胺基被醋孟南的狹促占據是位阻性
的。在并入醫(yī)藥活性物質R1和/或R2之前，必須將這些還原的多糖洗
脫。 .
根據本發(fā)明，半乳甘露聚糖和/或半乳葡甘露聚糖也可以用作多糖
X，并且其中醛基已經被除去或被保護的k -角叉菜膠可用作用于分離
和/或模式生成的大分子。
如果作為多糖X的ic -角叉菜膠是要結合于多糖A，則這可以通過 可用作多糖X的個體多糖的混合比例來實現。然而，也可能目的在于 不是將對大分子的聚結并入到本發(fā)明分結合產品(I)中，而是在A和X 反應以形成結合產品(I)之后洗脫掉。
'在特別的實施方案中，在可以與多糖X和/或A的官能團反應的官 能團已經被除去和/或用保護基保護起來之后，可以使用通過微生物或 細胞合成的大分子作為聚結于多糖X的間隔基，以便空間上影響多糖 X并入到本發(fā)明的結合產品(I)中。這種大分子包括得自細菌、真菌和 酵母菌的細胞膜的多糖和糖蛋白。
在使用具有較大分子間結合力傾向例如范德華力的多糖X時，結 合產品(I)可以具有對發(fā)揮位阻影響的非還原性生物學結構的高親合 力。
在一個實施方案中，通過與金屬復合以及通過電極和其它電化學 方式實現X和/或A的進一步取代。結合產品(I)在分子量和分子的電荷圖形方面具有差異，并且另外 在分子量和分子的電荷圖形方面不同于起始材料。因此，有可能通過 凝膠滲透色譜法和/或電泳從反應產物分離起始材料和/或純化反應產 物，其中根據它們的大小(更確切地說是它們的流體力學體積)和/或電 泳流動性從起始材料純化和/或分離反應產物。
在本發(fā)明的一個實施方案中，醫(yī)藥物質R3配位結合(復合)于結合
產品(I)。 R3優(yōu)選是金屬離子。更優(yōu)選地，R3是鐵(優(yōu)選為Fe11)、鉀、 鎂、鋅、鈣、釓和/或銅。
根據本發(fā)明，可以選擇復合的結合產品(I)，使得復合物可以在體 內釋放R3，以便提供示蹤元素或重要的礦物質。在另一個實施方案中， 選擇復合的結合產品(I)使得復合物不能在體內釋放R3，例如以便使得 復合物用作造影劑，優(yōu)選其中113=釓。
本發(fā)明的裝置優(yōu)選用于制備結合產品(I)。本發(fā)明的裝置包括由絕 緣材料例如玻璃、塑料或琥珀制成的可靜電帶電的支承板1，使得可以 通過支承板1的靜電電荷形成電場。通過本發(fā)明的裝置，可以由液相 產生納米結構表面。此外，表面可以選擇性地被幾何學官能化，以便 靜電固定特定的分子或微觀粒子。通過靜電結構，液體中的粒子，例 如溶解的脫乙酰殼多糖分子，可以借助電場移動并且選擇性地定位。
在本發(fā)明方法的特定的實施方案中，所述方法包括以下步驟對 支承板(l)施加脫乙酰殼多糖或殼多糖A的溶液或懸浮液；使支承板(l) 靜電帶電，形成電場；制備脫乙酰殼多糖或殼多糖薄膜；通過使脫乙 酰殼多糖或殼多糖薄膜與多糖X的溶液或懸浮液在大于6.8的pH下接 觸使脫乙酰殼多糖或殼多糖A反應，形成希夫堿；通過加入還原劑還 原希夫堿，得到結合產品(I)。在另外的步驟中，結合產品(I)可以與R1 和任選地與Zl反應，和/或與R2和任選地與Z2反應，得到被式(II)和
/或(ni)的殘基取代的結合產品(1)。隨后，進行以下步驟使至少被式(n)的殘基取代的結合產品(I)反應以裂解A和X之間的胺鍵和/或酰胺鍵， 以便至少得到被式(II)的殘基取代的多糖X。
在一個實施方案中，支承板1可以旋轉，其中可借助馬達控制性 調節(jié)和借助轉數計確定旋轉的每分鐘轉數。優(yōu)選支承板1為平面的。 在另一個實施方案中，支承板具有凹面設計，并且由此形成容器。
凹面彎曲的支承板使得能夠在由彎曲產生的反應容器中進行化學 反應。可以通過緩慢旋轉容器實現加入的試劑的混合，而不使形成的 薄膜結構分離或擾動。通過增加每分鐘轉數，試劑可以被離心離開邊
緣，即，除去，而不干擾薄膜結構。
