螺環(huán)芳基砜作為蛋白激酶抑制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了螺環(huán)芳基砜類化合物，尤其是式(I)化合物作為ALK抑制劑。
【專利說明】螺環(huán)芳基砜作為蛋白激酶抑制劑 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及螺環(huán)芳基砜化合物，尤其是式(I)化合物作為ALK抑制劑。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 蛋白激酶能夠調(diào)控細(xì)胞周期的各個環(huán)節(jié);蛋白激酶的異常表達(dá)既會引起疾病，同 時疾病也會造成蛋白激酶的異常表達(dá)，這些疾病包括癌癥，炎癥和糖尿病等，因此蛋白激酶 逐漸成為比較流行的藥物靶標(biāo)。
[0004] 自從2001年格列衛(wèi)上市以來，很多蛋白激酶已經(jīng)成為非常有吸引力的癌癥治療靶 標(biāo)。其中間變性淋巴瘤激酶(ALK)吸引了大量關(guān)注，由于其在許多人類癌癥中具有潛在的致 癌基因以及在癌癥的發(fā)病機理中扮演著重要角色，如ALCLS，非小細(xì)胞肺癌，乳腺癌，結(jié)腸直 腸癌，神經(jīng)母細(xì)胞瘤，卵巢癌等。
[0005] 間變性淋巴瘤激酶(ALK)是一種受體酪氨酸激酶(RTK)，為胰島素受體(IR)超家族 成員。1994年ALK首次以融合蛋白NPM(核磷蛋白）-ALK的形式在60-80%間變性大細(xì)胞淋巴 瘤(ALCLS)細(xì)胞系中被發(fā)現(xiàn)，NPM-ALK是由t (2; 5)染色體易位造成。盡管ALK在癌癥中的生理 功能還不清楚，但ALK融合蛋白已經(jīng)在ALCLs以及在各種人類癌癥中發(fā)現(xiàn)，如乳腺癌，結(jié)腸直 腸癌，炎性肌纖維母細(xì)胞瘤（MT)，彌散性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)，其中最為顯著的是在非 小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中。因此，與ALK融合蛋白相關(guān)的激酶活性被認(rèn)為對人類癌細(xì)胞存活與 增殖起著非常重要的作用。
[0006] ALK基因提供了一種信號傳導(dǎo)的指令，使受體酪氨酸激酶將信號從細(xì)胞表面?zhèn)鲗?dǎo) 到細(xì)胞中。這一過程起始于當(dāng)激酶在細(xì)胞表面受到刺激后，然后附著到類似的激酶(二聚）。 二聚化后，激酶被一個磷酸基團(tuán)標(biāo)記，這一過程稱為磷酸化。磷酸化激活激酶，活化激酶是 能夠?qū)⒘姿峄D(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)的另一個蛋白，活化持續(xù)通過信號通路中一系列的蛋白質(zhì)。而 這些信號通路對于許多細(xì)胞過程非常重要，如細(xì)胞生長和分裂(增殖)或成熟(分化)等。
[0007] 通常ALK染色體重排，使得ALK的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域與其它蛋白的5'-端的結(jié)構(gòu)域 融合，例如棘皮動物微管相關(guān)蛋白樣4(EML4)中NSCLC或核磷蛋白（NPM)在間變性大細(xì)胞淋 巴瘤。對所有ALK融合基因其斷點非常保守，位于外顯子編碼的基因內(nèi)區(qū)的上游激酶域。由 于ALK涉及的重排的部分不包括跨膜結(jié)構(gòu)域，所形成的融合蛋白從細(xì)胞膜重新迀移到細(xì)胞 質(zhì)。融合蛋白的5'-端通常含有卷曲螺旋或亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域，從而使融合蛋白低聚化，并 且導(dǎo)致ALK酪氨酸激酶的配體依賴性活化。這一結(jié)果反過來又組成性激活下游信號傳導(dǎo)，如 的Ras/MAPK，PI3K/AKT，和JAK/STAT等通路。ALK驅(qū)動的肺癌在用ALK小分子酪氨酸激酶抑制 劑治療后產(chǎn)生響應(yīng)和消退。這一發(fā)現(xiàn)表明了"腫瘤基因的依賴性"，即癌細(xì)胞變得依賴于致 癌驅(qū)動基因，因此對抑制癌基因高度敏感。
[0008] Cr i ζ 01 i n i b是第一個被FDA批準(zhǔn)的用于治療ALK陽性肺癌的ALK抑制劑。盡管對 Crizotinib治療最初響應(yīng)非常有效，但多數(shù)患者由于產(chǎn)生耐藥性而在治療的第一年發(fā)生復(fù) 發(fā)。Crizotinib耐藥機制一般分為兩大類，第一類是靶標(biāo)的基因改變，也就是說ALK通過突 變或基因擴(kuò)增發(fā)生改變。許多ALK激酶結(jié)構(gòu)域耐藥突變已經(jīng)從患者樣本得到鑒定，包括 L1196M和C1156Y 61269六，115111118兒11521?，612021?和51206￥。大約有三分之一的患者由于 ALK融合基因的突變和/或擴(kuò)增，在使用Crizotinib治療期間發(fā)生復(fù)發(fā)。第二類耐藥機制是 可以激活其它信號通路，從而繞過ALK。例如在體外ALK陽性對克唑替尼產(chǎn)生耐藥的細(xì)胞系 中已經(jīng)觀察到表皮生長因子受體信號的上調(diào)，這與臨床前的研亢結(jié)果一致，將近一半的ALK 陽性腫瘤在對克唑替尼產(chǎn)生耐藥時表現(xiàn)出EGFR激活。在臨床上，Crizotinib治療復(fù)發(fā)通常 與中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的轉(zhuǎn)移有關(guān)。這一發(fā)現(xiàn)也提出了一個藥代動力學(xué)的問題，藥物暴露不 足，可能是ALK陽性患者CNS復(fù)發(fā)率高的原因。
[0009] 2014年4月29日^0六批準(zhǔn)〇64^11丨13用于治療間變性淋巴瘤激酶以1^)陽性的轉(zhuǎn)移 性非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，包括對Crizotinib有效以及耐藥的患者。還有一些化合物正在臨 床研亢中用于治療癌癥，如 Alectinib，AP-26113，X-396，PF-06463992，LDK378 等。一些雜環(huán) 化合物也已披露，用于各種癌癥的治療，這些專利包括W02014033136，W02014025128， W02014006554，W02014002922，W02013192512，W02013177092，W02013148857， W02013138210，W02012139499，W02012140114，W02012048259。
[0010]
[0011] 然而，盡管有半數(shù)以上的NSCLC患者對Crizotinib的療效良好，然而耐藥總是會隨 治療時間的延長而產(chǎn)生，從而藥物失去其有效性。雖然近幾年來，國內(nèi)外都在大力開發(fā)用于 治療非小細(xì)胞肺癌的ALK抑制劑，但其療效并不令人滿意。因此開發(fā)新型的，更加有效安全 的ALK抑制劑非常迫切需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明的目的在于提供式(I)所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
[0013]
[0014] 其中，
[0015] 選自 N 或 C(R01);
[0016] T2 選自-N(R〇1)-、0、S(=0)2、-CH(NR(nR()2)-S-C(=0)N(R() 1)-;
[0017] RQ1、RQ2分別獨立地選自!1、？、(：1、8匕1、^0!1、3!1、冊2、或任選被1、2或3個鹵素、羥 基、氨基和/或氰基所取代的 ：(^-6烷基、Ch雜烷基、C3-6環(huán)烷基-(CH 2)〇-3-和C3-6雜環(huán)烷基-(CH2)〇-3-，其中所述"雜"代表1、2或3個雜原子或雜原子團(tuán)，所述雜原子或雜原子團(tuán)選自0、 S、N、S(=0)2 或S(=0);
[0018] 任選地，T2上的RQ1和RQ2相互連接到同一個N上形成1個3~6元環(huán)，所述的環(huán)上含有 1、2或3個雜原子，所述雜原子選自0、S和N;
[0019] Di~D4 分別獨立地選自-(CRifch-3-、0、S、C(=0)、S(=0)^S(=0);
[0020] R3 選自 R03、〇R03 和 SR〇3;
[0021] RQ3選自4烷基、4鹵代烷基和C3-5環(huán)烷基-(CH2)o- 3-;
[0022] Z選自 N和 C(R4);
[0023] R5選自4烷基；
[0024] Ri、R2和R4分別獨立地選自1^、(：1、8匕1、^0!1、3!1、順2、或任選被1、2或3個鹵素、 羥基和/或氰基所取代的：(^-6烷基、CP6雜烷基、C3-6環(huán)烷基-(CH 2)0-3-和C3-6雜環(huán)烷基-(CH2)〇-3-，其中所述"雜"代表1、2、或3個雜原子，所述雜原子選自0、S和N。
[0025] 本發(fā)明的一個方案中，上述RQ1和R〇2分別獨立地選自11、-〇13、-〇) 3、-〇?3、-(：冊2、- CH2CH3、CH(CH3)2、-CH2CF3、-CH2CH2CF3、-CH2CH2F、-CH2CH2S(=0)2CH3、-CH2CH 2CN、
-CH2CH(OH)(CH3)2、-CH2CH (F)(CH3)2、-CH2CH2F〇
[0026] 本發(fā)明的一個方案中，NRQ1RQ2 選自 NHCH3、N(CH3)2、N(CH2CH 3)2
[0027] 本發(fā)明的一個方案中，上述RQ3選自-〇13、-〇03、-〇卩3、-(：冊 2、-〇12(^3、-〇1(〇13)2、-CH2CF 3、-CH2CH2CF3、-CH2CH2F 和
[0028]本發(fā)明的一個方案中，上述R5選自-CH(CH3)2。
[0029] 本發(fā)明的一個方案中，上述Ri、R2和R4分別獨立地選自1^、(：1、8心1、-〇1 3、-〇)3、-CF3、-CHF2、-CH2CH3、-CH (CH3) 2、-CH2CF3、-CH2CH2CF3、-CH2CH2F、-CH2CH2S ( = 0) 2CH3、- CH2CH2CN、
-ch2ch(oh) (CH3) 2、-CH2CH( F) (CH3) 2和-CH2CH2F 〇
[0030] 本發(fā)明的一方案中，上述T2選自-NH-、-N(Me)-、_C( = 0)NH-、-C(=0)N(CH3)-、-0- 和-ch(nch3ch3)-〇
[0031] 本發(fā)明的一個方案中，上述螺環(huán)結(jié)構(gòu)單元

[0032] 本發(fā)明的一個方案中，上述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其選自：
[0033] I π
i c
[0034] 本發(fā)明的另一個目的在于提供制備上述化合物的方法，其中Ti代表N或CH，T2代表 NH，其制備路線如方案A或C所示：
[0035] 方案A
[0036]
[uuu/」 刀米l
[Of^Rl
[0039] 其中PG是氨基保護(hù)基，優(yōu)選自BOC、Bn和Cbz。
[0040] 本發(fā)明的一個方案中，其中A5的制備方法如方案B所示：
[0041 ]方案 B 「00421
[0043]本發(fā)明的目的在于使用上述化合物治療ALK和EGFR以及它們的突變引起的非小細(xì) 胞肺癌及其它癌癥。
[0044] 本發(fā)明的目的還在于使用上述化合物與R0Sl，BRAF，c-MET，HER2，KRAS/MEK， PIK3CA，F(xiàn)DFR，DDR2，VEGFR等抑制劑聯(lián)合治療癌癥，以及與細(xì)胞毒素，如多西他賽，卡鉑等聯(lián) 合治療癌癥。
[0045] 定義和說明
[0046] 選自于由Q，C2，C3，C4，CdPC6組成的基團(tuán)，數(shù)字表示碳原子數(shù)的基團(tuán)；C 3-6選自 于由C3，C4，C5，和C 6組成的基團(tuán)。
[0047] &-6烷基，&-6雜烷基，C3-6環(huán)烷基，C3-6雜環(huán)烷基，&-6烷基被C3-6環(huán)烷基或C3-6雜環(huán)烷 基取代，和雜烷基被C3-6環(huán)烷基或C3-6雜環(huán)烷基取代，包括但不限于：甲基，乙基，正丙基， 異丙基，-CH 2C(CH3) (CH3) (0H)，環(huán)丙基，環(huán)丁基，丙基亞甲基，環(huán)丙基?；?，芐氧基，環(huán)丙基烯 基，三氟甲基，氨基甲基，羥甲基，甲氧基，甲基?；?，甲氧?；?，甲基磺?；?，甲基亞磺?；?， 乙氧基，乙?；?，乙基磺?；?，乙氧?；谆被?，二乙基氨基，二甲基氨基，和二乙基氨 基；N(CH 3)2，NH(CH3)，-CH2CF3，-CH2CH2CF3，-CH2CH2F，-CH2CH2S( = 0)2CH3，-CH2CH2CN，
.〇-CH2CH(OH)(CH 3)2，- CH2CH(F) (CH3)2，-CH2CH2F，-CH2CF3，-CH2CH2CF3，-CH2CH2NH2，-CH2CH2OH，-CH2CH2OCH3，-CH2CH2CH2〇CH3，-CH2CH2N(CH3)2，-S(=0)2CH3，-CH2CH 2S(=0)2CH3，
[0048] 這里所采用的術(shù)語"藥學(xué)上可接受的"，是針對那些化合物、材料、組合物和/或劑 型而言，它們在可靠的醫(yī)學(xué)判斷的范圍之內(nèi)，適用于與人類和動物的組織接觸使用，而沒有 過多的毒性、刺激性、過敏性反應(yīng)或其它問題或并發(fā)癥，與合理的利益/風(fēng)險比相稱。
