含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類n-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺衍生物及其制備方法與應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種3?（6?溴?4?氧?4H?色酮）?1?苯基?5?對(duì)甲苯基?1,6a?二氫吡咯啉[3,4?c]吡唑?4,6（3aH,5H）?二酮及其制備方法與應(yīng)用，該制備方法用1,3?偶極環(huán)加成方法在N?對(duì)甲苯基馬來酰亞胺引入五元吡唑環(huán)的基礎(chǔ)上導(dǎo)入了色酮的結(jié)構(gòu)，從而合成一個(gè)新型的3?（6?溴?4?氧?4H?色酮）?1?苯基?5?對(duì)甲苯基?1,6a?二氫吡咯啉[3,4?c]吡唑?4,6（3aH,5H）?二酮，上述化合物對(duì)于腫瘤細(xì)胞株具有良好的抑制作用，其中對(duì)于白血病細(xì)胞具有更好的抑制率和選擇性，在制備抗腫瘤藥物等方面，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
【專利說明】
含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺衍生物及其制 備方法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域：
[0001] 本發(fā)明涉及一種新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺衍生物，具體 是指3-(6-溴-4-氧-4H-色酮)-1-苯基-5-對(duì)甲苯基-1，6a-二氫吡咯啉[3，4-c]吡唑_4,6 (3aH，5H)_二酮及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺，化學(xué)名：1_苯基吡咯烷-2,5_二酮，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
[0004] 1-對(duì)甲苯基吡咯烷-2，5_二酮
[0005] 1，3_偶極環(huán)加成反應(yīng)以其良好的區(qū)域和主體選擇性而成為合成五元雜環(huán)化合物 最主要的方法，也是雜環(huán)藥物化學(xué)研究中較為活躍的一類反應(yīng)。近幾年來，由于色酮廣泛的 生物活性，諸如抗癌、抗菌、抑制血小板凝聚等而倍受關(guān)注。所以，無論是從藥理學(xué)還是從合 成角度考慮，這類雜環(huán)化合物都有很高的合成價(jià)值。
[0006] 吡唑衍生物作為一類有用的中間體以及它們本身所顯示出來的多種藥物活性而 受到人們的廣泛關(guān)注。本發(fā)明通過研究不同雜環(huán)在同一分子中聚集而對(duì)藥理活性所產(chǎn)生的 影響，從而提供一種全新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺衍生物。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0007] 本發(fā)明的第一方面目的是提供一種新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲苯基馬來 酰亞胺衍生物。
[0008] 本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：
[0009] -種含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺衍生物，其化學(xué)名稱為:3-(6-溴-4-氧-4H-色酮)-1-苯基-5-對(duì)甲苯基-1，6a-二氫吡咯啉[3，4-c ]吡唑-4，6 (3aH，5H)-二 酮，其結(jié)構(gòu)式如下：
[0010]
[0011]該化合物相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：
[0012]
[0013]
【申請(qǐng)人】通過研究發(fā)現(xiàn):在N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺引入五元吡唑環(huán)的基礎(chǔ)上導(dǎo)入了 色酮的結(jié)構(gòu)，獲得了一種全新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺衍生物，該 化合物可以改變藥理活性。
[0014] 本發(fā)明的第二方面目的是提供一種上述含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲苯基馬來 酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:將順丁烯二酸酐和對(duì)甲基苯胺反應(yīng) 合成N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺(3)，然后采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應(yīng)合成6-溴代色酮苯 腙(4)，最后將N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺和6-溴代色酮苯腙進(jìn)行偶極環(huán)加成反應(yīng)，合成3-(6-溴-4-氧-4H-色酮)-1-苯基-5-對(duì)甲苯基-1，6a-二氫吡咯啉[3，4-c ]吡唑-4，6 (3aH，5H)-二 酮(5)。
