一種用于制備他汀類藥物的復合固定化酶及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥工業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及一種用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其制備方法及應用。本發(fā)明所述的復合固定化酶，由活性酶以吸附、共價結(jié)合、包埋、微囊化或交聯(lián)的固定方式固定于固定化酶載體中制備而成，其中，所述活性酶由酮基還原酶和/或鹵醇脫鹵酶組成，所述酮基還原酶占活性酶的質(zhì)量百分比為0%~100%。該固定化酶產(chǎn)品應用于生產(chǎn)阿托伐他汀、瑞舒伐他汀、匹伐他汀等產(chǎn)品的中間體(S)?4?氯?3?羥基丁酸乙酯和/或(R)?4?氰基?3?羥基丁酸乙酯的過程中。本發(fā)明的復合固定化酶與液酶相比，降低生產(chǎn)成本和勞動強度，提高酶的利用效率，減少三廢排，綠色環(huán)保。
【專利說明】
一種用于制備他訂類藥物的復合固定化酶及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及生物工程和綠色制藥領(lǐng)域，具體涉及一種復合固定化酶及其制備方法及用途。
【背景技術(shù)】
[0002]他汀類藥物(statins)是輕甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，此類藥物通過競爭性抑制內(nèi)源性膽固醇合成限速酶(HMG-CoA)還原酶，阻斷細胞內(nèi)羥甲戊酸代謝途徑，使細胞內(nèi)膽固醇合成減少，從而反饋性刺激細胞膜表面(主要為肝細胞)低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)受體數(shù)量和活性增加、使血清膽固醇清除增加、水平降低。他汀類藥物還可抑制肝臟合成載脂蛋白B-100，從而減少富含甘油三酯AV、脂蛋白的合成和分泌。目前市售的他汀類藥物主要有阿托伐他汀、瑞伐他汀和匹伐他汀等。
[0003]阿托伐他汀(atorvastatin，商品名立普妥，Lipitor)是世界上第一個年銷售額超過百億美元的藥品，它通過抑制羥甲基戊二酰CoA還原酶，阻礙肝臟中膽固醇合成的限速步驟來降低血液中膽固醇的含量。瑞舒伐他汀(Crestor)，2015年阿斯利康銷售額49.2億美
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[0004]阿托伐他汀等他汀類藥物的生產(chǎn)工藝中，涉及兩個重要的中間體，分別為(S)-4_氯-3-羥基丁酸乙酯和(R)-4_氰基-3-羥基丁酸乙酯，該兩個中間體在現(xiàn)有工藝中可以分別采用酮基還原酶和鹵醇脫鹵酶催化反應得到，且該兩個反應為順序反應，即，4-氯-3-羥基丁酸乙酯在酮基還原酶催化下生成(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯，(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯再作為底物，在鹵醇脫鹵酶的催化下生成(R)-4_氰基-3-羥基丁酸乙酯，這兩步反應均為酶催化反應，生物催化具有明顯的綠色、高效和專一等特點，利用酮基還原酶將酮基轉(zhuǎn)化為手性醇，利用鹵醇脫鹵酶脫去鹵基，是重要的生物轉(zhuǎn)化反應之一，與使用固定化酶相比，每批反應必須換用新的酶液，分離困難，操作繁瑣，且降低了酶的利用效率，廢液不可回收，產(chǎn)生大量三廢污染物，同時產(chǎn)品中可能含有蛋白等菌體雜質(zhì)。
[0005]固定化酶技術(shù)屬于新興催化技術(shù)，至今僅有100多年的歷史，到上個世紀70年代末，該技術(shù)在某些行業(yè)已有較為成熟的產(chǎn)業(yè)化成果，選擇適當?shù)墓潭ɑ椒ㄈ绨穹?、微囊化法、共價連接法、吸附法或組合方法，適當?shù)妮d體如無機載體或有機載體、天然載體或合成載體、有孔載體或無孔載體、膜、顆粒、泡沫、膠囊等，以及適當?shù)墓潭ɑ瘲l件如水相、有機溶劑、PH、溫度等。隨著科學技術(shù)的發(fā)展，固定化酶的技術(shù)也再不斷的進步，通過固定化載體、固定化方法和酶的不斷改進，提高了許多不具有工業(yè)化應用酶的性能，使其具有更高的選擇性、活力和耐用性，其反應器設計較靈活，適用于多種不同反應介質(zhì)和反應系統(tǒng)，方便過程開發(fā)和下游處理，尤其便于過程控制。但是，由于該技術(shù)出現(xiàn)時間短，有許多傳統(tǒng)催化反應還沒有嘗試應用固定化酶技術(shù)，對于固定化酶技術(shù)應用于醫(yī)藥化工領(lǐng)域，缺少足夠的實踐經(jīng)驗，其中的技術(shù)可行性，相關(guān)參數(shù)的摸索還是空白。
[0006]現(xiàn)有技術(shù)中，尚未出現(xiàn)專門用于他汀類藥物的生產(chǎn)的固定化酶產(chǎn)品，也沒有出現(xiàn)將多種他汀類藥物生產(chǎn)中需要的酶復合固定化于同一載體中制得的復合固定化酶產(chǎn)品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種用于制備他汀類藥物的復合固定化酶。
[0008]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下:
一種用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其由活性酶以吸附、共價結(jié)合、包埋、微囊化或交聯(lián)的固定方式固定于固定化酶載體中制備而成，其中，所述活性酶由酮基還原酶和/或鹵醇脫鹵酶組成，所述酮基還原酶占所述活性酶的質(zhì)量百分比為0%?100%，所述活性酶占所述固定化酶載體的質(zhì)量百分比為0.0I %~5%。
[0009]本領(lǐng)域常見的，本發(fā)明所述酮基還原酶和鹵醇脫鹵酶可以選擇野生型或突變型。
[0010]優(yōu)選地，本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其中，所述酮基還原酶占活性酶的質(zhì)量百分比為20%?80%。
[0011]進一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其中，所述酮基還原酶占活性酶的質(zhì)量百分比為40%?60%。
[0012]進一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其中，所述酮基還原酶占活性酶的質(zhì)量百分比為50%。
[0013]優(yōu)選地，本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其中，所述活性酶占所述固定化酶載體的質(zhì)量百分比為0.05%?2%。
[0014]進一步地，本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其中，所述固定方式為共價結(jié)合，所述固定化酶載體選自環(huán)氧基固定化酶載體或氨基固定化酶載體。