支承板1可以通過本領域中已知的方法靜電帶電。在一個實施方 案中，回轉支承板的一個側面可以接近絕緣加緊的紙表面并且由此靜 電帶負電荷。在支承板的相對側上形成相反的正電荷。
任選地，支承板1可以以受控的方式靜電帶電。在另外的實施方 案中，將電極布置在支承板中或其表面上。通過使電極帶電，可以在 支承板1的表面上形成復雜的電荷圖形。電極連接于發(fā)電機。在優(yōu)選 實施方案中，支承板1通過其軸連接于發(fā)電機。在一個實施方案中， 可旋轉支承板1的連接是通過滑動接觸實現的。
任選地，產生電荷的設備還能夠測量這種電荷。在本發(fā)明的一個 實施方案中，本發(fā)明的裝置包括用于產生和測量支承板表面的靜電電 荷的至少一個設備2，所述設備能夠使可旋轉的支承板的頂側和底側靜 電帶電有不同的電荷。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的裝置包
括用于產生和測量支承板表面的不同電荷的至少一個設備3，其中所述
設備包括以導電的方式與所述可旋轉的支承板的中心連接的陰極，和 在支承板表面外周上的環(huán)形陽極，其中所述電極連接于發(fā)電機。在一個實施方案中，電極布置在支承板中心的上方。電極可以通 過使其接近支承板而以導電的方式連接于脫乙酰殼多糖薄膜或加入的 試劑。在優(yōu)選實施方案中，電極材料是石墨。
在所述方法的另一個實施方案中，支承板沒有旋轉設計，但是涂 有脫乙酰殼多糖薄膜的支承板布置在至少一個陰極射線管的屏上。優(yōu) 選地，支承板設計為在陰極射線管的屏上的反應容器。通過偏轉板和/ 或偏轉線圈適當地調節(jié)陰極射線，可以在支承板表面上產生特定的電 荷圖形，其影響脫乙酰殼多糖的帶正電荷的氨基的聚集并且影響隨后 的化學反應，g卩，電子位移和氧化還原作用。
有利地，可以再現用成象方法例如電子顯微技術記錄的結構，用 于在整合到所述陰極射線管中的支承板上產生特定的電荷圖形。在這 種方法的特定實施方案中，可以通過偏轉線圈使陰極射線偏轉到檢視 窗上，使得可以通過偏轉到檢視窗上而觀察入射在支承板上的電荷圖 形。陰極和支承板之間的距離可以小于或大于陰極和檢視窗之間的距 離。通過適當地獲得陰極和檢視窗之間和陰極和支承板之間的距離， 在支承板上產生的電荷圖形可以放大在檢視窗上(在距離更遠的情況 下)。通過適當地將成像電子顯微鏡和使支承板帶電的二者連接于計算 機并且借助連接的電子顯微鏡觀察在支承板上制備的結構，可以使兩 個系統彼此配合。優(yōu)選地，陰極射線和用于對其進行控制和使其偏轉 的設備連接于計算機，所述計算機從電子顯微鏡或另一個成像設備獲 得信息。
本發(fā)明的裝置可以另外包括用于透照支承板1的設備6，以及用 于測量通過支承板1的光的光探測器。在一個實施方案中，所述裝置 包括用于照射支承板表面的設備以及用于測量支承板反射的光的光探 測器。獨立地，所述裝置可以包括用于使支承板表面上形成的薄膜磁 化和用于測量支承板表面上的磁場的設備。優(yōu)選所述設備可移動地布 置在支承板的上方和/或下方。優(yōu)選地，其可以在至少一個方向上相對于支承板移動，例如借助于步進馬達61和轉軸62。
優(yōu)選地，所述裝置包括在支承板1中心上方提供的移液或定量設 備4，其與支承板1的距離可以改變。任選地，所述裝置包括另外的定 量設備，可以選擇其與支承板中心的距離，其中還可以控制性地改變 它們在支承板上方的高度。
圖1表示本發(fā)明的裝置的說明性實施方案的頂部平面圖。圖表示 相同實施方案的剖視圖，其中
1是支承板，其可以以受控的方式靜電帶電，并且可以以可調的 每分鐘轉數旋轉；
2是用于產生和測量支承板1表面的靜電電荷的設備，例如通過 使所述可旋轉支承板的頂側和底側帶有不同的靜電電荷；
3是用于在支承板1表面上產生和測量不同電荷的設備，例如通
