本發(fā)明涉及一種金花茶基因及其應(yīng)用，具體涉及一種金花茶基因cpwrky及其在調(diào)控植物中葉黃素含量的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、金花茶是山茶科山茶屬金花茶組植物的統(tǒng)稱，常綠灌木或小喬木，是山茶屬中罕有的花色金黃的品種，被譽(yù)為“植物界的大熊貓”和“茶族皇后”。相關(guān)研究表明，植物葉片呈現(xiàn)黃色主要是葉黃素的含量高。而葉黃素是屬于類胡蘿卜素的天然色素，在高等植物中能大量合成,且在植物生理代謝中起關(guān)鍵作用。

2、目前關(guān)于調(diào)控植物中葉黃素含量的基因未見報(bào)道，因此挖掘調(diào)控植物中葉黃素含量的功能基因具有非常重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、發(fā)明目的：本發(fā)明旨在提供一種可以用于調(diào)控植物中葉黃素含量的基因cpwrky；本發(fā)明的另一目的在于提供一種所述基因在調(diào)控植物中葉黃素含量的應(yīng)用。

2、技術(shù)方案：本發(fā)明所述金花茶基因cpwrky，其核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

3、本發(fā)明所述的重組表達(dá)載體，含有上述金花茶基因cpwrky。

4、本發(fā)明所述的宿主菌，含有上述金花茶基因cpwrky或上述重組表達(dá)載體。

5、所述金花茶基因cpwrky，或所述重組表達(dá)載體或所述宿主菌可以應(yīng)用在調(diào)控植物或植物花朵中葉黃素含量的應(yīng)用。

6、進(jìn)一步地，所述金花茶基因cpwrky用于提高植物或植物花朵中的葉黃素含量。

7、一種利用金花茶基因cpwrky調(diào)控植物中葉黃素含量的應(yīng)用方法，包括以下步驟：

8、(1)構(gòu)建金花茶cpwrky基因的超表達(dá)載體；

9、(2)轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌gv3101；

10、(3)侵染大花煙草并進(jìn)行篩選得到抗性轉(zhuǎn)基因植株；

11、(4)cpwrky轉(zhuǎn)基因植株葉片葉黃素含量的測定。

12、進(jìn)一步地，構(gòu)建金花茶cpwrky基因超表達(dá)載體時(shí)所用載體為psuper1300-cpwrky。

13、進(jìn)一步地，構(gòu)建金花茶cpwrky基因超表達(dá)載體時(shí)所用引物為：

14、f-aagcttctgcaggggcccgggatggctgacggtcatgaaactg；

15、r-accggatccactagtatttaaatctattcagaatcatcgtaaatttctcca。

16、進(jìn)一步地，pcr擴(kuò)增的反應(yīng)體系為：forward?primer?1μl，forward?primer?1μl，cdna1μl，prime?star?10μl，ddh2o?7μl；反應(yīng)條件為：98℃變性10s；58℃退火15s；72℃延伸1min，35個(gè)循環(huán)；72℃總延伸10min；16℃終止反應(yīng)。

17、有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下顯著優(yōu)點(diǎn)：所述金花茶基因cpwrky，可以用于提高植物中的葉黃素含量，在調(diào)控植物中葉黃素方面有著良好的應(yīng)用前景。本發(fā)明基于前期研究和生物信息學(xué)分析軟件初步預(yù)測了該基因的功能。通過克隆得到基因序列的全長，在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了超表達(dá)載體并進(jìn)行煙草的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，cpwrky轉(zhuǎn)基因株系葉片中葉黃素的含量與空載相比明顯升高。作為調(diào)控植物葉黃素含量的基因cpwrky，可應(yīng)用于基因工程中一些花色偏淡的植物，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)特征：

1.一種金花茶基因cpwrky，其特征在于，其核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

2.含有權(quán)利要求1所述金花茶基因cpwrky的重組表達(dá)載體。

3.含有權(quán)利要求1所述金花茶基因cpwrky或含有權(quán)利要求2所述重組表達(dá)載體的宿主菌。

4.一種權(quán)利要求1所述金花茶基因cpwrky或權(quán)利要求2所述重組表達(dá)載體或權(quán)利要求3所述宿主菌在調(diào)控植物中葉黃素含量的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述金花茶基因cpwrky用于提高植物中的葉黃素含量。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述金花茶基因cpwrky用于提高植物花朵中的葉黃素含量。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，應(yīng)用方法包括以下步驟：

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，構(gòu)建金花茶cpwrky基因超表達(dá)載體時(shí)所用載體為psuper1300-cpwrky。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，構(gòu)建金花茶cpwrky基因超表達(dá)載體時(shí)所用引物為：

10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，pcr擴(kuò)增的反應(yīng)體系為：forward?primer1μl，forward?primer?1μl，cdna1μl，prime?star?10μl，ddh2o?7μl。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種金花茶基因CpWRKY及其在調(diào)控植物中葉黃素含量的應(yīng)用，所述金花茶基因CpWRKY的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。本發(fā)明基于前期研究和生物信息學(xué)分析軟件初步預(yù)測了該基因的功能，通過克隆得到基因序列的全長，在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了超表達(dá)載體并進(jìn)行煙草的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CpWRKY轉(zhuǎn)基因株系葉片中葉黃素的含量與空載相比明顯升高。作為調(diào)控植物中葉黃素含量的基因CpWRKY，可應(yīng)用于基因工程中一些花色偏淡的植物，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)研發(fā)人員：沈雨晞,徐凡宸,葛云芝
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南京林業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21