一種解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一株解淀粉芽孢桿菌WZS01。該菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)CCTCC NO：M2016096，保藏時(shí)間日期是為2016年3月8日，保藏單位是中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址是中國(guó)武漢，武漢大學(xué)，郵編430072。該菌株經(jīng)過(guò)一次培養(yǎng)后，可以用于催化三氯蔗糖制備中蔗糖?6?乙酸酯合成和三氯蔗糖?6?乙酸酯水解兩個(gè)步驟，并且具有反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)選擇性好，產(chǎn)物單一，轉(zhuǎn)化率高等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明為生物法制備三氯蔗糖提供了新的途徑。CCTCC NO：M 201609620160308
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于生物催化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]三氯蔗糖，又稱(chēng)作4，I’，6’ -三氯半乳蔗糖，是唯一以蔗糖為原料的功能性甜味劑，甜度為蔗糖的600倍左右。三氯蔗糖具有無(wú)能量、甜度高、甜味純正、安全等特點(diǎn)，是目前最優(yōu)秀的功能性甜味劑之一，己被包括中國(guó)在內(nèi)的30多個(gè)國(guó)家批準(zhǔn)作為甜味劑，并在食品領(lǐng)域廣泛使用。
[0003]合成三氯蔗糖的方式有化學(xué)法和酶一化學(xué)法?；瘜W(xué)法如使用全基團(tuán)保護(hù)法的美國(guó)專(zhuān)利US 4617269，使用單基團(tuán)保護(hù)法的美國(guó)專(zhuān)利US 4889928、US 5449772、US 4889928和US5449772。化學(xué)合成法產(chǎn)物收率較高，但是反應(yīng)條件較苛刻、生產(chǎn)成本較高、反應(yīng)選擇性較差、容易產(chǎn)生副產(chǎn)物。酶-化學(xué)法是利用酶的立體專(zhuān)一性和催化活性，使基團(tuán)反應(yīng)發(fā)生在所需要的位置，如將蔗糖中葡萄糖分子上的6位羥基以酶法?；Ｗo(hù)，再經(jīng)氯代、脫酰基、分離等步驟合成三氯蔗糖。美國(guó)專(zhuān)利US 4617269和GB 2145080A公布了由葡萄糖和蔗糖生物法制備蔗糖-6-乙酸酯的方法，摩爾產(chǎn)率50%左右。中國(guó)專(zhuān)利CN 101268090A公布了利用能夠產(chǎn)生果糖基轉(zhuǎn)移酶類(lèi)的微生物(如等)全細(xì)胞生物催化葡萄糖-
6-乙酸酯轉(zhuǎn)化為蔗糖-6-乙酸酯的方法，產(chǎn)率為45%左右。美國(guó)專(zhuān)利US 4826962以棉籽糖為原料，經(jīng)選擇性氯化后，用來(lái)源于vinacea，Circinella m u s c a e或Aspergillus fiige的a_半乳糖苷酶，水解去除棉籽糖中的乳糖基制得三氯鹿糖，摩爾產(chǎn)率70%左右。該方法雖然摩爾產(chǎn)率高，但是大量的棉子糖原料較難得到。美國(guó)專(zhuān)利US 5141860公布了制備酰基蔗糖衍生物的方法，將一些脂肪酶、酯酶、淀粉酶、半乳糖苷酶、蛋白酶用于蔗糖乙酸酯的選擇性水解，進(jìn)一步氯化后脫酯，可以得到三氯蔗糖，但是這些反應(yīng)過(guò)程步驟較多，酶用量大，且反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，產(chǎn)物中混合物和異構(gòu)體較多。中國(guó)專(zhuān)利CN 101886100A使用諾維信商品化的固定化脂肪酶Lipozyme TLIM在叔丁醇-二甲基亞砜(體積比4:1)體系中，催化蔗糖與乙酸乙烯酯進(jìn)行轉(zhuǎn)酯反應(yīng)，30°C反應(yīng)6小時(shí)，摩爾產(chǎn)率達(dá)到89%。然而使用商品化脂肪酶成本較高。另外本發(fā)明使用叔丁醇-二甲基甲酰胺(體積比4:1)作為反應(yīng)介質(zhì)，在與上述專(zhuān)利CN 101886100A相同底物濃度的情況下，產(chǎn)物的摩爾產(chǎn)率可以達(dá)到95.6%。反應(yīng)體系中的二甲基甲酰胺無(wú)需去除，因?yàn)槿日崽侵苽涞南乱徊椒磻?yīng)，即蔗糖-6-乙酸酯的氯化步驟需要在二甲基甲酰胺中進(jìn)行。