過并入以導電方式連接于可旋轉支承板中心的陰極和支承板表面的圓
周上的環(huán)形陽極，其中所述電極連接于發(fā)電機；
4是在支承板1的中心上方提供的移液或定量設備，其與支承板 的距離可以改變；和
6是透照支承板1的設備以及用于測量通過支承板1的光的光探 測器，其中所述設備6包括步進馬達61和轉軸62;
11是可以驅動所述可旋轉支承板的馬達；和
12是轉數計。
通過隨后的實施例進一步說明本發(fā)明，然而本發(fā)明不受其限制。
實施例 實施例1
將10 mg的高度粘性的脫乙酰殼多糖(2-氨基-2-脫氧 _(l_>4)-p-D-glucopyranan)(Fluka Biochemika)溶解在12 ml蒸餾水中。 隨后，將根據DeBelder和Granath制備的熒光素的DS為0.02的用異硫氰酸熒光素(FITC)標記的0.5 mg HES 200/0.5溶解于1.5 ml的0.1 N 磷酸鹽緩沖液pH 7.5中，并且通過在黑暗中搖動混合。在30分鐘之后， 加入0.025 g氰基硼氫化鈉NaBH3CN(Acros Organics， New Jersey)并且 搖動混合物和使其在黑暗中室溫靜置2小時。每30分鐘手動搖動試劑， 直到鼓泡停止。在最遲120分鐘之后，再次加入相同量的0.025 g氰基 硼氫化鈉，并對混合物進行同樣的處理。使用具有相同組成的對照溶 液進行相同的過程，但是不加入氰基硼氫化鈉。
在72小時之后，將兩種試劑分離并且冷凍干燥。與氰基硼氫化鈉 反應的混合物表現出脫乙酰殼多糖微粒的透明的黃色，而沒有用氰基 硼氫化鈉處理的微粒沒有明顯的顏色。在用熒光燈(波長540-590 nm) 照射時，可以觀察到熒光的黃色。隨后，將兩種冷凍干燥的試劑暴露 于負電荷的強電場。未與氰基硼氫化鈉混合的干燥物質立即被電場吸 引。根據本發(fā)明與氰基硼氫化鈉混合的物質不是帶電形式(聚陽離子)， 因此不受電場的影響。
實施例2
將10 mg的高度粘性的脫乙酰殼多糖(2-氨基-2-脫氧 -(1—4)-(5-D隱glucopyranan)(Fluka Biochemika)溶解于10 ml蒸餾水中。 隨后，將根據DeBelder和Granath制備的熒光素的DS為0.02的用FITC 標記的0.5 mg HES 200/0.5溶解于1.5 ml的0.1 N磷酸鹽緩沖液(pH 7.5) 中，并且通過在黑暗中搖動混合。在30分鐘之和，加入0.025 g的氰 基硼氫化鈉NaBH3CN(Acros Organics， New Jersey)。搖動混合物并且使 其在黑暗中室溫靜置2小時。每30分鐘手動搖動試劑，直到鼓泡停止。 在最遲120分鐘之后，再次加入相同量的0.025 g氰基硼氫化鈉，并對 混合物進行同樣的處理。
實施例3
在搖動下將2g的低粘度的脫乙酰殼多糖(2-氨基-2-脫氧 曙(1—4)-(3-D-glucopyrnanan)(Fluka Biochemika)溶解于50 ml的2 N乙酸中。使混合物靜置36小時，直到氣泡不再明顯。將平面的載玻片夾緊 在圖1中所示的薄膜離心機中。在薄膜離心機的旋轉中心上方提供的 移液設備充滿有脫乙酰殼多糖溶液。使離心機以200 rpm旋轉并且用發(fā) 生器使其帶負電荷。使移液設備緩慢接近回轉支承板。最初，將200
Pl的脫乙酰殼多糖溶液施加在支承板的中心并且通過增加轉數在支承 板上分配形成薄膜。用在薄膜離心機上方提供的燈和測量設備測定圓 形薄膜結構的半徑。增加離心機的轉數，直到形成的薄膜的半徑不再 增加。將薄膜在300 rpm千燥超過12小時。
