本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種帶狀皰疹病毒重組蛋白和制備方法及其用途。

背景技術(shù)：

1、帶狀皰疹是由水痘帶狀皰疹病毒(vzv)引起的，初次感染一般發(fā)生在兒童/青春期，在人體免疫力低下或受到非特異性刺激后，病毒再次激活，導(dǎo)致受侵犯的神經(jīng)節(jié)發(fā)炎或壞死，產(chǎn)生神經(jīng)痛，并造成簇集性水泡。

2、帶狀皰疹發(fā)病率：全球3～5‰，亞太地區(qū)3～10‰，目前有逐年遞增趨勢(shì)；目前藥物治療效果有限，接種帶狀皰疹疫苗是預(yù)防的最有效手段。

3、vzv病毒由核衣殼包裹一個(gè)線性、雙鏈dna構(gòu)成，有一個(gè)蛋白層將核衣殼與酯包被(lipid?envelope)分離，這個(gè)蛋白層組成了主要的病毒糖蛋白。vzv生產(chǎn)約六種糖蛋白，現(xiàn)標(biāo)明為gb、gc、ge、gh、gi和gl，這些蛋白在病毒繁殖時(shí)，也表達(dá)在被感染的細(xì)胞膜表面。在被感染的細(xì)胞中，ge蛋白是產(chǎn)生最多的蛋白，它以非共價(jià)鍵形式與gi吸附，可與抗體g(igg)的fc片段吸附。gb蛋白是中和性抗體結(jié)合的目標(biāo)，在病毒進(jìn)入細(xì)胞中起重要作用。gh蛋白具有融合功能，便于病毒在細(xì)胞與細(xì)胞間的擴(kuò)散；gh蛋白需要gl蛋白存在進(jìn)行糖基化和向細(xì)胞表面轉(zhuǎn)移。gc蛋白對(duì)vzv繁殖沒(méi)有功能性。

4、然而，目前的基于vzv?ge蛋白設(shè)計(jì)的重組抗原，存在蛋白表達(dá)量低，多聚體組裝效率低，結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，難以保證其具有較好的抗原性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、因此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種帶狀皰疹病毒重組蛋白和制備方法及其用途。

2、為此，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

3、一種帶狀皰疹病毒重組蛋白，包括帶狀皰疹病毒e蛋白截短的氨基酸片段k，所述氨基酸片段k的氨基酸序列如srq?id?no.1所示。

4、可選的，所述氨基酸片段k的n端包括信號(hào)肽，所述信號(hào)肽的氨基酸序列如srq?idno.2～4任一所示。

5、可選的，所述氨基酸片段k的c端還包括三聚體folden序列，所述三聚體folden序列的氨基酸序列如srq?id?no.5所示。

6、可選的，所述氨基酸片段k和所述三聚體folden序列之間還包括連接序列，所述連接序列的氨基酸序列為g-s。

7、生物材料，包括如下任一項(xiàng)：

8、(1)、編碼所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白的核酸分子；

9、(2)、含有(1)所述的核酸分子的重組表達(dá)載體；

10、(3)、含有(1)所述的核酸分子的重組微生物或含有(2)所述的重組表達(dá)載體的重組微生物；

11、(4)、含有(1)所述的核酸分子的重組細(xì)胞系或含有(2)所述的重組表達(dá)載體的重組細(xì)胞系。

12、可選的，將編碼所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白的核酸分子轉(zhuǎn)入生物或生物細(xì)胞中表達(dá)。

13、一種藥物組合物，包括所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白、所述的生物材料或所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白的制備方法制備的帶狀皰疹病毒重組蛋白；優(yōu)選的，還包括藥學(xué)上可接受的載體和/或輔料。

14、一種疫苗，包括所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白、所述的生物材料或所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白的制備方法制備的帶狀皰疹病毒重組蛋白；優(yōu)選的，還包括免疫學(xué)上可接受載體和/或佐劑。

15、可選的，所述佐劑包括鋁佐劑和/或cpg佐劑；優(yōu)選的，所述鋁佐劑包括氫氧化鋁佐劑或磷酸鋁佐劑；優(yōu)選的，所述cpg佐劑包括cpg-a、cpg-b和/或cpg-c；優(yōu)選的，所述疫苗的制劑形式為水劑或凍干劑。

16、所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白、所述的生物材料、所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白的制備方法制備的帶狀皰疹病毒重組蛋白、所述的藥物組合物或所述的疫苗具有如下任一項(xiàng)的用途：

17、(1)、用于制備診斷、檢測(cè)、預(yù)防或治療與帶狀皰疹病毒感染的疾病的產(chǎn)品；

18、(2)、用于制備診斷、檢測(cè)、預(yù)防或治療與帶狀皰疹病毒所致的疾病的產(chǎn)品；

19、(3)、用于制備針對(duì)帶狀皰疹病毒的抗體；

20、(4)、用于所述帶狀皰疹病毒的分離純化；或

21、(5)、制備檢測(cè)所述帶狀皰疹病毒的產(chǎn)品。

22、本發(fā)明技術(shù)方案，具有如下優(yōu)點(diǎn)：

23、1、本發(fā)明提供的一種帶狀皰疹病毒重組蛋白，包括帶狀皰疹病毒e蛋白截短的氨基酸片段k，所述氨基酸片段k的氨基酸序列如srq?id?no.1所示；本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)并選擇了原始病毒e蛋白的核心胞外區(qū)1-509aa，相對(duì)于全長(zhǎng)的e蛋白，刪除了可能刺激產(chǎn)生無(wú)效抗體的氨基酸片段，免疫后相同的劑量能刺激出更多的中和抗體。

