本發(fā)明涉及一種用于鑒別甲基化差異的引物組和試劑盒，具體地說是一種用于鑒別慢性活動性eb病毒感染(caebv)和傳染性單核細胞增多癥(im)中eb病毒(ebv)差異甲基化基因的引物組、試劑盒及其應(yīng)用，屬于生物。

背景技術(shù)：

1、eb病毒(epstein-barr?virus，簡稱為ebv)為皰疹病毒科γ皰疹病毒亞科成員，是一種嗜人類淋巴細胞病毒，廣泛分布于世界各地，全球范圍內(nèi)約90％以上的健康成人攜帶該病毒。eb病毒在口咽部上皮細胞內(nèi)增殖，然后感染b淋巴細胞，這些細胞大量進入血液循環(huán)而造成全身性感染，并可長期潛伏在人體淋巴組織中。ebv感染可表現(xiàn)為增殖性感染和潛伏性感染。不同感染狀態(tài)表達不同的抗原，增殖性感染期表達的抗原有ebv早期抗原、ebv衣殼蛋白和ebv膜抗原，潛伏感染期表達的抗原有ebv核抗原和潛伏膜蛋白。ebv與多種人類淋巴細胞性和上皮細胞性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，如霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌和ebv相關(guān)胃癌等，是公認的dna腫瘤病毒。

2、ebv是傳染性單核細胞增多癥(infect?ious?mononucl?eos?i?s，簡稱為im)和慢性活動性ebv感染(chronic?act?ive?ebv?infect?ion，簡稱為caebv)的病原體。im是一種急性淋巴組織增生性疾病，多見于青春期初次感染ebv后發(fā)病，其臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、咽炎、淋巴結(jié)炎、脾大、肝功能異常、外周血中單核細胞和異型淋巴細胞大量增多。caebv是一種ebv感染t淋巴細胞、nk細胞或b淋巴細胞所致的一種淋巴增殖性疾病。caebv通常發(fā)生于原發(fā)性ebv感染后，以發(fā)熱、淋巴結(jié)病和脾腫大為主要特征。實驗室檢查可發(fā)現(xiàn)高拷貝數(shù)ebv-dna和/或異常的ebv相關(guān)抗體，病理學(xué)檢查可以在受損組織內(nèi)檢測到ebv編碼的rna和多種病毒相關(guān)蛋白，研究發(fā)現(xiàn)，盡早地為患者進行異基因造血干細胞移植是治愈該病的有效方法。

3、研究發(fā)現(xiàn)，表觀遺傳學(xué)修飾尤其是dna甲基化修飾在ebv感染相關(guān)疾病中發(fā)揮著重要的作用。ebv感染宿主細胞后，ebv病毒基因可能通過甲基轉(zhuǎn)移酶調(diào)控宿主基因dna甲基化水平，從而參與ebv致病過程。不同ebv相關(guān)疾病中ebv基因組甲基化特征不同，因此可通過檢測差異dna甲基化基因來對相應(yīng)疾病進行識別和診斷。

4、目前，ebv全基因組dna甲基化的改變在慢性活動性ebv感染(caebv)和傳染性單核細胞增多癥(im)的發(fā)生和發(fā)展中所發(fā)揮的潛在作用還尚未被研究。比較caebv與im之間在ebv全基因組中差異甲基化基因，從而篩選可用于臨床診斷及預(yù)后的dna甲基化biomarker，可進一步揭示甲基化在該疾病發(fā)生發(fā)展的機制，并作為疾病早期檢測和診斷的依據(jù)具有重要的意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的首要技術(shù)問題在于提供一種檢測待測樣品eb病毒基因組中相關(guān)位點甲基化水平的物質(zhì)在鑒定或輔助鑒定慢性活動性eb病毒感染和傳染性單核細胞增多癥中的新用途。

2、本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供用于檢測上述相關(guān)位點的檢測引物組。

3、為實現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下的技術(shù)方案：

4、檢測待測樣品eb病毒基因組中ebna-lp、ebna-3a、a73、balf5和bnrf1位點甲基化水平的物質(zhì)在制備鑒定或輔助鑒定慢性活動性eb病毒感染和傳染性單核細胞增多癥產(chǎn)品中的應(yīng)用。

