一種從人體唾液中提取基因組dna的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物化學(xué)領(lǐng)域，具體的說，它涉及一種從人體唾液中提取基因組DNA的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]從人體的血液或組織中提取高質(zhì)量的DNA，是常規(guī)分子生物學(xué)研究及臨床相關(guān)檢測的前提，常見的人基因組DNA，是從血液中提取，而血液的采集往往會對被采集者造成傷害和痛苦，血液的采集也需要專業(yè)的醫(yī)護(hù)人員和配套的器械器具。而從唾液組織的采集是一種對人體基本無傷害和痛苦的方式，容易采集，價格低，不需要專業(yè)的醫(yī)護(hù)人員，也不需要相關(guān)專業(yè)配套的器械器材。所以從唾液中提取基因組DNA簡便易行。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是解決以上提出的問題，提供一種一種操作簡便、安全、對被采集者無傷害無痛苦、提取的基因組DNA質(zhì)量高的一種從人體唾液中提取基因組DNA的方法。
[0004]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0005]本發(fā)明是一種從人體唾液中提取基因組DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0006]1)取lml唾液組織樣本，加入3mL核裂解液，50uL蛋白酶K，lOOuL的SDS，上下劇烈晃動混勻；
[0007]2)將步驟1)的樣本放置56°C水浴鍋處理30min后，再加入3mL核裂解液，上下劇烈震蕩混勻;繼續(xù)放置56°C水浴鍋溫育處理30min，每隔lOmin上下輕柔顛倒混勻一次；
[0008]3)將步驟2)得到混合液從水浴鍋中取出，室溫放置5min;
[0009]4)向步驟3)得到的上清液中加入等體積的酚/氯仿/異戊醇混合溶液，輕柔顛倒混勻直至呈渾濁乳滴狀，無明顯分界;室溫，7068X g離心lOmin，將上清轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中；
[0010]5)向步驟4)中得到的上清液中加入等體積的氯仿/異戊醇混合溶液，輕柔顛倒混勻直至呈渾濁乳滴狀，無明顯分界;室溫，7068X g離心lOmin，將上清轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中；
[0011 ] 6)向步驟4)中得到的上清液中加入2/3體積-20°C預(yù)冷的異丙醇，并加入0.1倍體積的醋酸鈉溶液，_20°C放置lh后，4°C，7068X g離心lOmin，棄上清；
[0012]7)向步驟6)中得到的沉淀中加入lmL-20°C預(yù)冷的70%乙醇，清洗沉淀，上下輕柔顛倒混勻使沉淀漂浮起來，將沉淀轉(zhuǎn)移到另一干凈的離心管中；
[0013]8)向步驟7)中得到的沉淀中加入lmL-20°C預(yù)冷的70%乙醇，清洗沉淀，上下顛倒混勻使沉淀漂浮起來，4°C，16700X g離心lOmin，棄上清，此步驟重復(fù)一次；
[0014]9)步驟8)中得到的沉淀放置室溫晾干lOmin，加入30-50uL的無菌水充分溶解；
[0015]10)向步驟9)的溶液中加入0.01倍體積的RNase A溶液，37°C放置30min，濃度電泳檢測，-20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0016]優(yōu)選的，所述的唾液組織樣本為人唾液樣本。
[0017]優(yōu)選的，所述步驟1)和步驟2)中，所述核裂解液中各溶劑組分濃度為:10mmol/LpH=8.0Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/L EDTA_Na2，0.8mmol/L鹽酸胍。
[0018]優(yōu)選的，所述步驟1)中，所述蛋白酶K的濃度為20mg/mL，SDS的濃度為10%。
[0019]優(yōu)選的，所述步驟4)中，所述酚/氯仿/異戊醇混合溶液中，酚、氯仿和異戊醇的體積比是25:24:1。
[0020]優(yōu)選的，所述步驟5)中，所述氯仿/異戊醇混合溶液中，氯仿和異戊醇的體積比是24:1ο
[0021 ]優(yōu)選的，所述步驟6)中，所述醋酸鈉溶液的濃度為3Μ。
[0022]優(yōu)選的，所述步驟10)中，所述RNase A溶液的濃度為20mg/mL。
[0023]本發(fā)明的有益效果如下:
[0024](1)本發(fā)明成本低廉，操作簡便，對人體無傷害無痛苦。
[0025](2)利用本發(fā)明的方法提取唾液DNA，僅需要實驗室具有常規(guī)離心設(shè)備、溫育設(shè)備即可進(jìn)行。
