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牛紐布病毒病毒樣顆粒、制備方法及應(yīng)用

文檔序號:39725479發(fā)布日期:2024-10-22 13:23閱讀:5來源:國知局
牛紐布病毒病毒樣顆粒、制備方法及應(yīng)用

本發(fā)明涉及生物,特別是涉及牛紐布病毒病毒樣顆粒、制備方法及應(yīng)用。


背景技術(shù):

1、牛紐布病毒(bovine?nebovirus,bnev)屬于杯狀病毒科,是導(dǎo)致犢牛腹瀉的常見病原,引起犢牛高發(fā)病率和高死亡率,給全世界養(yǎng)牛業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。感染bnev的犢牛伴有厭食、精神沉郁與腹瀉癥狀;導(dǎo)致腸道病變等胃腸道疾病,如絨毛萎縮腸和細(xì)胞完全喪失,其中最嚴(yán)重的是在小腸上部(十二指腸和空腸)。vp1是bnev的主要結(jié)構(gòu)蛋白,包含主要抗原表位,參與受體識別、宿主特異性和免疫原性,能誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體,是較好的備選亞單位疫苗蛋白。bnev根據(jù)vp1氨基酸可將其分為3種基因型(基因1型、基因2型和基因3型),其中基因1型進(jìn)一步分為4個譜系(基因1.1型~基因1.4型),基因1.1型為優(yōu)勢基因型。

2、疫苗是控制bnev的有效方式,但國內(nèi)沒有商品化疫苗而病毒樣顆粒疫苗因具有較高的免疫原性受到廣泛關(guān)注。病毒樣顆粒(virus-like?particles,vlps)是由病毒的單個或多個結(jié)構(gòu)蛋白自組裝的中空蛋白顆粒,由于沒有核酸具有較強(qiáng)的安全性,因其與真實病毒具有相似構(gòu)象,易被免疫系統(tǒng)識別,可誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答。桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(baculovirus?expression?system,bes)是以桿狀病毒為外源基因表達(dá)載體,以昆蟲細(xì)胞為受體的真核表達(dá)系統(tǒng);可以驅(qū)動宿主昆蟲細(xì)胞中外源基因的高效表達(dá),并具有復(fù)雜的糖基化和其他翻譯后修飾,是用于表達(dá)vlps的常用系統(tǒng)。

3、到目前為止,幾種基于vlps的疫苗已經(jīng)商品化生產(chǎn),例如重組乙型肝炎病毒(hepatitis?b?virus,hbv)疫苗、人乳頭瘤病毒(human?papillomavirus,hpv)疫苗、人戊肝病毒(hepatitis?e?virus,hev)疫苗和豬圓環(huán)病毒2型(porcine?circovirus-2,pcv-2)疫苗等,但bnev的vlps仍未見報道。


技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題,本發(fā)明的目的在于提供牛紐布病毒病毒樣顆粒、制備方法及應(yīng)用。

2、第一方面,本發(fā)明提供一種牛紐布病毒vp1基因,其核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

3、第二方面,本發(fā)明提供一種重組質(zhì)粒,其包括前述牛紐布病毒vp1基因。

4、第三方面,本發(fā)明提供一種重組桿粒,其包括前述重組質(zhì)粒。

5、第四方面,本發(fā)明提供一種重組桿狀病毒,其包括前述的重組桿粒。

6、第五方面,本發(fā)明提供一種牛紐布病毒樣顆粒,其由前述牛紐布病毒結(jié)構(gòu)蛋白vp1基因裝配而成。第六方面,本發(fā)明提供一種牛紐布病毒病毒樣顆粒的制備方法,其特征在于,包括:

7、(1)優(yōu)化牛紐布病毒vp1基因;

8、(2)構(gòu)建重組質(zhì)粒;

9、(3)構(gòu)建重組桿粒;

10、(4)將(3)中的重組桿粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞,得到重組桿狀病毒;

11、(5)將重組桿狀病毒共感染細(xì)胞,得到牛紐布病毒病毒樣顆粒。

12、其中,所述牛紐布病毒vp1基因的原始序列及經(jīng)密碼子優(yōu)化后的序列分別如seqid?no.1和seq?id?no.2所示,由它們編碼的氨基酸序列如seq?id?no.3所示。