5、其中較優(yōu)地，所述物質(zhì)為引物組。

6、其中較優(yōu)地，所述引物組選自由seq?id?no.1和seq?id?no.2的引物對、seq?idno.3和seq?id?no.4的引物對、seq?id?no.5和seq?id?no.6的引物對、seq?id?no.7和seqid?no.8的引物對以及seq?id?no.9和seq?id?no.10的引物對組成的引物組。

7、一種用于檢測慢性活動性eb病毒感染和傳染性單核細胞增多癥的eb病毒基因組中差異甲基化基因的引物組，所述引物組用于檢測甲基化位點為eb病毒基因組的ebna-lp、ebna-3a、a73、balf5和bnrf1五個位點的甲基化水平。

8、其中較優(yōu)地，所述引物組選自由seq?id?no.1和seq?id?no.2的引物對、seq?idno.3和seq?id?no.4的引物對、seq?id?no.5和seq?id?no.6的引物對、seq?id?no.7和seqid?no.8的引物對以及seq?id?no.9和seq?id?no.10的引物對組成的引物組。

9、上述引物組在檢測或輔助檢測慢性活動性eb病毒感染和傳染性單核細胞增多癥的eb病毒基因組中差異甲基化水平的檢測試劑或檢測試劑盒中的用途。

10、一種用于檢測慢性活動性eb病毒感染和傳染性單核細胞增多癥的eb病毒基因組中差異甲基化基因的試劑盒，其中包括上述的引物組。

11、與現(xiàn)有技術(shù)相比較，本發(fā)明具有以下的技術(shù)效果：

12、(1)本發(fā)明經(jīng)過對篩選方法的優(yōu)化改進，篩選得到了穩(wěn)定性強特異性顯著的caebv和im之間差異甲基化位點。本發(fā)明第一次提出了通過檢測目的ebv基因甲基化水平來鑒別caebv和im的方法。

13、(2)本發(fā)明提供了位于eb病毒基因組上的5個甲基化位點，由ebv感染引起的上述甲基化位點發(fā)生改變與caebv相關(guān)，可以通過檢測上述eb病毒基因組甲基化位點的改變進行caebv的早期診斷。

14、(3)本發(fā)明提供的五個caebv和im之間差異甲基化位點，該五個位點特異性佳，穩(wěn)定性優(yōu)異，eb病毒基因組的ebna-lp(30069bp)、ebna-3a(53968bp)、a73(157064bp)、balf5(154371bp)及bnrf1(2422bp)處，可以進一步檢測上述甲基化位點的改變進行caebv與im的早期鑒別。

15、(4)本發(fā)明提供甲基化位點的檢測引物，可以通過所述引物對其序列進行pcr擴增及焦磷酸測序檢測，檢測相應(yīng)基因甲基化水平，從而進行caebv與im的早期鑒別。

技術(shù)特征：

1.檢測待測樣品基因組中ebna-lp?30069bp、ebna-3a?53968bp、a73157064bp、balf515437bp和bnrf12422bp位點甲基化水平的物質(zhì)在制備鑒定或輔助鑒定慢性活動性eb病毒感染和傳染性單核細胞增多癥產(chǎn)品中的應(yīng)用。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：

3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于：

4.一種用于檢測慢性活動性eb病毒感染和傳染性單核細胞增多癥的宿主差異甲基化基因的引物組，其特征在于：

5.如權(quán)利要求4所述的引物組，其特征在于：

6.權(quán)利要求4或5所述的引物組在檢測或輔助檢測慢性活動性eb病毒感染和傳染性單核細胞增多癥的宿主差異甲基化水平的檢測試劑或檢測試劑盒中的用途。

7.一種用于檢測慢性活動性eb病毒感染和傳染性單核細胞增多癥的宿主差異甲基化基因的試劑盒，其特征在于：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種檢測待測樣品基因組中EBNA?LP?30069bp、EBNA?3A?53968bp、A73?157064bp、BALF5?15437bp和BNRF1?2422bp位點甲基化水平的物質(zhì)在制備鑒定或輔助鑒定慢性活動性EB病毒感染和傳染性單核細胞增多癥產(chǎn)品中的應(yīng)用。本發(fā)明可以通過利用檢測物質(zhì)對上述基因位點的甲基化水平進行檢測從而進行CAEBV與IM的早期鑒別。

技術(shù)研發(fā)人員：謝正德,王然,張林琳,艾軍紅,張萌
受保護的技術(shù)使用者：首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京兒童醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/9