本發(fā)明屬于生物，具體涉及一種源于菹草鱗枝的酪氨酸酶抑制肽及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、酪氨酸酶(tyrosinase,ec.1.14.18.1)又稱多酚氧化酶、兒茶酚氧化酶，是一種廣泛存在于微生物、動(dòng)植物以及人體中的含銅金屬氧化酶，是調(diào)節(jié)黑色素生物合成的關(guān)鍵限速酶。酪氨酸酶可先將l-酪氨酸轉(zhuǎn)化為左旋多巴(l-dopa)，再氧化l-dopa為多巴醌，最終導(dǎo)致黑色素生物合成。因此，其表達(dá)水平以及活性直接影響黑色素合成的速度和產(chǎn)量。對(duì)于人類而言，黑色素能保護(hù)皮膚免受紫外線輻射，然而過(guò)量的黑色素會(huì)導(dǎo)致黃褐斑、雀斑、炎癥后黑皮病、色素性痤瘡疤痕等異常色素沉著性疾病，甚至形成惡性黑色素瘤。另外，酪氨酸酶催化的黑色素生物合成，還影響昆蟲的蛻皮和傷口愈合，以及果蔬的酶促褐變等過(guò)程。因此，酪氨酸酶抑制劑可以通過(guò)降低酪氨酸酶的催化效率，抑制黑色素的生物合成，在醫(yī)療美容、食品保鮮劑、新型殺蟲劑等領(lǐng)域均具有十分廣闊的應(yīng)用前景。曲酸、熊果苷和對(duì)苯二酚是在化妝品領(lǐng)域應(yīng)用較為廣泛的酪氨酸酶抑制劑，雖然這些藥物能夠產(chǎn)生較強(qiáng)的治療效果，但同時(shí)也具有嚴(yán)重的副作用。曲酸和對(duì)苯二酚可能具有遺傳毒性和致癌作用。熊果苷是從小麥、梨皮和藍(lán)莓葉中提取的糖基化氫醌，很容易在皮膚表面轉(zhuǎn)化為有害的對(duì)苯二酚。因此，迫切需要開(kāi)發(fā)安全穩(wěn)定的酪氨酸酶抑制劑。

2、菹草(potamogeton?crispusl.)，又名絲草、榨草、鵝草，為眼子菜科(potamogetonaceae)多年生大型沉水維管植物，廣泛分布生于湖沼、河溝、池塘和稻田，為許多草型湖泊的優(yōu)勢(shì)種。鱗枝是菹草抵御不良生境的一種延存器官。本發(fā)明以菹草鱗枝為研究對(duì)象，進(jìn)行酪氨酸酶抑制肽的制備及酪氨酸酶抑制活性的探討，對(duì)于菹草的綜合開(kāi)發(fā)和利用提供重要的科學(xué)依據(jù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種源于菹草鱗枝的酪氨酸酶抑制肽及其制備方法和應(yīng)用。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、一種源于菹草鱗枝的酪氨酸酶抑制肽，所述酪氨酸酶抑制肽選自下述任一種：

4、1)氨基酸序列為ltly的酪氨酸酶抑制肽；

5、2)氨基酸序列為stvpf的酪氨酸酶抑制肽。

6、上述一種源于菹草鱗枝的酪氨酸酶抑制肽的制備方法，包括以下步驟：

7、1)將菹草鱗枝挑選去除雜物，于60℃干燥4h，然后經(jīng)高速粉碎機(jī)粉碎，過(guò)篩，得到菹草鱗枝粉；

8、2)向步驟1)的菹草鱗枝粉中加入純水，充分?jǐn)嚢枞苊?，調(diào)節(jié)ph至9.0，超聲輔助提取20min，再30℃恒溫浸提4h，離心，取上清液調(diào)節(jié)ph至4.0，4℃靜置4h后離心，棄上清，將沉淀冷凍干燥，得到菹草鱗枝蛋白；

9、3)將步驟2)的菹草鱗枝蛋白用純水溶解，加入堿性蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解結(jié)束后滅酶，離心收集上清液，得到菹草鱗枝多肽酶解液；

10、4)將步驟3)的菹草鱗枝多肽酶解液采用葡聚糖凝膠柱進(jìn)行分離純化，收集酪氨酸酶抑制活性最高的組分，冷凍干燥；

11、5)對(duì)步驟4)酪氨酸酶抑制活性最高的組分所包含的肽段進(jìn)行氨基酸序列測(cè)定，對(duì)測(cè)定得到的氨基酸序列進(jìn)行固相合成，從而得到源于菹草鱗枝的酪氨酸酶抑制肽。

12、上述步驟2)中，菹草鱗枝粉與純水的質(zhì)量比為1：20。

13、上述步驟3)中，菹草鱗枝蛋白與純水的質(zhì)量比為1：10；酶解的條件為：酶解溫度30～60℃，酶底比為4000～32000u/g，ph?7.0～10.0，酶解時(shí)間為1～4h。

14、上述步驟4)中，先用sephadex?lh-20葡聚糖凝膠柱進(jìn)行分離純化，再用superdex30pg葡聚糖凝膠柱進(jìn)行分離純化。

15、上述一種源于菹草鱗枝的酪氨酸酶抑制肽在制備酪氨酸酶抑制劑中的應(yīng)用。

16、上述一種源于菹草鱗枝的酪氨酸酶抑制肽在制備抑制黑色素合成的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

技術(shù)特征：

1.一種源于菹草鱗枝的酪氨酸酶抑制肽，其特征在于：所述酪氨酸酶抑制肽選自下述任一種：

2.如權(quán)利要求1所述的酪氨酸酶抑制肽的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟2）中，菹草鱗枝粉與純水的質(zhì)量比為1：20。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的的制備方法，其特征在于：步驟3）中，菹草鱗枝蛋白與純水的質(zhì)量比為1：10；酶解的條件為：酶解溫度30~60℃，酶底比為4000~32000u/g，ph?7.0~10.0，酶解時(shí)間為1~4h。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：步驟4）中，先用sephadex?lh-20葡聚糖凝膠柱進(jìn)行分離純化，再用superdex30pg葡聚糖凝膠柱進(jìn)行分離純化。

6.如權(quán)利要求1所述的酪氨酸酶抑制肽在制備酪氨酸酶抑制劑中的應(yīng)用。

7.如權(quán)利要求1所述的酪氨酸酶抑制肽在制備抑制黑色素合成的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種源于菹草鱗枝的酪氨酸酶抑制肽及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明以菹草鱗枝為原料，通過(guò)制備菹草鱗枝粉、提取菹草鱗枝蛋白、制備菹草鱗枝多肽酶解液、分離純化、序列測(cè)定、固相合成，得到酪氨酸酶抑制肽，其氨基酸序列為L(zhǎng)TLY或STVPF。本發(fā)明的酪氨酸酶抑制肽具有良好的酪氨酸酶抑制活性。

技術(shù)研發(fā)人員：董樂(lè),王芳
受保護(hù)的技術(shù)使用者：泉州師范學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21