[0049] 術(shù)語"藥學(xué)上可接受的鹽"是指本發(fā)明化合物的鹽，由本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的具有特定取代 基的化合物與相對無毒的酸或堿制備。當(dāng)本發(fā)明的化合物中含有相對酸性的功能團(tuán)時，可 以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的堿與這類化合物的中性形式接觸的方 式獲得堿加成鹽。藥學(xué)上可接受的堿加成鹽包括鈉、鉀、鈣、銨、有機氨或鎂鹽或類似的鹽。 當(dāng)本發(fā)明的化合物中含有相對堿性的官能團(tuán)時，可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中 用足夠量的酸與這類化合物的中性形式接觸的方式獲得酸加成鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成 鹽的實例包括無機酸鹽，所述無機酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氫根，磷酸、磷 酸一氫根、磷酸二氫根、硫酸、硫酸氫根、氫碘酸、亞磷酸等；以及有機酸鹽，所述有機酸包括 如乙酸、丙酸、異丁酸、馬來酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、 鄰苯二甲酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、檸檬酸、酒石酸和甲磺酸等類似的酸;還包括氨基酸(如 精氨酸等）的鹽，以及如葡糖醛酸等有機酸的鹽（參見Berge et al./Pharmaceutical Salts"，Journal of Pharmaceutical Science 66:1-19( 1977))。本發(fā)明的某些特定的化 合物含有堿性和酸性的官能團(tuán)，從而可以被轉(zhuǎn)換成任一堿或酸加成鹽。
[0050] 優(yōu)選地，以常規(guī)方式使鹽與堿或酸接觸，再分離母體化合物，由此再生化合物的中 性形式。化合物的母體形式與其各種鹽的形式的不同之處在于某些物理性質(zhì)，例如在極性 溶劑中的溶解度不同。
[0051] 本文所用的"藥學(xué)上可接受的鹽"屬于本發(fā)明化合物的衍生物，其中，通過與酸成 鹽或與堿成鹽的方式修飾所述母體化合物。藥學(xué)上可接受的鹽的實例包括但不限于:堿基 比如胺的無機酸或有機酸鹽、酸根比如羧酸的堿金屬或有機鹽等等。藥學(xué)上可接受的鹽包 括常規(guī)的無毒性的鹽或母體化合物的季銨鹽，例如無毒的無機酸或有機酸所形成的鹽。常 規(guī)的無毒性的鹽包括但不限于那些衍生自無機酸和有機酸的鹽，所述的無機酸或有機酸選 自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羥基乙磺酸、乙酸、抗壞血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氫根、碳酸、檸 檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富馬酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、氫溴酸、鹽 酸、氫碘酸鹽、羥基、羥萘、羥乙磺酸、乳酸、乳糖、十二烷基磺酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲 烷磺酸、硝酸、草酸、雙羥萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛、丙酸、水楊酸、硬脂酸、亞 乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、對氨基苯磺酸、硫酸、單寧、酒石酸和對甲苯磺酸。
[0052] 本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽可由含有酸根或堿基的母體化合物通過常規(guī)化學(xué)方 法合成。一般情況下，這樣的鹽的制備方法是:在水或有機溶劑或兩者的混合物中，經(jīng)由游 離酸或堿形式的這些化合物與化學(xué)計量的適當(dāng)?shù)膲A或酸反應(yīng)來制備。一般地，優(yōu)選醚、乙酸 乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈等非水介質(zhì)。
[0053] 除了鹽的形式，本發(fā)明所提供的化合物還存在前藥形式。本文所描述的化合物的 前藥容易地在生理條件下發(fā)生化學(xué)變化從而轉(zhuǎn)化成本發(fā)明的化合物。此外，前體藥物可以 在體內(nèi)環(huán)境中通過化學(xué)或生化方法被轉(zhuǎn)換到本發(fā)明的化合物。
[0054] 本發(fā)明的某些化合物可以以非溶劑化形式或者溶劑化形式存在，包括水合物形 式。一般而言，溶劑化形式與非溶劑化的形式相當(dāng)，都包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明的 某些化合物可以具有不對稱碳原子(光學(xué)中心)或雙鍵。外消旋體、非對映異構(gòu)體、幾何異構(gòu) 體和單個的異構(gòu)體都包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0055] 本文中消旋體、ambiscalemic and scalemic或者對映體純的化合物的圖示法來 自MaehrJ.Chem.Ed. 1985,62:114-120。1985年，62:114-120。除非另有說明，用楔形鍵和虛 線鍵表示一個立體中心的絕對構(gòu)型。當(dāng)本文所述化合物含有烯屬雙鍵或其它幾何不對稱中 心，除非另有規(guī)定，它們包括E、Z幾何異構(gòu)體。同樣地，所有的互變異構(gòu)形式均包括在本發(fā)明 的范圍之內(nèi)。
[0056] 本發(fā)明的化合物可以存在特定的幾何或立體異構(gòu)體形式。本發(fā)明設(shè)想所有的這類 化合物，包括順式和反式異構(gòu)體、（-)-和(+)-對對映體、（R)-和(S)-對映體、非對映異構(gòu)體、 (D)-異構(gòu)體、（L)-異構(gòu)體，及其外消旋混合物和其他混合物，例如對映異構(gòu)體或非對映體富 集的混合物，所有這些混合物都屬于本發(fā)明的范圍之內(nèi)。烷基等取代基中可存在另外的不 對稱碳原子。所有這些異構(gòu)體以及它們的混合物，均包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0057] 可以通過的手性合成或手性試劑或者其他常規(guī)技術(shù)制備光學(xué)活性的（R)-和（S)-異構(gòu)體以及D和L異構(gòu)體。如果想得到本發(fā)明某化合物的一種對映體，可以通過不對稱合成 或者具有手性助劑的衍生作用來制備，其中將所得非對映體混合物分離，并且輔助基團(tuán)裂 開以提供純的所需對映異構(gòu)體?；蛘?，當(dāng)分子中含有堿性官能團(tuán)（如氨基)或酸性官能團(tuán)（如 羧基)時，與適當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)活性的酸或堿形成非對映異構(gòu)體的鹽，然后通過本領(lǐng)域所公知的拆 分方法進(jìn)行非對映異構(gòu)體拆分，然后回收得到純的對映體。此外，對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu) 體的分離通常是通過使用色譜法完成的，所述色譜法采用手性固定相，并任選地與化學(xué)衍 生法相結(jié)合(例如由胺生成氨基甲酸鹽）。
[0058] 本發(fā)明的化合物可以在一個或多個構(gòu)成該化合物的原子上包含非天然比例的原 子同位素。例如，可用放射性同位素標(biāo)記化合物，比如氚( 3H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。本 發(fā)明的化合物的所有同位素組成的變換，無論放射性與否，都包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0059] 術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"是指能夠遞送本發(fā)明有效量活性物質(zhì)、不干擾活性物 質(zhì)的生物活性并且對宿主或者患者無毒副作用的任何制劑或載體介質(zhì)代表性的載體包括 水、油、蔬菜和礦物質(zhì)、膏基、洗劑基質(zhì)、軟膏基質(zhì)等。這些基質(zhì)包括懸浮劑、增粘劑、透皮促 進(jìn)劑等。它們的制劑為化妝品領(lǐng)域或局部藥物領(lǐng)域的技術(shù)人員所周知。關(guān)于載體的其他信 息，可以參考Remington : The Science and Practice of Pharmacy ,21st Ed ., Lippincott，Williams&Wilkins(2005)，該文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用的方式并入本文。
[0060] 術(shù)語"賦形劑"通常是指配制有效的藥物組合物所需要載體、稀釋劑和/或介質(zhì)。 [0061 ]針對藥物或藥理學(xué)活性劑而言，術(shù)語"有效量"或"治療有效量"是指無毒的但能達(dá) 到預(yù)期效果的藥物或藥劑的足夠用量。對于本發(fā)明中的口服劑型，組合物中一種活性物質(zhì) 的"有效量"是指與該組合物中另一種活性物質(zhì)聯(lián)用時為了達(dá)到預(yù)期效果所需要的用量。有 效量的確定因人而異，取決于受體的年齡和一般情況，也取決于具體的活性物質(zhì)，個案中合 適的有效量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)常規(guī)試驗確定。
[0062] 術(shù)語"活性成分"、"治療劑"、"活性物質(zhì)"或"活性劑"是指一種化學(xué)實體，它可以有 效地治療目標(biāo)紊亂、疾病或病癥。
[0063] 術(shù)語"被取代的"是指特定原子上的任意一個或多個氫原子被取代基取代，包括重 氫和氫的變體，只要特定原子的價態(tài)是正常的并且取代后的化合物是穩(wěn)定的。當(dāng)取代基為 酮基（即=〇)時，意味著兩個氫原子被取代。酮取代不會發(fā)生在芳香基上。術(shù)語"任選被取代 的"是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有規(guī)定，取代基的種類和數(shù)目在化學(xué)上可以 實現(xiàn)的基礎(chǔ)上可以是任意的。
[0064] 當(dāng)任何變量(例如R)在化合物的組成或結(jié)構(gòu)中出現(xiàn)一次以上時，其在每一種情況 下的定義都是獨立的。因此，例如，如果一個基團(tuán)被0-2個R所取代，則所述基團(tuán)可以任選地 至多被兩個R所取代，并且每種情況下的R都有獨立的選項。此外，取代基和/或其變體的組 合只有在這樣的組合會產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物的情況下才是被允許的。
[0065] 當(dāng)一個取代基的鍵可以交叉連接到一個環(huán)上的兩個原子時，這種取代基可以與這 個環(huán)上的任意原子相鍵合。當(dāng)所列舉的取代基中沒有指明其通過哪一個原子連接到化學(xué)結(jié) 構(gòu)通式中包括但未具體提及的化合物時，這種取代基可以通過其任何原子相鍵合。取代基 和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物的情況下才是被允許的。
[0066] 烷基和雜烷基原子團(tuán)（包括通常被稱為亞烷基、鏈烯基、亞雜烷基、雜烯基、炔基、 環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烯基和雜環(huán)烯基的那些基團(tuán)）的取代基一般被稱為"烷基取代基"，它 們可以選自但不限于下列基團(tuán)中的一個或多個：-1?'、-(?'、=〇、=冊'、=1(?'、-·'!?"、-SR'、鹵素、-SiR'R"R" '、0C(0)R'、-C(0)R'、-⑶2R'、_C0NR'R"、-0C(0)NR'R"、-NR"C(0)R'、 NR'C(0)NR"R" '、-NR"C(0)2R'、_NR""，-C(NR'R"R" '）=NR""、NR""C(NR'R"）=NR" '、-S(0) R '、-S (0) 2R '、-S (0) 2NR ' R"、NR" S02R '、-CN、-N02、-N3、-CH( Ph) 2和氟代（CrC4)烷基，取代基的 數(shù)目為0~(2m'+l)，其中m'是這類原子團(tuán)中碳原子的總數(shù)。1^、1?"、礦'、1?""和礦"'各自獨立 地優(yōu)選氫、被取代或未被取代的雜烷基、被取代或未被取代的芳基(例如被1~3個鹵素取代 芳基）、被取代或未被取代的烷基、烷氧基、硫代烷氧基基團(tuán)或芳烷基。當(dāng)本發(fā)明的化合物包 括一個以上的R基團(tuán)時，例如，每一個R基團(tuán)是獨立地加以選擇的，如同當(dāng)存在一個以上的 尺^'^""和礦"'基團(tuán)時的每個這些基團(tuán)名^和礦附著于同一個氮原子時沱們可與 該氮原子結(jié)合形成5-，6_或7-元環(huán)。例如，-NR4 "意在包括但不僅限于1-吡咯烷基和4-嗎啉 基。根據(jù)上述關(guān)于取代基的討論中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，術(shù)語"烷基"意在包括碳原子 鍵合于非氫基團(tuán)所構(gòu)成的基團(tuán)，如鹵代烷基（例如-CF 3、-CH2CF3)和?；?例如-c(o)ch3、-c (0)CF 3、-C(0)CH20CH3等）。與烷基原子團(tuán)所述取代基相似，芳基和雜芳基取代基一般統(tǒng)稱為 "芳基取代基"，選自例如-R'、-〇R'、-NR'R"、-SR'、-鹵素，-3丨1?'礦礦'、0(：(0)1?'、-(：(0)1?'、-C02R'、-CONR'R"、-0C(0)NR'R"、-NR"C(0)R'、NR'C(0)NR"R" '、-NR"C(0)2R'、-NR""，-C(NR' R"R" '）=NR""、NR""C(NR'R"）=NR" '、-S(0)R'、-S(0)2R'、-S(0)2NR'R"、NR"S02R'、_CN、_ 勵2、-犯、-〇1(?11)2、氟((：1-〇4)烷氧基和氟((： 1-〇4)烷基等，取代基的數(shù)量為0到芳香環(huán)上開放 化合價的總數(shù)之間；其中R'、R"、R" '、R""和R"" '獨立地優(yōu)選自氫、被取代或未被取代的烷 基、被取代或未被取代的雜烷基、被取代或未被取代的芳基和被取代或未被取代的雜芳基。 當(dāng)本發(fā)明的化合物包括一個以上的R基團(tuán)時，例如，每個R基團(tuán)是獨立地加以選擇的，如同當(dāng) 存在一個以上R'、R"、R" '、R""和R"" '基團(tuán)時的每個這些基團(tuán)。
