一種功能化復(fù)合多孔材料的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種功能化復(fù)合多孔材料的制備方法，包括以下步驟：A)將造孔劑懸浮液平鋪于載體表面，干燥后得到附著在載體表面的造孔劑模板；B)將基體溶液鋪到所述造孔劑模板上，干燥后得到復(fù)合流延膜；所述基體溶液包括聚乳酸乙醇酸共聚物、碳納米管和溶劑。C)將所述復(fù)合流延膜浸入酸性溶液中，得到功能化復(fù)合多孔材料。本發(fā)明將粒子溶出法與流延膜法相結(jié)合制備多孔支架材料，制得的多孔材料在形態(tài)和功能上都能模擬細(xì)胞外基質(zhì)，而且有良好的生物相容性和良好的機(jī)械強(qiáng)度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明中的制備方法制得的功能化復(fù)合多孔材料拉伸斷裂應(yīng)力為3.5～4.1MPa，斷裂伸長率在75.16％左右。
【專利說明】
一種功能化復(fù)合多孔材料的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于多孔材料技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種功能化復(fù)合多孔材料的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用主要包括組織工程支架、藥物釋放、生物傳感器、醫(yī)用植入物、親和 膜、以及傷口敷料等。近年來，由于組織工程在促進(jìn)人類健康方面表現(xiàn)出無限的潛能，因此， 對(duì)它們的研究也取得了長足的進(jìn)步。以組織工程為例，疾病和創(chuàng)傷引起的組織、器官的缺損 或功能障礙是人類健康所面臨的主要危害之一。如何克服自體或異體組織、器官移植中存 在的"以創(chuàng)傷修復(fù)創(chuàng)傷"、供體來源不足等缺陷，從根本上解決組織、器官缺損修復(fù)和功能重 建等問題，已成為生命科學(xué)領(lǐng)域的國際性前沿課題。其中具有功能化的多孔材料的制備是 組織器官修復(fù)工程的關(guān)鍵技術(shù)之一。
[0003] 作為組織工程支架時(shí)，功能化的多孔材料能夠?yàn)榧?xì)胞的黏附、生長、迀移和增殖提 供良好的模板。因此，借助于現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，如何使受損的組織器官獲得完全再生或 在體外復(fù)制出所需要的組織或器官進(jìn)行替代性治療便成為生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)關(guān) 注的焦點(diǎn)，不僅具有重要科學(xué)價(jià)值，而且還有巨大的應(yīng)用前景。
[0004] 多孔聚合物薄膜材料廣泛地應(yīng)用于組織工程支架，因?yàn)檫@些材料可以模擬天然細(xì) 胞外基質(zhì)(ECM)的物理特性。在組織工程中，聚合物支架具有連接良好的多孔結(jié)構(gòu)，它們?yōu)?細(xì)胞提供臨時(shí)的物理模板，便于細(xì)胞黏附、迀移、增殖、分化、新組織的再生和三維結(jié)構(gòu)。最 終，支架應(yīng)該被細(xì)胞分泌的天然細(xì)胞外基質(zhì)所替代?？缮锝到飧呔畚锸且环N很有誘惑力 的候選材料，因?yàn)樗鼈兙哂薪Y(jié)構(gòu)的完整性，最后自然分解，留下新形成的組織，將承擔(dān)組織 所需要的機(jī)械載荷。多孔材料作為支架植入動(dòng)物或人體，必須具備兩個(gè)功能，其一是具有一 定的機(jī)械強(qiáng)度以保持原有組織的形狀;其二是具有一定的生物活性誘導(dǎo)細(xì)胞生長和分化， 從而引導(dǎo)受損組織的再生，并且支架材料最終可被降解吸收。
[0005] 目前，制備多孔支架材料有很多方法，主要有粒子溶出法、纖維粘結(jié)、氣體發(fā)泡、冷 凍干燥、三維打印和相分離等制備方法。這些制備方法雖各具特點(diǎn)但仍有不足之處。比如， 粒子溶出法是在基體中加入可溶解的顆粒作為造孔劑，如食鹽、蔗糖、甘露醇、碳酸氫鈉、磷 酸二氫鈉和谷氨酸鈉等，待基體固化后將其浸泡入特定溶液中，使其中的造孔劑溶出而留 下孔隙。該法簡單易行，但是，該方法制得的多孔支架材料機(jī)械強(qiáng)度不高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了一種功能化復(fù)合多孔材料的制備方法，本發(fā)明中的制備方法得到的 功能化復(fù)合多孔材料具有較高的機(jī)械強(qiáng)度。