[0004]在氯化步驟完成后，三氯蔗糖乙酸酯需要脫去乙?；鶊F(tuán)生成三氯蔗糖。關(guān)于三氯蔗糖單酯的脫保護(hù)反應(yīng)，專(zhuān)利US5023329、US5128248、US5470969、CN1176094C均是在甲醇溶液中，使用甲醇鈉或者氫氧化鈉做催化劑進(jìn)行反應(yīng)。然而該反應(yīng)向體系中引入了大量的鈉離子，乙酰基脫除后，還需要將鈉離子用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂從溶液中交換出來(lái)。而使用本發(fā)明的技術(shù)，則無(wú)需這一操作，從而降低了三氯蔗糖的生產(chǎn)成本。
[0005]事實(shí)上，已有使用酶法水解三氯蔗糖-6-乙酸酯，得到三氯蔗糖的報(bào)道。Ratnam等報(bào)道了在生產(chǎn)三氯蔗糖過(guò)程中，使用固定化酶，脫乙?；首罡哌_(dá)到95%，但仍然需要純化。Chaubey等使用節(jié)桿菌和枯草芽孢桿菌水解三氯蔗糖-6-乙酸酯，底物濃度1-2%，水解48h，轉(zhuǎn)化率達(dá)到100%，因而無(wú)需后續(xù)純化步驟。本發(fā)明與該報(bào)道相比，優(yōu)勢(shì)在于底物濃度更高，水解時(shí)間更短，底物濃度3.5%，水解24h，產(chǎn)率99.6%。
[0006]本發(fā)明最大的優(yōu)勢(shì)在于，使用同一菌種，經(jīng)過(guò)一次培養(yǎng)，作為全細(xì)胞催化劑，以較高的催化效率進(jìn)行三氯蔗糖制備過(guò)程中的酯化和水解反應(yīng)，極大地簡(jiǎn)化了酶法合成三氯蔗糖的操作步驟。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用的技術(shù)方案。
[0008]所述的一種解淀粉芽孢桿菌amyloliquefaciens)^ZSOl，保藏號(hào)為CCTCC Ν0:Μ 2016096，保藏時(shí)間日期是為2016年3月8日，保藏單位是中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址是中國(guó)武漢，武漢大學(xué)，郵編430072。
[0009]所述的一種解淀粉芽孢桿菌在三氯蔗糖合成過(guò)程中催化蔗糖-6-乙酸酯合成的應(yīng)用。
[0010]所述的應(yīng)用，其特征在于以蔗糖和乙酸乙烯酯作為底物，叔丁醇作為反應(yīng)介質(zhì)，吸附有解淀粉芽孢桿菌的聚氨酯泡沫作為催化劑進(jìn)行反應(yīng)生成蔗糖-6-乙酸酯。
[0011]所述的應(yīng)用，其特征在于所述的吸附有解淀粉芽孢桿菌的聚氨酯泡沫通過(guò)以下步驟得到:將加入了重量體積比為0.6?1.0%密度為1?50Kg/m3的聚氨酯泡沫的培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，冷卻后接種1%的解淀粉芽孢桿菌種子液，30°C培養(yǎng)18?24小時(shí)后干燥得到。
[0012]所述的應(yīng)用，其特征在于所述的培養(yǎng)基包括葡萄糖2.0?3.5%、蛋白胨0.5?1.5%、酵母粉0.1%0
[0013]所述的應(yīng)用，其特征在于向反應(yīng)體系中加入重量體積比1.0?2.5%干燥后的吸附有解淀粉芽孢桿菌的聚氨酯泡沫，控制反應(yīng)溫度30?38°C，反應(yīng)時(shí)間16?24小時(shí)。
[0014]所述的一種解淀粉芽孢桿菌在三氯蔗糖合成過(guò)程中催化三氯蔗糖-6-乙酸酯水解的應(yīng)用。
[0015]所述的應(yīng)用，其特征在于以三氯蔗糖-6-乙酸酯作為底物，甲醇作為三氯蔗糖-6-乙酸酯的助溶劑，含有解淀粉芽孢桿菌的濕菌體或干燥后的吸附有菌體的聚氨酯泡沫為催化劑，在PH5.1?8.0的緩沖體系中進(jìn)行水解生成三氯蔗糖。
[0016]所述的應(yīng)用，其特征在于向反應(yīng)體系中加入重量體積比3?5%的濕菌體或重量體積比1.0?2.0%干燥后的吸附有菌體的聚氨酯泡沫，控制反應(yīng)溫度30?400C，反應(yīng)時(shí)間12?24小時(shí)。
