本申請(qǐng)涉及水產(chǎn)防治的，尤其涉及一種噬菌體及其應(yīng)用、以及包括該噬菌體的微生態(tài)制劑。

背景技術(shù)：

1、歐文斯氏弧菌是一種兼性厭氧菌，屬于革蘭氏陰性菌，通常存在于海洋環(huán)境中，也出現(xiàn)在淡水和河口等水域。同時(shí)，歐文斯氏弧菌也是一種條件致病菌，當(dāng)環(huán)境條件異?；蝠B(yǎng)殖動(dòng)物體質(zhì)下降時(shí)，往往會(huì)引起歐文斯氏弧菌相關(guān)疾病的暴發(fā)。歐文斯氏弧菌的致病對(duì)象包括水生動(dòng)物，例如蝦類(lèi)。歐文斯氏弧菌可能導(dǎo)致蝦類(lèi)疾病的發(fā)生，例如急性肝胰腺壞死病(ahpnd)，故往往會(huì)對(duì)蝦類(lèi)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成嚴(yán)重影響，進(jìn)而會(huì)對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。

2、目前，對(duì)弧菌的防治主要依賴(lài)于抗生素和化學(xué)藥物。然而，隨著抗生素和化學(xué)藥物的濫用，導(dǎo)致的環(huán)境污染和“超級(jí)細(xì)菌”也引發(fā)了一系列問(wèn)題。同時(shí)，抗生素和化學(xué)藥物對(duì)水產(chǎn)病害的防治效果并不好，藥效短、見(jiàn)效差且容易導(dǎo)致病原菌耐藥性增強(qiáng)。

3、隨著人們環(huán)保意識(shí)的提高以及可持續(xù)農(nóng)業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略的實(shí)施，尋找環(huán)保、安全、有效的生物防治措施越來(lái)越被人們重視。不同于抗生素和化學(xué)藥物，水產(chǎn)噬菌體微生態(tài)制劑是完全源于自然的黃色環(huán)保產(chǎn)品。水產(chǎn)噬菌體微生態(tài)制劑具有環(huán)境友好、對(duì)非靶標(biāo)生物安全以及對(duì)水產(chǎn)病害具有特異性殺菌效果等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域和食品安全領(lǐng)域，在養(yǎng)殖業(yè)中替代抗生素用于防病抗病以及克服過(guò)量使用抗生素帶來(lái)的致病菌、耐藥性問(wèn)題，已成為當(dāng)前生物技術(shù)研究的熱點(diǎn)。

4、然而，噬菌體對(duì)宿主具有高度專(zhuān)一性，一般情況下，一種噬菌體只能裂解一種宿主，因此，窄譜噬菌體用于水產(chǎn)噬菌體微生態(tài)制劑，不能解決在水產(chǎn)養(yǎng)殖過(guò)程中出現(xiàn)的多種細(xì)菌病害感染問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N噬菌體及其應(yīng)用、以及包括該噬菌體的微生態(tài)制劑。本申請(qǐng)?zhí)峁┑氖删w噬菌譜廣，能更有效地解決水產(chǎn)養(yǎng)殖中出現(xiàn)的多種細(xì)菌病害感染問(wèn)題，同時(shí)還具有高度的安全性，在水產(chǎn)生物防治上具有良好的應(yīng)用前景。

2、第一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N噬菌體。

3、本申請(qǐng)從福建省漳州市漳浦縣地區(qū)南美對(duì)蝦塘水樣分離篩選出一種新的噬菌體，命名為噬菌體13vo501a。經(jīng)過(guò)鑒定，該噬菌體是有尾噬菌體綱caudoviricetes的噬菌體，具體為歐文斯氏弧菌噬菌體13v0501a(vibrio?owensii?phage?13v0501a)。且全基因組已上傳ncbi官網(wǎng)并獲得genebank登錄號(hào)oq622095.1。并將該噬菌體于2023年3月23日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?m?2023395，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)武漢大學(xué)校內(nèi)。

4、本申請(qǐng)?zhí)峁┑氖删w能同時(shí)裂解至少8種不同的宿主，包括能夠裂解26株歐文斯氏弧菌、23株副溶血弧菌、15株哈維氏弧菌、9株坎氏弧菌、6株溶藻弧菌、5株霍亂弧菌、4株創(chuàng)傷弧菌、3株?duì)N爛弧菌。同時(shí)，噬菌體離開(kāi)宿主后無(wú)法獨(dú)立生長(zhǎng)和繁殖，也無(wú)法侵染其他生物，故不會(huì)導(dǎo)致生物危害和環(huán)境污染。

5、因此，本申請(qǐng)分離篩選到的新噬菌體具有高裂解能力，不僅能夠有效抑菌殺菌，而且還具有高度的安全性，在水產(chǎn)生物防治上具有良好的應(yīng)用前景。

6、可選地，所述噬菌體包括特異性基因片段vo1和特異性基因片段vo2；所述特異性基因片段vo1包括如seq?id?no?1所示的核苷酸序列；所述特異性基因片段vo2包括如seqid?no?2所示的核苷酸序列。

7、可選地，所述特異性基因片段vo1的上游引物為seq?id?no?3所示的核苷酸序列，下游引物為seq?id?no?4所示的核苷酸序列。

8、可選地，所述特異性基因片段vo2的上游引物為seq?id?no?5所示的核苷酸序列，下游引物為seq?id?no?6所示的核苷酸序列。

9、可選地，所述噬菌體具有較強(qiáng)的耐高溫性、耐酸堿性和紫外耐受能力。

10、可選地，所述噬菌體為寬譜噬菌體，能同時(shí)裂解至少8種不同種類(lèi)的弧菌。

11、第二方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N微生態(tài)制劑。該微生態(tài)制劑包括上述噬菌體。