[0067] 芳基或雜芳基環(huán)的相鄰原子上的兩個取代基可以任選地被通式為^⑶）-(CRR '）q-U-的取代基所取代，其中T和U獨立地選自-NR-、-0-、CRf -或單鍵，q是0到3的整 數(shù)。作為替代選擇，芳基或雜芳基環(huán)的相鄰原子上的兩個取代基可以任選地被通式為-A (CH2)r B-的取代基所取代，其中A和B獨立的選自-CRR'-、-0-、-NR-、-S-、-S(0)-、S(0)2-、-S(0) 2NR'_或單鍵，r是1~4的整數(shù)。任選地，由此形成的新環(huán)上的一個單鍵可以替換為雙 鍵。作為替代選擇，芳基或雜芳基環(huán)的相鄰原子上的兩個取代基可以任選地被通式為-A (CH2)r B-的取代基所取代，其中s和d分別獨立的選自0~3的整數(shù)，X是-〇-、-NR'、-S-、-S (0)-、-S(0)2-或-S(0)2NR'-。取代基R、R'、R"和R" '分別獨立地優(yōu)選自氫和被取代或未被取 代的(&_0〇烷基。
[0068] 除非另有規(guī)定，術(shù)語"鹵代素"或"鹵素"本身或作為另一取代基的一部分表示氟、 氯、溴或碘原子。此外，術(shù)語"鹵代烷基"意在包括單鹵代烷基和多鹵代烷基。例如，術(shù)語"鹵 代(Q-C4)烷基"意在包括但不僅限于三氟甲基、2,2,2_三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等 等。
[0069]鹵代烷基的實例包括但不僅限于：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。 "烷氧基"代表通過氧橋連接的具有特定數(shù)目碳原子的上述烷基。CH烷氧基包括ChChG、 C4、CdPC6的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正 丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。"環(huán)烷基"包括飽和環(huán)基，如環(huán)丙基、環(huán) 丁基或環(huán)戊基。3-7環(huán)烷基包括C 3、C4、C5、C6和C7環(huán)烷基。"鏈烯基"包括直鏈或支鏈構(gòu)型的烴 鏈，其中該鏈上任何的穩(wěn)定位點上存在一個或多個碳-碳雙鍵，例如乙烯基和丙烯基。
[0070] 術(shù)語"，或"鹵素"是指氟、氯、溴和碘。
[0071] 本文所用術(shù)語"雜原子"包括碳(C)和氫(H)以外的原子，例如包括氧(0)、氮(N)、硫 (3)、硅說）、鍺(66)、錯以1)和硼(8)等。
[0072] 除非另有說明，術(shù)語"雜"，"雜原子"或"雜自由基"（即自由基含雜原子），包括除碳 (C)和氫(H)外的原子，也包含上述雜原子的自由基。例如包括氧(0)、氮(N)、硫(S)、硅(Si)、 鍺(Ge)、鋁(A1)和硼(B)等，還包括任意取代的-C(=0)N(H)-、-N(H)-、-C(=NH)-、-S(=0) 2N(H)-,or-S(=0)N(H)-〇
[0073] "環(huán)"表示被取代或未被取代的環(huán)烷基、被取代或未被取代的雜環(huán)烷基、被取代或 未被取代的芳基或被取代或未被取代的雜芳基。所謂的環(huán)包括稠環(huán)。環(huán)上原子的數(shù)目通常 被定義為環(huán)的元數(shù)，例如，"5~7元環(huán)"是指環(huán)繞排列5~7個原子。除非另有規(guī)定，該環(huán)任選 地包含1~3個雜原子。因此，"5~7元環(huán)"包括例如苯基吡啶和哌啶基；另一方面，術(shù)語"5~7 元雜環(huán)烷基環(huán)"包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。術(shù)語"環(huán)"還包括含有至少一個環(huán)的環(huán) 系，其中的每一個"環(huán)"均獨立地符合上述定義。
[0074] 術(shù)語"雜環(huán)"或"雜環(huán)基"意指穩(wěn)定的單環(huán)或雙環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)，它們可以是飽和的、 部分不飽和的或不飽和的（芳族的），它們包含碳原子和1、2、3或4個獨立地選自N、0和S的環(huán) 雜原子，其中上述任意雜環(huán)可以稠合到一個苯環(huán)上形成雙環(huán)。氮和硫雜原子可任選被氧化 (即N0和S(0)p)。氮原子可以是被取代的或未取代的（即N或NR，其中R是Η或本文已經(jīng)定義過 的其他取代基）。該雜環(huán)可以附著到任何雜原子或碳原子的側(cè)基上從而形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。如 果產(chǎn)生的化合物是穩(wěn)定的，本文所述的雜環(huán)可以發(fā)生碳位或氮位上的取代。雜環(huán)中的氮原 子任選地被季銨化。一個優(yōu)選方案是，當(dāng)雜環(huán)中S及0原子的總數(shù)超過1時，這些雜原子彼此 不相鄰。另一個優(yōu)選方案是，雜環(huán)中S及0原子的總數(shù)不超過1。如本文所用，術(shù)語"芳族雜環(huán) 基團(tuán)"或"雜芳基"意指穩(wěn)定的5、6、7元單環(huán)或雙環(huán)或7、8、9或10元雙環(huán)雜環(huán)基的芳香環(huán)，它 包含碳原子和1、2、3或4個獨立地選自Ν、0和S的環(huán)雜原子。氮原子可以是被取代的或未取代 的（即Ν或NR，其中R是Η或本文已經(jīng)定義過的其他取代基）。氮和硫雜原子可任選被氧化（即 Ν0和S(0)p)。值得注意的是，芳香雜環(huán)上S和0原子的總數(shù)不超過1。橋環(huán)也包含在雜環(huán)的定 義中。當(dāng)一個或多個原子（即C、0、N或S)連接兩個不相鄰的碳原子或氮原子時形成橋環(huán)。優(yōu) 選的橋環(huán)包括但不限于：一個碳原子、兩個碳原子、一個氮原子、兩個氮原子和一個碳-氮 基。值得注意的是，一個橋總是將單環(huán)轉(zhuǎn)換成三環(huán)。橋環(huán)中，環(huán)上的取代基也可以出現(xiàn)在橋 上。
[0075] 雜環(huán)化合物的實例包括但不限于：吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯 并巰基呋喃基、苯并巰基苯基、苯并惡唑基、苯并惡唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并 四唑基、苯并異惡唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH_咔唑基、咔啉基、苯并二 氫吡喃基、色烯、噌啉基十氫喹啉基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、二氫呋喃并[2，3-b ]四氫呋喃 基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、二氫吲哚基、中氮 茚基、吲哚基、3H-吲哚基、isatino基、異苯并呋喃基、吡喃、異吲哚基、異二氫吲哚基、異吲 噪基、Π 引噪基、異陸琳基、異卩莖唑基、異惡唑基、亞甲^氧基苯基、嗎琳基、奈陡基，八氣異陸 啉基、惡二唑基、1，2，3-惡二唑基、1，2，4-惡二唑基、1，2，5-惡二唑基、1，3，4-惡二唑基、惡 唑烷基、惡唑基、異惡唑基、羥吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪、吩噻嗪、苯并黃嘌呤 基、酚惡嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡 喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并惡唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、 吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、吡唑基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹 嗪基、喹喔啉基、奎寧環(huán)基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基，6H-1，2,5-噻 二嗪基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻 唑基、異噻唑基噻吩基、噻吩基、噻吩并惡唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪 基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，5-三唑基、1，3，4-三唑基和咕噸基。還包括稠環(huán)和螺 環(huán)化合物。
[0076] 除非另有規(guī)定，術(shù)語"烴基"或者其下位概念（比如烷基、烯基、炔基、苯基等等)本 身或者作為另一取代基的一部分表示直鏈的、支鏈的或環(huán)狀的烴原子團(tuán)或其組合，可以是 完全飽和的、單元或多元不飽和的，可以是單取代、二取代或多取代的，可以包括二價或多 價原子團(tuán)，具有指定數(shù)量的碳原子(如Ci-Cn)表示1至10個碳）。"烴基"包括但不限于脂肪烴 基和芳香烴基，所述脂肪烴基包括鏈狀和環(huán)狀，具體包括但不限于烷基、烯基、炔基，所述芳 香烴基包括但不限于6-12元的芳香烴基，例如苯、萘等。在一些實施例中，術(shù)語"烷基"表示 直鏈的或支鏈的原子團(tuán)或它們的組合，可以是完全飽和的、單元或多元不飽和的，可以包括 二價和多價原子團(tuán)。飽和烴原子團(tuán)的實例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁 基、叔丁基、異丁基、仲丁基、異丁基、環(huán)己基、（環(huán)己基）甲基、環(huán)丙基甲基，以及正戊基、正己 基、正庚基、正辛基等原子團(tuán)的同系物或異構(gòu)體。不飽和烷基具有一個或多個雙鍵或三鍵， 其實例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、巴豆基、2-異戊烯基、2-(丁二烯基）、2,4_ 戊二烯基、3-( 1，4_戊二烯基）、乙炔基、1-和3-丙炔基，3-丁炔基，以及更高級的同系物和異 構(gòu)體。
[0077] 除非另有規(guī)定，術(shù)語"雜烴基"或者其下位概念(比如雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜芳 基等等)本身或者與另一術(shù)語聯(lián)合表示穩(wěn)定的直鏈的、支鏈的或環(huán)狀的烴原子團(tuán)或其組合， 有一定數(shù)目的碳原子和至少一個雜原子組成。在一些實施例中，術(shù)語"雜烷基"本身或者與 另一術(shù)語聯(lián)合表示穩(wěn)定的直鏈的、支鏈的烴原子團(tuán)或其組合物，有一定數(shù)目的碳原子和至 少一個雜原子組成。在一個典型實施例中，雜原子選自Β、0、Ν和S，其中氮和硫原子任選地被 氧化，氮雜原子任選地被季銨化。雜原子Β、0、Ν和S可以位于雜烴基的任何內(nèi)部位置(除該烴 基基附著于分子其余部分的位置之外）。實例包括但不限于-〇1 2-〇12-〇-〇13、-〇12-〇12-順-CH 3、-CH2-CH2-N( CH3) -CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2、-S (0) -CH3、-CH2-CH2-S (0) 2-CH3、-CH= CH-〇-CH3、-CH2-CH = N-〇CH3和-CH = CH-N(CH3) -CH3。至多兩個雜原子可以是連續(xù)的，例如- ch2-nh-och3〇
[0078] 術(shù)語"烷氧基"、"烷氨基"和"烷硫基"（或硫代烷氧基）屬于慣用表達(dá)，是指分別通 過一個氧原子、氨基或硫原子連接到分子的其余部分的那些烷基基團(tuán)。
[0079] 除非另有規(guī)定，術(shù)語"環(huán)烴基"、"雜環(huán)烴基"、"環(huán)烴雜基"或者其下位概念(比如芳 基、雜芳基、芳雜基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷雜基、環(huán)烯基、雜環(huán)烯基、環(huán)烯雜基、環(huán)炔基、雜 環(huán)炔基、環(huán)炔雜基等等)本身或與其他術(shù)語聯(lián)合分別表示環(huán)化的"烴基"、"雜烴基"或"烴雜 基"。此外，就雜烴基或雜環(huán)烴基(比如雜烷基、雜環(huán)烷基)而言，雜原子可以占據(jù)該雜環(huán)附著 于分子其余部分的位置。環(huán)烷基的實例包括但不限于環(huán)戊基、環(huán)己基、1-環(huán)己烯基、3-環(huán)己 烯基、環(huán)庚基等。雜環(huán)基的非限制性實例包括1-(1，2,5,6_四氫吡啶基）、1_哌啶基、2-哌啶 基，3-哌啶基、4-嗎啉基、3-嗎啉基、四氫呋喃-2-基、四氫呋喃吲哚-3-基、四氫噻吩-2-基、 四氫噻吩-3-基，1-哌嗪基和2-哌嗪基。