將薄膜以150 rpm的每分鐘轉數用水洗滌，從薄膜的外部周邊開 始，直到滴落的洗滌溶液具有中性的pH。向支承板添加3ml的磷酸鹽 緩沖液。將5 g的HES-460完全溶解于7ml水中，并且將其添加到支 承板上。在30分鐘之和，加入0.025 g的氰基硼氫化鈉NaBH3CN(Acros Organics, New Jersey)。使混合物緩慢旋轉30分鐘并且使其室溫靜置2 小時。其后，每30分鐘旋轉試劑IO分鐘，直到鼓泡停止。在最遲120 分鐘之后，再次加入相同量的0.025 g氰基硼氫化鈉，并對混合物進行 同樣的處理。在72小時之后，使試劑離心從支承板上方離開，將制備 物反復地用磷酸鹽緩沖液pH 7.5洗滌，干燥并且通過電子顯微技術檢 查。使用具有相同電荷的支承板進行相同的過程，但是不加入氰基硼 氫化鈉。
在氰基硼氫化鈉反應時，觀察到幾乎僅在樣品的邊緣區(qū)發(fā)生氣泡 形成。圖3表示沒有加入氰基硼氫化鈉形成的實施例3的脫乙酰殼多 糖薄膜。圖4表示在經過實施例3的本發(fā)明的方法之后的脫乙酰殼多 糖薄膜。在制備物的邊緣區(qū)，發(fā)現明顯的改變和起皺，這在薄膜的中 間區(qū)沒有觀察到。對薄膜邊緣區(qū)這種改變的顯著限制只在支承板帶負 電荷時可以觀察到。這些觀察結果表明，支承板的電極化引起脫乙酰 殼多糖分子的陽離子基團朝向板取向，并且由此只有在邊緣區(qū)可進行 本發(fā)明的反應。在支承板帶負電荷時，加入氰基硼氫化鈉之后的氣泡 形成也是只在邊緣區(qū)觀察到。實施例4
在搖動下將5g殼多糖懸浮在2N乙酸中。使混合物靜置，直到氣 泡停止，并且在三口燒瓶中用氮氣吹掃。隨后，緩慢加入250 ml的0.5 NNaOH。將混合物在95'C加熱20分鐘。殘余物用過量的水洗滌并且 在80'C干燥。
在搖動下使形成的脫乙酰殼多糖溶解于2 N乙酸，并且使用實施 例3中所述的裝置在薄膜離心機的帶正電荷板上以300rpm離心。隨后 以低的每分鐘轉數從周邊開始用水洗滌，直到滴落的洗滌溶液具有中 性的pH。將支承板上的薄膜聚集在3 ml的磷酸鹽緩沖液(pH 7.5)中。 將1 g的HES 130/0.5溶解于5 ml的H20中并且移液到支承板上。
在30分鐘之后，加入0,025 mg的氰基硼氫化鈉。使混合物緩慢 旋轉30分鐘，然后使其靜置2小時。其后，使支承板緩慢旋轉10分 鐘，直到鼓泡停止。在120分鐘之后，再次加入0.025 g氰基硼氫化鈉， 并對混合物進行同樣的處理。在72小時之后，將上清溶液離心掉，并 將制備物重復地用磷酸鹽緩沖液洗滌并且干燥。
將帶有制備物的支承板置于具有滴液漏斗和pH電極的反應容器 中，并且小心地用水涂覆。用稀的氫氧化鈉水溶液調節(jié)pH為8-8.5。 小心地加入0.5g吡啶，并且小心地搖動容器。其后，加入30mg的丙 二酸二氯化物，然后緩慢旋轉反應容器。隨后，加入50mg的肌醇。 使反應在6(TC靜置2小時。其后，再次加入30 mg丙二酸二氯化物， 然后加入50 mg肌醇并且再次使混合物在6(TC靜置2小時。這個過程 再重復兩次。其后，將支承板小心地用水洗滌并且冷凍干燥。
4權利要求
1. 結合產品(I)，其包括m個多糖X分子與一個多糖A分子，其中所述多糖A選自殼多糖或脫乙酰殼多糖，m是1-10,000的整數，和X和A之間的連接基是胺和/或酰胺鍵。
2. 權利要求1的結合產品，其特征在于所述多糖X選自直鏈淀粉、 支鏈淀粉、醋孟南、右旋糖酐、.阿拉伯半乳聚糖、半乳甘露聚糖、半 乳葡甘露聚糖、黃原膠、角叉菜膠、藻酸鹽、瓜爾膠、金合歡膠、瓊 脂糖、肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸軟骨素、透明質酸、阿拉伯樹膠、 淀粉、及其混合物。
3. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是半乳甘露聚糖。
4. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是半乳葡甘露聚糖。
