本發(fā)明涉及植物遺傳轉(zhuǎn)化領(lǐng)域，特別是涉及一種刺五加遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)：

1、刺五加(acanthopanax?senticosus(rupr.maxim.)harms)是五加科五加屬的一種“藥食同源”植物。刺五加的根和根莖是主要的藥用部位，具有益氣健脾和補氣安神等藥理作用。當(dāng)前刺五加的栽培苗木多為野生資源的種子繁育而來，刺五加新品種選育尤其是分子育種剛剛起步，高效的遺傳體系是分子育種的問題。

2、目前對于不同植物構(gòu)建遺傳轉(zhuǎn)化體系的方法有很多，并且大多構(gòu)建方法步驟相似，但是針對不同的植物的遺傳特性、對環(huán)境的適應(yīng)性和要求等存在差異，而刺五加雖然是常見的一種中藥材植物，但是發(fā)明人根據(jù)常規(guī)遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建對培養(yǎng)基組分、培養(yǎng)條件等進(jìn)行優(yōu)化，愈傷組織再分化苗的獲得率較低低，并且長勢較差，根量少，成活率低，難以滿足對于刺五加后期栽培種植的要求，因此，構(gòu)建一種高效的刺五加遺傳體系，解決目前刺五加遺傳體系構(gòu)建存在至關(guān)重要。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種刺五加遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建方法，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，該方法能夠得到穩(wěn)定遺傳的抗性刺五加幼苗，為刺五加育種奠定基礎(chǔ)。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

3、本發(fā)明提供一種刺五加遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建方法，包括以下步驟：

4、采用真空或者超聲條件下農(nóng)桿菌浸染刺五加新鮮莖段和葉片，之后轉(zhuǎn)入共培養(yǎng)培養(yǎng)基共培養(yǎng)，再脫菌和篩選抗性愈傷組織；其中，在浸染和共培養(yǎng)階段，在農(nóng)桿菌浸染液和共培養(yǎng)培養(yǎng)基中添加氯化鑭；

5、將篩選得到的抗性愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)，得到抗性刺五加苗。

6、優(yōu)選的是，所述真空或者超聲的時間為20min。

7、優(yōu)選的是，在農(nóng)桿菌浸染液中，農(nóng)桿菌的od600值為0.6，氯化鑭的濃度為20mg/l。

8、優(yōu)選的是，所述共培養(yǎng)培養(yǎng)基包括以下濃度的組分：1/2ms+20mg/l氯化鑭。

9、優(yōu)選的是，所述脫菌和篩選抗性愈傷組織包括以下步驟：采用加入頭孢霉素和特美汀的滅菌水進(jìn)行脫菌處理，后移至含頭孢霉素和潮霉素的lb固體培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)直至誘導(dǎo)出抗性愈傷組織。

10、優(yōu)選的是，所述抗性愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)的條件為：采用不含任何植物激素的固體ms基礎(chǔ)培養(yǎng)，常溫條件下培養(yǎng)。

11、本發(fā)明還提供一種刺五加增根壯苗的方法，利用所述方法構(gòu)建的抗性刺五加苗，在壯苗培養(yǎng)基中常溫培養(yǎng)，所述壯苗培養(yǎng)基包括以下組分：1/2ms+naa+hys或者1/2ms+hys。

12、優(yōu)選的是，所述壯苗培養(yǎng)基為如下任意一項：

13、(1)1/2ms+0.5mg/l?naa+5mg/l?hys；

14、(2)1/2ms+5mg/l?hys。

15、本發(fā)明公開了以下技術(shù)效果：

16、本發(fā)明通過對刺五加遺傳轉(zhuǎn)化過程中農(nóng)桿菌浸染以及篩選抗性愈傷組織的條件進(jìn)行改進(jìn)和優(yōu)化，得到最佳構(gòu)建刺五加遺傳轉(zhuǎn)化體系的條件，并且通過該方法構(gòu)建的遺傳轉(zhuǎn)化體系能夠得到抗性刺五加幼苗，長勢好且產(chǎn)生了大量的不定根，有利于抗性刺五加幼苗的成活。經(jīng)觀察和統(tǒng)計，本發(fā)明篩選得到的陽性抗性刺五加幼苗100％成活，這對于后期刺五加育種和栽培高效提供大量種質(zhì)資源奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)特征：

1.一種刺五加遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述真空或者超聲的時間為20min。

3.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，在農(nóng)桿菌浸染液中，農(nóng)桿菌的od600值為0.6，氯化鑭的濃度為20mg/l。

4.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述共培養(yǎng)培養(yǎng)基包括以下濃度的組分：1/2ms+20mg/l氯化鑭。

5.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述脫菌和篩選抗性愈傷組織包括以下步驟：采用加入頭孢霉素和特美汀的滅菌水進(jìn)行脫菌處理，后移至含頭孢霉素和潮霉素的lb固體培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)直至誘導(dǎo)出抗性愈傷組織。

6.如權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述抗性愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)的條件為：采用不含任何植物激素的固體ms基礎(chǔ)培養(yǎng)，常溫條件下培養(yǎng)。

7.一種刺五加增根壯苗的方法，其特征在于，利用權(quán)利要求1-6任一項所述方法構(gòu)建的抗性刺五加苗，在壯苗培養(yǎng)基中常溫培養(yǎng)，所述壯苗培養(yǎng)基包括以下組分：1/2ms+naa+hys或者1/2ms+hys。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述壯苗培養(yǎng)基為如下任意一項：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種刺五加遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建方法，屬于植物遺傳轉(zhuǎn)化領(lǐng)域。本發(fā)明采用真空或者超聲條件下農(nóng)桿菌浸染刺五加莖段和葉片，之后轉(zhuǎn)入共培養(yǎng)培養(yǎng)基共培養(yǎng)，再脫菌和篩選抗性愈傷組織；其中，在浸染和共培養(yǎng)階段，在農(nóng)桿菌浸染液和共培養(yǎng)培養(yǎng)基中添加氯化鑭；將篩選得到的抗性愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)，得到抗性刺五加苗。本發(fā)明成功構(gòu)建刺五加遺傳轉(zhuǎn)化體系，并得到穩(wěn)定遺傳的抗性刺五加幼苗，抗性刺五加幼苗不定根量大，長勢好，這對刺五加育種和栽培具有重要意義。

技術(shù)研發(fā)人員：范桂枝,仝亞倩,唐中華,高興蕾
受保護(hù)的技術(shù)使用者：東北林業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/29