[0007] 本發(fā)明提供一種功能化復(fù)合多孔材料的制備方法，包括以下步驟：
[0008] A)將造孔劑懸浮液平鋪于載體表面，干燥后得到附著在載體表面的造孔劑模板；
[0009] B)將基體溶液鋪到所述造孔劑模板上，干燥后得到復(fù)合流延膜；
[0010] 所述基體溶液包括基體材料、碳納米管和溶劑；
[0011] 所述基體材料包括聚乳酸乙醇酸共聚物、聚乳酸、絲素蛋白和殼聚糖中的一種或 幾種；
[0012] C)將所述復(fù)合流延膜浸入酸性溶液中，得到功能化復(fù)合多孔材料。
[0013] 優(yōu)選的，所述造孔劑懸浮液選自三聚氰胺甲醛樹脂微球懸浮液。
[0014] 優(yōu)選的，所述造孔劑懸浮液中造孔劑的粒徑為100~lOOOOnm。
[0015] 優(yōu)選的，所述造孔劑懸浮液的質(zhì)量濃度為3~5%。
[0016] 優(yōu)選的，所述基體溶液中聚乳酸乙醇酸共聚物的質(zhì)量濃度為(0.06~0.14)g/mL。
[0017] 優(yōu)選的，所述碳納米管與聚乳酸乙醇酸共聚物的質(zhì)量比為(0.1~1): 100。
[0018] 優(yōu)選的，所述溶劑為四氫呋喃與二甲基甲酰胺的混合溶液、六氟異丙醇或氯仿；
[0019] 所述四氫呋喃與二甲基甲酰胺的混合溶液中四氫呋喃與二甲基甲酰胺的體積比 為(1~5):1。
[0020] 優(yōu)選的，所述聚乳酸乙醇酸共聚物與造孔劑懸浮液中造孔劑的體積比為（2~3): 1〇
[0021] 優(yōu)選的，所述步驟B)具體為：
[0022] 將基體溶液鋪到造孔劑模板上，得到濕態(tài)流延膜，然后將所述濕態(tài)流延膜振蕩，干 燥后得到復(fù)合流延膜。
[0023]優(yōu)選的，所述振蕩的時(shí)間為10~60min。
[0024] 本發(fā)明提供了一種功能化復(fù)合多孔材料的制備方法，包括以下步驟:A)將造孔劑 懸浮液平鋪于載體表面，干燥后得到附著在載體表面的造孔劑模板;B)將基體溶液鋪到所 述造孔劑模板上，干燥后得到復(fù)合流延膜;所述基體溶液包括聚乳酸乙醇酸共聚物、碳納米 管和溶劑。C)將所述復(fù)合流延膜浸入酸性溶液中，得到功能化復(fù)合多孔材料。本發(fā)明將粒子 溶出法與流延膜法相結(jié)合制備多孔材料，制得的多孔材料在形態(tài)和功能上都能模擬細(xì)胞外 基質(zhì)，而且有良好的生物相容性和良好的機(jī)械強(qiáng)度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明中的制備方法制 得的功能化復(fù)合多孔材料拉伸斷裂應(yīng)力為3.5~4. IMPa，斷裂伸長率在75.16%左右。另外， 本發(fā)明中的制備方法制備過程簡單，孔徑大小容易控制具有良好的形貌的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。
【附圖說明】
[0025] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本 發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù) 提供的附圖獲得其他的附圖。
[0026] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1得到的PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料的掃描電鏡圖；
[0027] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例2得到的PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料的掃描電鏡圖； [0028]圖3為細(xì)胞在本發(fā)明實(shí)施例1、實(shí)施例2的PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料和空白 玻片上的粘附趨勢(shì)；
