本發(fā)明屬于葫蘆素提取，具體涉及一種王瓜根葫蘆素b的提取方法及其在質(zhì)量檢測中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、王瓜根為葫蘆科栝樓屬植物王瓜(trichosanthes?cucumeroides(ser.)maxim.)的根，別名土瓜根、山苦瓜根、土花粉。塊根呈圓柱形或紡錘形，肥大，通常2-9個呈簇生狀，斷面為潔白或黃白色，粉性，味稍苦澀。分布于東南亞、澳大利亞、中國、朝鮮、日本，全世界大約有80種，中國分布有41種8個變種，主要分布在我國華中、華南、華東及西南等地，味苦，性寒，歸大腸、胃經(jīng)。據(jù)《中華本草》記載，王瓜根具有散瘀通結(jié)、瀉熱解毒、行血消腫等功效，用于跌打損傷、熱病煩渴、咽喉炎、癰瘡腫毒、小便不利、乳汁不下等。

2、王瓜根含有葫蘆素b和葫蘆素e，對鼻咽癌細胞具有較強的殺傷作用，可以作為鼻咽癌、胃癌、腸癌及其他晚期癌癥的鎮(zhèn)痛劑。葫蘆素(cucurbitacins)是從葫蘆科及其他科屬多種植物中得到的一類呈苦味或甜味的四環(huán)三萜類化合物，主要為葫蘆素b、葫蘆素d、葫蘆素g、葫蘆素i、葫蘆素j等成分，此外，葫蘆素b具有抗腫瘤、提高機體免疫力、保肝等多種生物活性。目前有關(guān)王瓜提取工藝研究，僅發(fā)現(xiàn)對王瓜果實總?cè)七M行研究的報道，未見王瓜根三萜類活性成分提取工藝研究。

3、公開號cn101974055a的中國專利公開了一種提取葫蘆素b的方法，包含以下步驟：把甜瓜蒂原料粉碎用ph3-5的酸性水拌濕，加入生物酶混勻30-40℃酶解2-4天，酶解原料再投入提取容器，加5-15倍量乙醇回流提取2-3次，提取液加入活性炭氧化鋁混合短柱，下注液減壓回收乙醇至醇濃度30-50％，放置結(jié)晶，濾出得粗結(jié)晶，粗結(jié)晶加入氯仿冷溶，濾過回收氯仿至1/3-1/6體積，放置結(jié)晶，得二次結(jié)晶物，將二次結(jié)晶物，乙醇回流溶解，再加入活性炭脫色，濾過放置結(jié)晶，干燥結(jié)晶物即得產(chǎn)品葫蘆素b，但該方法需要采用酸、生物酶等，容易造成雜質(zhì)成分，且分離難。

4、公開號cn103992366a的中國專利公開了一種制備葫蘆素b的方法，具體步驟包括：1)將甜瓜蒂粉碎，過40目篩，置于萃取釜中，設(shè)定萃取壓力10～35mpa，萃取溫度30～55℃，解析釜i溫度為35～60℃，解析釜ii溫度為室溫，解析釜i、ii壓力均為系統(tǒng)壓力，靜態(tài)萃取10～30min后，再動態(tài)萃取10～30min(頻率35khz)，從解析釜i出料口得樣品i；2)從攜帶劑罐中加入2～5倍藥材量(v/w)的有機溶劑，設(shè)定萃取壓力20～45mpa，萃取溫度35～70℃，解析釜i溫度為40～75℃，解析釜ii溫度為35～70℃，解析釜i、ii壓力均為系統(tǒng)壓力，動態(tài)萃取30～60min(頻率35khz)從解析釜i出料口得萃取液。減壓回收溶劑并濃縮至稠膏，得到樣品ii；3)從富含總葫蘆素提取物的樣品i、樣品ii分離純化得到葫蘆素b。但該方法對系統(tǒng)壓力有較高要求，即對設(shè)備有較高要求。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提出了一種王瓜根葫蘆素b的提取方法及其在質(zhì)量檢測中的應(yīng)用。

2、具體是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

3、本發(fā)明的第一目的是提供：一種王瓜根葫蘆素b的提取方法，具體為：取王瓜根粉，以甲醇為溶劑，于200-250w、40khz條件下超聲處理30-50min，放冷，過濾即得。