[0080] 除非另有規(guī)定，術(shù)語"芳基"表示多不飽和的芳族烴取代基，可以是單取代、二取代 或多取代的，它可以是單環(huán)或多環(huán)(優(yōu)選1至3個環(huán)），它們稠合在一起或共價連接。術(shù)語"雜 芳基"是指含有一至四個雜原子的芳基(或環(huán)）。在一個示范性實例中，雜原子選自Β、Ν、0和 S，其中氮和硫原子任選地被氧化，氮原子任選地被季銨化。雜芳基可通過雜原子連接到分 子的其余部分。芳基或雜芳基的非限制性實施例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-聯(lián)苯基、1-吡 咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-惡唑基、4-惡唑基、2-苯基-4-惡唑基、5-惡唑基、3-異惡唑基、4-異惡唑基、5-異惡唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶 基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-異喹啉基、5-異喹啉基、 2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述任意一個芳基和雜芳基環(huán)系的取代基 選自下文所述的可接受的取代基。
[0081] 為簡便起見，芳基在與其他術(shù)語聯(lián)合使用時(例如芳氧基、芳硫基、芳烷基)包括如 上定義的芳基和雜芳基環(huán)。因此，術(shù)語"芳烷基"意在包括芳基附著于烷基的那些原子團(tuán)（例 如芐基、苯乙基、吡啶基甲基等），包括其中碳原子(如亞甲基）已經(jīng)被例如氧原子代替的那 些烷基，例如苯氧基甲基、2-吡啶氧甲基3-(1-萘氧基)丙基等。
[0082] 術(shù)語"離去基團(tuán)"是指可以被另一種官能團(tuán)或原子通過取代反應(yīng)(例如親和取代反 應(yīng))所取代的官能團(tuán)或原子。例如，代表性的離去基團(tuán)包括三氟甲磺酸酯;氯、溴、碘;磺酸酯 基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、對溴苯磺酸酯、對甲苯磺酸酯等;酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙 酰氧基等等。
[0083]術(shù)語"保護(hù)基"包括但不限于"氨基保護(hù)基"、"羥基保護(hù)基"或"巰基保護(hù)基"。術(shù)語 "氨基保護(hù)基"是指適合用于阻止氨基氮位上副反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)。代表性的氨基保護(hù)基包括 但不限于：甲酰基；?；珂溚轷；ㄈ缫阴；⑷纫阴；蛉阴；?；烷氧基羰 基，如叔丁氧基羰基(Boc);芳基甲氧羰基，如節(jié)氧羰基(Cbz)和9-荷甲氧羰基(Fmoc);芳基 甲基，如芐基(Bn)、三苯甲基(Tr)、l，l-二-(V-甲氧基苯基）甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅 烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。術(shù)語"羥基保護(hù)基"是指適合用于阻止羥基 副反應(yīng)的保護(hù)基。代表性羥基保護(hù)基包括但不限于:烷基，如甲基、乙基和叔丁基；?；?，例 如鏈烷酰基(如乙?；?；芳基甲基，如芐基(Bn)，對甲氧基芐基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二 苯基甲基（二苯甲基，DPM);甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基（TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基 (TBS)等等。
[0084] 本發(fā)明所使用的所有溶劑是市售的，無需進(jìn)一步純化即可使用。反應(yīng)一般是在惰 性氮氣下、無水溶劑中進(jìn)行的。質(zhì)子核磁共振數(shù)據(jù)記錄在Bruker Avance III 400(400MHz) 分光儀上，化學(xué)位移以四甲基硅烷低場處的(ppm)表示。質(zhì)譜是在安捷倫1200系列加6110(& 1956A)上測定。LC/MS或Shimadzu MS包含一個DAD:SPD-M20A(LC)和Shimadzu Micromass 2020檢測器。質(zhì)譜儀配備有一個正或負(fù)模式下操作的電噴霧離子源(ESI)。
[0085] 本發(fā)明采用下述縮略詞：aq代表水;DCM代表二氯甲烷;PE代表石油醚;DMF代表N， N-二甲基甲酰胺;DMS0代表二甲基亞砜;EtOAc代表乙酸乙酯;EtOH代表乙醇;MeOH代表甲 醇；Cbz代表芐氧羰基，一種胺保護(hù)基;Boc代表叔丁基氧羰基，一種胺保護(hù)基;HOAc代表乙 酸;NaBH(0Ac) 3代表三乙酰氧基硼氫化鈉;r.t代表室溫;THF代表四氫呋喃;B〇C20代表二叔 丁基二碳酸酯;TFA代表三氟乙酸;DIPEA代表二異丙基乙胺;Pd(dppf)Cl 2代表[l，"-雙(二 苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀（II);P0C13代表三氯氧磷;NaH代表氫化鈉;LAH代表氫化鋁鋰； Pd (OAc) 2代表鈀（II)乙酸鹽;Pd2 (dba) 3代表三(二亞芐基丙酮)二鈀;Pd (PPh3) 4代表四（三苯 基膦)鈀;Et3SiH代表三乙基硅烷;PPh3代表三苯基膦;Xantphos代表4，5-雙(二苯基膦基)-9,9_二甲基;MeS0 3H代表甲磺酸;Xphos代表2-二環(huán)己基膦基-2'三異丙基聯(lián)苯;勞 森試劑代表2，4-二(4-甲氧基苯基)-1，3-二硫雜-2，4-二磷烷-2，4-二硫化物;NBS代表N-溴 代丁二酰亞胺;t-BuOK代表叔丁醇鉀。
[0086] 化合物經(jīng)手工或者GheraDra.w?軟件命名，市售化合物采用供應(yīng)商目錄名稱。
[0087] 用配有Shimadzu SIL-20A自動進(jìn)樣器和日本島津DAD:SPD-M20A探測器的島津 LC20AB系統(tǒng)進(jìn)行高效液相色譜分析，采用Xtimate C18(3m填料，規(guī)格為2. lx 300mm)色譜 柱。0-60AB_6分鐘的方法:應(yīng)用線性梯度，以100 % A (A為0.0675 % TFA的水溶液)開始洗脫， 并以60 % B (B為0.0625 % TFA的MeCN溶液)結(jié)束洗脫，整個過程為4.2分鐘，然后以60 % B洗脫 1分鐘。將色譜柱再平衡0.8分鐘達(dá)到100:0，總運行時間為6分鐘。10-80AB_6分鐘的方法:應(yīng) 用線性梯度，以90%A(A為0.0675%TFA的水溶液)開始洗脫，并以80%B(B為0.0625%TFA的 乙腈溶液)結(jié)束洗脫，整個過程為4.2分鐘，然后以80%B洗脫1分鐘。將色譜柱再平衡0.8分 鐘達(dá)到90:10，總運行時間為6分鐘。柱溫為50°(：，流速為0.8 111171^11。二極管陣列檢測器掃描 波長為 200-400nm〇
[0088]在Sanpont-group的硅膠GF254上進(jìn)行薄層色譜分析(TLC)，常用紫外光燈照射檢 出斑點，在某些情況下也采用其他方法檢視斑點，在這些情況下，用碘（l〇g硅膠中加入約lg 碘并徹底混合而成）、香草醛（溶解大約lg香草醛于l〇〇mL 10%H2S〇4中制得）、茚三酮（從 Aldrich購得）或特殊顯色劑（徹底混合(NH4)6M〇7〇24 · 4H20、5g(NH4)2Ce(IV)(N03)6、450mL 出0和5〇1111^濃!123〇4而制得)展開薄層板，檢視化合物。采用31:;[11，￥.(].;1^1111，]\1.;311(11;[1:瓜， Μ· Journal of Organic Chemistry，1978,43,2923_2925·中所公開技術(shù)的類似方法，在 Silicycle的40-63μπι(230-400目）硅膠上進(jìn)行快速柱色譜?？焖僦V或薄層色譜的常用 溶劑是二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/甲醇和己烷/乙酸乙酯的混合物。
[0089] 在Gilson-281Prep LC 322系統(tǒng)上采用吉爾森UV/VIS-156探測器進(jìn)行制備色譜分 析，所米用的色譜柱是Agella Venusil ASB Prep C18,5m、150x 21.2mm;Phenomenex Gemini C18、5m、150x 30mm；Boston Symmetrix C18,5m、150x 30mm;或者Phenomenex Synergi C18、4m、150x 30mm。在流速約為25mL/min時，用低梯度的乙腈/水洗脫化合物，其 中水中含有〇.〇5%11(：1、0.25%!10)0!1或0.5%順3*112〇，總運行時間為8-15分鐘。
[0090] 本發(fā)明涉及一類的新型螺環(huán)芳基砜化合物是ALK和其突變體的抑制劑，可以用來 治療癌癥和其他疾病。本發(fā)明的這種新型螺芳砜化合物展示了對ALK，ALK突變體和EGFR突 變體酶更好的抑制活性；同時體內(nèi)藥效方面，在ALK驅(qū)動患者來源的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 PDX模型中展示了比參考化合物L(fēng)DK378更好的活性，因此本發(fā)明可能為ALK酶異常引起疾病 的患者提供更有效的治療。
【具體實施方式】
[0091] 在一些實施例中，具有式(I)的化合物可以按照方案A中所述的合成方法制備。
[0092] 方案A
[0093]
[0094] 芳基砜類化合物(A1)與2，4，5-三氯嘧啶(A2)在溶劑中，如THF，DMF中處理，在堿的 存在下，如氫化鈉，碳酸鉀，反應(yīng)得到嘧啶芳基砜類化合物(A3)?；衔?A3)在溶劑(如叔丁 醇）中用酸(如甲烷磺酸)催化可以與芳基胺A6反應(yīng)得到化合物A7 A7可進(jìn)一步反應(yīng)，如通過 還原胺化，得到式（I)的化合物。該螺環(huán)胺類化合物A4可以購買，或者可以通過方案B來制 備。A4可以通過取代反應(yīng)在溶劑如二甲基甲酰胺中，制備化合物A5，A5通過加氫還原得到芳 基胺類化合物A6.
[0095] 方案B
[0096]
[0097] 方案B為螺環(huán)胺類化合物B5(A4)的一般合成方法。酮B1與氰基乙酸酯反應(yīng)，得到螺 環(huán)化合物B2,水解得到B3,然后M，用還原劑如氫化鋁鋰，還原Μ得到B5;B5可以與方案A中 的芳基氯偶聯(lián)得到A5。
[0098] 方案 C
[0099]
[0100] 方案c是制備式（I)化合物的一般合成方法，其中T1是CH。醛的Cl化合物與甲基乙 烯基酮，在堿如Κ0Η作用下反應(yīng)，得到酮C2,氫化得到C3,三氟甲磺酸酯化生成C4;然后與氨 基芳基或硝基芳硼酸偶聯(lián)得到C5,還原得到化合物C6;然后與化合物A4偶聯(lián)，得到式I的化 合物C7(I)，或脫掉保護(hù)基后，進(jìn)一步還原胺化得到式I的化合物C7(I)。
[0101] 本發(fā)明現(xiàn)在進(jìn)一步通過實施例描述。下面給出的實施例僅用于說明目的，而不是 僅限于此發(fā)明。本發(fā)明的化合物可以用有機合成領(lǐng)域中許多已知的方法來制備。本發(fā)明的 實施例可以使用下面描述的方法來合成，以及有機合成化學(xué)領(lǐng)域中已知的合成方法，或在 其基礎(chǔ)上通過改進(jìn)的方法。優(yōu)選的方法包括，但不限于以下描述方法。
【具體實施方式】
[0102]
[0103] 為了更詳細(xì)地說明本發(fā)明，給出下列實例，但本發(fā)明的范圍并非限定于此。
[0104] 實施例1
[0105] 化合物1:5-氯N4-(2-(異丙基磺酰基)苯基)-N2-(2-甲氧基-4-(9-甲基_3,9_二氮 雜螺[5.5 ] 十一碳-3-基)苯基)嘧啶-2，4二胺
[0106]
[0107] 實施例ΙΑ
[0108] 9-芐基-2，4-二氧代-3，9-二氮雜螺[5 · 5 ] ^烷 _1，5_ 二腈
[0109]
[0110] 在5-8°C下，醋酸銨（2.04克，26.42毫摩爾，0.10當(dāng)量）加入到氰基乙酸酯（90克， 796毫摩爾，3.00當(dāng)量）的甲醇溶液（100mL)中；然后1-芐基哌啶4-酮(50克，0.264摩爾)加入 到上述反應(yīng)混合物中；然后，在10°C以下，氨水(46.3克，370毫摩爾，1.40當(dāng)量)加入到反應(yīng) 混合物中，將該混合物在0-5 °C下攪拌1小時。然后反應(yīng)混合物升溫至20 °C (室溫），并攪拌20 小時。LCMS顯示生成產(chǎn)物。水（100mL)加入到混合物中，并加熱至55°C。加入濃鹽酸（12M)將 pH調(diào)至4,并保持溫度不超過70°C。然后將反應(yīng)液冷卻至10°C，攪拌30分鐘后過濾。濾餅用水 洗滌，放置空氣中干燥，得到標(biāo)題化合物（66克，77 %產(chǎn)率）為白色固體上01^^51)(0-30AB)：m/z：323.0[M+l].