5. 權利要求3或4中任一項的結合產品，其特征在于多糖的半乳 糖對—甘—露箭f5B為1:3-1:5。
6. 權利要求2的結合產品，其特征在于所述多糖X是直鏈淀粉和/或支鏈淀粉。
7. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是醋孟南。
8. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是右旋糖酐。
9. 權利要求l或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是阿拉伯 半乳聚糖。
10. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是黃原膠。
11. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是角叉 菜膠。
12. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是藻酸±卜jhl 。
13. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是瓜爾膠。
14. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是金合 歡膠。
15. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是瓊脂糖。
16. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是肝素。
17. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是硫酸 軟骨素。
18. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是透明 質酸。
19. 權利要求1或2的結合產品，其特征在于所述多糖X是阿拉 伯樹膠。
20. 前述權利要求中一項或多項的結合產品，其特征在于所述多 糖X被部分或完全取代。
21. 權利要求20的結合產品，其特征在于多糖X的取代基選自羥 乙基和羧甲基。
22. 權利要求20或21的結合產品，其特征在于所述多糖X是羥 乙基淀粉。
23. 權利要求22的結合產品，其特征在于所述羥乙基淀粉的分子 量低于30,000，其取代度DS小于或等于0.3，并且m優(yōu)選為15-50。
24. 權利要求22的結合產品，其特征在于所述羥乙基淀粉的分子 量低于4000，并且m優(yōu)選為100-200。
25. 權利要求22的結合產品，其特征在于所述羥乙基淀粉的分子 量低于1500，并且m優(yōu)選為300-750。
26. 權利要求1的結合產品，其特征在于所述多糖X是用單羧酸 和/或二羧酸酯化的淀粉。
27. 前述權利要求中一項或多項的結合產品，其特征在于所述多 糖A是脫乙酰程度為90%-40%、更優(yōu)選為75%-60%的脫乙酰殼多糖。
28. 前述權利要求中一項或多項的結合產品，其特征在于所述結 合產品(I)被共價結合于X的式(II)的殘基取代，—Z1CR1 (11)，和/或被共價結合于A的式(III)的殘基取代 -Z2dR2 (III),其中Rl是藥學活性分子殘基， R2是藥學活性分子殘基，和 Rl和R2可相同或不同，和其中 _Zl是與Rl和X 二者共價結合的連接基，Z2是與R2和a 二者共價結合的連接基，0=1或0，d=l或0，和其中式(II)的殘基與X的摩爾比是a，式(ni)的殘基與a的摩爾比是b，a是0-1000的整數， b是0-1000的整數，和 a和b的至少一個不是零。