[0029]圖4為細(xì)胞在本發(fā)明實(shí)施例1、實(shí)施例2的PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料和空白 玻片上的增殖情況；
[0030]圖5為細(xì)胞在本發(fā)明實(shí)施例2中的PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料上粘附和增殖 的掃描電鏡圖；
[0031] 圖6為本發(fā)明實(shí)施例3得到的PLGA/SWCNTs功能化復(fù)合多孔材料的掃描電鏡圖。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 本發(fā)明提供了一種功能化復(fù)合多孔材料的制備方法，包括以下步驟：
[0033] A)將造孔劑懸浮液平鋪于載體表面，干燥后得到附著在載體表面的造孔劑模板；
[0034] B)將基體溶液鋪到所述造孔劑模板上，干燥后得到復(fù)合流延膜；
[0035]所述基體溶液包括聚乳酸乙醇酸共聚物、碳納米管和溶劑。
[0036] C)將所述復(fù)合流延膜浸入酸性溶液中，得到功能化復(fù)合多孔材料。
[0037] 本發(fā)明中的制備方法得到的功能化復(fù)合多孔材料具有較高的機(jī)械強(qiáng)度。
[0038] 本發(fā)明將造孔劑懸浮液平鋪于載體表面，干燥后得到附著在載體表面的造孔劑模 板，在本發(fā)明中，所述造孔劑懸浮液為造孔劑和水的均勻懸浮液，所述造孔劑懸浮液優(yōu)選包 括三聚氰胺甲醛樹脂微球懸浮液;所述造孔劑懸浮液的質(zhì)量濃度優(yōu)選為3~5%，更優(yōu)選為 3.5~4.5%，最優(yōu)選為4% ;所述造孔劑的粒徑優(yōu)選為100~lOOOOnm，更優(yōu)選為1000~ 9〇〇〇nm，具體的，在本發(fā)明的實(shí)施例中，可以是2μπ?或7μL?，如德國柏林微粒有限公司提供的 粒徑分別為2 ± 0.06μπι，7 ± 0.15μπι的三聚氰胺甲醛樹脂微球。
[0039] 本發(fā)明對(duì)所述載體的種類沒有特殊的限制，優(yōu)選采用表面平整光滑的固體載體， 如玻璃載片。在本發(fā)明中，所述干燥的溫度優(yōu)選20~40°C，更優(yōu)選為25~35°C;所述干燥的 時(shí)間優(yōu)選為24~48小時(shí)，更優(yōu)選為30~40小時(shí)；得到的造孔劑模板實(shí)質(zhì)為附著在玻璃載片 上造孔劑微球?qū)樱鲈炜讋┠０蹇梢允菃螌拥?，也可以是多層的，視需要而定?br>[0040] 得到造孔劑模板后，本發(fā)明將基體溶液鋪到所述造孔劑模板表面，干燥后得到復(fù) 合流延膜，本發(fā)明優(yōu)選將基體溶液鋪到造孔劑模板上，得到濕態(tài)流延膜，然后將所述濕態(tài)流 延膜振蕩，干燥后得到復(fù)合流延膜。對(duì)所述濕態(tài)流延膜進(jìn)行輕微振蕩的目的是允許基體溶 液完全充滿所述造孔劑模板的間隙。所述振蕩的時(shí)間優(yōu)選為10~60min，更優(yōu)選為20~ 50min，最優(yōu)選為30~40min;所述振蕩的頻率優(yōu)選為120~240次/min，更優(yōu)選為150~200 次/min〇
[0041 ]在本發(fā)明中，所述基體溶液包括基體材料、碳納米管和溶劑，所述基體材料包括聚 乳酸乙醇酸共聚物(PLGA)、聚乳酸(PLA)、絲素蛋白和殼聚糖中的一種或幾種;其中，PLGA的 分子量為81000g/mo 1;粘度為0.61 dL/g。所述碳納米管可以是單壁碳納米管(SWCNTs)，也可 以是多壁碳納米管(MWCNTs);所述碳納米管的直徑優(yōu)選為30~70nm，更優(yōu)選為40~60nm，最 優(yōu)選為45~55nm;所述碳納米管的長度優(yōu)選為100~400nm，更優(yōu)選為150~350nm，最優(yōu)選為 200~300nm。所述基體溶液中聚乳酸乙醇酸共聚物的質(zhì)量濃度優(yōu)選為(0.06~0.14)g/mL， 更優(yōu)選為(〇. 08~0.12) g/mL，具體的，在本發(fā)明的實(shí)施例中，可以是0.06g/mL、0.08g/mL、 0.10g/mL、0.12g/mL或0.14g/mL。所述碳納米管與聚乳酸乙醇酸共聚物的質(zhì)量比優(yōu)選為 (0.1~1): 100,更優(yōu)選為(0.2~0.9): 100,具體的，在本發(fā)明的實(shí)施例中，可以是0.5:100。 所述溶劑優(yōu)選為四氫呋喃與二甲基甲酰胺的混合溶液，所述四氫呋喃與二甲基甲酰胺的體 積比優(yōu)選為(1~5): 1，更優(yōu)選為(2~4): 1，最優(yōu)選為3:1。
