一種用于檢測(cè)多種動(dòng)物源性成分的可視化dna芯片試劑盒及方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分子檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測(cè)多種動(dòng)物源性成分的可視 化DNA芯片試劑盒及方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著國(guó)際貿(mào)易的飛速發(fā)展，防御國(guó)際間動(dòng)物疫病傳播的難度在不斷加大。為了防 止瘋牛病、癢病、動(dòng)物流感等經(jīng)飼料、畜產(chǎn)品傳播，世界各國(guó)政府和組織在規(guī)范對(duì)動(dòng)物源性 飼料使用的同時(shí)，積極開(kāi)展動(dòng)物源性成分檢測(cè)技術(shù)的研究。另外，在國(guó)內(nèi)及國(guó)際貿(mào)易中，牛、 羊肉中摻雜價(jià)格便宜的豬肉，以次充好的欺騙行為屢見(jiàn)不鮮，給廣大的穆斯林朋友帶來(lái)諸 多不便的同時(shí)，嚴(yán)重?fù)p害了消費(fèi)者的利益。虎、熊、豹是珍稀野生動(dòng)物，對(duì)野生動(dòng)物及其加工 品的物種來(lái)源鑒定是打擊非法捕獵和走私的有效途徑。
[0003] 目前，針對(duì)以上動(dòng)物源性成分檢測(cè)方法主要是PCR方法，該方法特異性好，快速準(zhǔn) 確，已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用。PCR方法的檢測(cè)的不足是同時(shí)只能對(duì)有限幾個(gè)物種進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)于 來(lái)源背景不清和可能摻雜多種肉類的情況下，在引物選擇上就出現(xiàn)了困難。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中所存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種用于檢測(cè)多種動(dòng)物源 性成分的可視化DNA芯片試劑盒及檢測(cè)方法。
[0005] 本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：
[0006] -種用于檢測(cè)多種動(dòng)物源性成分的可視化DNA芯片試劑盒，其包括：芯片基片，點(diǎn) 樣于芯片基片上的特異性探針，特異性引物；其中，雞、鴨、鵝、豬、牛、綿羊和山羊使用一套 通用引物進(jìn)行擴(kuò)增，虎、熊和豹分別使用各自的特異性引物，所述特異性探針和特異性引物 的序列如下表所示：
[0007]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于檢測(cè)多種動(dòng)物源性成分的可視化DNA芯片試劑盒，其包括：芯片基片，點(diǎn)樣 于芯片基片上的特異性探針，特異性引物；其中，雞、鴨、鵝、豬、牛、綿羊和山羊使用一套通 用引物進(jìn)行擴(kuò)增，虎、熊和豹分別使用各自的特異性引物，所述特異性探針和特異性引物的 序列如下表所示：

2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)多種動(dòng)物源性成分的可視化DNA芯片試劑盒，其特 征在于，所述芯片基片上探針點(diǎn)樣矩陣圖如下表所示：
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)多種動(dòng)物源性成分的可視化DNA芯片試劑盒，其特 征在于，所述試劑盒中還含有緩沖液、檢測(cè)液、封閉液和顯色劑。
4. 利用權(quán)利要求1?3任一項(xiàng)所述的試劑盒檢測(cè)多種動(dòng)物源性成分的方法，包括如下 步驟： (l)PCR擴(kuò)增：提取待檢樣品DNA，利用特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增； ⑵芯片雜交：取PCR產(chǎn)物與DNA芯片于47?49°C下雜交，棄去檢測(cè)液，用水沖洗至雜 交點(diǎn)清晰為止，相機(jī)成像。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟（2)的具體操作為： 1) 取PCR產(chǎn)物與DR.雜交緩沖液充分混合，沸水變性，迅速轉(zhuǎn)移至冰上； 2) 將上述混合物轉(zhuǎn)移至芯片室內(nèi)，平鋪均勻，避免在底部產(chǎn)生氣泡，在47?49°C溫度 條件下于振動(dòng)溫箱中雜交45-60min;棄去雜交液，用DR.洗滌液洗滌； 3) 于雜交室中加Strep-AP和封閉液的混合液，室溫反應(yīng)，棄去封閉液，以洗滌液洗滌， 吸除芯片上殘留的水分； 4) 每個(gè)芯片室加NBT/BCIP和檢測(cè)液的混合液，將芯片置于暗室中反應(yīng)5-10min，棄去 檢測(cè)液，用水沖洗至雜交點(diǎn)清晰為止，相機(jī)成像。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種用于檢測(cè)多種動(dòng)物源性成分的可視化DNA芯片試劑盒及方法。該可視化DNA芯片檢測(cè)方法應(yīng)用于檢測(cè)雞、鴨、鵝、豬、牛、綿羊、山羊、虎、熊和豹?jiǎng)游镌葱?。根?jù)GenBank中以上動(dòng)物線粒體DNA（mitochondrial？DNA）序列，設(shè)計(jì)合成特異性引物和探針。使用Dr.chip系統(tǒng)進(jìn)行芯片點(diǎn)樣、雜交、顯色，優(yōu)化反應(yīng)條件后做靈敏度、特異性試驗(yàn)和重復(fù)性試驗(yàn)，然后應(yīng)用于動(dòng)物源性成分的檢測(cè)。結(jié)果表明：本發(fā)明所建立的雞、鴨、鵝、豬、牛、綿羊、山羊、虎、熊和豹的新型可視化DNA芯片檢測(cè)方法，具有靈敏度高，特異性強(qiáng)及高通量的特點(diǎn)。
【IPC分類】C12Q1-68
【公開(kāi)號(hào)】CN104561271
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410742642
【發(fā)明人】羅寶正, 薄清如, 陶旻, 陳軒, 廖秀云, 沙才華, 徐海聶, 黃海超
【申請(qǐng)人】珠海出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
【公開(kāi)日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2014年12月4日