本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及兩種深海凝血因子xia的多肽抑制劑及其在抗凝藥物治療方面中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、心血管疾病是當(dāng)今社會普遍存在的一種疾病，對人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅，全世界每年超過1500萬人死于心腦血管疾病，居于各種死因首位。我國心血管病現(xiàn)患人數(shù)3.3億，每5例死亡中就有2例死于心血管病。血栓形成是心血管疾病的主要并發(fā)癥，可導(dǎo)致心肌梗塞、急性缺血性中風(fēng)或靜脈血栓栓塞。血栓的形成是由許多條件造成的，但其根本原因在于體內(nèi)促凝血系統(tǒng)和抗凝血系統(tǒng)的失衡，所以研究凝血過程與血栓形成的關(guān)系成為研究血栓性疾病的熱點(diǎn)。

2、凝血系統(tǒng)是靜脈血栓形成的關(guān)鍵參與者，涉及凝血因子的一系列酶促反應(yīng)。凝血因子許多都是絲氨酸蛋白酶，它們在凝血的過程中會受到激活和抑制。內(nèi)在和外在凝血途徑共同構(gòu)成整個凝血系統(tǒng)，它們分別通過凝血因子fixa和fviia生成fxa，隨后凝血酶將可溶性纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。目前，臨床常用的抗凝劑包括普通肝素、低分子量肝素和華法林，但這些藥物可能引發(fā)嚴(yán)重出血。盡管凝血因子fxa和凝血酶在損傷止血反應(yīng)中起著核心作用，但它們的抑制劑會增加患者發(fā)生嚴(yán)重出血的風(fēng)險(xiǎn)，尤其是胃腸道、顱內(nèi)等危及生命的大出血。從治療角度看，內(nèi)在凝血途徑中的凝血因子xia具有很大潛力，因?yàn)樗軠p少出血副作用并提高臨床安全性。此外，fxia介導(dǎo)的內(nèi)在凝血過程主要通過反饋機(jī)制放大凝血酶的形成，因此，抑制內(nèi)在通路中的fxia可有效降低血栓形成和出血風(fēng)險(xiǎn)。fxia的特異性抑制劑可抑制血栓形成，而不完全干擾正常的止血功能，從而預(yù)防或最大限度地降低止血并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。多肽類fxia抑制劑的發(fā)展仍處于起步階段，目前潛在的fxia多肽類抑制劑非常有限，且還沒有靶向fxia的多肽類藥物進(jìn)入臨床研究。

3、綜上所述，臨床上亟需開發(fā)出血風(fēng)險(xiǎn)小、成本低、專一性強(qiáng)、且兼顧有效性和安全性的多肽類fxia靶點(diǎn)抗血栓藥物。目前海洋中發(fā)現(xiàn)的抗凝肽主要是針對凝血酶和凝血因子xa，且它們的氨基酸鏈都比較長，在海洋中的fxia抑制肽目前還沒有報(bào)道過。海洋環(huán)境產(chǎn)生了具有特殊功能和新穎結(jié)構(gòu)的多肽，探究海洋fxia抑制肽不僅可以為血栓性疾病的抗凝治療提供一種安全高效的藥物先導(dǎo)物，同時還能夠探索多肽類藥物在靶向fxia抗凝治療中的應(yīng)用前景。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于，針對血栓性疾病的預(yù)防及治療中存在潛在出血風(fēng)險(xiǎn)，本發(fā)明提供了兩種來自深海貝類的fxia多肽抑制劑prnif和gndrcl，多肽prnif作為一種非競爭抑制劑，能劑量依賴性地延長凝血酶時間(tt)和活化部分凝血活酶時間(aptt)，具有顯著的抗凝作用，為研制新型抗凝藥物提高了新的模板分子。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

3、本發(fā)明公開了一種具有抗凝效果的多肽prnif，所述prnif的蛋白序列為pro-arg-asn-ile-phe；或者所述抑制肽gndrcl的氨基酸序列為gly-asn-asp-arg-cys-leu。深海凝血因子xia抑制肽組合物為抑制肽為prnif或抑制肽gndrcl中的一種或兩種。

4、上述fxia多肽抑制劑prnif在制備凝血因子xia抑制劑、制備抗凝劑、制備防治血栓性疾病藥物中的應(yīng)用，主要是利用prnif具有凝血因子xia抑制活性的特性，而以prinf為藥物活性成分，制成任何一種藥學(xué)上可接受的劑型。

5、所述藥學(xué)上可接受的劑型包括片劑、膠囊、顆粒劑、口服液或注射劑。

6、通過對prnif進(jìn)行生物學(xué)活性測定，發(fā)現(xiàn)prnif對fxia具有很好的抑制活性，對fxia的ic50值為0.67mm，通過酶動力學(xué)法測得prnif是一種非競爭抑制劑。在體外凝血實(shí)驗(yàn)中，prnif顯著延長凝血酶時間(tt)和活化部分凝血活酶時間(aptt)，在內(nèi)源性凝血途徑中發(fā)揮較好作用。因此，prnif或其可藥學(xué)上可接受的鹽可以作為fxia抑制劑用于制備治療或預(yù)防血栓性疾病的藥物。