[0042]在本發(fā)明中，所述造孔及懸浮液中造孔劑和所述基體材料的體積比優(yōu)選為1: (2~ 3)，更優(yōu)選為1:2.5。
[0043]本發(fā)明優(yōu)選將聚乳酸乙醇酸共聚物在攪拌的狀態(tài)下，加入四氫呋喃與二甲基甲酰 胺的混合有機(jī)溶液中，充分溶解，形成PLGA溶液，然后再將碳納米管在攪拌的條件下，均勻 分散在PLGA溶液中，得到基體溶液，即PLGA/CNTs溶液。
[0044] 在本發(fā)明中，所述干燥優(yōu)選為真空干燥，所述真空干燥的真空度優(yōu)選為0.02MPa; 所述真空干燥的時(shí)間優(yōu)選為24~48小時(shí);所述真空干燥的溫度優(yōu)選為20~40°C。
[0045] 得到復(fù)合流延膜后，本發(fā)明優(yōu)選將所述復(fù)合流延膜浸入酸性溶液中，得到功能化 復(fù)合多孔材料。所述酸性溶液優(yōu)選包括鹽酸溶液或硫酸溶液;所述酸性溶液的摩爾濃度優(yōu) 選為0.5~2mol/L，更優(yōu)選為lmol/L，將所述復(fù)合流延膜浸入酸性溶液后，0.5~2小時(shí)后，造 孔劑溶解，載體和復(fù)合流延膜完全脫離，再將所述脫離的復(fù)合流延膜進(jìn)行清洗和真空干燥， 得到功能化復(fù)合多孔材料。
[0046] 在本發(fā)明中，需嚴(yán)格控制酸性溶液的濃度和造孔劑的溶解時(shí)間，溶解時(shí)間過長，容 易引起多孔材料變形，溶解時(shí)間過短，使造孔劑溶解不充分，本發(fā)明中的造孔劑溶解時(shí)間優(yōu) 選為0.5~2小時(shí)，更優(yōu)選為1~1.5小時(shí);酸性溶液濃度過大，會(huì)破壞多孔材料，濃度過小，會(huì) 影響造孔劑的溶解。
[0047] 按照上述制備方法制得的為圓形、膜狀的功能化復(fù)合多孔材料，其厚度優(yōu)選為 0 · 001 ~0 · lcm，更優(yōu)選為0 · 002~0 · 05cm。
[0048] 本發(fā)明中的制備方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0049] (1)利用流延膜法和粒子溶出法制備PLGA/CNTs功能化復(fù)合多孔材料，使其機(jī)械性 能得到顯著提高；另外材料中孔結(jié)構(gòu)的形成是通過微球溶出而實(shí)現(xiàn)的，所以該方法特別適 宜制備厚度較小的多孔材料；
[0050] (2)通過使用不同粒徑的微球，實(shí)現(xiàn)對(duì)多孔材料孔徑的可控制備，孔形貌和結(jié)構(gòu)穩(wěn) 定性良好，孔隙率在67 %~70.1 %左右；
[0051] (3)PLGA/CNTs功能化復(fù)合多孔材料的微納米結(jié)構(gòu)具有較大的比表面積（0.2~ 0.5m2/g)，其獨(dú)特的三維多孔結(jié)構(gòu)能夠促進(jìn)細(xì)胞的粘附和增殖。
[0052]為了進(jìn)一步說明本發(fā)明，以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的一種功能化復(fù)合多孔材 料進(jìn)行詳細(xì)描述，但不能將其理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。
[0053]在以下實(shí)施例中，PLGA購自濟(jì)南岱罡生物材料制品公司，三聚氰胺甲醛樹脂微球 (MF)懸浮液為德國柏林微粒有限公司提供的，微球粒徑分別為2 ± 0 · 06μπι，7 ± 0 · 15μπι。 [0054]孔隙率計(jì)算公式：
[0055]
[0056]
[0057] 式中，m，r和h分別代表多孔膜的質(zhì)量，半徑和厚度。pb為聚合物的本體密度，ε為孔 隙率。
[0058] 實(shí)施例1