[0015]進一步地，本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其中，所述復合固定化酶的制備方法為:將活性酶和固定化酶載體分別加入緩沖溶液中，所述緩沖液的PH值為5?10，控制固定化反應溫度為1?60 °C，攪拌反應8?96小時，收集固體，干燥，即得。
[0016]作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其中，所述反應時間為16?48小時，優(yōu)選24小時。
[0017]作為本發(fā)明的進一步優(yōu)選方案，本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其中，所述緩沖溶液的PH值為6?9，優(yōu)選7.5-8.5,進一步優(yōu)選8。
[0018]作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其中，所述固定化反應溫度為15°040°C，優(yōu)選20°030°C，進一步優(yōu)選25°C。
[0019]作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其中，所述緩沖溶液選自磷酸鹽緩沖溶液、Tris-HCL緩沖溶液或三乙醇胺緩沖溶液，優(yōu)選磷酸鹽緩沖溶液。
[0020]作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其中，所述反應時間為16?48小時，優(yōu)選24小時。
[0021]本發(fā)明的另一目的在于提供所述用于制備他汀類藥物的復合固定化酶的用途。
[0022]本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶在生產(chǎn)他汀類藥物中間體
(S)-4_氯-3-羥基丁酸乙酯和/或(R)-4_氰基-3-羥基丁酸乙酯中的用途。
[0023]本發(fā)明的另一目的在于提供制備所述用于制備他汀類藥物的復合固定化酶的方法。
[0024]制備本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶的方法，其包括如下步驟:(I)將活性酶和固定化載體分別加入緩沖溶液中，所述緩沖溶液的PH值為5?10，(2)控制固定化反應溫度為10?60°C，攪拌反應8?96小時，(3)收集固體，干燥，即得，其中，所述固定化酶載體選自環(huán)氧基固定化酶載體或氨基固定化酶載體，所述緩沖溶液選自磷酸鹽緩沖溶液、Tr is-HCL緩沖溶液或三乙醇胺緩沖溶液。
[0025]優(yōu)選地，上述制備本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶的方法，其中，步驟(I)中緩沖溶液的pH值為6?9，優(yōu)選7.5-8.5,進一步優(yōu)選8。
[0026]優(yōu)選地，上述制備本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶的方法，其中，步驟(2)中所述固定化反應溫度為20°030°C，優(yōu)選25°C。
[0027]優(yōu)選地，上述制備本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶的方法，其中，步驟(2)中攪拌反應時間為16?48小時，優(yōu)選24小時。
[0028]優(yōu)選地，上述制備本發(fā)明所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶的方法，其中，步驟(2)中攪拌轉(zhuǎn)速為80?200rpm，優(yōu)選120?160rpm。
[0029]另外，本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，所述氨基固定化酶載體使用前應當活化。
[0030]本發(fā)明技術(shù)方案中，所述的酮基還原酶、鹵醇脫鹵酶、固定化酶載體均可商購獲得。
[0031]由于以上技術(shù)方案的實施，本發(fā)明與已有技術(shù)相比具有如下優(yōu)勢:
1、本發(fā)明技術(shù)方案的進步性在于，通過固定化酶的使用，方便了制備他汀類藥物的順序反應中反應混合物的分離，改進了目前液酶使用的缺點，與當前液酶反應相比提高了酶的利用效率，減少了三廢排放，提高產(chǎn)品質(zhì)量、降低生產(chǎn)成本和勞動強度，且便于過程控制，具有重要的工業(yè)應用價值和社會價值。
[0032]2、固定化酶技術(shù)應用于他汀類藥物的生產(chǎn)，需要解決一系列的技術(shù)匹配問題，本發(fā)明首次將固定化酶技術(shù)應用于本發(fā)明所述反應，通過大量具體試驗，對復合固定化酶的性能進行了優(yōu)化，確定了本文所涉及的具體催化反應中的固定化反應類型，載體選擇，緩沖液選擇，完成了反應溫度、時間、PH值等條件的優(yōu)化，采用本發(fā)明提供的復合固定化酶，實現(xiàn)了他汀類藥物制備過程中兩步反應產(chǎn)物純度98%以上，反應收率95%以上，適應工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0033]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明，但本發(fā)明并不限于以下實施例所提供的技術(shù)方案。
[0034]實施例1
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.4g酮基還原酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EP113-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速120rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0035]實施例2
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.4g鹵醇脫齒酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EP113-M)，溫度30°C，轉(zhuǎn)速150rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0036]實施例3
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.4g酮基還原酶，40g活化后的氨基固定化酶載體(sepabeads ? EC-HA/M)，溫度20°C，轉(zhuǎn)速160rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0037]實施例4
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.4g酮基還原酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EP113-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速120rpm，反應16小時，收集固定化酶。
[0038]實施例5