[0015] 本發(fā)明涉及的反應(yīng)方程式如下：
[0016]
[0017] 進(jìn)一步的，所述的一種3-(6-溴-4-氧-4H-色酮)-1_苯基-5-對(duì)甲苯基-1，6a_二氫 吡咯啉[3，4-c ]吡唑-4，6 (3aH，5H)-二酮的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0018] (1)、N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺的合成：
[0019] 將順丁烯二酸酐和對(duì)甲基苯胺溶解于丙酮溶劑中，在攪拌下反應(yīng)，并逐步產(chǎn)生淡 黃色沉淀，室溫反應(yīng)1小時(shí)后，取少量沉淀，經(jīng)水洗、干燥，然后依次加入醋酸錳、三乙胺和醋 酐，升溫后，沉淀逐步溶解，在50~60°C下反應(yīng)2小時(shí)，溶液由橙黃變成紅黑，逐漸出現(xiàn)新的 沉淀即產(chǎn)物N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺(3)，冷卻至室溫，沉淀經(jīng)水洗、干燥，用丙酮重結(jié)晶得到 產(chǎn)物N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺(3);
[0020] (2)、6_溴代色酮苯腙的合成：
[0021] 所述的6-溴代色酮苯腙(4)為已知化合物，CAS號(hào)為68287-82-1，本發(fā)明采用6-溴 代色酮與苯肼脫水反應(yīng)生成席夫堿的方法進(jìn)行合成，具體操作：取2mmol的苯肼加入盛有 1 OmL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmo 1 6-溴代 色酮的無水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn)。連續(xù)沸 水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水?dāng)嚢瑁S色沉淀顏色變深，抽濾得6-溴代色 酮苯腙，為黃紅色針狀產(chǎn)物;用無水乙醚沖洗多次，真空干燥得產(chǎn)物6-溴代色酮苯腙(4); [0022] (3)、3-(6-溴-4-氧-紐-色酮）-1-苯基-5-對(duì)甲苯基-1，6&-二氫吡咯啉[3,4-(3]吡 唑-4,6(3aH，5H)_二酮的合成：
[0023] 將lmmol N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺和1. lmmol色酮苯腙于20mL乙醇中，再加入1.2mL 氯胺T，回流12小時(shí);將沉淀過濾，清洗，用甲醇再結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物3-(6-溴-4-氧-4H-色酮）-1-苯基-5-對(duì)甲苯基-l，6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3aH，5H)_二酮(5)。 [0024]更進(jìn)一步的設(shè)置在于：
[0025]所述的步驟(1)中，反應(yīng)得到的淡黃色沉淀需進(jìn)行減壓過濾。
[0026] 本發(fā)明的第三方面目的是提供一種3-(6-溴-4-氧-4H-色酮）-1-苯基-5-對(duì)甲苯 基-l，6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3&!1，5!〇-二酮在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。通過 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證:上述化合物，對(duì)于不同瘤株如人肝癌細(xì)胞、口腔癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、 白血病細(xì)胞、腸癌細(xì)胞等，均具有抑制作用，其中對(duì)于白血病細(xì)胞具有更佳的抑制率和選擇 性，可單獨(dú)制備抗腫瘤藥物、也可以作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具 有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
[0027]本發(fā)明的有益效果如下：
[0028]本
【申請(qǐng)人】經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，在N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺引入五元吡唑環(huán)的基礎(chǔ)上導(dǎo)入了 色酮的結(jié)構(gòu)，可以改變藥理活性，經(jīng)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)及分析，研究不同雜環(huán)在同一分子中聚集而 對(duì)藥理活性所產(chǎn)生的影響，