[0川]實施例1B
[0112] 1/-芐基-3,7-二氮雜螺[二環(huán)[3.3.1]壬烷-9,4/-哌啶]-2,4,6,8-四酮
[0113]
[0114] 實施例1A(1 · 00克，3 · 10毫摩爾，1 · 00當(dāng)量）的硫酸（88%，4mL)混合液在60°C下攪 拌4小時。然后向反應(yīng)液中加入水（1.4mL )，并加熱到100 °C攪拌1小時。再向反應(yīng)混合物中加 入水(5mL)，并冷卻至10 °C，并在10 °C下攪拌30分鐘，然后過濾。濾餅用冷水(5mL)洗滌并干 燥，得到標(biāo)題化合物（1.11克，粗品）為白色固體。4 NMR(400MHz，CDC13): 11.87(s，2H)，9.56 (br.s.，lH)，7.47(s，5H)，4.34(d，J=4.4Hz，2H)，3.75(br.s.，lH)，3.22(br.s.，4Η)，1·88 (br.s.,4H).
[0115] 實施例1C
[0116] 9-芐基-3，9-二氮雜螺[5.5 ] ^烷 _2，4_ 二酮
[0117]
123456 在15°C下，向?qū)嵤├?B(1.10克，3.22毫摩爾，1.00當(dāng)量）的燒瓶中加入NaOH水溶液 2 (5N，5mL)，然后，將混合物升溫至70°C并攪拌4小時。將混合液冷卻至45°C，然后將濃鹽酸 3 (12N，~1.5mL)慢慢地加入，直到溶液的pH值為7左右。再將混合物加熱至70-75°C，然后將 4 濃HC1(12N，~lmL)逐滴加入，以控制二氧化碳釋放的速度，直到pH值調(diào)至3-4左右。將混合 5 物加熱到70-75 °C并進(jìn)一步反應(yīng)1小時。將所得懸浮液冷卻至10 °C并攪拌0.5小時。將固體過 6 濾并用水洗滌（25mL)中。將固體干燥，得到標(biāo)題化合物（380毫克，1.40毫摩爾，2步產(chǎn)率 45%)為白色固體。4 Mffi(400MHz，CDCl3) :10.89(s，lH)，10.60(br.s，lH)，7.57(br.s.， 2H)，7.44(br.s.，3H)，4.28(br.s.，2H)，3.11(br.s.，4H)，2.76(br.s.，2H)，2.42(br.s.， 2H)，2.00-1.48(m，4H).
[0119] 實施例1D
[0120] 3-芐基-3,9-二氮雜螺[5.5] ^烷
[0121]
[0122] 在0-10°C下，向?qū)嵤├?C( 10.6克，38.92毫摩爾，1.00當(dāng)量）的四氫呋喃溶液 (120mL)中加入氫化鋁鋰（5.17克，136.22毫摩爾，3.50當(dāng)量），然后將混合液在65°C下攪拌 下3小時。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合液冷卻至10 °C，并加入水(5.2mL)淬滅反應(yīng)，接著加入氫 氧化鈉水溶液（lN，5.2mL)。將混合物過濾，濾液濃縮，得到標(biāo)題化合物(7.40克，30.28毫摩 爾，77.81 %產(chǎn)率)為淡黃色油狀物。1H NMR(400MHz，CDC13) :7.34-7.27(m，5H)，3.52(s，2H)， 2·88-2.73(m，4H)，2·46-2.35(m，4H)，1.58-1.51(m，4H)，1·48-1.39(m，4H).
[0123] 實施例1E
[0124] 叔丁酯3，9-二氮雜螺[5 · 5 ]十一烷-3-羧酸甲酯
[0125]
123 向?qū)嵤├?D( 500毫克，2.05毫摩爾)和Boc20(450毫克，2.06毫摩爾）的甲醇混合液 中加入三乙胺(311毫克，3.08毫摩爾），然后將混合物在20-30 °C下攪拌16小時。將反應(yīng)混合 物濃縮，殘余物用乙酸乙酯（20mL)稀釋，并用水（15mL X 2)和鹽水(20mL)洗滌，將有機層用 無水硫酸鈉干燥，濃縮。將粗中間體溶于乙醇（15mL)和醋酸(2mL)中，然后加入氫氧化鈀/碳 (〇. 1克），并將該混合物在氫氣（50Psi)下反應(yīng)20小時。將混合物過濾，濾液濃縮，得到標(biāo)題 化合物的乙酸鹽(320毫克，1.26毫摩爾，61.37%產(chǎn)率）。 2 實施例1F 3 叔丁酯9-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸甲酯
[0129]
[0130] 將實施例1D(150毫克，0.589毫摩爾）溶于4.0mL DMS0中，并加入4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯（131毫克，0.766毫摩爾）和碳酸鉀(244毫克，1.77毫摩爾）。氮氣保護(hù)下，反應(yīng)液90 °C攪拌16小時。冷卻至室溫，加入60mL二氯甲烷稀釋，有機相用水（15ml X 3)，飽和食鹽水 (15ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥并濃縮，得到標(biāo)題化合物（250毫克，收率:62%)為黃色油狀 物。 1H NMR(400MHz，CD30D):S，7.95(d，J = 9.2Hz，lH)，6.55(dd，J = 9.6,2.4Hz，lH)，6.48(d， J=2.4Hz，1H)，3.95(s，3H)，3.56-3.41(m，8H)，1.72-1.65(m，4H)，1.58-1.50(m，4H)，1.48 (s，9H).
[0131] 實施例1G
[0132] 3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[ 5·5]^烷
[0133]
[0134] 將實施例1?(0.78，1.73111111〇1)溶于41^三氟乙酸和41^二氯甲烷的混合溶液中，16 °C下攪拌1小時。LCMS顯示反應(yīng)完成。反應(yīng)液加入50mL飽和碳酸鈉溶液，并加入(50mLX2)二 氯甲烷萃取。有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物(〇.7g，粗品），為黃色 固體· LCMS(ESI) (0-60AB) :m/z: 306 · 0[M+1 ].
[0135] 實施例1H
[0136] 3-( 3-甲氧基-4-硝基苯基)-9-甲基-3,9-二氮雜螺[5.5]^烷
[0137]
[0138] 將實施例16(0.78,2.3111111〇1)溶于1〇1111四氫呋喃溶液中，16°(：下加入37%的甲醛水 溶液(207mg，6.9mmol)，并攪拌0.5小時。然后加入（1 · 5g，6.9mmol)硼氫化鈉繼續(xù)攪拌12小 時。LCMS顯示反應(yīng)完成。反應(yīng)液用60ml DCM稀釋，過濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物(0.6g，收率： 82% )，為黃色油狀物L(fēng)CMS(ESI) (0-60AB) :m/z: 320 · 2[M+1 ].
[0139] 實施例1I
[0140] 2-甲氧基-4-(9-甲基-3,9-二氮雜螺[5.5] ^碳_3_基)苯胺
[0141]
[0142] 向?qū)嵤├?H(0.6克，1.9毫摩爾）的乙醇-水(12毫升)溶液中加入鐵粉(1.1克，18.8 毫摩爾)和氯化銨（1.1克，18.8毫摩爾）。將混合物在80 °C下攪拌2小時。TLC(二氯甲烷：甲醇 = 6:1)顯示反應(yīng)完成。將混合物過濾并濃縮。將所得到的殘余物通過制備型TLC純化(二氯 甲烷：甲醇=6:1)，得到了標(biāo)題化合物（400mg，產(chǎn)率74%)為綠色固體1H NMR(400MHz， CD30D):S，6.72(d，J = 8.4Hz，lH)，6.64(d，J = 2.0Hz，lH)，6.51(d，J = 8.4Hz，lH)，3.86(s， 3H)，3.08-2.96(m，4H)，2.58-2.45(m，4H)，2.32(s，3H)，l.75-1.52(m，8H).
[0143] 化合物1
[0144] 5-氯N4-(2-(異丙基磺?；┍交?N2-(2-甲氧基-4-(9-甲基-3,9-二氮雜螺 [5.5H^一碳-3-基)苯基)嘧啶-2,4二胺
[0145；
[0146] 將實施例11 (200mg，0.69mmo 1)和2，5-二氯-N-( 2-(異丙基磺?；?苯基)嘧啶-4-胺(263mg，0.76mmo 1)加入5毫升叔丁醇中，攪拌下加入甲燒磺酸(399mg，4.15mmo 1)。反應(yīng)液 100 °C下攪拌12小時。LCMS顯示反應(yīng)完成。反應(yīng)混合物通過制備型HPLC (酸性方法)純化，得 到標(biāo)題化合物(221mg，收率:53 % )，為無色油狀物。1H NMR(400MHz，CD30D): δ，8.35 (s，1H)， 8.11(m，lH)，8.07(d，J = 8.0Hz，lH)，7.89(t，J = 8.0Hz，lH)，7.73(d，J = 8.8Hz，lH)，7.68 (t，J=8·0Hz，1H)，7.60(m，lH)，7.28(m，lH)，4.03(s，3H)，3·66-3.82(m，4H)，3.38-3.52(m， 3H)，3.20-3.28(m，2H)，2.94(s，3H)，l ·95-2·46(ι?，6H)，1.78-1.89(m，2H)，1.26(d，J = 6·8Hz，6H)·LCMS(ESI)(5-95AB):m/z:599·2[M+1]·
[0147] 實施例2
[0148] 化合物2:5-氯，2-(2-(二氟甲氧基)-4-(9-甲基- 3,9-二氮雜螺[5.5]^碳-3-基)苯基)-N4-( 2_(異丙基磺?；?苯基)嘧啶-2-，4-二胺
[0149]
123456 實施例2A 2 5-氟-2-硝基苯酚 3
[0152]
4 在0°C下，向攪拌的4-氟-2-甲氧基硝基苯(3克，17.53毫摩爾）的二氯甲烷(30mL) 的溶液中滴加三溴化硼。反應(yīng)液在0 °C下攪拌1.5小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=10:1)顯示 4_氟-2-甲氧基硝基苯消失。將溶液緩慢加入到冰水(100mL)中，并用二氯甲烷(50mLX3)萃 取。將有機相干燥并濃縮，得到標(biāo)題化合物（2.5g，收率90.8 % )為黃色油狀物。1H NMR (400MHz，CDC13):S，10.80(s，1H)，8.16(dd，J = 9.6,5.6Hz，lH)，6.84(dd，J = 9.6,2.4Hz， lH)，6.77-6.67(m，lH). 5 實施例2B 6 2-(二氟甲氧基)-4-氟-1-硝基苯
[0156]
[0157] 在不斷攪拌下，向?qū)嵤├?1A( 2.0克，12.73毫摩爾）的N，N-二甲基甲酰胺(20mL)溶 液中加入ClCF2C00Na(6.9克，44.56毫摩爾）和碳酸鈉（1.62克，15.28毫摩爾）。將反應(yīng)混合 液加熱至90 °C并攪拌16小時。TLC (石油醚：乙酸乙酯=10:1)顯示5-氟-2-硝基苯酚消失。將 反應(yīng)液用乙酸乙酯稀釋（100mL)，并用水(20mLX2)洗滌。有機層干燥并濃縮，得到粗產(chǎn)物， 將其通過硅膠柱純化(石油醚：乙酸乙酯=10:1 )，得到標(biāo)題化合物（1.4g，收率53.1 % )為黃 色油狀物。1H Mffi(400MHz，CDCl3): δ，8· 07-7 ·98(ι?，1H)，7· 17-7 ·05(ι?，2H)，6.65(t，J = 72·0Ηζ，1Η).
[0158] 實施例2C
[0159] 3-(3-(二氟甲氧基)-4-硝基苯基)-9-甲基-3,9-二氮雜螺[5.5]^烷
[0160]
[0161] 將 3-甲基-3，9_ 二氮雜[5.5]^烷（18,5.94謹(jǐn)〇1)、實施例28(1.488,7.13!11111〇1) 和碳酸鉀（2.468，17.82臟〇1)加入2011^乙腈中，混合物90°(：下攪拌16小時?？?：(二氯甲烷： 甲醇= 10:1)顯示原料反應(yīng)完畢。將混合物過濾并濃縮，所得粗品用柱色譜分離(洗脫劑:二 氯甲烷/甲醇=50 :1，20 :1)得到標(biāo)題化合物（1.9g，收率：90 % )為黃色油狀物。1H NMR (400MHz，CD30D)j，8.03-8.06(m，lH)，6.44-6.82(m，3H)，3· 39-3.43(m，3H)，3 ·03-3·07(ι?， lH),2.43-2.49(m,4H),2.33(s,3H)a.61-1.65(m,8H).
[0162] 實施例2D
[0163] 2-(二氟甲氧基)-4-(9-甲基-3,9-二氮雜螺[5.5]十一碳- 3-基)苯胺
[0164]
[0165] 向?qū)嵤├?C(1.9g，5.35mmol)的甲醇（30mL)溶液中，加入鐵粉（2.1g，32.08mmol) 和氯化銨（1.72g，32.08mmo 1)，反應(yīng)混合物在20 °C下攪拌0.5小時。TLC(二氯甲烷：甲醇=10 :1)顯示反應(yīng)完成。將混合物過濾并濃縮，加入30mL飽和碳酸鈉溶液，水相用二氯甲烷(50ml X3)萃取。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物（1.5g，粗品），為棕色油 狀物。1H NMR(400MHz，CD30D):δ，6.28-6.76(m，4H)，3.00-3.03(m，3H)，2.82-2·85(ι?，1H)， 2.43-2.46(m，4H)，2.33(s，3H)，1.57-1.62(m，8H).