29.權利要求28的結合產品，其特征在于連接基Zl和/或Z2的 起始化合物選自具有1-22個、優(yōu)選2-15個、更優(yōu)選3-8個碳原子的直 鏈或支鏈的、飽和或不飽和的、脂肪族或脂環(huán)族的烴基殘基；芳基部 分中具有5-12個、優(yōu)選6-12個、更優(yōu)選6個碳原子的芳基、芳基-d-CV 烷基和芳基-C2-CV烯基，其可任選地被d-CV烷基和/或C2-CV烷氧基 取代；或在雜芳基部分中具有3-8個碳原子和一個或兩個選自N、 O和 S的雜原子的雜芳基、雜芳基-CrCV垸基和雜芳基-C2-C6-烯基，其可被 Q-C6-烷基和/或C2-CV烷氧基取代；和其中連接基Zl的起始化合物包含用于與Rl和X形成共價鍵的 2-20個官能團，和其中連接基Z2的起始化合物包含用于與R2和A形成共價鍵的 2-20個官能團，其中所述官能團各自獨立地選自羥基(-OH)， 氨基(-NH2)， 羧基(-COOH)， 異氰酸酯(-NCO)，羧酸鹵化物(-C(O)Cl， -C(O)Br和/或-C(0)1)， 羧基亞垸基(-(CH2)q-COOH，其中q=l-10)， 或 酯基(-COOAlk，其中Alk是含1-7個碳原子的烷基)。
30. 權利要求28或29的結合產品，其特征在于c-0，并且R1通 過羧酸酯、羧酸酰胺和/或氨基甲酸酯鍵直接結合于X。
31. 權利要求28或29中任一項的結合產品，其特征在于d二0，并 且R2通過羧酸酯、羧酸酰胺和/或氨基甲酸酯鍵直接結合于A。
32 權利要求28到31中任一項的結合產品，其特征在于R2和/ 或R1選自氨基酸殘基和肽殘基。
33. 權利要求28到31中任一項的結合產品，其特征在于R2和/ 或R1選自蛋白質殘基。
34. 權利要求28到31中任一項的結合產品，其特征在于R2和/ 或R1基于選自以下的藥物減食欲劑、抗酸中毒劑、氨基酸或修飾的 氨基酸、強壯劑/抗缺氧劑、鎮(zhèn)痛藥/抗風濕病藥、驅蟲劑、抗變態(tài)反應 藥、抗貧血藥、抗心律失常藥、抗生素/抗感染藥、抗老年癡呆藥、抗 糖尿病藥、解毒劑、止吐藥/抗眩暈藥、抗癲癇藥、止血藥、抗高血壓 藥、抗低血糖藥、抗低滲藥、抗凝劑、抗真菌藥、抗寄生蟲藥、抗炎 劑、鎮(zhèn)咳藥/祛痰藥、動脈硬化藥、浴療劑和熱療用藥物、(3阻斷劑、 l丐通道阻斷劑和腎素-血管緊張素系統抑制劑、毛細支氣管擴張藥/止喘 藥、利膽劑和膽道治療劑、膽堿能藥、皮質激素、皮膚用藥、食療藥/營養(yǎng)治療劑、診斷劑和診斷助劑、利尿劑、血流興奮藥、脫癮藥、酶 抑制劑、酶制劑和轉運蛋白、溶纖藥、老年病用藥、痛風治療劑、流 感治療劑、婦科用藥、抗痔瘡藥、肝用藥、安眠藥/鎮(zhèn)靜劑、垂體和下 丘腦激素、調節(jié)肽及其抑制劑、免疫治療劑和細胞因子、輸注和標準 注溶液、器官灌流液、心臟治療藥、齲齒和牙周病治療劑和其它牙科 制劑、冠狀動脈用藥、通便劑、脂質抑制劑、神經治療劑、胃腸用藥、 偏頭痛鎮(zhèn)痛藥、礦物質代謝制劑、肌肉松弛藥、麻醉劑、甲狀旁腺激 素、鈣代謝調節(jié)劑、骨質疏松癥用藥、神經病制劑和其它親神經藥物、 神經遞質或修飾的神經遞質、眼科用藥、耳科用藥、抗帕金森病藥和 用于錐體外系病癥的其它藥物、精神治療藥、竇炎用藥、強壯劑/補養(yǎng) 藥、甲狀腺治療劑、血清、免疫球蛋白和疫苗、性激素及其抑制劑、 解痙藥、血小板聚集抑制劑、抗肺結核藥、免疫刺激藥、泌尿科用藥、 血管治療劑、維生素、傷口治療劑、細胞生長抑制劑和轉移抑制劑。
35. 權利要求1到34中任一項的結合產品，其特征在于醫(yī)藥物質 R3配位結合于結合產品(I)，其中R3優(yōu)選為金屬離子，更優(yōu)選為鐵、 鉀、鎂、鋅、鈣、釓和/或銅。
36. 用于制備前述權利要求中任一項的結合產品(I)的裝置(IO)，其 包括由絕緣材料制成的可靜電帶電的支承板(l)。
