本發(fā)明涉及發(fā)光探針檢測(cè)，具體涉及的是一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針及其制備和在比率檢測(cè)β-淀粉樣蛋白纖維化過程的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、阿爾茨海默病(alzheimer’s?disease,ad)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性病變，主要發(fā)生在老年或老年前期，其臨床表現(xiàn)主要是進(jìn)行性記憶和認(rèn)知功能障礙、行為和人格異常等。ad的發(fā)病率會(huì)隨著人類年齡的增長不斷增加，隨著老齡化不斷加劇，預(yù)計(jì)到2030年ad癥患者人數(shù)將增加40％左右，達(dá)到7800萬人，到2050年將增至1.39億人，成為危害人類的重大疾病之一。目前還沒有能有效治療ad的藥物和方法，因此對(duì)于ad的檢測(cè)方法以及相關(guān)藥物的研發(fā)就具有重要意義。

2、雖然目前對(duì)ad的確切發(fā)病機(jī)制仍不清楚，但普遍認(rèn)為β-淀粉樣蛋白的纖維化是引起ad的重要原因之一。因此研究和開發(fā)針對(duì)β-淀粉樣蛋白纖維化過程的檢測(cè)方法，不僅能在分子水平上了解ad的發(fā)病機(jī)理，還能對(duì)ad的早期診斷和相關(guān)藥物的開發(fā)提供重要依據(jù)。

3、從目前β-淀粉樣蛋白纖維化的檢測(cè)方法研究的情況來看，發(fā)光探針檢測(cè)具有方法簡單、靈敏度較好以及實(shí)時(shí)成像檢測(cè)能力等優(yōu)勢(shì)，成為首選的檢測(cè)方法之一。相較于目前商業(yè)的單重發(fā)射探針，開發(fā)基于雙重發(fā)射金屬配合物的比率發(fā)光探針，能有效減少儀器性能、探針濃度以及光漂白等因素對(duì)檢測(cè)的影響，從而顯著提高β-淀粉樣蛋白纖維化檢測(cè)的準(zhǔn)確度。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的之一在于提供一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針，適用于比率檢測(cè)淀粉樣蛋白纖維化，具有檢測(cè)可靠性高和檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn)。

2、本發(fā)明的目的還在于提供上述雙重發(fā)射金屬釕配合物探針的制備方法。

3、本發(fā)明的目的還在于提供上述雙重發(fā)射金屬釕配合物探針在實(shí)時(shí)檢測(cè)淀粉樣蛋白纖維化過程的應(yīng)用。

4、本發(fā)明的目的還在于提供上述雙重發(fā)射金屬釕配合物探針在對(duì)淀粉樣蛋白纖維的比率成像檢測(cè)的應(yīng)用。

5、為了達(dá)成上述目的，本發(fā)明的解決方案是：

6、一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針，其結(jié)構(gòu)通式如i所示，

7、

8、其中，r1和r2為氫原子或甲氧基，為互不相同的二齒多吡啶類配體。

9、r1和r2選自氫原子或甲氧基中的一種。

10、選自二齒多吡啶配體以及中的一種。

11、選自以及中的一種。

12、下面列出優(yōu)選的化合物進(jìn)一步闡述本發(fā)明一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針，它們不應(yīng)該被視為以任何方式限制本發(fā)明。

13、

14、

15、一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針的制備方法，包括如下步驟：

16、(1)按摩爾比＝1：2～2.2：2～2.2稱取化合物a對(duì)傘花烴二氯化釕二聚體、二齒多吡啶類配體化合物b和二齒多吡啶類配體化合物c

17、(2)在氮?dú)鈿夥障拢蚧衔颽中加入溶劑和二齒多吡啶類配體化合物b，將反應(yīng)溫度控制在80℃～90℃進(jìn)行金屬配位反應(yīng)，加熱反應(yīng)3～7h，所述溶劑的體積和所述化合物a的物質(zhì)的量之比為8～16ml：0.1mmol；

18、(3)然后再向步驟(2)的反應(yīng)體系中加入二齒多吡啶類配體化合物c，將反應(yīng)溫度控制在130℃～150℃進(jìn)行金屬配位反應(yīng)，回流反應(yīng)10～15h，冷卻、抽濾、洗滌，得到化合物d

19、(4)按摩爾比＝1：1.1～1.5稱取化合物d和二齒配體化合物e

20、(5)在化合物d中加入二齒配體化合物e，再加入溶劑，進(jìn)行金屬配位反應(yīng)，得到所述雙重發(fā)射金屬釕配合物探針，所述溶劑的體積和所述化合物d的物質(zhì)的量之比為8～12ml：0.1mmol。

21、步驟(2)中，所述溶劑為1,4-二氧六環(huán)、乙腈和n,n-二甲基甲酰胺中的一種。

22、步驟(5)中，所述溶劑為叔丁醇、乙二醇和乙二醇二甲醚中的一種。

23、該雙重發(fā)射金屬釕配合物探針的合成路線如下所示：

24、

25、即金屬釕配合物a在溶劑的作用下，分步與不同的二齒多吡啶配體發(fā)生螯合反應(yīng)得到。

26、一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針在實(shí)時(shí)比率發(fā)光檢測(cè)β-淀粉樣蛋白纖維化過程的應(yīng)用，其檢測(cè)方法包括以下步驟：

