本發(fā)明屬于生物，具體涉及一種鱘魚骨板粗多肽的制備方法及其在配制酒中的應用。

背景技術：

1、鱘魚骨板，是鱘魚魚體的一種特殊結構，質地堅硬，形狀獨特，呈扁平的板狀，是鱘魚骨骼系統(tǒng)的一部分。鱘魚骨板在一些文化中具有裝飾和藥用價值。在某些地區(qū)，鱘魚骨板被用作裝飾品或手工藝品的材料，因其獨特的紋理和光澤而受到喜愛。此外，鱘魚骨板也有一定的藥用價值，傳統(tǒng)上被認為具有滋補強身的功效。

2、鱘魚骨板中富含鈣、蛋白質以及礦質元素，且鱘魚骨板中的蛋白質，也是構成骨骼和關節(jié)結構的重要成分之一。迄今為止，還未有報道關于以鱘魚骨板為原料經復合酶酶解成具有促進成骨細胞增殖分化的多肽和在此基礎上制備的具有增加骨密度的配制酒。

技術實現(xiàn)思路

1、要解決的技術問題：針對上述的問題，本發(fā)明的目的是提供一種鱘魚骨板粗多肽的制備方法及其在配制酒中的應用，針對鱘魚骨板的提取方法包括使用堿液處理鱘魚骨板，經過高溫熱液化后，添加木瓜蛋白酶與中性蛋白酶進行酶解，經過離心、超濾和冷凍干燥制得多肽，從占比較高的組分中通過lc-ms鑒定其序列并通過虛擬活性篩選得到具有增加骨密度活性四條成骨肽。在此基礎上添加于70％vol清香型白酒中制成一款配制酒，通過動物實驗以期探討鱘魚骨板肽酒對骨流失的改善作用及增加骨密度，大大提高了產品的應用價值。

2、技術方案：一種鱘魚骨板粗多肽的制備方法，包括以下步驟：

3、s1.預處理：清洗鱘魚骨板后，用0.9％生理鹽水浸泡30min，再用堿液浸泡30min，清洗干凈瀝干，高速粉碎，過400目篩，得到骨板粉；

4、s2.高壓熱液化：將骨板粉與水混合，經高溫100-121℃熱解壓30-50min，得到骨板液；

5、s3.酶解：向骨板液中加入0.4-0.8wt.％胰蛋白酶，在37-50℃條件下酶解3-5h，100℃滅酶10min；再加入0.4-0.8wt.％木瓜蛋白酶，在50-60℃條件下繼續(xù)酶解3-5h；反應結束后，沸水浴進行滅酶處理，得到酶解液后，冷卻，離心，取上層清液，得到酶解物；

6、s4.過濾、超濾：將酶解物過濾去除雜質，得到濾液，再加入等量蒸餾水，在10kda的超濾膜條件下進行超濾分離，五次循環(huán)過濾，得到截留液；

7、s5.冷凍干燥：將截留液經真空冷凍干燥后，制得鱘魚骨板粗多肽。

8、進一步的，所述步驟s1中粉碎轉速為12000-14000rpm，粉碎時間為10-15min。

9、進一步的，所述步驟s2中骨板粉和水的質量體積比為1:(4-8)(w/v)。

10、進一步的，所述步驟s3中胰蛋白酶、木瓜蛋白酶復合添加量與骨板液的料液比為1:(2-6)(w/v)。

11、進一步的，所述步驟s5中真空冷凍干燥的溫度為-50～-20℃，真空度為13～40pa。

12、進一步的，所述鱘魚骨板粗多肽包括gpgptp(gly-pro-gly-pro-thr-pro)、gppigi(gly-pro-pro-ile-gly-ile)、gpaggapr(gly-pro-ala-gly-gly-ala-pro-arg)、paggap(pro-ala-gly-gly-ala-pro)

13、進一步的，所述的制備方法所制備的鱘魚骨板粗多肽在配制酒中的應用。

14、進一步的，所述的鱘魚骨板粗多肽在配制酒中的應用，包括以下步驟：

15、步驟1：將鱘魚骨板粗多肽添加進70％vol清香型白酒中；

16、步驟2：將步驟1所得溶液進行除雜過濾澄清，即得鱘魚骨板粗多肽配制酒。

17、進一步的，所述步驟1中鱘魚骨板粗多肽與白酒的質量體積比為1:100(w/v)。

18、有益效果：

19、1.本發(fā)明從鱘魚骨板制備的粗多肽中通過鑒定及模擬篩選得到4條活性肽，分別為gpgptp(gly-pro-gly-pro-thr-pro)、gppigi(gly-pro-pro-ile-gly-ile)、gpaggapr(gly-pro-ala-gly-gly-ala-pro-arg)、paggap(pro-ala-gly-gly-ala-pro)，并對合成的這4條肽，進行成骨細胞模型鑒定，驗證其為鱘魚骨板來源的成骨肽；

20、2.本發(fā)明將鱘魚骨板來源的多肽添加于70％vol清香型白酒中制成一款具有改善骨骼健康的配制酒，同時為其在低于70％vol及其他香型的白酒的應用奠定了良好基礎。

技術特征：

1.一種鱘魚骨板粗多肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權利要求1所述的一種鱘魚骨板粗多肽的制備方法，其特征在于：所述步驟s1中粉碎轉速為12000-14000rpm，粉碎時間為10-15min。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種鱘魚骨板粗多肽的制備方法，其特征在于：所述步驟s2中骨板粉和水的質量體積比為1:(4-8)。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種鱘魚骨板粗多肽的制備方法，其特征在于：所述步驟s3中胰蛋白酶、木瓜蛋白酶復合添加量與骨板液的料液比為1:(2-6)。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種鱘魚骨板粗多肽的制備方法，其特征在于：所述步驟s5中真空冷凍干燥的溫度為-50～-20℃，真空度為13～40pa。

6.根據(jù)權利要求1所述的一種鱘魚骨板粗多肽的制備方法，其特征在于：所述鱘魚骨板粗多肽包括gly-pro-gly-pro-thr-pro、gly-pro-pro-ile-gly-ile、gly-pro-ala-gly-gly-ala-pro-arg、pro-ala-gly-gly-ala-pro。

7.根據(jù)權利要求1-6任一項所述的制備方法所制備的鱘魚骨板粗多肽在配制酒中的應用。

8.根據(jù)權利要求7所述的鱘魚骨板粗多肽在配制酒中的應用，其特征在于，包括以下步驟：

9.根據(jù)權利要求8所述的鱘魚骨板粗多肽在配制酒中的應用，其特征在于：所述步驟1中鱘魚骨板粗多肽與白酒的質量體積比為1:100。

技術總結
本發(fā)明提供了一種鱘魚骨板粗多肽的制備方法及其在配制酒中的應用，從鱘魚骨板制備的粗多肽中通過鑒定及模擬篩選得到4條占比較高的多肽，并對這4條肽進行成骨細胞模型鑒定，驗證其為鱘魚骨板來源的成骨肽；將鱘魚骨板多肽添加于70％vol清香型白酒中制成一款具有增加骨密度的配制酒，同時為其在低于70％vol及其他香型的白酒的應用奠定了良好基礎。

技術研發(fā)人員：趙元暉,景英歡,陳澤凡,翟明斌,李洪邦,張述禮,李傳華,宋玉芝,趙克城,王康宇,劉鑫雨,白帆,汪金林,徐鵬,許賀
受保護的技術使用者：山東木草芯酒業(yè)有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/10/21