本發(fā)明申請涉及生物免疫，具體涉及偽狂犬病毒gc蛋白抗原表位肽、單克隆抗體、雜交瘤細胞及應用。

背景技術：

1、偽狂犬?。╬orcine?pseudorabies,?pr），又名奧耶斯基氏病（aujeszky'sdisease,?ad），是由偽狂犬病毒（pseudorabies?virus,?prv）引發(fā)的一種以豬為主要自然宿主的傳染病。prv是一種雙鏈dna病毒，其基因組大約為143kb，具有74%的gc含量，并能編碼70至100種不同的蛋白質。

2、gc蛋白是偽狂犬病毒（prv）的一個組成部分，位于病毒基因組的ul區(qū)，由480個氨基酸組成，并以74kda的前體形式和92kda的成熟蛋白形式在感染的細胞中存在。雖然gc蛋白在偽狂犬病毒（prv）復制中不是必需的，但它能夠與硫酸肝素糖胺聚糖結合，對偽狂犬病毒（prv）吸附宿主細胞膜起到輔助作用。缺少gc蛋白的偽狂犬病毒（prv）在細胞吸附能力上會有所下降，并且病毒的滴度也會降低。此外，gc蛋白在激發(fā)豬的體液免疫反應中扮演著關鍵角色，具有顯著的免疫原性。因此，開發(fā)針對gc蛋白的特異性單克隆抗體、雜交瘤細胞及抗原表位肽，有助于開發(fā)針對偽狂犬病毒（prv）的檢測技術及疫苗，對于深入理解gc蛋白的生物學功能也具有重要意義。

3、公開于該背景技術部分的信息僅用于加深對本公開的背景技術的理解，而不應當被視為承認或以任何形式暗示該信息構成本領域技術人員所公知的現有技術。

技術實現思路

1、鑒于以上技術問題中的至少一項，本公開提供了一種偽狂犬病毒gc蛋白抗原表位肽、單克隆抗體、雜交瘤細胞及應用。

2、本申請公開的第一方面，提供一種偽狂犬病病毒gc蛋白的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)包括cdr?h1、cdr?h2、cdrh3，其氨基酸序列分別如seq?id?no.1、seq?id?no.2、seq?idno.3所示，其輕鏈可變區(qū)包括cdr?l1、cdrl2、cdr?l3，其氨基酸序列分別如seq?id?no.4、seq?id?no.5、seq?id?no.6所示。

3、在本公開的一些實施例中，所述單克隆抗體重鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?idno.7所示，其輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.8所示。

4、本申請公開的第二方面，提供一種編碼所述單克隆抗體的基因，編碼所述單克隆抗體重鏈可變區(qū)的dna序列如seq?id?no.9所示，編碼輕鏈可變區(qū)的dna序列如seq?idno.10所示。

5、本申請公開的第三方面，將所述單克隆抗體或所述基因應用在制備檢測偽狂犬病病毒的試劑中。

6、本申請公開的第四方面，提供一種所述單克隆抗體特異性識別的抗原表位肽，其位于偽狂犬病病毒gc蛋白的412～419肽段，其氨基酸序列如seq?id?no?.11所示。

7、本申請公開的第五方面，提供一種雜交瘤細胞，其分泌的單克隆抗體能特異性結合上述抗原表位肽。

8、本申請公開的第六方面，將所述單克隆抗體、所述抗原表位肽或所述雜交瘤細胞應用在制備免疫學檢測的試劑中。

9、本申請公開的第七方面，將所述單克隆抗體、所述抗原表位肽或所述雜交瘤細胞應用在制備抗偽狂犬病毒的抗體或疫苗中。

10、本申請實施例中提供的一個或多個技術方案，至少具有如下任一技術效果或優(yōu)點：

11、1.?本申請?zhí)峁┑膫慰袢《荆╬rv）gc蛋白的單克隆抗體，是基于構建能夠穩(wěn)定表達prv?gc蛋白的rosetta菌株，以表達的prv?gc蛋白作為免疫原免疫小鼠，利用細胞融合技術，以表達的prv?gc蛋白作為檢測原，通過酶聯免疫吸附試驗(enzymelinkedimmunosorbent?assay;elisa)，篩選得到了抗prv?gc蛋白的單克隆細胞株3e7，該細胞株產生的單克隆抗體可特異性識別并結合gc蛋白，對基于prv的疫苗研制具有重要指導意義。