[0059]將lg的聚乳酸乙醇酸共聚物(PLGA)在攪拌狀態(tài)下，加入到四氫呋喃與二甲基甲酰 胺體積比為3 :1的混合有機(jī)溶劑中，充分溶解，配成濃度為0 . lg/mL的溶液；將0.005g的 MWCNTs均勻分散于PLGA溶液中，制成PLGA/MWCNTs混合溶液。量取5yL粒徑為2μπι的三聚氰胺 甲醛樹脂微球(MF)懸浮液，平鋪于充分洗凈的圓形玻片上，完全分散且干燥，得到附著在玻 片上的MF微球模板。再量取10yL的PLGA/MWCNTs混合溶液鋪到MF微球模板上，然后將混合溶 液/MF模板的濕態(tài)流延膜輕微振蕩30分鐘，目的是允許混合溶液完全充滿MF膠體模板的間 隙，隨后真空干燥48小時(shí);最終，已干燥的復(fù)合PLGA/MWCNTs/MF流延膜的玻片浸入lmol/L的 鹽酸溶液中，1小時(shí)后，MF微球溶解，玻片和PLGA/MWCNTs流延膜完全脫離，充分清洗流延膜， 然后真空干燥，即得厚度為0.003cm的圓形膜狀PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料。
[0060] 本實(shí)施例得到的多孔材料質(zhì)量m約為O.OOlg，半徑r約為0.5〇111，厚度11約為 0.003cm，pb為1.25g/cm3。按照上述公式計(jì)算，本實(shí)施例中的多孔材料孔隙率為67%。
[0061] 本實(shí)施例中的PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料形貌如圖1所示，圖1為本發(fā)明實(shí) 施例1得到的PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料的掃描電鏡圖。由圖1可以看出，本實(shí)施例中 PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料的孔徑為2μπι。
[0062] 經(jīng)比表面儀測(cè)量（貝士德儀器），本實(shí)施例中PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料的 比表面積為0.2~0.5m2/g。
[0063] 本發(fā)明使用萬能材料試驗(yàn)機(jī)（INSTR0N 3365)測(cè)試了本實(shí)施例中PLGA/MWCNTs功能 化復(fù)合多孔材料的機(jī)械性能，其拉伸斷裂應(yīng)力為3.5MPa，斷裂伸長率為60.5%。
[0064] 實(shí)施例2
[0065]將1.2g的聚乳酸乙醇酸共聚物(PLGA)在攪拌狀態(tài)下，加入到四氫呋喃與二甲基甲 酰胺體積比為3 :1的混合有機(jī)溶劑中，充分溶解，配成濃度為0.12g/mL的溶液;將0.012g的 MWCNTs均勻分散于PLGA溶液中，制成PLGA/MWCNTs混合溶液;量取5yL粒徑為7μπι的三聚氰胺 甲醛樹脂微球(MF)懸浮液，平鋪于充分洗凈的圓形玻片上，完全分散且干燥，得到附著在玻 片上的MF微球模板。再量取10yL的PLGA/MWCNTs混合溶液鋪到MF微球模板上，然后將混合溶 液/MF模板的濕態(tài)流延膜輕微振蕩20分鐘，目的是允許混合溶液完全充滿MF膠體模板的間 隙，隨后真空干燥48小時(shí);最終，已干燥的復(fù)合PLGA/MWCNTs/MF流延膜的玻片浸入lmol/L的 鹽酸溶液中，1.5小時(shí)后，MF微球溶解，玻片和PLGA/MWCNTs流延膜完全脫離，充分清洗流延 膜，然后真空干燥，即得厚度為〇. 0039cm的圓形膜狀PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料。
[0066] 本實(shí)施例得到的多孔材料質(zhì)量m約為0.0012g，半徑r約為0.5cm，厚度h約為 0.0039cm，pb為1.25g/cm3。按照上述公式計(jì)算，本實(shí)施例中的多孔材料孔隙率為69%。
[0067] 本實(shí)施例中的PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料形貌如圖2所示，圖2為本發(fā)明實(shí) 施例2得到的PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料的掃描電鏡圖。由圖2可知，本實(shí)施例中 PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料的孔徑為7μπι。
[0068] 經(jīng)比表面儀測(cè)量（貝士德儀器），本實(shí)施例中PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料的 比表面積為〇·05~0· lm2/g。