37. 權利要求36的裝置(10)，其另外包括在支承板(l)的上方提供 的移液和/或定量設備(4)，其與支承板(l)的距離可以任選地可變調節(jié)， 并且其在支承板上方的位置可以任選地改變。
38. 權利要求36和37中任一項的裝置(10)，其特征在于所述支承 板(l)是可旋轉的。
39. 權利要求36到38中任一項的裝置(10)，其另外包括用于產生 和測量支承板(1)的表面上的靜電電荷的設備(2)，所述設備能夠使可旋轉的支承板(l)的頂側和底側靜電帶有不同的電荷。
40. 權利要求38到39中任一項的裝置(10)，其另外包括用于在支 承板(1)的表面上產生和測量不同電荷的設備(3)，其中所述設備(3)包括 以導電方式連接于所述可旋轉支承板(l)的中心的陰極，和支承板(l)的 表面圓周上的環(huán)形陽極，其中所述電極連接于發(fā)電機。
41. 權利要求36到40中任一項的裝置(10)，其另外包括至少一個 用于透照支承板(1)的設備(6)以及用于測量通過支承板(1)的光的光探 測器，和用于照射支承板(l)的表面的設備以及用于測量被支承板(l)反 射的光的光探測器，和/或用于使支承板(l)的表面上形成的薄膜磁化和 用于測量支承板(l)的表面上的磁場的設備。
42. 權利要求36到41中任一項的裝置(IO)，其特征在于電極布置 在支承板(l)內或其表面上，其適合于以可選擇的極性和電荷圖形使支 承板(l)靜電帶電。
43. t又利要求36到42中任一項的裝置(IO)，其特征在于電極(9) 以可選擇的距離布置在支承板(l)的中心的上方。
44. 權利要求36或37的裝置(10)，其特征在于借助陰極射線管使所述支承板(i:i靜電帶電。
45. 制備權利要求1到35中任一項的結合產品的方法，其特征在于其中(a)當所述結合是胺鍵時，該過程包括以下步驟-使多糖A與多糖X反應形成亞胺；和-隨后將亞胺還原為相應的胺；或 其中(b)當所述結合是酰胺鍵時，該過程包括以下步驟 -將多糖X的醛基氧化；和 -隨后使氧化產物與多糖A反應。
46. 權利要求45的方法，其特征在于在上游步驟中，多糖X與大分子形成平行分子的聚結物，所述大分子優(yōu)選為K-角叉菜膠、糖蛋白或得自細胞膜的大分子，所述大分子不含使它們能夠在隨后工藝步驟的反應條件下與多糖X和/或多糖A反應形成共價鍵的官能團。
47. 權利要求45到46中任一項的方法，其特征在于將多糖A溶 解于選自稀的有機酸和無機酸的溶劑中，所述溶劑具有小于6.5、優(yōu)選 小于6.0、更優(yōu)選小于5.5的pH。
48. 權利要求45到47中任一項的方法，其特征在于所述多糖X 溶解于pH大于6.5、更優(yōu)選大于7.0、更優(yōu)選大于7.5的含水溶液。
49. 權利要求45到48中任一項的方法，其特征在于將選自鹽樣 氫化物，優(yōu)選fjAlH4、 LiBH4、 NaBHjQNaBH3CN的適合的還原劑用 于還原。
50. 權利要求45到49中任一項的方法，另外包括以下步驟 用式(II)的殘基取代X，-Z1CR1 (11)，禾口/或用式(ni)的殘基取代a，-Z2dR2 (m)，其中Rl是藥學活性分子殘基，R2是藥學活性分子殘基，和 Rl和R2可相同或不同，和其中Zl是與Rl和X 二者共價結合的連接基，Z2是與R2和A 二者共價結合的連接基， c=l或0， d=l或0，和其中式(II)的殘基與X的摩爾比是a， 式(III)的殘基與A的摩爾比是b， a是0-1000的整數， b是0-1000的整數，和 a和b的至少一個不是零。
51. 權利要求45到50中任一項的方法，其特征在于反應產物、 起始材料、和中間物通過電泳和/或凝膠滲透色譜法彼此分離并且根據 它們的電泳流動性和/或它們的流體力學體積進行純化。
52. 權利要求50到51中任一項的方法，其特征在于在用式(II)的 殘基取代X之后，^另外的步驟中將X和A彼此分離。