13、進(jìn)一步地,所述步驟(2)中構(gòu)建重組質(zhì)粒所使用的載體可以選自acrp23-lacz、acrp6-sc、acuwl-lacz、bacpak6、bac?to?pac、bacmid、p2bac、p2blue、blucbacii(petl)、p89b310、pac360、pac373、pacab3、pacab4、pacas3、pacc129、pacc4、dzi、pacgp67、pacie1、pacjp1、pacmlf2、pacmlf7、pacmlf8、pacmp1、pacmp2、pacrp23、pacrp25、pacrw4、pacsmag、pacuw1、pacuw21、pacuw2a、pacuw2b、pacuw3、pacuw31、pacuw41、pacuw42、pacuw43、pacuw51、pacvc2、pacvc3、pacym1、pacjcc5、pbac1、pbac2、pbluebaciii、pbluebachis、pev55、mxiv、pieineo、pjvetl、pivnhe1、pjvp10、pjvrsmag、pmbac、pp10、ppak1、ppbac、pshonex1.1、psyn?xivvi+、psynvi+wp、psynxivvi-、pvl1391、pvl1392、pvl1393、pvl941、pvl945、pvl985、pvtbac、pbm030、puac-5、pfastbacdual、pfastbacl、pfastbachta、pfastbacht?b、pfastbacht?c、pfastbacdual或其它類似的桿狀病毒同源重組或轉(zhuǎn)座載體中的至少一種。優(yōu)選pfastbacdual桿狀病毒運載載體。

14、本發(fā)明中所構(gòu)建的載體為帶有牛紐布病毒vp1基因密碼子優(yōu)化后序列的載體pfastbac-dual-vp1。

15、第七方面,本發(fā)明提供一種免疫原,其包括前述的牛紐布病毒vp1基因。

16、第八方面,本發(fā)明提供一種藥物組合物,包括:前述的牛紐布病毒vp1基因。

17、在本發(fā)明中,所述藥物組合物還可以包括藥學(xué)上可接受的佐劑和/或輔料。

18、輔料是指生產(chǎn)藥物組合物和調(diào)配處方時所用的賦形劑和附加劑,具有賦形、保護(hù)活性成分、提高穩(wěn)定性、增溶、助溶、緩控釋等重要功能,以使藥物組合物達(dá)到一定的保質(zhì)期和生物利用度,從而提高藥物組合物的安全性和有效性。可與本申請的藥物組合物共同施用的輔料包括但不限于糖、蛋白、氨基酸和高分子聚合物。

19、第九方面,本發(fā)明提供了一種前述牛紐布病毒結(jié)構(gòu)蛋白vp1基因在制備牛腹瀉疫苗和/或藥物中的應(yīng)用。

20、第十方面,本發(fā)明還提供了一種牛腹瀉疫苗,將前述的牛紐布病毒病毒樣顆粒輔以佐劑制備而成。

21、本發(fā)明具有如下有益效果:

22、(1)本發(fā)明通過對密碼子進(jìn)行優(yōu)化,得到新的vp1基因,并利用該優(yōu)化基因制備得到了牛紐布病毒病毒樣顆粒;利用該牛紐布病毒病毒樣顆粒制備疫苗,免疫小鼠后能夠均能夠產(chǎn)生高滴度的抗體水平。

23、(2)使用本發(fā)明的vp1基因,可以大幅度提高牛紐布病毒病毒樣顆粒表達(dá)量,具有安全性高、免疫原性好、成本低等優(yōu)點。



技術(shù)特征:

1.一種牛紐布病毒vp1基因,其核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

2.一種重組質(zhì)粒,其特征在于,其包括權(quán)利要求1所述的牛紐布病毒vp1基因。

3.一種重組桿粒,其特征在于,其包括權(quán)利要求2所述的重組質(zhì)粒。

4.一種重組桿狀病毒,其特征在于,其包括權(quán)利要求3所述的重組桿粒。

5.一種牛紐布病毒病毒樣顆粒,其特征在于,其由權(quán)利要求1所述的牛紐布病毒vp1基因裝配而成。

6.一種牛紐布病毒病毒樣顆粒的制備方法,其特征在于,包括:

7.一種免疫原,其特征在于,其包括權(quán)利要求1所述的牛紐布病毒vp1基因。

8.一種藥物組合物,其特征在于,其包括權(quán)利要求1所述的牛紐布病毒vp1基因。

9.權(quán)利要求5所述的牛紐布病毒病毒樣顆粒在制備牛腹瀉疫苗和/或藥物中的應(yīng)用。

10.一種牛腹瀉疫苗,其特征在于,將權(quán)利要求5所述的牛紐布病毒病毒樣顆粒輔以佐劑制備而成。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種牛紐布病毒病毒樣顆粒、制備方法及應(yīng)用,所述牛紐布病毒病毒樣顆粒由優(yōu)化后的VP1基因裝配而成,將本發(fā)明得到的牛紐布病毒病毒樣顆粒免疫小鼠后能夠產(chǎn)生高滴度的抗體水平,同時刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫;密碼子優(yōu)化后的VP1基因可以大幅度提高牛紐布病毒樣顆粒的表達(dá)量,具有安全性高、免疫原性好,成本低等優(yōu)點。

技術(shù)研發(fā)人員:張斌,丁露,陳曦,湯承,岳華,高立
受保護(hù)的技術(shù)使用者:西南民族大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2024/10/21
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