一種從山茱萸果核中提取分離白樺脂酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于白樺脂酸的提取工藝技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從山茱萸果核中提取分 離白樺脂酸的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來天然產(chǎn)物及其衍生物在保健品、食品添加劑以及藥品開發(fā)等應(yīng)用方面顯示 了巨大的前景，特別是一些藥食同源的材料中有效成分的開發(fā)利用。山茱萸，學(xué)名 Sieb. et Zucc.，是北溫帶和北亞熱帶樹種，主要分布于東亞國家，如：中國、 日本、朝鮮等，在我國分布較為集中地區(qū)是河南的伏牛山、浙江的天目山和陜西漢中地區(qū)。 自古我國就有以山茱萸果入藥的用法，山茱萸這個名稱最早出現(xiàn)在《神農(nóng)本草經(jīng)》，其主要 生理作用有抗菌作用、抗休克作用、抗癌作用、降血糖作用、免疫系統(tǒng)的作用和抑制炎癥反 應(yīng)作用等。除作為藥材供處方調(diào)配外，以山茱萸為原料的綠色保健食品的開發(fā)廣為發(fā)展，可 加工為飲品、果醬、蜜餞及罐頭等多種食品。山茱萸屬于落葉灌木或小喬木，先開花、后萌 葉，秋季紅果累累，園林綠化方面多為觀賞性樹木很受歡迎，可在庭園、花壇內(nèi)單植或片植， 景觀效果十分美麗。
[0003] 近年來，山茱萸作為中醫(yī)臨床常用藥，具有良好的藥用價值和廣闊的開發(fā)前景，國 內(nèi)外學(xué)者對其化學(xué)成分和藥理藥效作用進(jìn)行了大量的研究。這些研究多集中于山茱萸果 肉，但對于其果核中活性相關(guān)具體化學(xué)成分的研究還鮮見報道。天然產(chǎn)物白樺脂酸主要分 布在樺木科植物中，具有良好的抗HIV、抗腫瘤、抗炎等方面的活性，且作用機(jī)制獨特。白樺 脂酸較為常見的制備方法有三種：直接提取法、化學(xué)合成法和微生物轉(zhuǎn)化法。由于白樺脂酸 的缺乏，直接影響了它作為臨床藥物的研究和開發(fā)，本發(fā)明為白樺脂酸的提取分離提供了 一種方法。
[0004] 層析（chromatography)是"色譜分析"的簡稱，是一種物理化學(xué)分析方法，在分析 化學(xué)、有機(jī)化學(xué)和生物化學(xué)等領(lǐng)域有著非常廣泛的應(yīng)用。利用不同物質(zhì)在不同相態(tài)的選擇 性分配，將多組分混合物進(jìn)行分離及測定的方法。本專利主要利用了柱層析和薄層層析兩 種分離方法，柱層析是一種經(jīng)典的分析方法，不但可用于分析，還可用于制備分離，是利用 混合物中各組分在固定相中的分配系數(shù)的不同，進(jìn)行分離收集的。薄層層析是快速分離和 鑒定少量物質(zhì)的一種重要實驗技術(shù)，兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點，其以快速、分離效率高 和靈敏度高的特點，廣泛用于分離、分析，許多工廠也把薄層層析應(yīng)用在反應(yīng)終點控制、工 藝條件選擇、產(chǎn)品質(zhì)量的控制和未知試樣的解剖。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供了一種分離工藝簡單且分離效果較好的從山茱萸 果核中提取分離白樺脂酸的方法。
[0006] 本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采用如下技術(shù)方案，一種從山茱萸果核中提取分離白 樺脂酸的方法，其特征在于具體步驟為：（1)超聲波浸提，將粉碎后的山茱萸果核粉末浸泡 于乙醇中，然后使用超聲波提取三次，將提取液收集并于低于50°C的溫度真空濃縮后用于 下一步的萃??；（2)分級萃取，依次使用極性從小到大的溶劑正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、 正丁醇和水進(jìn)行萃取，過濾，合并濾液，蒸發(fā)，真空干燥后分別得到正己烷層、二氯甲烷層、 乙酸乙酯層、正丁醇層和水層；（3)二氯甲烷層的硅膠柱層析，取二氯甲烷浸膏做硅膠柱層 析，用三氯甲烷洗脫液洗脫得到組分S2; (4)將組分S2于甲醇、乙醇或乙酸乙酯中重結(jié)晶得 到化合物白樺脂酸。
[0007] 進(jìn)一步優(yōu)選，所述的超聲波提取溫度為30°C，時間為20min，超聲波功率為800W。
[0008] 本發(fā)明利用天然產(chǎn)物的提取萃取方法，經(jīng)過機(jī)械破碎制粉、過篩、浸提、過濾、真空 濃縮、萃取和硅膠柱層析等分離技術(shù)，從山茱萸果核中分離出了具有多種生物活性的白樺 脂酸，分離工藝簡單且分離效果較好，白樺脂酸的質(zhì)量百分含量達(dá)到〇. 39%。
【附圖說明】
[0009] 圖1是本發(fā)明的提取分離工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0010] 以下通過實施例對本發(fā)明的上述內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不應(yīng)該將此理解為本 發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā) 明的范圍。