[0166] 實施例2E
[0167] 5-氯-N2-(2-(二氟甲氧基)-4-(9-甲基-3,9_ 二氮雜螺[5.5]^碳 _3_ 基)苯基)-N4-( 2-(異丙基磺?；?苯基)嘧啶-2-，4-二胺
[0168]
[0169] 將實施例2D(80mg，0.25mmol)和2,5_二氯-N-(2-(異丙基磺?；?苯基)嘧啶-4-胺 (94mg，0 · 27mmo 1)的叔丁醇(5mL)溶液中，緩慢加入甲燒磺酸(7 lmg，0 · 74mmo 1)，反應(yīng)混合物 在100°C下攪拌12小時。LCMS顯示反應(yīng)完成。反應(yīng)混合物通過Pre-HPLC純化，得到標(biāo)題化合 物（71 .Olmg，收率：11%)為無色油狀物。LCMS(ESI)(5-95AB) :m/z:635.2[M+l]RT: 1.774min/4min.
[0170] 實施例3
[0171] 化合物3:5-氯N4-(2-(異丙基磺?；?苯基)-N2-(2-甲氧基-4-(3-甲基-3-氮雜螺 [5.5] 十一碳-9-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺
[0172]
12345678910111213 實施例3A 2 4-甲?；哙?1-甲酸叔丁酯 3
[0175]
4 在-70°C，氮氣保護(hù)下，向二甲基亞砜(4.37克，46.52毫摩爾）的二氯甲烷(25mL)溶 5 液中滴加草酰氯(5.9克，46.52毫摩爾）的二氯甲烷(75mL)溶液;然后在-70°C下將4-(羥甲 6 基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(5克，23.26毫摩爾）的二氯甲烷(40mL)溶液逐滴加入到上述混合物 7 中。反應(yīng)混合物在-70°C下攪拌15分鐘，逐滴加入三乙胺（11.76克，116.3毫摩爾）到反應(yīng)混 8 合物中。加完后反應(yīng)混合物在_70°C下攪拌1小時，并升溫至15°C。將反應(yīng)混合物倒入水中， 9 并用二氯甲烷(200mL)萃取。將有機層用碳酸氫鈉溶液（100mL)洗滌后，無水硫酸鈉干燥，過 10 濾并濃縮至干。將所得油狀物通過柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯= 10:1至3:1)，得到標(biāo)題 11 化合物(2.4克，產(chǎn)率為48%)為黃色油狀物。1!1匪1?(40010^，0)(：13)3,9.68(8，1!〇,3.98- 12 3.92(m，2H)，2.96-2.91(m，2H)，2.45-2.42(m，lH)，l.89-1.60(m，2H)，l.60-1.54(m，2H)， 13 1.47(s,9H).
[0177] 實施例3B
[0178] 9-氧代-3-氮雜螺[5.5 ]十一碳-7-烯-3-羧酸叔丁酯
[0179]
[0180] 丁-3-烯-2-酮(0.658克，9.39毫摩爾）加入到實施例3A(2克，9.39毫摩爾）的四氫 呋喃（100mL)溶液中。將反應(yīng)混合物冷卻至-5 °C，將氫氧化鉀-乙醇（3摩爾/升，1.57mL，4.7 毫摩爾）溶液在5分鐘內(nèi)逐滴加入到反應(yīng)混合物中。反應(yīng)混合物升溫至15°C并攪拌16小時。 將石油醚（10mL)加入到反應(yīng)混合物中，并將該混合物用鹽水（100mL)洗滌。有機層濃縮，得 到粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)品通過硅膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯= 10:1至2:1)，得到標(biāo)題化合物 (1.12克，產(chǎn)率為45%)為黃色油狀物。1!1匪1?(4001抱，0)(：13)3,6.82((1，了=10抱，1!〇,5.97 (d，J=10Hz，lH)，3.57-3.56(m，2H)，2.50-2.47(m，2H)，2.01-1.97(m，2H)，1.67-1 ·65(ι?， 2H)，1.61-1.59(m，2H)，1.49(s，9H).
[0181] 實施例3C
[0182] 9-氧代-3-氮雜螺[5 · 5] ^烷-3-羧酸叔丁酯
[0183]
[0184] 向?qū)嵤├?B(5.00克，18.84毫摩爾）的甲醇（100mL)溶液中加入鈀/碳(200毫克， 188毫摩爾）。將此懸浮液抽真空并用氫氣置換幾次。反應(yīng)混合物在氫氣（ 18psi)下保持溫 度10-25 °C并攪拌5小時。將反應(yīng)混合物過濾，濾液濃縮。粗產(chǎn)物通過硅膠柱層析純化(石油 醚：乙酸乙酯=2:1 )，得到標(biāo)題化合物(4.78克，17.88毫摩爾，產(chǎn)率為94.9 % )為白色固體。 咕 MMR(400MHz，CDC13) :δ，3·47-3·44(πι，4Η)，2·38-2·35(πι，4Η)，1.81-1.77(m，4H)，1.58-1.56(m，4H)，1.49(s，9H).
[0185] 實施例3D
[0186] 9-(((三氟甲基)磺酰)氧基)-3-氮雜螺[5.5]十一碳-8-烯-3-羧酸叔丁酯
[0187]
在-78°C氮氣保護(hù)下，向?qū)嵤├?C(2克，7.5毫摩爾）的四氫呋喃(2〇!11〇溶液中逐滴 加入二異丙基氨基鋰(2.51，1.22!^，9毫摩爾），加完后，將反應(yīng)混合物攪拌2小時。然后逐滴 加入1，1，1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基）磺?；┘谆酋０罚?.67克，7.48毫摩爾，溶解在 5mL的THF中）到反應(yīng)液中，并在-78°C下攪拌1.5小時。將混合物升溫至10°C攪拌2.5小時，反 應(yīng)混合物用氯化銨溶液(30mL)淬滅，并用乙酸乙酯(50mL X 2)萃取。將有機層用鹽水(50mL) 洗滌，用Na2S04干燥并濃縮，得到殘余物，將其通過硅膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=5: 1)，得到標(biāo)題化合物(2.38，產(chǎn)率為77%)為棕色油狀物。1!1匪1?(4001抱，〇)(：1 3)3,5.71(^ =4·OHz，1H)，3·51-3·45(m，2H)，3·39-3.32(m，2H)，2.37-2.35(m，2H)，2.16-2.09(m，2H)， 1.71-1.67(m,2H)a.48(s,9H).1.45-1.42(m,4H).
[0189] 實施例3E
[0190] 4-溴-2-甲氧基苯胺
[0191]
[0192] 向2-甲氧基苯胺(3克，24 · 36毫摩爾）的乙腈(30mL)溶液中加入N-溴代丁二酰亞胺 (4.34克，24.36毫摩爾），將反應(yīng)混合物在15 °C下攪拌15分鐘。向反應(yīng)混合物中加入亞硫酸 鈉溶液(40mL)淬滅反應(yīng)，將混合物用乙酸乙酯（50ml)萃取;有機層用硫酸鈉干燥，濃縮，得 到粗產(chǎn)物，將其通過硅膠柱層析純化(石油醚:乙酸乙酯= 10:1)得到標(biāo)題化合物(2.7克，產(chǎn) 率55%)為黃色固體。4 NMR(400MHz，CDCl3)j，6.93-6.91(m，2H)，6.62-6.59(dd，J=1.6， 2.0Hz，lH)，3.86(s，lH).
[0193] 實施例3F
[0194] 2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊環(huán)-2-基)苯胺
[0195]
[0196] 向?qū)嵤├?E(500毫克，2.47毫摩爾）的01^0(511^)溶液中加入雙聯(lián)頻那醇硼酸酯 (628.4毫克，2.47毫摩爾），四三苯基膦鈀（150毫克，0.13毫摩爾）和醋酸鉀(485毫克，4.95 毫摩爾），將反應(yīng)混合物在150°C微波下攪拌40分鐘。將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯（50mL)和水 (30mL)稀釋。有機層分離，干燥并濃縮，得到粗品，將其通過硅膠柱層析純化(石油醚：乙酸 乙酯=10 :1)得到標(biāo)題化合物（160毫克，產(chǎn)率為26 % )為黃色油狀物。1H NMR(400MHz， CDCl3):S，7.31(d，J = 8.0Hz，lH)，7.22(s，lH)，6.71(d，J = 8.0Hz，lH)，3.91(s，3H)，1·35 (s，12H).
[0197] 實施例3G
[0198] 9-( 4-氨基-3-甲氧基苯基)-3-氮雜螺[5.5 ]十一碳-8-烯-3-羧酸叔丁酯
[0199]
[0200] 向?qū)嵤├?7D(300毫克，0.75毫摩爾），實施例3F(187毫克，0.75毫摩爾）的二氧六 環(huán)（10mL)溶液中加入Pd(dppf)Cl2(15毫克，0.075毫摩爾）和碳酸鉀(204毫克，1.5毫摩爾）， 將反應(yīng)混合物在110 °C攪拌16小時。將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，濾液濃縮，得到粗產(chǎn)物， 將其通過硅膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯= 3:1)，得到標(biāo)題化合物（llOmg，產(chǎn)率為39%) 為黃色油狀物。LCMS(ESI) (5-95AB) :m/z: 373 · 2[M+1 ] ·
[0201] 實施例3H
[0202] q-M-氪其-3-田氣其某某）-3-氮雜螺[5 · 5 ] 十一烷-3-羧酸叔丁酯
[0203]
[0204] 在吣保護(hù)下，向?qū)嵤├?G (110毫克，0.3毫摩爾）的甲醇(5mL)溶液中加入鈀/碳（10 毫克，10% )，將反應(yīng)混合物在氫氣（15PSI)下，于16°C攪拌5小時。將反應(yīng)混合物通過硅藻土 過濾并真空濃縮，得到粗品標(biāo)題化合物（130毫克)為黃色油狀物。LCMS(ESI)(5-95AB):m/z: 319.1[Μ-56+1],
[0205] 實施例31
[0206] 5-氯N4-( 2-(異丙基磺?；?苯基)-N2-(2-甲氧基-4-( 3-氮雜螺[5 · 5 ] ^碳-9-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺
[0207]
[0208] 木jr |、，付大姻yijjnvi .zug，J.20mmol)和2,5_二氯-N-(2-異丙基苯基砜）啼啶- 4-胺（1.22g，3.52mmol)加入20mL叔丁醇中，并緩慢滴加甲烷磺酸（1.54g，16.02mmol)。反應(yīng) 液在90 °C攪拌16小時。LCMS顯示反應(yīng)完成。將反應(yīng)混合物倒入10mL飽和碳酸鈉溶液中并攪 拌10分鐘。得到的固體用水洗滌;收集濾餅真空干燥，得到標(biāo)題化合物(580mg，0.95mmol，收 率:29 · 79 %，純度:96 % )為白色固體。LCMS(ESI) (5-95AB):m/z: 584 · 2[M+1 ].
[0209] 化合物3
[0210]5-氯財-(2-(異丙基磺?；?苯基)-呢-(2-甲氧基-4-(3-甲基-3-氮雜螺[5.5]十 一碳-9-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺
[0211]
[0212]將實施例31 (180mg，0 · 308mmol)溶于6mL MeOH中，一次性加入HCH0溶液(46 · 27mg， 1.54mmol)，反應(yīng)混合物在25°C下攪拌0.5小時，然后加入NaBH3CN(97mg，1.54mmo 1)。反應(yīng)混 合物繼續(xù)攪拌2小時。反應(yīng)混合物用（15mL)水稀釋，并用（20ml X 2)DCM萃取;有機層干燥，濃 縮，所得粗品經(jīng)Pre-HPLC(酸性方法）純化，得到標(biāo)題化合物（162mg，0.25mmo 1，收率： 82.84%)為黃色固體。
[0213] 實施例4
[0214] 化合物4:5-氯-N2-(2-異丙氧基-5-甲基-4-(3-甲基-3-氮雜螺[5.5]^碳-9-基)苯基)-N4-( 2-(異丙基磺?；?苯基)嘧啶-2-，4-二胺
[0215]
[0222]
[0223] 將實施例4A(1.00g，4.35mmol)溶于20毫升1，4_二氧六環(huán)中，加入雙聯(lián)片吶醇硼酸 酯（1.228,4.79111111〇1)，？〇73(122.1111^，0.44臟〇1)，？(12((^ &)2(199.3611^，0.22111111〇1)和醋酸 鉀(619.62mg，6.3lmmo 1)。在N2保護(hù)下反應(yīng)混合物在100 °C攪拌2.5小時。TLC(石油醚：乙酸 乙酯= 10:1)顯示反應(yīng)完成。將反應(yīng)液過濾并濃縮，所得殘余物通過柱色譜分離(洗脫劑:石 油醚：乙酸乙酯=50 :1)，得到標(biāo)題化合物（2.00g，粗品）為黃色油狀物。1H匪R(400MHz， CDC13)j，7.52(s，lH)，7.45(s，lH)，4.79-4.64(m，lH)，2.49(s，3H)，1.40-1.37(m，6H)， 1.36(s，12H).