53. 權利要求45到51中任一項的方法，其特征在于醫(yī)藥物質R3 配位結合于結合產品(I)，其中R3優(yōu)選為金屬離子，更優(yōu)選為鐵、鉀、 鎂、鋅、鈣、釓和/或銅。
54. 權利要求45到53中任一項的方法，其使用權利要求36到44 中任一項的裝置，所述方法包括以下步驟-向支承板(l)施加脫乙酰殼多糖或殼多糖A的溶液或懸浮液； -使支承板(l)靜電帶電以形成電場； -制備脫乙酰殼多糖或殼多糖薄膜；-通過使脫乙酰殼多糖或殼多糖薄膜與多糖X的溶液或懸浮液在 大于6.8的pH條件下接觸而使脫乙酰殼多糖或殼多糖A反應，形成希夫堿；-通過加入還原劑將希夫堿還原，得到結合產品(I)。
55. 權利要求54的方法，其另外包括-使結合產品(I)與Rl反應并且任選地與Zl反應，和/或與R2反 應并且任選地與Z2反應，以便得到被式(II)和/或(III)的殘基取代的結 合產品(I);-任選地使至少被式(II)的殘基取代的結合產品(I)反應以裂解A和 X之間的胺鍵和/或酰胺鍵，以便至少得到被式(II)的殘基取代的多糖X。
56. 權利要求54或55的方法，其特征在于布置在可旋轉支承板 內或其上的電極以導電方式與存在于支承板(l)上的薄膜和/或試劑連 接。
57. 權利要求54或55的用于制備結合產品(I)的方法，其特征在 于將涂有脫乙酰殼多糖薄膜的支承板(l)布置在至少一個陰極射線管的 屏上，其中通過偏轉板和/或偏轉線圈適當調節(jié)陰極射線而在支承板(1) 的表面上產生特定的圖形。
58. 權利要求57的方法，其特征在于所述支承板(l)被設計作為在 陰極射線管的屏上的反應容器。
59. 權利要求57和58的方法，其特征在于，通過偏轉線圈使入 射到支承板上的陰極射線選擇性地偏轉到檢視窗上，其中陰極和支承 板之間的距離可以小于或大于陰極和檢視窗之間的距離。
60. 權利要求57到59的方法，其特征在于陰極射線和用于控制 和使其偏轉的設備連接于計算機，所述計算機從電子顯微鏡或其它的 成像設備獲得信息。
61. 藥物組合物，包括權利要求l到35中任一項的結合產品。
62. 權利要求1到35中任一項的結合產品用于制備疾病治療用不 溶性藥物的用途。
63. 權利要求1到35中任一項的結合產品作為生物相容性物質的 用途，優(yōu)選用于或用作植入物例如人造血管、血管植入物、人造心臟 瓣膜、心臟二尖瓣、腱和韌帶代用品、軟骨代用品、用于在手術過程 中封閉不希望的開口的貼片和傷口覆蓋物；用于或用作手術助劑，例 如手術工具、以短期方式體內使用的一次性制品、導管、導管通道、 縫合材料、生物可降解的縫合材料、注射器、體外血液通道、血液袋 或用于靜脈內使用的溶液的袋、和袋的片材；或用于或用作醫(yī)療裝置 的組件，例如心肺機和透滲析機或過濾器、輸注通道、蠕動泵和透析 膜的部件。
64. 權利要求1到35中任一項的結合產品的用途，用作隱形眼鏡 的材料；用作護發(fā)素、保濕霜或指甲油的美容添加劑；用于固定細胞 和酶；用作親和色譜法和蛋'白分離的載體；用于受控治療系統；用于 選擇性藥物釋放的系統；或用于體外組織培養(yǎng)技術。
全文摘要
本發(fā)明涉及適合作為醫(yī)藥物質的載體的結合產品，以及涉及由其衍生的攜帶醫(yī)藥物質的化合物。本發(fā)明另外涉及用于制備這種結合產品和化合物的方法和裝置。此外，本發(fā)明涉及包含這種結合產品和化合物的藥物組合物，以及涉及其用于制備疾病治療用不溶性藥物的用途。
文檔編號C08B37/00GK101432310SQ200780014964
公開日2009年5月13日 申請日期2007年4月26日 優(yōu)先權日2006年4月26日
發(fā)明者伯恩特·霍斯特·邁爾, 內萊·邁爾 申請人:B·布朗·梅爾松根有限公司