12、2.?本申請偽狂犬病毒（prv）gc蛋白的單克隆抗體能特異的識別gc蛋白，為prv?gc蛋白快速檢測技術的解決奠定基礎，在prv相關的免疫檢測中具有廣泛的研究應用價值和商業(yè)使用價值，對基于prv的疫苗研制具有重要指導意義。并且該單克隆抗體可特異性識別并結合gc蛋白的412qlpifedt419區(qū)域，這是首次報道的b細胞表位。

13、3.?本申請所公開的單克隆抗體的重鏈可變區(qū)序列和輕鏈可變區(qū)序列的基礎上，可以通過常規(guī)基因工程和蛋白質工程進行一個或多個氨基酸的添加、刪除、替換等修飾，獲得其活性片段或保守性變異體，但仍能夠與偽狂犬病毒gc蛋白特異性結合，為進一步改造其抗體可變區(qū)序列制備不同組合形式的基因工程抗體打下基礎，以進一步提升抗體的特異性。

技術特征：

1.一種偽狂犬病病毒gc蛋白的單克隆抗體，其特征在于，其重鏈可變區(qū)包括cdr?h1、cdr?h2、cdr?h3，其氨基酸序列分別如seq?id?no.1、seq?id?no.2、seq?id?no.3所示，其輕鏈可變區(qū)包括cdr?l1、cdr?l2、cdr?l3，其氨基酸序列分別如seq?id?no.4、seq?id?no.5、seq?id?no.6所示。

2.根據權利要求1所述單克隆抗體，其特征在于，其重鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?idno.7所示，輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.8所示。

3.編碼權利要求1所述單克隆抗體的基因，其特征在于，編碼所述單克隆抗體重鏈可變區(qū)的dna序列如seq?id?no.9所示，編碼輕鏈可變區(qū)的dna序列如seq?id?no.10所示。

4.權利要求1所述單克隆抗體或權利要求3所述基因在制備檢測偽狂犬病毒的試劑中的應用。

5.一種權利要求1所述單克隆抗體特異性識別的抗原表位肽，其特征在于，其位于偽狂犬病病毒gc蛋白的412～419肽段，其氨基酸序列如seq?id?no.11所示。

6.一種雜交瘤細胞，其分泌的單克隆抗體能特異性結合權利要求5所述抗原表位肽。

7.權利要求1所述單克隆抗體、權利要求5所述抗原表位肽或權利要求6所述雜交瘤細胞在制備免疫學檢測試劑中的應用。

8.權利要求1所述單克隆抗體、權利要求5所述抗原表位肽或權利要求6所述雜交瘤細胞在制備抗偽狂犬病毒的抗體或疫苗中的應用。

技術總結
本發(fā)明申請涉及一種偽狂犬病毒gC蛋白抗原表位肽、單克隆抗體、雜交瘤細胞及應用，通過構建能夠穩(wěn)定表達PRV?gC蛋白的Rosetta菌株，以表達的PRV?gC蛋白作為免疫原免疫小鼠，利用細胞融合技術，以表達的PRV?gC蛋白作為檢測原，通過ELISA檢測，篩選得到了抗PRV?gC蛋白的單克隆細胞株，該細胞株產生的單克隆抗體可特異性識別并結合gC蛋白的<supgt;412</supgt;QLPIFEDT<supgt;419</supgt;區(qū)域。本申請單克隆抗體、抗原表位肽或雜交瘤細胞為偽狂犬病毒及其gC蛋白快速檢測技術的發(fā)展奠定基礎，在偽狂犬病毒相關的免疫檢測中具有廣泛的研究應用價值和商業(yè)使用價值，對基于偽狂犬病毒的疫苗研制具有重要指導意義。

技術研發(fā)人員：王愛萍,張改平,陳玉梅,張勇,周景明,劉紅亮
受保護的技術使用者：鄭州大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/10/21