【申請(qǐng)人】通過偶極環(huán)加成反應(yīng)合成了含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì) 甲苯基馬來酰亞胺衍生物，該方法制備的新型含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對(duì)甲苯基馬來酰 亞胺衍生物，在制備抗腫瘤藥物方面，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】：
[0029] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述，但實(shí)施例不應(yīng)解釋為限定本發(fā)明的范 圍。
[0030] 實(shí)施例1:N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺的合成：
[0031] 將順丁烯二酸酐和對(duì)甲基苯胺溶解于一定量的丙酮溶劑中，在攪拌下將對(duì)甲基苯 胺溶液滴加至含有順丁烯二酸酐溶液的反應(yīng)瓶，反應(yīng)放熱并逐步產(chǎn)生淡黃色沉淀，室溫反 應(yīng)1小時(shí)后，取少量沉淀，經(jīng)水洗、干燥，得中間產(chǎn)物.在上述反應(yīng)瓶中，依次加入醋酸錳、三 乙胺和醋酐，升溫后，沉淀逐步溶解，在50~60°C下反應(yīng)2小時(shí)，溶液由橙黃變成紅黑，冷卻 至室溫，水中沉淀經(jīng)大量水洗、干燥，用丙酮重結(jié)晶得到產(chǎn)物N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺(3)。 [0032]實(shí)施例2:6_溴代色酮苯腙的合成：
[0033] 采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應(yīng)生成席夫堿的方法，具體操作:取2mmol的苯肼加 入盛有1 OmL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmo 16-溴代色酮的無水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn)。連 續(xù)沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水?dāng)嚢?，淡黃色沉淀顏色變深，抽濾得苯腙， 黃紅色針狀產(chǎn)物。用無水乙醚沖洗多次，真空干燥得產(chǎn)物6-溴代色酮苯腙(4)。
[0034] 實(shí)施例3:3_ (6-溴-4-氧-4H-色酮）-1-苯基-5-對(duì)甲苯基-l，6a-二氫吡咯啉[3,4_ c]吡唑-4,6(3&!1，5!〇-二酮的合成：
[0035] 將lmmol N-對(duì)甲苯基馬來酰亞胺和1. lmmol色酮苯腙于20mL乙醇中，再加入1.2mL 氯胺T，回流12小時(shí)。將沉淀過濾，清洗，用甲醇再結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物3-(6-溴-4-氧-4H-色酮）-1-苯基-5-對(duì)甲苯基-l，6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3&!1，5!〇-二酮(5)。產(chǎn) 物為黃色結(jié)晶，產(chǎn)率34.7 %，m. p. 143.5 -144°C。
[0036] 結(jié)構(gòu)確認(rèn)：
[0037] 咕匪1?(0150)3:7.286-7.490(111，12!1，八『-!1)，6.46(8，1!1，〇 = (：-!1)，5.83((1，了 = 1010Hz，lH)，5.34(d，J = 1014Hz，lH)，2.34(s，3H，CH3)
[0038] IR 3457(N-C = 0) ,3085(ArH), 1726(C = 0), 1575(C = N), 1298(C-〇-C)cm_1
[0039] m/e :529.05( 100.0% ), 527.05(97.5% )〇
[0040] Anal.calcd.for C27Hi8BrN3〇4:C，61.38;H，3.43;N，7.95 〇
[0041] 應(yīng)用實(shí)施例4:采用MTT法檢測(cè)受試化合物(5)對(duì)不同瘤株的的抗腫瘤活性。
[0042]將上述實(shí)施例制備的化合物（5)，分別以不同瘤株[腫瘤細(xì)胞Bel_7402(人肝癌細(xì) 胞）、KB(口腔癌細(xì)胞）、SGC7901(胃癌細(xì)胞）、H08901 (卵巢癌細(xì)胞）、HL-60(白血病細(xì)胞）、 ECA109(腸癌細(xì)胞）]為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，測(cè)試化合物(5)對(duì)于不同瘤株的體外抑制作用：實(shí)驗(yàn)采用 四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(MTT法），活性用半數(shù)抑制濃度表示（IC 50)。
[0043]具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：