[0224] 實施例4C
[0225] 叔丁基-9-( 5-異丙氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-3-氮雜螺[5.5 ] ^碳_8_烯_3_羧 酸
[0226]
[0227] 向?qū)嵤├?B(600mg，1.87mmol)的1，4-二氧六環(huán)（10mL)溶液中，加入實施例3D (746.16mg，l. 87mmo 1)，Pd(dppf)C12(136.69mg，0.18mmo 1)和碳酸納（594 · OOmg， 5.60mmo 1)。在N2保護(hù)下反應(yīng)液在100°C攪拌16小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=10:1)顯示反 應(yīng)完成。將混合物過濾并濃縮。殘余物通過柱色譜分離(洗脫劑:石油醚：乙酸乙酯= 20:1) 純化得到標(biāo)題化合物（580mg，收率：69.77 % )，為黃色油狀物。1H NMR(400MHz，CDC13): δ， 7.62(s，lH)，6.75(s，lH)，5.53(br.s.，lH)，4.67-4.59(m，lH)，3.59-3.48(m，2H)，3.43-3.33(m，2H)，2.23-2.17(m，5H)，2.10(br.s.，2H)，1.65(t，J=6.4Hz，2H)，1.49-1.46(m， 13H)，1.38(d，J = 6.0Hz，6H).
[0228] 實施例4D
[0229] 9-(5-異丙氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-3-甲基-3-氮雜螺[5.5]^碳_8_烯
[0230]
實施例4C中的溶液(590毫克，1.33毫摩爾)在DCM( 2毫升)和TFA( 2毫升）的混合物 在25 °C下攪拌1小時。將反應(yīng)混合物濃縮，得到黃色油狀物。將該油溶解于MeOH( 5mL)中并加 入aq. HCHO(538.41毫克，6.63毫摩爾）。將混合物在25 °C下攪拌1小時。的混合物中加入三乙 ?；饸浠c(843.58毫克，3.98毫摩爾）。將混合物在25°C下攪拌16小時。LCMS顯示反應(yīng)完 成。將混合物濃縮，殘余物中加入水（10mL)并用二氯甲烷（10X3)萃取。有機層經(jīng)硫酸鈉干 燥并濃縮。殘余物通過柱層析純化（DCM:甲醇= 50:1)，得到標(biāo)題化合物（369.00毫克， 77.40%產(chǎn)率）為黃色油狀物。1!1匪1?(4001取，〇)(：13)3,7.62(8，1!1)，6.75(8，1!1)，5.53 (br.s.，lH)，4.69-4.58(m，lH)，2.79-2.55(m，4H)，2.48(s，3H)，2.28-2.16(m，5H)，2.13-2.07(m，2H)，1.73-1.61(m，6H)，1.37-1.41(m，6H).
[0232] 實施例4E
[0233] 2-異丙氧基-5-甲基-4-(3-甲基-3-氮雜螺[5.5]十一碳-9-基)苯胺
[0234]
[0235] 將實施例4D(369.00mg，1 .03mmol)溶于10mL甲醇中，N2保護(hù)下加入Pd/C (50.00mg)。反應(yīng)混合物抽真空，并用氫氣置換多次。將反應(yīng)混合物50psi氫氣壓力下，50°C 攪拌16小時。LCMS顯示起始起始原料反應(yīng)完。將反應(yīng)混合物過濾，濃縮，得到標(biāo)題化合物 (300mg，0.91_〇1，收率:88.13% )為黃色固體。LCMS(ESI)(30-90CD):m/z :331.2[M+lL
[0236] 實施例4F
[0237] 5-氯-N2-(2-異丙氧基-5-甲基-4-(3-甲基-3-氮雜螺[5.5]^碳_9_基)苯基)-N4-( 2-(異丙基磺?；?苯基)嘧啶-2-，4-二胺
[0238]
12 將實施例 40(500.0011^，1.51111111〇1)和2,5-二氯4-(2-異丙基苯基砜）嘧啶-4-胺 (523.78mg，1.5lmmol)的叔丁醇（10ml)溶液中，滴加甲烷磺酸（872.38mg，9.08mmol)，反應(yīng) 液在90 °C下攪拌16小時。LCMS顯示反應(yīng)完成。將混合物濃縮，所得殘余物通過Pre-HPLC(酸 性方法）分離純化，得到標(biāo)題化合物（27111^，收率28.03%)為棕色固體。1!1匪1?(40冊他， MeOD) :5,8.23 (br.s. , 2H), 8.01 (dd, J = 8.0,1.2Hz ,ΙΗ), 7.74(br. s . ,1H), 7.56( t, J = 7.2Hz，lH)，7.23(br.s.，1H)，6.98(s，lH)，4·74-4·62(ι?，1H)，3.46-3.32(m，3H)，3.25-3.11 (m，2H)，2.89(s，3H)，2.82-2.69(m，lH)，2.45(d，J=14.4Hz，1H)，2.31(d，J=13·6Ηζ，1Η)， 2·18(br.s.，3H)，1·87-1·50(ι?，10H)，1.31-1.22(m，12H).LCMS(ESI)(5-95AB):m/z:640.3 [M+l], 2 實施例5
[0241] 化合物5:9-(4-( (5-氯-4-( (2-(異丙基磺?；?苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)-3，9-二氮雜螺[5.5 ] -|碳-2-酮
[0242]
[0243] 實施例5A
[0244] 9-芐基-3，9-二氮雜螺[5 · 5 ] ^碳-2-酮
[0245]
[0246] 將9-芐基-3，9二氮雜螺[5 · 5]^烷_2_，4_二酮（5 · 00g，18 · 36mmol)溶于四氫呋 喃（80mL)溶液中，N2保護(hù)下緩慢加入氫化鋁鋰（1.74g，45.90mm〇 1)并控制體系溫度在55 °C 以下。將反應(yīng)液在55°C攪拌1小時。TLC顯示反應(yīng)完成。將混合物冷卻至25°C，依次緩慢加入 2ml水和氫氧化鈉溶液(5mol/L，2ml)淬滅反應(yīng)，濾出固體，濾液真空濃縮。將殘余物通過柱 色譜分離(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 20/1)純化，得到標(biāo)題化合物(450mg，收率：7.8%，純 度：78%)為白色固體。lHNMR(400MHz，DMS0-d6) :δ1.31-1 ·47(ι?，4H)，1.55(t，J = 6.0Hz， 2H)，2.00(s，1H)，2·26-2.40(m，4H)，3·11(t，J=6Hz，lH)，3.45(s，2H)，7.21-7.34(m，5H)， 7·37(br·s·，1H)·LCMS(ESI)(10-80CD):m/z:259·1[M+l]·
[0247] 實施例5B
[0248] 3,9_二氮雜螺[5.5]^ 碳-2_ 酮
[0249]
[0250] N2保護(hù)下，向?qū)嵤├?A(500mg，1.94mmol)的乙醇（lOmL)溶液中，加入Pd-C(lOOmg) 和Ac0H(0 . lmL)。將反應(yīng)混合物抽真空，并用H2置換數(shù)次。反應(yīng)混合物在50psi氫氣壓力下， 50°C攪拌12小時。將反應(yīng)混合物過濾，濃縮得標(biāo)題化合物(400mg，粗品）為白色固體，直接用 于下一步反應(yīng)。
[0251] 實施例5C
[0252] 9-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5 ·5]^碳-2-酮
[0253]
[0254] 向?qū)嵤├?5B(220mg，1 .31mmol)和4-氟-2-甲氧基-1-硝基-苯（223.78mg， 1 ·31mmol)的DMA(lOmL)溶液中，加入N，N_二異丙基乙基胺（169.31mg，1 ·31mmol)，反應(yīng)混合 物在90°C下攪拌6小時。TLC顯示反應(yīng)完成。將反應(yīng)液減壓濃縮，殘余物通過柱色譜分離(洗 脫劑:二氯甲烷：甲醇=50:1，10:1)得到標(biāo)題化合物（280mg，收率:63.58 %，純度:95 % )為 黃色固體。lHNMR(400MHz，CDC13):Sl.69(t，J = 6.0Hz，4H)1.78(t，J = 6.0Hz，2H)，2.36(s， 2H)，3.34-3.45(m，4H)，3·46-3.55(m，2H)，3.96(s，3H)，5.82(br.s.，1H)，6.32(d，J= 4.0Hz，lH)，6.43(dd，J = 8.4Hz，lH)，8.02(d，J = 8.0Hz，lH)
[0255] 實施例?
[0256] 9-(4-氨基-3-甲氧基苯基)- 3，9-二氮雜螺[5 ·5]^碳-2-酮
[0257]
[0258] 將實施例50(10011^，0.31111111〇1)溶于51111四氫呋喃溶液中，似保護(hù)下加入？(1-〇 (0. lg)。反應(yīng)混合物抽真空，并用氫氣置換數(shù)次。25°C下，將混合物在氫氣(50psi)下，攪拌3 小時。LCMS顯示反應(yīng)完全。反應(yīng)混合物過濾，濾液濃縮，得到標(biāo)題化合物（llOmg，粗品）為白 色固體。LCMS(ESI)(0-60CD):m/z:290.1[M+l].
[0259] 實施例5E
[0260] 9-(4-( (5-氯-4-((2-(異丙基磺?；┍交?氨基）嘧啶-2-基)氨基)-3_甲氧基苯 基)-3，9-二氮雜螺[5.5 ]-|碳-2-酮
[0261]
1234 向?qū)嵤├?D(120 . OOmg，0.41mmol)和2，5-二氯-N-(2-異丙基苯基砜）嘧啶-4-胺 (172 · 30mg，0 · 5mmo 1)的 1，4-二氧六環(huán)（3mL)溶液中，加入MeS03H( 119 · 57mg，1 · 24mmo 1)。反 應(yīng)液在50 °C下攪拌12小時。LCMS顯示反應(yīng)完成。將混合物通過Pre-HPLC (酸性方法)純化，得 到標(biāo)題化合物（33.0011^，0.05111111〇1，收率：13.15%，純度 ：99%)，為黃色固體。1!1麗1? (400MHz，METHAN0L-d4) :δ1·24((1，J = 8.0Hz，6H)l .90-2.16(m，6H)2.47(br. s.，2H)3.37-3.45(m，3H)3.71(br.s·，4H)4.01(s，3H)7.21(d，J=8.0Hz，lH)7.53(br.s·，1H)7.62-7.75 (m，2H)7.86(t，J=8.0Hz，lH)8.04-8·12(m，2H)8.34(s，lH).LCMS(ESI)(0-60AB):m/z: 599.2[M+1], 2 實施例6 3 化合物6:9-(4-( (5-氯-4-( (2-(異丙基磺?；?苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3- 4 甲氧基苯基)-3-甲基-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-酮
[0265] !
[0266] 實施例6A
[0267] 9-( 3-甲氧基-4-硝基苯基)-3-甲基-3, 9-二氮雜螺[5.5]^碳-2-酮
[0268]
[0269] 向?qū)嵤├?(：(150.0011^，0.47111111〇1)的01^(51111〇溶液中，在0°(：下，加入此!1 (15.031^，0.38臟〇1，60%)并攪拌0.511，在0。(：下加入]^1(53.3411^，0.38111111〇1，1.2069)，將 反應(yīng)液升溫至25 °C并攪拌3小時。LCMS顯示起始物質(zhì)反應(yīng)完全。緩慢加入冰水淬滅反應(yīng)，然 后用DCM萃?。?5ml X 3)。合并的有機相用飽和食鹽水（10ml X 2)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過 濾并真空濃縮，得到標(biāo)題化合物（11 〇mg，收率:61.82 %，純度:88 % )為黃色固體。LCMS(ESI) (5-95AB)：m/z:356.1[M+23]RT：1.090min/2min.