27、(1)制備所述雙重發(fā)射金屬釕配合物探針；

28、(2)將β-淀粉樣蛋白樣品加入到緩沖溶液中，在37℃的條件下進(jìn)行孵育，形成β-淀粉樣蛋白聚集體溶液；

29、(3)每間隔5～10分鐘分別吸取步驟(1)所制備的雙重發(fā)射金屬釕配合物探針和步驟(2)所制備β-淀粉樣蛋白聚集體溶液，混勻，利用熒光光譜儀檢測(cè)所述金屬釕配合物探針的雙重發(fā)射強(qiáng)度的比值變化情況。

30、步驟(2)中，所述緩沖溶液為300mm?nacl/100mm?tris,所述緩沖溶液的ph＝7.5。

31、步驟(3)中，所述熒光光譜儀的參數(shù)設(shè)置為：激發(fā)與發(fā)射狹縫寬度均為10nm；延遲時(shí)間為1s；檢測(cè)電壓為700v；激發(fā)波長為340nm；增益為1；靈敏度為8.0s。

32、一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針對(duì)β-淀粉樣蛋白纖維的比率成像檢測(cè)的應(yīng)用，其檢測(cè)方法包括以下步驟：

33、(1)制備所述雙重發(fā)射金屬釕配合物探針；

34、(2)將β-淀粉樣蛋白樣品加入到緩沖溶液中，在37℃的條件下進(jìn)行孵育150分鐘，形成β-淀粉樣蛋白纖維；

35、(3)分別吸取步驟(1)所制備的雙重發(fā)射金屬釕配合物探針和步驟(2)所制備β-淀粉樣蛋白纖維，混勻，利用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)所述金屬釕配合物探針的比率成像變化情況。

36、步驟(2)中，所述緩沖溶液為300mm?nacl/100mm?tris,所述緩沖溶液的ph＝7.5。

37、步驟(3)中，所述激光共聚焦顯微鏡的參數(shù)設(shè)置為：激發(fā)波長為405和488nm；信號(hào)檢測(cè)范圍：425-525nm和600-700nm，檢測(cè)電壓為600v。

38、采用上述技術(shù)方案后，本發(fā)明一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針是結(jié)構(gòu)通式如i的化合物，該雙重發(fā)射金屬釕配合物探針具有合成方法簡單，產(chǎn)率高的特點(diǎn)。利用熒光光譜測(cè)試方法，該金屬釕配合物可以對(duì)β-淀粉樣蛋白纖維化過程的開展比率發(fā)光實(shí)時(shí)檢測(cè)；利用激光共聚焦顯微鏡測(cè)試技術(shù)，該金屬釕配合物還能對(duì)β-淀粉樣蛋白纖維進(jìn)行比率成像分析。與商業(yè)化的單重發(fā)光探針硫黃素t相比，顯著提高了檢測(cè)過程可靠性和準(zhǔn)確性。證明該雙重發(fā)射金屬釕配合物探針在阿爾茨海默病的早期檢測(cè)方面具有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針，其特征在于：其結(jié)構(gòu)通式如i所示，

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針，其特征在于：r1和r2均選自氫原子或甲氧基中的一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針，其特征在于：選自二齒多吡啶配體以及中的一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針，其特征在于：選自以及中的一種。

5.如權(quán)利要求1所述的一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，所述溶劑為1,4-二氧六環(huán)、乙腈和n,n-二甲基甲酰胺中的一種。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針的制備方法，其特征在于：步驟(5)中，所述溶劑為叔丁醇、乙二醇和乙二醇二甲醚中的一種。

8.如權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的雙重發(fā)射金屬釕配合物探針在實(shí)時(shí)比率發(fā)光檢測(cè)β-淀粉樣蛋白纖維化過程的應(yīng)用。

9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于：所述的檢測(cè)包括以下步驟：

10.如權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的雙重發(fā)射金屬釕配合物探針在β-淀粉樣蛋白纖維的比率成像檢測(cè)的應(yīng)用。

11.如權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于：所述的檢測(cè)包括以下步驟：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種雙重發(fā)射金屬釕配合物探針及其制備方法和應(yīng)用，該金屬釕配合物探針具有合成方法簡單，產(chǎn)率高的特點(diǎn)。該金屬釕配合物不僅能對(duì)β?淀粉樣蛋白纖維化過程的開展比率發(fā)光實(shí)時(shí)檢測(cè)，還能對(duì)β?淀粉樣蛋白纖維進(jìn)行比率成像分析，檢測(cè)過程具有可靠性高和結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn)。與商業(yè)化的單重發(fā)射探針相比，該金屬釕配合物探針的檢測(cè)準(zhǔn)確度顯著提高，證明該雙重發(fā)射金屬釕配合物探針在阿爾茨海默病的早期檢測(cè)方面具有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：吳四海,彭慧娥,鄭仁會(huì),張哲
受保護(hù)的技術(shù)使用者：華僑大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21