[0044] 將化合物5用DMS0溶解，稀釋，腫瘤細(xì)胞Bel-7402(人肝癌細(xì)胞）、KB(口腔癌細(xì)胞）、 SGC7901(胃癌細(xì)胞）、H08901 (卵巢癌細(xì)胞）、HL-60(白血病細(xì)胞）、ECA109(腸癌細(xì)胞)在96孔 板上種入4000個(gè)/200yL/孔，每孔加入化合物2yL，終濃度為12. ΟμΜ，6. ΟμΜ，3. ΟμΜ，1.5μΜ，共 同于37°C、5 %C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育72小時(shí)，以DMS0(1 % )為空白對(duì)照。72小時(shí)后，加入終濃 度為0.25mg/mL的MTT，置于37 °C、5 % C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中4小時(shí)，之后吸干溶劑，每孔加入100μ 1 DMS0,用酶聯(lián)免疫儀于570nm處測(cè)定吸光度(0D值），所得數(shù)據(jù)用于計(jì)算IC5Q值。挑選抑制活 性高的化合物，測(cè)定不同濃度下的化合物作用時(shí)間不同對(duì)人腫瘤細(xì)胞周期和凋亡的影響。
[0045] 不同濃度的受試化合物用96孔板進(jìn)行粗篩，根據(jù)所得的抑制率，計(jì)算IC5Q值，結(jié)果 見下表。
[0046] 表1、化合物5對(duì)六種腫瘤細(xì)胞株的1(：50值
[0047]
d
[0048]通過上表數(shù)據(jù)可以看出：本發(fā)明制備的化合物，對(duì)于六種腫瘤細(xì)胞株均具有抑制 作用，其中對(duì)于HL-60(白血病細(xì)胞)具有更好的抑制率和選擇性，可以單獨(dú)制備抗腫瘤藥 物、也可以作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前 景。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.3-(6-漠-4-氧-4H-色酬)-1-苯基-5-對(duì)甲苯基-I，6a-二氨化咯嘟[3，4-c]化挫-4，6 (3aH，甜)-二酬，其結(jié)構(gòu)古如下，2. -種3-(6-漠-4-氧-4H-色0向)-1-苯基-5-對(duì)甲苯基-l，6a-二S化咯嘟[3,4-c]化挫- 4,6(3aH，甜)-二酬的制備方法，其特征在于，包括W下步驟:將順下締二酸酢和對(duì)甲基苯胺 反應(yīng)合成N-對(duì)甲苯基馬來酷亞胺，然后采用6-漠代色酬與苯阱脫水反應(yīng)合成6-漠代色酬苯 腺，最后將N-對(duì)甲苯基馬來酷亞胺和6-漠代色酬苯腺進(jìn)行偶極環(huán)加成反應(yīng)，合成3-(6-漠- 4-氧-4H-色酬)-1 -苯基-5-對(duì)甲苯基-1，6a-二氨化咯嘟[3，4-C ]化挫-4，6 (3aH，甜)-二酬。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種3-(6-漠-4-氧-4H-色酬)-1-苯基-5-對(duì)甲苯基-l，6a-二 氨化咯嘟[3，4-C ]化挫-4，6 (3址，5H)-二酬的制備方法，其特征在于，包括W下步驟： (1) 、N-對(duì)甲苯基馬來酷亞胺的合成： 將順下締二酸酢和對(duì)甲基苯胺溶解于丙酬溶劑中，在攬拌下反應(yīng)，并逐步產(chǎn)生淡黃色 沉淀，室溫反應(yīng)1小時(shí)后，取少量沉淀，經(jīng)水洗、干燥，然后依次加入醋酸儘、S乙胺和醋酢， 升溫后，沉淀逐步溶解，在50~60°C下反應(yīng)2小時(shí)，溶液由澄黃變成紅黑，逐漸出現(xiàn)新的沉 淀，冷卻至室溫，沉淀經(jīng)水洗、干燥，用丙酬重結(jié)晶得到產(chǎn)物N-對(duì)甲苯基馬來酷亞胺； (2) 、6-漠代色酬苯腺的合成： 取2mmol的苯阱加入盛有IOmL四氨巧喃的燒瓶中，沸水浴回流攬拌至溶解，然后緩慢滴 加入20mL溶有2mmol 6-漠代色酬的無水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攬拌比，滴加10滴鹽酸， 有淡黃色沉淀出現(xiàn)，連續(xù)沸水浴回流攬拌化，停止水浴，加人20mL蒸饋水?dāng)埌?，淡黃色沉淀 顏色變深，抽濾得6-漠代色酬苯腺，為黃紅色針狀產(chǎn)物；用無水乙酸沖洗多次，真空干燥得 產(chǎn)物6-漠代色酬苯腺； (3) 、3-(6-漠-4-氧-他-色酬）-1-苯基-5-對(duì)甲苯基-1，6曰-二氨化咯嘟[3,4-。]化挫-4， 6(3aH，5H)-二酬的合成： 將Immol N-對(duì)甲苯基馬來酷亞胺和1. Immol色酬苯腺于20mL乙醇中，再加入1.2mL氯胺 T，回流12小時(shí);將沉淀過濾，清洗，用甲醇再結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物3-(6-漠-4-氧-4H- 色酬）-1-苯基-5-對(duì)甲苯基-l，6a-二氨化咯嘟[3,4-c]化挫-4,6(3址，5H)-二酬。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種3-(6-漠-4-氧-4H-色酬)-1-苯基-5-對(duì)甲苯基-l，6a-二 氨化咯嘟[3,4-c]化挫-4,6(3aH，5H)-二酬的制備方法，其特征在于:所述的步驟（1)中，反 應(yīng)得到的淡黃色沉淀需進(jìn)行減壓過濾。5. -種權(quán)利要求1所述化合物在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07D487/04GK105906632SQ201610275684
【公開日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年4月29日
【發(fā)明人】鄧?yán)蚱? 王瑋, 陳國慶, 胡純琦, 吳春雷, 莫憶偉, 李琰
【申請(qǐng)人】紹興文理學(xué)院