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.4g酮基還原酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EP113-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速120rpm，反應48小時，收集固定化酶。
[0039]實施例6
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值5.8)，并依次加入0.4g鹵醇脫鹵酶，40g活化后的氨基固定化酶載體(sepabeads? EC-HA/M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速150rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0040]實施例7
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.8)，并依次加入0.4g鹵醇脫鹵酶，40g活化后的氨基固定化酶載體(sepabeads? EC-HA/M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速150rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0041 ] 實施例8
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.02g酮基還原酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EP113-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速120rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0042]實施例9
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.8g酮基還原酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EP113-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速120rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0043]實施例10
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.004g酮基還原酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EP113-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速120rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0044]實施例11
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入2g酮基還原酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EPl13-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速120rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0045]實施例12
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.02g鹵醇脫齒酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EP113-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速120rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0046]實施例13 取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.8g鹵醇脫齒酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EP113-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速120rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0047]實施例14
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.004g鹵醇脫齒酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EP113-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速120rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0048]實施例15
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入2g鹵醇脫齒酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EPl13-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速120rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0049]實施例16
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.2g酮基還原酶和0.2g齒醇脫齒酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EPl 13-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速150rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0050]實施例17
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.08g酮基還原酶和0.32g齒醇脫齒酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EPl 13-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速150rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0051 ] 實施例18
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.32g酮基還原酶和0.08g齒醇脫齒酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EPl 13-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速150rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0052]實施例19