[0011] 實施例1 1、獲得溶解性好、展開效果好的二氯甲烷層萃取物（Mc層） 將山茱萸果去除果肉取核，用蒸餾水清洗后在陰涼處陰干，放入粉碎機(jī)破碎成粉末，用 篩子篩去極細(xì)的粉末，將剩余的樣品裝入廣口瓶中，加入無水乙醇使樣品完全被浸沒。使用 超聲波在功率800W，30°C條件下，提取20min，重復(fù)三次。合并提取液，減壓抽濾，濾液通過 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑，獲得乙醇粗提物。將濾液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀去除溶劑，控制溫度低于 50°C，獲得乙醇提取物。將乙醇提取物用蒸餾水?dāng)嚢枵鹗?，充分溶解后加入等體積的正己 烷，用磁力攪拌器攪拌4h，轉(zhuǎn)入分液漏斗中靜置24h，待液體充分分層后，收集各層溶液，將 下層水層繼續(xù)加入等體積的正己烷重復(fù)上述過程三次，將上層正己烷層合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀把溶劑蒸出，將樣品移到絲口瓶中放入真空干燥器中干燥，得到H層。然后在下層水層中 加入等體積的二氯甲烷，攪拌4h，轉(zhuǎn)入分液漏斗，使用上述的方法獲得Mc層。依次使用乙酸 乙酯、正丁醇，同樣的方法萃取、合并萃取液、蒸發(fā)、真空干燥后分別得到EA層和Bu層，將剩 余的水層經(jīng)蒸發(fā)和真空干燥后得到W層。
[0012] 取少量各個層萃取物用三氯甲烷溶解，觀察其溶解性，并用薄層層析進(jìn)行上柱前 的條件摸索，發(fā)現(xiàn)Mc層的溶解性最好，以及在用三氯甲烷洗脫時分離效果最好，可用于進(jìn) 一步分離。
[0013] 2、獲得白樺脂酸 取40. 6g Mc層樣品到梨形瓶中，加入75g 230目硅膠（德國MERCK社7734 Silica gel)進(jìn)行攪拌混合，待樣品與硅膠混合均勻成塊狀取出，于研缽中進(jìn)行研磨。將樣品進(jìn)行柱 層析分離，初始流動相為三氯甲烷時得到餾分2,即化合物1 (160.0 mg)。然后將組分S2于 甲醇、乙醇或乙酸乙酯中重結(jié)晶得到化合物白樺脂酸。
[0014] 3、核磁共振（NMR)結(jié)構(gòu)鑒定 化合物1的化學(xué)式： 核磁共振數(shù)據(jù).
1HNMR (Pyridine-i/5, 300 MHz) δ： 0.80 (3Η, s, CH3), 0.86 (3H, s, CH3), 0.97 (3H, s, CH3), 1.02 (3H, s, CH3), 1.07 (3H, s, CH3), 1.74 (3H, s, 3〇-CH3), 2 .02 (2H, m, 18-H), 2.45 (1H, m, 19-H), 3.25 (1H, m, 3-H), 4.69 (1H, s, 29-H), 4.82 (1H, s, 29-H) 〇13C NMR (Pyridine-4, 75 MHz) δ: 15.2 (C-27), 16.3 (C-24), 16.6 (C-25, 26)，19.2 (C-6), 19.8 (C-30), 21.7 (C-Il), 26.5 (C-12), 28.1 (C-2), 28.8 (C-23), 30.6 (C-21), 31.5 (C-15), 33.2 (C-16), 35.3 (C-7), 38.0 (C-10, 22)，39.1 (C-13), 39.8 (C-l, 4)，41.6 (C-8), 43.2 (C-14), 48.1 (C-18), 50.1 (C-19), 51.5 (C-9)，56.4 (C-5)，57.1 (C-17), 78.9 (C-3)，110.2 (C-29), 151.7 (C-20), 179.4 (C-28)〇
[0015] 以上實施例描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征及優(yōu)點，本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該 了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原 理，在不脫離本發(fā)明原理的范圍下，本發(fā)明還會有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)均落入 本發(fā)明保護(hù)的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種從山茱萸果核中提取分離白樺脂酸的方法，其特征在于具體步驟為：（1)超聲 波浸提，將粉碎后的山茱萸果核粉末浸泡于乙醇中，然后使用超聲波提取三次，將提取液收 集并于低于50°C的溫度真空濃縮后用于下一步的萃??；（2)分級萃取，依次使用極性從小 到大的溶劑正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水進(jìn)行萃取，過濾，合并濾液，蒸發(fā)，真空 干燥后分別得到正己烷層、二氯甲烷層、乙酸乙酯層、正丁醇層和水層；（3)二氯甲烷層的 硅膠柱層析，取二氯甲烷浸膏做硅膠柱層析，用三氯甲烷洗脫液洗脫得到組分S2 ; (4)將組 分S2于甲醇、乙醇或乙酸乙酯中重結(jié)晶得到化合物白樺脂酸。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從山茱萸果核中提取分離白樺脂酸的方法，其特征在于：所 述的超聲波提取溫度為30°C，時間為20min，超聲波功率為800W。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從山茱萸果核中提取分離白樺脂酸的方法，屬于白樺脂酸的提取工藝技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明利用天然產(chǎn)物的提取萃取方法，經(jīng)過機(jī)械破碎制粉、過篩、浸提、過濾、真空濃縮、萃取和硅膠柱層析等分離技術(shù)，從山茱萸果核中分離出了具有多種生物活性的白樺脂酸，分離工藝簡單且分離效果較好，白樺脂酸的質(zhì)量百分含量達(dá)到0.39%。
【IPC分類】C07J63/00
【公開號】CN105061546
【申請?zhí)枴緾N201510504932
【發(fā)明人】許明錄, 王蘭, 許光日, 李勇超, 孟志芬, 胡林峰, 李淑梅, 馮喜蘭, 胡建和
【申請人】河南科技學(xué)院
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年8月18日