24、2、本發(fā)明提供的一種帶狀皰疹病毒重組蛋白，所述氨基酸片段k的n端包括信號(hào)肽，所述信號(hào)肽的氨基酸序列如srq?id?no.2～4任一所示；本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)并選擇了上述信號(hào)肽可以提高帶狀皰疹病毒e蛋白截短的氨基酸片段k的表達(dá)量，同時(shí)提高三聚體蛋白的組裝效率，尤其是如srq?id?no.3所示的信號(hào)肽與帶狀皰疹病毒e蛋白截短的氨基酸片段k組合在保證表達(dá)量的同時(shí)，三聚體的組裝效率最高。

25、3、本發(fā)明提供的一種帶狀皰疹病毒重組蛋白，所述氨基酸片段k的c端還包括三聚體folden序列，所述三聚體folden序列的氨基酸序列如srq?id?no.5所示；所述氨基酸片段k和所述三聚體folden序列之間還包括連接序列，所述連接序列的氨基酸序列為g(甘氨酸)-s(絲氨酸)；上述三聚體folden序列是本發(fā)明經(jīng)過(guò)大量研究?jī)?yōu)化的三聚體folden序列，在前面加上了gs兩個(gè)氨基酸作為連接序列，可以在形成穩(wěn)定三聚體的同時(shí)空間盡可能的暴露出e蛋白的中和表位，三聚體的組裝效率最高的同時(shí)保證刺激出更多的中和抗體，同時(shí)，刪除了gglvprgs這些氨基酸殘基，降低了免疫時(shí)刺激產(chǎn)生無(wú)效抗體的可能。

技術(shù)特征：

1.一種帶狀皰疹病毒重組蛋白，其特征在于，包括帶狀皰疹病毒e蛋白截短的氨基酸片段k，所述氨基酸片段k的氨基酸序列如srq?id?no.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白，其特征在于，所述氨基酸片段k的n端包括信號(hào)肽，所述信號(hào)肽的氨基酸序列如srq?id?no.2～4任一所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白，其特征在于，所述氨基酸片段k的c端還包括三聚體folden序列，所述三聚體folden序列的氨基酸序列如srq?id?no.5所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白，其特征在于，所述氨基酸片段k和所述三聚體folden序列之間還包括連接序列，所述連接序列的氨基酸序列為g-s。

5.生物材料，其特征在于，包括如下任一項(xiàng)：

6.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白的制備方法，其特征在于，將編碼權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白的核酸分子轉(zhuǎn)入生物或生物細(xì)胞中表達(dá)。

7.一種藥物組合物，其特征在于，包括權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白、權(quán)利要求5所述的生物材料或權(quán)利要求6所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白的制備方法制備的帶狀皰疹病毒重組蛋白；優(yōu)選的，還包括藥學(xué)上可接受的載體和/或輔料。

8.一種疫苗，其特征在于，包括權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白、權(quán)利要求5所述的生物材料或權(quán)利要求6所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白的制備方法制備的帶狀皰疹病毒重組蛋白；優(yōu)選的，還包括免疫學(xué)上可接受載體和/或佐劑。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的疫苗，其特征在于，所述佐劑包括鋁佐劑和/或cpg佐劑；優(yōu)選的，所述鋁佐劑包括氫氧化鋁佐劑或磷酸鋁佐劑；優(yōu)選的，所述cpg佐劑包括cpg-a、cpg-b和/或cpg-c；優(yōu)選的，所述疫苗的制劑形式為水劑或凍干劑。

10.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白、權(quán)利要求5所述的生物材料、權(quán)利要求6所述的帶狀皰疹病毒重組蛋白的制備方法制備的帶狀皰疹病毒重組蛋白、權(quán)利要求7所述的藥物組合物或權(quán)利要求8或9所述的疫苗具有如下任一項(xiàng)的用途：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種帶狀皰疹病毒重組蛋白和制備方法及其用途。本發(fā)明提供的一種帶狀皰疹病毒重組蛋白，包括帶狀皰疹病毒E蛋白截短的氨基酸片段K，所述氨基酸片段K的氨基酸序列如SRQ?ID?NO.1所示；本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)并選擇了原始病毒E蛋白的核心胞外區(qū)1?509aa，相對(duì)于全長(zhǎng)的E蛋白，刪除了可能刺激產(chǎn)生無(wú)效抗體的氨基酸片段，免疫后相同的劑量能刺激出更多的中和抗體。

技術(shù)研發(fā)人員：盧衛(wèi)嘉
受保護(hù)的技術(shù)使用者：北京睿晟合生物科技有限責(zé)任公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21