[0026](3)本發(fā)明方法提取的DNA濃度純度良好，且提取穩(wěn)定，可以滿足一般分子生物學(xué)操作的樣本質(zhì)量要求。
【附圖說明】
[0027]圖1為利用本方法和現(xiàn)有方法提取DNA的電泳圖；
[0028]圖中，Μ為Mark，1和2為本方法，3和4為現(xiàn)有方法A，5和6為現(xiàn)有方法B。從圖上可以看到1和2的條帶完整清晰，說明樣本的純度和完整比較好;3和4的條帶暗，且不明顯，說明樣本的提取產(chǎn)量低，DNA含量少;5和6條帶亮但均有輕微拖尾，且膠孔發(fā)亮，說明存在樣本存在輕微降解和蛋白等雜質(zhì)污染的情況。
【具體實施方式】
[0029]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的實施例進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明:
[0030]實施例一:
[0031]本實施例是一種從人體唾液中提取基因組DNA的方法，包括以下步驟:
[0032]1)取lml人體唾液組織樣本，加入3mL核裂解液，50uL 20mg/mL蛋白酶K，lOOuL10 %的SDS，上下劇烈晃動混勻，其中，核裂解液中各溶劑組分濃度為:1 Ommo 1/L pH =8.0Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/L EDTA_Na2，0.8mmol/L 鹽酸胍；
[0033]2)將步驟1)的樣本放置56°C水浴鍋處理30min后，再加入3mL核裂解液，上下劇烈震蕩混勻。繼續(xù)放置56°C水浴鍋溫育處理30min，每隔lOmin上下輕柔顛倒混勻一次，其中，核裂解液同步驟1);
[0034]3)將步驟2)得到混合液從水浴鍋中取出，室溫放置5min;
[0035]4)向步驟3)得到的上清液中加入等體積的酚/氯仿/異戊醇混合溶液，輕柔顛倒混勻直至呈渾濁乳滴狀，無明顯分界;室溫，7068X g離心lOmin，將上清轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中；其中，酚、氯仿和異戊醇的體積比是25:24:1;
[0036]5)向步驟4)中得到的上清液中加入等體積的氯仿/異戊醇混合溶液，輕柔顛倒混勻直至呈渾濁乳滴狀，無明顯分界;室溫，7068X g離心lOmin，將上清轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中；其中，氯仿和異戊醇的體積比是24:1 ；
[0037]6)向步驟4)中得到的上清液中加入2/3體積_20°C預(yù)冷的異丙醇，并加入0.1倍體積、濃度為3M的醋酸鈉溶液，_20°C放置lh后，4°C，7068X g離心lOmin，棄上清；
[0038]7)向步驟6)中得到的沉淀中加入lmL-20°C預(yù)冷的70%乙醇，清洗沉淀，上下輕柔顛倒混勻使沉淀漂浮起來，將沉淀轉(zhuǎn)移到另一干凈的離心管中；
[0039]8)向步驟7)中得到的沉淀中加入lmL-20°C預(yù)冷的70%乙醇，清洗沉淀，上下顛倒混勻使沉淀漂浮起來，4°C，16700X g離心lOmin，棄上清，此步驟重復(fù)一次；
[0040]9)步驟8)中得到的沉淀放置室溫晾干lOmin，加入30-50uL的無菌水充分溶解；
[0041 ] 10)向步驟9)的溶液中加入0.01倍體積、濃度為20mg/mL的RNase A溶液，37°C放置30min，濃度電泳檢測，-20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0042 ] 通過電泳得到的DNA的電泳圖，其中，Μ為Mark，1和2為本方法，3和4為現(xiàn)有方法A，5和6為現(xiàn)有方法B從圖1上可以看到1和2的條帶完整清晰，說明樣本的純度和完整比較好;3和4的條帶暗，且不明顯，說明樣本的提取產(chǎn)量低，DNA含量少;5和6條帶亮但均有輕微拖尾，且膠孔發(fā)亮，說明存在樣本存在輕微降解和蛋白等雜質(zhì)污染的情況，因此，本方法提取的DNA濃度純度良好，且提取穩(wěn)定，可以滿足一般分子生物學(xué)操作的樣本質(zhì)量要求。