4、所述甲醇的體積濃度為40-60％。

5、所述王瓜根粉與溶劑的質(zhì)量體積比為1∶(50-70)。

6、所述王瓜根粉為60-80目。

7、本發(fā)明的第二目的是提供：一種王瓜根葫蘆素b的提取方法在王瓜根質(zhì)量檢測中的應(yīng)用。

8、所述應(yīng)用具體指采用上述的王瓜根葫蘆素b的提取方法制備供試品溶液。

9、所述王瓜根質(zhì)量檢測，包括如下步驟：包括對水分、總灰分、水溶性浸出物、葫蘆素b含量的測定，所述水分、總灰分、水溶性浸出物含量測定按照《中國藥典》2020年版四部方法；所述葫蘆素b含量測定采用高效液相色譜法，具體如下：

10、(1)對照品溶液的制備：取葫蘆素b對照品，加甲醇即得；

11、(2)供試品溶液的制備：取王瓜根細粉加甲醇，超聲處理，放冷，補足甲醇，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；

12、(3)分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液，注入液相色譜儀中測定。

13、所述液相色譜的工作條件：色譜柱為hypersil?ods?c18，流動相為乙腈-水，檢測波長為231nm，流速按體積流量計，柱溫為30℃，進樣量為10μl，理論塔板數(shù)按葫蘆素b峰計算應(yīng)不低于5000。

14、所述色譜柱的規(guī)格為4.6mm×250mm，5μm。

15、所述流動相乙腈-水的體積比為(44-46)∶(54-56)。

16、所述流速的體積流量為0.8-1.4ml/min。

17、有益效果：

18、本發(fā)明方法具有操作簡便，不易破壞有效成分，節(jié)約成本、設(shè)備要求低、提取率高的優(yōu)勢。

19、本發(fā)明的提取方法應(yīng)用于王瓜根的質(zhì)量檢測或質(zhì)量控制中，可以提高質(zhì)量檢測或質(zhì)量控制的有效性，呈現(xiàn)的色譜圖顯著且穩(wěn)定，有利于提高藥材的內(nèi)在質(zhì)量和用藥質(zhì)量的評價。

技術(shù)特征：

1.一種王瓜根葫蘆素b的提取方法，其特征在于，取王瓜根粉，以甲醇為溶劑，于200-250w、40khz條件下超聲處理30-50min，放冷，過濾即得。

2.如權(quán)利要求1所述一種王瓜根葫蘆素b的提取方法，其特征在于，所述甲醇的體積濃度為40-60％。

3.如權(quán)利要求1所述一種王瓜根葫蘆素b的提取方法，其特征在于，所述王瓜根粉與溶劑的質(zhì)量體積比為1∶(50-70)。

4.如權(quán)利要求1所述一種王瓜根葫蘆素b的提取方法，其特征在于，所述王瓜根粉為60-80目。

5.如權(quán)利要求1-4任一項所述一種王瓜根葫蘆素b的提取方法在王瓜根質(zhì)量檢測中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述王瓜根質(zhì)量檢測，包括如下步驟：包括對水分、總灰分、水溶性浸出物、葫蘆素b含量的測定，所述水分、總灰分、水溶性浸出物含量測定按照《中國藥典》2020年版四部方法；所述葫蘆素b含量測定采用高效液相色譜法，具體如下：

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述色譜柱的規(guī)格為4.6mm×250mm，5μm。

8.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述流動相乙腈-水的體積比為(44-46)∶(54-56)。

9.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述流速的體積流量為0.8-1.4ml/min。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于葫蘆素提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種王瓜根葫蘆素B的提取方法及其在質(zhì)量檢測中的應(yīng)用，取王瓜根粉，以甲醇為溶劑，于200?250W、40kHz條件下超聲處理30?50min，放冷，過濾即得；本發(fā)明方法具有操作簡便，不易破壞有效成分，節(jié)約成本、設(shè)備要求低、提取率高的優(yōu)勢。

技術(shù)研發(fā)人員：馮發(fā)進,楊江林,楊德智,陸寬,趙啟華,吳飛龍,杜成興
受保護的技術(shù)使用者：貴州省生物技術(shù)研究開發(fā)基地有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/9