[0069] 本發(fā)明使用萬能材料試驗(yàn)機(jī)(INSTR0N 3365)測(cè)試了本實(shí)施例中PLGA/MWCNTs功能 化復(fù)合多孔材料的機(jī)械性能，其拉伸斷裂應(yīng)力為4. IMPa，斷裂伸長率為75.16%。
[0070] 將本發(fā)明實(shí)施例1和實(shí)施例2得到的PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料、以及空白 玻片放入24孔培養(yǎng)板，加入75%酒精，浸泡消毒4小時(shí)，然后吸出酒精，晾干，用PBS溶液浸泡 漂洗3次，每次20分鐘。然后用DMEM培養(yǎng)基浸泡材料半小時(shí)左右，然后吸去培養(yǎng)基，放入C02培養(yǎng)箱數(shù)小時(shí)后，按照每孔20000個(gè)的細(xì)胞密度接種。將培養(yǎng)到一定時(shí)間的細(xì)胞從培養(yǎng)箱取 出，移液槍吸掉原來的培養(yǎng)液，用經(jīng)過預(yù)熱的PBS溶液沖洗3次，每孔加入預(yù)熱到37°C未加有 10 %胎牛血清和雙抗的DMEM培養(yǎng)基360yL，加入預(yù)熱到37°C的MTT 40yL，培養(yǎng)4小時(shí)，將有紫 色沉淀產(chǎn)生，然后把培養(yǎng)基吸去，每孔加入400yL DMSO，溶解沉淀20分鐘，變?yōu)樽仙芤?，?后用移液槍移取溶液l〇〇yL加入96孔培養(yǎng)板的每孔中，在多功能熒光酶標(biāo)儀上檢測(cè)波長 570nm處的熒光值，大小可以反映活細(xì)胞的黏附趨勢(shì)。
[0071]結(jié)果如圖3~5所示，圖3為細(xì)胞在本發(fā)明實(shí)施例1、實(shí)施例2和空白玻片上的粘附趨 勢(shì)，其中，1為細(xì)胞在空白玻片上的粘附趨勢(shì)，2為細(xì)胞在本發(fā)明實(shí)施例1中的PLGA/MWCNTs功 能化復(fù)合多孔材料上的粘附趨勢(shì)，3為細(xì)胞在本發(fā)明實(shí)施例2中的PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合 多孔材料上的粘附趨勢(shì)。由圖3可以看出，隨著時(shí)間的延長，與空白玻片相比，細(xì)胞在多孔材 料上的黏附越來越多；圖4為細(xì)胞在本發(fā)明實(shí)施例1、實(shí)施例2的PLGA/麗CNTs功能化復(fù)合多 孔材料和空白玻片上的增殖情況，其中，1為細(xì)胞在空白玻片上的增殖情況，2為細(xì)胞本發(fā)明 實(shí)施例1中的PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料上的增殖情況，3為細(xì)胞本發(fā)明實(shí)施例2中的 PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料上的增殖情況。由圖4可以看出，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，與 空白玻片相比，細(xì)胞在多孔材料上的增殖情況良好。圖5為細(xì)胞在本發(fā)明實(shí)施例2中的PLGA/ MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料上粘附和增殖的掃描電鏡圖。
[0072] 實(shí)施例3
[0073]將lg的聚乳酸乙醇酸共聚物(PLGA)在攪拌狀態(tài)下，加入到四氫呋喃與二甲基甲酰 胺體積比為3:1的混合有機(jī)溶劑中，充分溶解，配成濃度為0.1g/mL的溶液；將O.Olg的 SWCNTs均勻分散于PLGA溶液中，制成PLGA/SWCNTs混合溶液;量取5yL粒徑為7μπι的三聚氰胺 甲醛樹脂微球(MF)懸浮液，平鋪于充分洗凈的圓形玻片上，完全分散且干燥，得到附著在玻 片上的MF微球模板。再量取10yL的PLGA/SWCNTs混合溶液鋪到MF微球模板上，然后將混合溶 液/MF模板的濕態(tài)流延膜輕微振蕩20分鐘，目的是允許混合溶液完全充滿MF膠體模板的間 隙，隨后真空干燥48小時(shí);最終，已干燥的復(fù)合PLGA/SWCNTs/MF流延膜的玻片浸入lmol/L的 鹽酸溶液中，1.5小時(shí)后，MF微球溶解，玻片和PLGA/MWCNTs流延膜完全脫離，充分清洗流延 膜，然后真空干燥，即得厚度為〇. 0034cm的圓形膜狀PLGA/MWCNTs功能化復(fù)合多孔材料。 [0074] 本實(shí)施例中的多孔材料質(zhì)量m約為0.001g，半徑r約為0.5cm，厚度h約為0.0034cm， Pb為1.25g/cm3。經(jīng)計(jì)算，本實(shí)施例中的多孔材料孔隙率為70.1 %。