[0270] 實施例6B
[0271 ] 9-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-3-甲基- 3，9-二氮雜螺[5.5]^碳-2-酮
[0272]
[0273] 將實施例6A( 110.0 Omg，0.33mmol，1. OOeq)溶于5.00ml四氫呋喃中，N2保護(hù)下加入 Pd-C(lOOmg)。將反應(yīng)混合物抽真空，并用氫氣置換數(shù)次。反應(yīng)液25°C下在15psi氫氣壓力下 攪拌3小時。LCMS顯示起始原料反應(yīng)完全。將反應(yīng)混合物過濾，濃縮，得到標(biāo)題化合物 (10011^，0.29臟〇1，產(chǎn)率 :87.91%，純度:88%)為白色固體，可直接用于下一步。
[0274] 實施例6C
[0275] 9-(4-( (5-氯-4-((2-(異丙基磺?；?苯基)氨基）嘧啶-2-基)氨基)-3_甲氧基苯 基)-3-甲基-3，9-二氮雜螺[5.5 ] 十一烷-2-酮
[0276]
將實施例68(10011^，0.33111111〇1)和2,5-二氯4-(2-異丙基苯基砜）-嘧啶-4-胺 (114.1211^，0.33111111〇1)的1，4-二氧六環(huán)（3.001111)溶液中，緩慢加入甲烷磺酸（95.0311^， 0.99mmo 1)。該混合物在60 °C下攪拌12小時。LCMS顯示反應(yīng)完成。反應(yīng)液通過Pre-HPLC(酸性 方法）純化，得到標(biāo)題化合物（45mg，收率：22. 10%，純度：97% )為黃色固體。1H NMR (400MHz，METHAN0L-d4):1.23(s，3H)1.24(s，3H)2.05(m，6H)2.53(br.s.，2Η)2·95-3·05(ι?， 3H)3.41(dt，J=12.0,6.0Hz，lH)3.50(t，J = 6.0Hz，2H)3.72(br.s.，4H)4.01(s，3H)7.28 (d，J=12Hz，lH)7.60(s，lH)7.65-7.71(m，2H)7.87(t，J = 6.0Hz，lH)8.05(d，J = 8.0Hz，2H) 8.36(s，lH).LCMS(ESI)(0-60AB):m/z:613.2[M+lL
[0278] 生化實驗
[0279] 實驗材料
[0280] 酶：ALK 野生型，ALK Cl 156Y 和 ALK LI 196M 均購自 Cama Biosciences (Japan)，EGFR T790M/L858R 購自 Life technology (Madison，WI) 〇
[0281 ] HTRF試劑盒：購自 Cis-Bio International，內(nèi)含Eu標(biāo)記TK1 抗體，XL665和biotin 標(biāo)記的TK1多肽底物。
[0282] 檢測儀器：Envision(PerkinElmer)。
[0283] 實驗方法
[0284] 將測試化合物3倍梯度稀釋，獲得終濃度從luM到0.017nM 11個劑量。
[0285] 10ul野生型ALK酶反應(yīng)混合物體系：0 · 5nM野生型ALK，luM biotin-TKlpeptide， 30uM ATP。反應(yīng)緩沖液：50mM Hepes(pH7.5)，10mM MgC12,0.01mM NaV3V04.反應(yīng)板為white Proxiplate 384-Plus plate(PerkinElmer)，室溫反應(yīng)90分鐘。
[0286] lOul ALK C1156Y酶反應(yīng)混合物體系：0.1511]\1厶1^(：1156￥，111]\11^〇衍11-TKlpeptide，30uM ATP。反應(yīng)緩沖液：50mM Hepes(pH7.5)，10mM MgC12,0.01mM NaV3V04.反 應(yīng)板為white Proxiplate 384-Plus plate(PerkinElmer)。室溫反應(yīng)60分鐘。
[0287] lOul ALK L1196M酶反應(yīng)混合物體系：0.1511]\1厶1^1^11961，111]\11^〇衍11-TKlpeptide，30uM ATP。反應(yīng)緩沖液：50mM Hepes(pH7.5)，10mM MgC12,0.01mM NaV3V04.反 應(yīng)板為white Proxiplate 384-Plus plate(PerkinElmer)，室溫反應(yīng)60分鐘。
[0288] l〇ul EGFR T790M/L858R酶反應(yīng)混合物體系：0.08nM EGFR T790M/L858R，luM biotin-TKlpeptide，20uM ATP。反應(yīng)緩沖液：50mM Hepes(pH7.5)，lOmM MgC12,0.01mM NaV3V04.反應(yīng)板為white Proxiplate 384-Plus plate(PerkinElmer)。室溫反應(yīng)60分鐘。
[0289] 檢測反應(yīng)：加 lOul檢測試劑至反應(yīng)板中，Antibody終濃度為2nM，XL665為62.5nM。 室溫孵育60分鐘。Envision讀板。
[0290] 數(shù)據(jù)分析
[0291] 通過下列公式將讀數(shù)轉(zhuǎn)化成抑制率（％ ) (Min-Ratio)/(Max_Min)*100%。4參數(shù)曲 線擬合(Model 205in XLFIT5，iDBS)測得IC50數(shù)據(jù)。
[0292] 細(xì)胞實驗
[0293] 實驗材料
[0294] RPMI1640，胎牛血清，青霉素/鏈霉素溶液，均購自Life Technology(Madison， WI)〇Cell Titer-Glo luminescent cell viability reagents貝勾自Promega(Madison， WlhKarpasSggcell line購自European Collection of Cell Cultures(ECACC)。讀板儀 器:Envision(PerkinElmer) 〇
[0295] 實驗方法
[0296] 384孔板，每孔種2500個Karpas-299細(xì)胞，45ul體積。在CO 2培養(yǎng)箱中37°C過夜培 養(yǎng)。待測化合物做3倍梯度稀釋，獲得濃度從2.5mM到0.127uM 10個劑量濃度，兩復(fù)孔。中間 板每孔加49ul培養(yǎng)基。從梯度稀釋化合物板轉(zhuǎn)移lul化合物至中間板，混合充分。再從中間 板取5ul液體轉(zhuǎn)至細(xì)胞板。細(xì)胞繼續(xù)在C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時。72小時后，加入25ul檢測試 劑。室溫孵育10分鐘，Env i s i on讀板。
[0297] 數(shù)據(jù)分析
[0298] 通過下列公式將讀數(shù)轉(zhuǎn)化成抑制率（％ ) (Max-Sample)/(Max_Min) * 100%。參數(shù) 曲線擬合(Model 205in XLFIT5，iDBS)測得 1C 50數(shù)據(jù)。
[0299] 本發(fā)明化合物的ALK酶抑制IC 50，ALK L1196M酶抑制IC 50，ALK C1156Y酶抑制1C 50，EGFR T790M/L858R酶抑制1C 50,以及Karpas-299細(xì)胞的ALK IC50的數(shù)據(jù)在以下表1中 展示。
[0300] 表 1
[0301]
[0302]體內(nèi)藥效研究
[0303]以下體內(nèi)藥效數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明的化合物在野生型LU-01-0015肺癌患者來源的異 種移植(PDX)模型(BALB/c裸鼠）和野生型LU-01-0319肺癌患者來源的異種移植(PDX)模型 (BALB/c裸鼠）這兩種模型上都展示了比參考化合物L(fēng)DK378略優(yōu)或相當(dāng)?shù)目鼓[瘤活性。舉例 來說，在野生型LU-01-0319肺癌患者來源的異種移植(PDX)模型(BALB/c裸鼠）代表性化合 物2在給藥（10毫克/公斤)21天后，腫瘤體積從最開始的約370mm 3減小至222mm3,而LDK378減 少到268mm3。
[0304] 1.在皮下移植LU-01-0319肺癌患者來源的異種移植瘤(PDX)，BALB/c裸鼠上進(jìn)行 抗腫瘤體內(nèi)藥效實驗
[0305]最初是從手術(shù)切除的臨床樣本中獲得的LU-01-0319異種移植瘤模型，并植入裸 鼠，此定義為批次P0(LU-01-0319-P0)。接下來的一批從P0的腫瘤植入定義為批次P1(LU-01-0319-P1KFP3是從P2重新獲得，接下來的批次從FP3腫瘤植入被定義為批次FP4。植入腫 瘤后約2-3周，腫瘤大小達(dá)到約200-400mm 3時，開始給藥。試驗化合物每天一次口服給藥。月中 瘤尺寸每周測量兩次，用卡尺兩個維度，并使用下面的公式計算體積:V = 0.5a X b2,其中a 和b是分別腫瘤的長徑和短徑?？鼓[瘤藥效是通過用化合物處理過的動物的平均腫瘤增加 體積除以未處理過動物的平均腫瘤增加體積來確定。實驗結(jié)果見表2。
[0306]表2
[0307]
[0308] 2.在皮下植入LU-01 -0015肺癌患者來源的異種移植(PDX) BALB/c裸小鼠上進(jìn)行體 內(nèi)藥效實驗.
[0309] BALB/c裸鼠，雌性，6-8周，體重約18-22克，將小鼠保持在一個特殊的無病原體的 環(huán)境中，且在單個通風(fēng)籠中（5只小鼠每籠）。所有的籠子，鋪墊和水在使用前進(jìn)行消毒。所有 的動物都可以自由獲取標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)證的商業(yè)實驗室飲食。共有80只購于上海BK Laboratory Animal Co.，LTD的小鼠用于研亢。每只小鼠在右脅腹皮下植入腫瘤組織(20-30立方毫米）， 用于腫瘤的生長。當(dāng)平均腫瘤體積達(dá)到約~160立方毫米時開始實驗。將試驗化合物每日口 服給藥，10毫克/公斤或20毫克/公斤。腫瘤體積每3天用二維卡尺測量，體積以立方毫米計 量，通過以下公式計算:V = V = 0.5a X b2,其中a和b分別是腫瘤的長徑和短徑?？鼓[瘤藥效 是通過用化合物處理過的動物的平均腫瘤增加體積除以未處理過動物的平均腫瘤增加體 積來確定。實驗結(jié)果見表3。
[0310] 表3
[0311]
[0312] 注：*l〇mg/kg QD X lW，5mg/kg QD X 2W，P0，10yl/g;**20mg/kg，P0，10yl/g，QD X 21
[0313] 本發(fā)明所報道的ALK抑制劑，可用于治療各種癌癥包括間變性大細(xì)胞淋巴瘤，非小 細(xì)胞肺癌，擴(kuò)散的大B-細(xì)胞淋巴瘤，炎性肌纖維母細(xì)胞腫瘤，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，甲狀腺未分化 癌和橫紋肌肉瘤。ALK抑制劑，可以作為單獨治療或與其它化療劑聯(lián)合使用。
【主權(quán)項】
1. 式(I)所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中， Tl 選自 N或 C(R01); T2 選自-N(R(n)-、0、S( =OKH(NRq1Rq2)-或-(X=O)N(Rq1)-; Roi、R〇2分別獨立地選自1^、(：1、8廣1、^0!1、3!1、順2、或任選被1、2或3個鹵素、羥基、氨 基和/或氰基所取代的= CV6烷基、CV6雜烷基、C3-6環(huán)烷基-(CH 2 )Q-3-和C3-6雜環(huán)烷基-(CH2)〇-3-，其中所述"雜"代表1、2或3個雜原子或雜原子團(tuán)，所述雜原子或雜原子團(tuán)選自0、 S、N、S(=0)2 或S(=0); 任選地，T2上的Ro1和Ro2相互連接到同一個N上形成1個3~6元環(huán)，所述的環(huán)上含有1、2或 3個雜原子，所述雜原子選自0、S和Ν; Di ~D4 分別獨立地選自-(0^2)13^04^(=0)4(=0):^3(=0); R3 選自 Rq3、ORq3 和 SR03; Ro3選自烷基、鹵代烷基和C3-5環(huán)烷基-(CH2) 0-3-; Z選自N和C(R4); R5選自C1-4烷基； Ri、R2和R4分別獨立地選自11小工1、8匕1、^0!1、3!1、順2、或任選被1、2或3個鹵素、羥基 和/或氰基所取代的：Ci-6烷基、Ci-6雜烷基、C3-6環(huán)烷基-(CH2 ) 0-3-和C3-6雜環(huán)烷基-(CH2 ) 0-3-， 其中所述"雜"代表1、2、或3個雜原子，所述雜原子選自0、S和N。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中所述Rq1和Rq2分別獨立地選 自 H、-CH3、-CD3、-CF3、-CHF2、-CH 2CH3、CH (CH3) 2、-CH2CF3、-CH2CH2CF 3、-CH2CH2F、-CH2CH2S (= 0)2CH3、-CH2CH2(OH) (CH3) 2、-CH2QK F) (CH3) 2、-CH2CH2F;和/或 所述 NRQ1R()2 選自 NHCH3、N( CH3) 2、N (CH2CH3;3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中所述Ro3選自-CH3、_⑶3、_ CF3、-CHF2、-CH2CH3、-CH (CH3) 2、-CH2CF3、-CH2CH2CF 3、-CH2CH4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R5選自-CH(CH3)2t35. 根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中所述R^RdPR4分別獨立地 選自H、F、Cl、Br、I、-CH 3、-CD3、-CF3、-CHF2、-CH2CH 3、-CH(CH3)2、-CH2CF3、-CH2CH 2CF3、-CH2CH2F、-CH2CH2S ( = O) 2CH3、-CH2CH2CN (OH) (CH3 )2、-CH2CH(F) (CH3 )2 和-CH2CH2F06. 根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中，T2選自-NH-、-N(Me)-、-C (=0)NH-、-C( =0)N(CH3)-、-0-和-CH(NCH3CH3)-O9.根據(jù)權(quán)利要求1所述式(I)化合物的制備方法，其中T1代表N或CH，T2代表NH，其制備路 線如方案A或C所示： 方案A其中PG是氨基保護(hù)基，優(yōu)選自BOC、Bn和Cbz，其他變量如上述權(quán)利要求所定義。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述化合物的制備方法，其中A5的制備方法如方案B所示： 方案B11.根據(jù)權(quán)利要求1~10任意一項所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療與ALK 和/或EGFR以及它們的突變相關(guān)的癌癥、與ROSl、BRAF、c-MET、HER2、KRAS/MEK、PIK3CA、 FDFR、DDR2和/或VEGFR抑制劑聯(lián)合治療的癌癥、或與細(xì)胞毒素聯(lián)合治療的癌癥的藥物中的 應(yīng)用。
【文檔編號】A61K31/506GK106008503SQ201610179546
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年3月25日
【發(fā)明人】丁照中, 陳曙輝, 趙保平, 劉希樂, 鄢笑非, 張路
【申請人】南京明德新藥研發(fā)股份有限公司