[0043]以上所述的僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明核心技術(shù)特征的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1.一種從人體唾液中提取基因組DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)取lml唾液組織樣本，加入3mL核裂解液，50uL蛋白酶K，lOOuL的SDS，上下劇烈晃動混勻； 2)將步驟1)的樣本放置56°C水浴鍋處理30min后，再加入3mL核裂解液，上下劇烈震蕩混勻;繼續(xù)放置56°C水浴鍋溫育處理30min，每隔lOmin上下輕柔顛倒混勻一次； 3)將步驟2)得到混合液從水浴鍋中取出，室溫放置5min; 4)向步驟3)得到的上清液中加入等體積的酚/氯仿/異戊醇混合溶液，輕柔顛倒混勻直至呈渾濁乳滴狀，無明顯分界;室溫，離心力為7068g，離心lOmin，將上清轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中； 5)向步驟4)中得到的上清液中加入等體積的氯仿/異戊醇混合溶液，輕柔顛倒混勻直至呈渾濁乳滴狀，無明顯分界;室溫，離心力為7068g，離心lOmin，將上清轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中； 6)向步驟4)中得到的上清液中加入2/3體積-20°C預(yù)冷的異丙醇，并加入0.1倍體積的醋酸鈉溶液，_20°C放置lh后，4°C，離心力為7068g，離心lOmin，棄上清； 7)向步驟6)中得到的沉淀中加入lmL-20°C預(yù)冷的70%乙醇，清洗沉淀，上下輕柔顛倒混勻使沉淀漂浮起來，將沉淀轉(zhuǎn)移到另一干凈的離心管中； 8)向步驟7)中得到的沉淀中加入lmL-20°C預(yù)冷的70%乙醇，清洗沉淀，上下顛倒混勻使沉淀漂浮起來，4°C，離心力為16700g離心lOmin，棄上清，此步驟重復(fù)一次； 9)步驟8)中得到的沉淀放置室溫晾干lOmin，加入30-50uL的無菌水充分溶解； 10)向步驟9)的溶液中加入0.01倍體積的RNaseA溶液，37°C放置30min，進(jìn)行濃度電泳檢測，-20°C保存?zhèn)溆谩?.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從人體唾液中提取基因組DNA的方法，其特征在于，所述的唾液組織樣本為人唾液樣本。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從人體唾液中提取基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟1)和步驟2)中，所述核裂解液中各溶劑組分濃度為:10 mm ο 1 / L p Η = 8.0 T r i s - H C1，400mmol/L NaCl，2mmol/L EDTA_2Na，(h8mmol/L鹽酸胍。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從人體唾液中提取基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟1)中，所述蛋白酶K的濃度為20mg/mL，SDS的質(zhì)量體積比(w/v)為10 %。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從人體唾液中提取基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟4)中，所述酚/氯仿/異戊醇混合溶液中，酚、氯仿和異戊醇的體積比是25:24:1ο6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從人體唾液中提取基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟5)中，所述氯仿/異戊醇混合溶液中，氯仿和異戊醇的體積比是24:1。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從人體唾液中提取基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟6)中，所述醋酸鈉溶液的摩爾濃度為3M。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從人體唾液中提取基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟10)中，所述RNase A溶液的濃度為20mg/mL。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從人體唾液中提取基因組DNA的方法。它包括核裂解、抽提、純化、洗滌、晾干、溶解，本發(fā)明方法操作簡便，成本低，提取得到的DNA純度高，片段完整，質(zhì)量好，可以滿足一般分子生物學(xué)實驗操作的要求。
【IPC分類】C12N15/10
【公開號】CN105420231
【申請?zhí)枴緾N201610042153
【發(fā)明人】臧德山, 范崇儀
【申請人】杭州和壹基因科技有限公司
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2016年1月21日