[0075] 本實(shí)施例中的PLGA/SWCNTs功能化復(fù)合多孔材料形貌如圖6所示，圖6為本發(fā)明實(shí) 施例3得到的P LG A / SWCNT s功能化復(fù)合多孔材料的掃描電鏡圖。由圖6可知，本實(shí)施例中 PLGA/SWCNTs功能化復(fù)合多孔材料的孔徑為7μπι。
[0076] 經(jīng)比表面儀測(cè)量（貝士德儀器），本實(shí)施例中PLGA/SWCNTs功能化復(fù)合多孔材料的 比表面積為0.1~0.3m2/g。
[0077] 本發(fā)明使用萬能材料試驗(yàn)機(jī)（INSTR0N 3365)測(cè)試了本實(shí)施例中PLGA/SWCNTs功能 化復(fù)合多孔材料的機(jī)械性能，其拉伸斷裂應(yīng)力為3.8MPa，斷裂伸長率為69.3%。
[0078] 以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng) 視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種功能化復(fù)合多孔材料的制備方法，包括以下步驟： A) 將造孔劑懸浮液平鋪于載體表面，干燥后得到附著在載體表面的造孔劑模板； B) 將基體溶液鋪到所述造孔劑模板上，干燥后得到復(fù)合流延膜； 所述基體溶液包括基體材料、碳納米管和溶劑； 所述基體材料包括聚乳酸乙醇酸共聚物、聚乳酸、絲素蛋白和殼聚糖中的一種或幾種； C) 將所述復(fù)合流延膜浸入酸性溶液中，得到功能化復(fù)合多孔材料。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述造孔劑懸浮液選自三聚氰胺甲醛 樹脂微球懸浮液。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述造孔劑懸浮液中造孔劑的粒徑為 100~10000nm〇4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述造孔劑懸浮液的質(zhì)量濃度為3~ 5%〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述基體溶液中聚乳酸乙醇酸共聚物 的質(zhì)量濃度為(0.06~0.14)g/mL。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述碳納米管與聚乳酸乙醇酸共聚物 的質(zhì)量比為(0.1~1):1〇〇。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述溶劑為四氫呋喃與二甲基甲酰胺 的混合溶液、六氟異丙醇或氯仿； 所述四氫呋喃與二甲基甲酰胺的混合溶液中四氫呋喃與二甲基甲酰胺的體積比為（1 ~5):1〇8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述聚乳酸乙醇酸共聚物與造孔劑懸 浮液中造孔劑的體積比為(2~3): 1。9. 根據(jù)權(quán)利要求1~8任意一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述步驟B)具體為： 將基體溶液鋪到造孔劑模板上，得到濕態(tài)流延膜，然后將所述濕態(tài)流延膜振蕩，干燥后 得到復(fù)合流延膜。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述振蕩的時(shí)間為10~60min。
【文檔編號(hào)】C08K7/24GK105837849SQ201610300686
【公開日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年5月9日
【發(fā)明人】劉福娟, 王萍, 徐嵐, 何吉?dú)g, 張巖
【申請(qǐng)人】蘇州大學(xué)