12、第三方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N噬菌體。微生態(tài)制劑在制備用于防治水產(chǎn)動(dòng)物弧菌病害的組合物中的應(yīng)用。

13、可選地，所述弧菌病害為單種弧菌或多種弧菌引起的弧菌病害。

14、綜上所述，本申請(qǐng)包括以下至少一種有益技術(shù)效果：

15、1.本申請(qǐng)篩選獲得的噬菌體于2023年3月23日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?m?2023395，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)武漢大學(xué)校內(nèi)，全基因組已上傳ncbi官網(wǎng)并獲得genebank登錄號(hào)oq622095.1。

16、2.本申請(qǐng)篩選獲得的噬菌體為有尾噬菌體，頭部形狀為正廿面體，具有較強(qiáng)的耐高溫性、一定的耐酸性、較強(qiáng)的耐堿性以及較強(qiáng)的紫外耐受能力。

17、3.本申請(qǐng)篩選獲得的噬菌體可以同時(shí)裂解8種不同種的宿主菌，不僅對(duì)歐文斯氏弧菌有較好的裂解效果，而且能夠裂解124株弧菌的91株，其中能裂解26株歐文斯氏弧菌、23株副溶血弧菌、15株哈維氏弧菌、9株坎氏弧菌、6株溶藻弧菌、5株霍亂弧菌、4株創(chuàng)傷弧菌和3株?duì)N爛弧菌。

18、4.相較于其他噬菌體，本申請(qǐng)篩選獲得的噬菌體(噬菌體13vo501a)裂解能力更強(qiáng)，宿主譜更廣，能在實(shí)際運(yùn)用中更有效地解決水產(chǎn)養(yǎng)殖中出現(xiàn)的多種細(xì)菌病害感染問(wèn)題。

19、5.在實(shí)際運(yùn)用中，本申請(qǐng)篩選獲得的噬菌體(噬菌體13vo501a)作為寬譜噬菌體具有明顯的優(yōu)勢(shì)，能顯著降低南美對(duì)蝦的死亡率，從而降低水產(chǎn)養(yǎng)殖中歐文斯氏弧菌、副溶血弧菌、哈維氏弧菌3種弧菌帶來(lái)的危害。

20、6.本申請(qǐng)?zhí)峁┑奈⑸鷳B(tài)制劑對(duì)南美對(duì)蝦生長(zhǎng)未有影響，且對(duì)南美對(duì)蝦歐文斯氏弧菌病害有明顯的預(yù)防與治療效果。

技術(shù)特征：

1.?一種噬菌體，其特征在于，所述噬菌體的保藏編號(hào)為cctcc?m?2023395。

2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的噬菌體，其特征在于，所述噬菌體是有尾噬菌體綱caudoviricetes的噬菌體，全基因組在ncbi官網(wǎng)的genebank登錄號(hào)為?oq622095.1。

3.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的噬菌體，其特征在于，所述噬菌體包括特異性基因片段vo1和特異性基因片段vo2；所述特異性基因片段vo1包括如seq?id?no?1所示的核苷酸序列；所述特異性基因片段vo2包括如seq?id?no?2所示的核苷酸序列。

4.?根據(jù)權(quán)利要求3所述的噬菌體，其特征在于，所述特異性基因片段vo1的上游引物為seq?id?no?3所示的核苷酸序列，下游引物為seq?id?no?4所示的核苷酸序列。

5.?根據(jù)權(quán)利要求3所述的噬菌體，其特征在于，所述特異性基因片段vo2的上游引物為seq?id?no?5所示的核苷酸序列，下游引物為seq?id?no?6所示的核苷酸序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的噬菌體，其特征在于，所述噬菌體具有較強(qiáng)的耐高溫性、耐酸堿性和紫外耐受能力。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的噬菌體，其特征在于，所述噬菌體為寬譜噬菌體，能同時(shí)裂解至少8種不同種類(lèi)的弧菌。

8.一種微生態(tài)制劑，其特征在于，所述微生態(tài)制劑包括權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的噬菌體。

9.一種權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的噬菌體、權(quán)利要求8所述微生態(tài)制劑在制備用于防治水產(chǎn)動(dòng)物弧菌病害的組合物中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述弧菌病害為單種弧菌或多種弧菌引起的弧菌病害。

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)涉及水產(chǎn)防治的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種噬菌體及其應(yīng)用、以及包括該噬菌體的微生態(tài)制劑。該噬菌體的保藏編號(hào)為CCTCC?M?2023395，是有尾噬菌體綱的噬菌體，全基因組在NCBI官網(wǎng)的GeneBank登錄號(hào)為OQ622095.1。本申請(qǐng)?zhí)峁┑氖删w能同時(shí)裂解至少8種不同的宿主，包括能夠裂解26株歐文斯氏弧菌、23株副溶血弧菌、15株哈維氏弧菌、9株坎氏弧菌、6株溶藻弧菌、5株霍亂弧菌、4株創(chuàng)傷弧菌、3株?duì)N爛弧菌。因此，本申請(qǐng)分離篩選到的新噬菌體具有高裂解能力，不僅能夠有效抑菌殺菌，而且還具有高度的安全性，在水產(chǎn)生物防治上具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：陳德國(guó),林茂,敬科舉,蔣詩(shī)濤,劉裴清,童桂香,房文紅
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廈門(mén)昶科生物工程有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/29