7、本發(fā)明公開了一種具有抗凝效果的多肽gndrcl，所述gndrcl的蛋白序列為gly-asn-asp-arg-cys-leu。

8、上述fxia多肽抑制劑gndrcl在制備凝血因子xia抑制劑、制備抗凝劑、制備防治血栓性疾病藥物中的應(yīng)用，其是利用gndrcl具有凝血因子xia抑制活性的特性，而以gndrcl為藥物活性成分，制成任何一種藥學(xué)上可接受的劑型。

9、所述藥學(xué)上可接受的劑型包括片劑、膠囊、顆粒劑、口服液或注射劑。通過對gndrcl進(jìn)行生物學(xué)活性測定，發(fā)現(xiàn)gndrcl對fxia具有很好的抑制活性，對fxia的ic50值為1.52mm，在內(nèi)源性凝血途徑中發(fā)揮較好作用。因此，gndrcl或其可藥學(xué)上可接受的鹽可以作為fxia抑制劑用于制備治療或預(yù)防血栓性疾病的藥物。

10、進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供了一種具有抗凝作用的多肽組合物，其特征在于：包括權(quán)利要求prnif或gndrcl中的任一種多肽。

11、所述深海抗凝血肽或其組合物的應(yīng)用，其特征在于：包含prnif或gndrcl任一種多肽或多肽組合物在制備凝血因子xia抑制劑中的應(yīng)用。

12、一種深海抗凝血肽或其組合物的應(yīng)用，其特征在于：以上所述多肽或其組合物在制備抗凝血藥物、或抗血栓類藥物或制劑中的應(yīng)用。

13、凝血因子xia抑制肽或其組合物作為活性成分在制備抗凝血藥物或抗血栓類藥物或制劑中還可以添加藥物學(xué)上可接受的載體或輔料。

14、fxia抑制肽prnif和gndrcl都可以應(yīng)用于制備治療血栓性疾病的藥物，所述血栓類疾病包括急性心肌梗塞、急性肺栓塞、腦卒中、及靜脈血栓等。

15、本發(fā)明所具有的優(yōu)點(diǎn):

16、1.prnif和gndrcl都具有顯著的抗凝效果，且兩個多肽具有新穎的序列特征。

17、2.prnif對fxia的抑制活性較強(qiáng)，且在內(nèi)源性凝血途徑表現(xiàn)出較好的效果。

技術(shù)特征：

1.一種深海凝血因子xia抑制肽，其特征在于，所述抑制肽為prnif，其氨基酸序列為pro-arg-asn-ile-phe。

2.一種深海凝血因子xia抑制肽，其特征在于，所述抑制肽gndrcl的氨基酸序列為gly-asn-asp-arg-cys-leu。

3.一種深海凝血因子xia抑制肽組合物，其特征在于：包括權(quán)利要求1或權(quán)利要求2中的一種或兩種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其特征在于：所述的深海凝血因子xia抑制肽組合物還可以作為活性成分添加藥物學(xué)上可接受的載體或輔料。

5.一種深海凝血因子xia抑制肽或其組合物的應(yīng)用，其特征在于：如權(quán)利要求1-4所述凝血因子xia抑制肽或多肽組合物作為凝血因子xia抑制劑或在制備凝血因子xia抑制劑中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于：所述凝血因子xia抑制肽或其組合物在制備抗凝血藥物或抗血栓類藥物或制劑中的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的應(yīng)用，其特征在于：所述凝血因子xia抑制肽或其組合物作為活性成分在制備抗凝血藥物或抗血栓類藥物或制劑中還可以添加藥物學(xué)上可接受的載體或輔料。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于：所述藥物劑型包括片劑、膠囊、顆粒劑、口服液或注射劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及兩種深海凝血因子XIa抑制肽PRNIF和GNDRCL及其組合物在制備抗凝藥物、抗血栓藥物或組合物中的用途。該多肽來源于深海平端偏頂蛤，通過虛擬酶解深海平端偏頂蛤蛋白序列獲得多肽，然后以凝血因子XIa為靶標(biāo)進(jìn)行虛擬篩選后獲得。研究表明，兩個多肽PRNIF和GNDRCL都具有較好的凝血因子XIa(FXIa)抑制活性，其IC<subgt;50</subgt;值分別為0.67mM和1.52mM，雙倒數(shù)作圖顯示PRNIF為一種非競爭抑制劑。在體外抗凝血實(shí)驗(yàn)中PRNIF能顯著延長凝血酶時間(TT)和活化部分凝血活酶時間(APTT)，具有顯著的抗凝作用。本發(fā)明提供的兩種抗凝血肽來源于深海貝類，且序列新穎、分子量低，可作為模板分子進(jìn)行修飾改造用于肽類抗凝藥物或抗血栓類藥物的研發(fā)，具有較好的開發(fā)利用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：張全斌,歐陽宇泓,岳洋,吳寧,王晶,耿麗華
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國科學(xué)院海洋研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21