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.16g酮基還原酶和0.24g齒醇脫齒酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EPl 13-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速150rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0053]實施例20
取250mL三口燒瓶，加150mL磷酸鹽緩沖溶液(500mM，pH值8.0)，并依次加入0.24g酮基還原酶和0.16g齒醇脫齒酶，40g環(huán)氧基固定化酶載體(sepabeads ? EC-EPl 13-M)，溫度25°C，轉(zhuǎn)速150rpm，反應24小時，收集固定化酶。
[0054]實施例21
在250mL三口燒瓶中加入120mL磷酸鹽緩沖溶液(l(K)mM，pH為7.0)依次加入底物4-氯-3-羥基丁酸乙酯12mL，異丙醇12mL，取實施例1的固定化酶5g，無水氯化鈣ImM，0.02g輔酶I(NAD)，于30°C下，200rpm攪拌反應，利用6M氨水控制pH值為7.0，利用氣相色譜監(jiān)測反應的轉(zhuǎn)化率，24小時轉(zhuǎn)化率達到99.9%以上，分離固定化酶，加入等體積乙酸乙酯萃取3次，合并有機相并蒸干，得到產(chǎn)品(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯，純度大于98%，收率98%。
[0055]實施例22
在250mL三口燒瓶中加入120mL磷酸鹽緩沖溶液(100mM，pH為7.0)依次加入底物(S)-4-氯-3-輕基丁酸乙酯12mL，異丙醇12mL，取實施例2的固定化酶5g，無水氯化^lniU0.0Sg輔酶I (NAD)，于30°C下，200rpm攪拌反應，利用6M氨水控制pH值為7.0，利用氣相色譜監(jiān)測反應的轉(zhuǎn)化率，24小時轉(zhuǎn)化率達到99.9%以上，分離固定化酶，加入等體積乙酸乙酯萃取3次，合并有機相并蒸干，得到產(chǎn)品(R)-4_氰基-3-羥基丁酸乙酯，純度大于98%，收率97%。
[0056]實施例23
在250mL三口燒瓶中加入120mL磷酸鹽緩沖溶液(l(K)mM，pH為7.0)依次加入底物4-氯-3-輕基丁酸乙酯12mL，異丙醇12mL，取實施例16所得的固定化酶1g，無水氯化|丐ImM，0.02g輔酶I (NAD)，于35°C下，200rpm攪拌反應，反應開始后利用30%的氰化鈉溶液控制pH值為
7.0。利用氣相色譜監(jiān)測反應的轉(zhuǎn)化率，18小時后轉(zhuǎn)化率達到99.9%以上，分離固定化酶，加入等體積乙酸乙酯萃取3次，合并有機相并蒸干，得到產(chǎn)品(R)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯，純度大于98%，收率97%。
[0057]實施例24
在250mL三口燒瓶中加入120mL磷酸鹽緩沖溶液(l(K)mM，pH為7.0)依次加入底物4-氯-3-羥基丁酸乙酯12mL，異丙醇12mL，取實施例17所得的固定化酶1g，無水氯化鈣ImM，0.02g輔酶I (NAD)，于35°C下，200rpm攪拌反應，反應開始后利用30%的氰化鈉溶液控制pH值為
7.0。利用氣相色譜監(jiān)測反應的轉(zhuǎn)化率，48小時后轉(zhuǎn)化率達到99.9%以上，分離固定化酶，加入等體積乙酸乙酯萃取3次，合并有機相并蒸干，得到產(chǎn)品(R)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯，純度大于98%，收率95%。
【主權(quán)項】
1.一種用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其特征在于:由活性酶以吸附、共價結(jié)合、包埋、微囊化或交聯(lián)的固定方式固定于固定化酶載體中制備而成，其中，所述活性酶由酮基還原酶和/或鹵醇脫鹵酶組成，所述酮基還原酶占所述活性酶的質(zhì)量百分比為0%?100%，所述活性酶占所述固定化酶載體的質(zhì)量百分比為0.0I %~5%。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其特征在于:所述酮基還原酶占活性酶的質(zhì)量百分比為20%?80%。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其特征在于:所述酮基還原酶占活性酶的質(zhì)量百分比為40%?60%。4.根據(jù)權(quán)利要求1?3中任一項所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其特征在于:所述固定方式為共價結(jié)合，所述固定化酶載體選自環(huán)氧基固定化酶載體或氨基固定化酶載體。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其特征在于:所述復合固定化酶的制備方法為:將活性酶和固定化酶載體分別加入緩沖溶液中，所述緩沖液的PH值為5?10，控制固定化反應溫度為1?60 °C，攪拌反應8?96小時，收集固體，干燥，即得。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其特征在于:所述緩沖溶液的pH值為6?9。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其特征在于:所述固定化反應溫度為15°040°C。8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶，其特征在于:所述緩沖溶液選自磷酸鹽緩沖溶液、Tris-HCL緩沖溶液或三乙醇胺緩沖溶液。9.權(quán)利要求1?8中任一項所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶在生產(chǎn)他汀類藥物中間體(S)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯和/或(R)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯中的用途。10.制備根據(jù)權(quán)利要求1?3中任一項所述的用于制備他汀類藥物的復合固定化酶的方法，其特征在于:包括如下步驟:(I)將活性酶和固定化載體分別加入緩沖溶液中，所述緩沖溶液的pH值為5?10，(2)控制固定化反應溫度為10?60°C，攪拌反應8?96小時，(3)收集固體，干燥，即得，其中，所述固定化酶載體選自環(huán)氧基固定化酶載體或氨基固定化酶載體，所述緩沖溶液選自磷酸鹽緩沖溶液、Tris-HCL緩沖溶液或三乙醇胺緩沖溶液。
【文檔編號】C12N9/88GK105925558SQ201610324640
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年5月17日
【發(fā)明人】馮文亮, 王靜
【申請人】河北周酶生物科技有限公司