[0017]所述的一種解淀粉芽孢桿菌在三氯蔗糖合成過(guò)程中催化蔗糖-6-乙酸酯合成和催化三氯蔗糖-6-乙酸酯水解的應(yīng)用。
[0018]本發(fā)明中篩選到的菌株可以用于催化三氯蔗糖制備中蔗糖-6-乙酸酯合成和三氯蔗糖-6-乙酸酯水解兩個(gè)步驟。并且具有反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)選擇性好，產(chǎn)物單一，轉(zhuǎn)化率高等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明為生物法制備三氯蔗糖提供了新的途徑。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此。
[0020]實(shí)施例1蔗糖-6-乙酸酯合成菌株的篩選和鑒定
蔗糖-6-乙酸酯合成過(guò)程中釋放乙醛，使用Zheng等(2014)的顯色方法，可以對(duì)乙醛定量，從而反映出酶活力的大小。將0.1g土樣加入20ml含橄欖油的液體富集培養(yǎng)基中，加入20ml含橄欖油的液體富集培養(yǎng)基中，30°C，180 r/min，振蕩培養(yǎng)48小時(shí)。稀釋后涂布于含有三丁酸甘油酯和溴百里香酚藍(lán)的初篩平板上，30°C培養(yǎng)兩天。挑取菌落顏色變?yōu)辄S色的不同形態(tài)的單菌落，液體培養(yǎng)后，吸取Iml于離心管中，離心，吸凈上清，烘干菌體，加入含10%蔗糖的DMF 0.2mL，叔丁醇0.8mL，0.056mL乙酸乙烯酯，30°C反應(yīng)I小時(shí)；取20倍稀釋的反應(yīng)液ΙΟΟμΙ，加入ΙΟΟμΙ 0.1% 酚試劑，反應(yīng)lOmin，再加入40μ1 1% NH4Fe(S04)2.12Η20 試劑，反應(yīng)30min;酶標(biāo)儀測(cè)定0D598。將上述篩選到的菌種，培養(yǎng)后進(jìn)行蔗糖_6_乙酸酯催化反應(yīng)，液相測(cè)定產(chǎn)物譜。
[0021 ]將篩選到的菌粉溶于無(wú)菌水，在LB和Yro平板培養(yǎng)基上復(fù)活。提取該菌的總DNA，使用引物(5 ’-CAGAGTTTGATCCTGGCT-3 ’ 和5 ’ -AGGAGGTGATCCAGCCGCA-3 ’)為上下游引物擴(kuò)增待鑒定菌株的16S rDNA。通過(guò)BLAST程序比對(duì)，僅能鑒定出該菌為芽孢桿菌。進(jìn)一步使用上下游引物(
5’-GAAGTCATCATGACCGTTCTGCAYGCNGGNGGNAARTTYGA-3’ 和
5 ’ -AGCAGGGTACGGATGTGCGAGCCRTCNACRTCNGCRTCNGTCAT-3 ’)擴(kuò)增的部分序列。測(cè)序后，通過(guò)BLAST程序比對(duì)，并結(jié)合該菌的系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)，發(fā)現(xiàn)該菌株與解淀粉芽孢桿菌菌株h47在親緣關(guān)系上最接近。將該菌株命名為解淀粉芽孢桿菌WZS01，已經(jīng)保存于保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)CCTCC N0:M2016096o
[0022]
實(shí)施例2培養(yǎng)基的優(yōu)化
以葡萄糖2.0%、蛋白胨2.0%、酵母粉0.1%為出發(fā)培養(yǎng)基。分別按2%的濃度以乳糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、淀粉、甘油為碳源。30 0C培養(yǎng)24h，取0.2ml培養(yǎng)物干燥后進(jìn)行反應(yīng)，Iml反應(yīng)體系，反應(yīng)30分鐘，按上述菌株篩選的顯色方法，測(cè)定相對(duì)反應(yīng)初速度。葡萄糖為碳源時(shí)，相對(duì)反應(yīng)初速度顯著高于其他碳源。進(jìn)一步考察了葡萄糖濃度對(duì)菌株WZS01的產(chǎn)酶的影響。葡萄糖濃度2%、2.3%、3%、3.5%的相對(duì)反應(yīng)初速度之比分別為0.8:1:0.99:0.77。
[0023]當(dāng)碳源為2.5%葡萄糖時(shí)，本實(shí)驗(yàn)選擇添加1%的有機(jī)氮源(牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、玉米粉)或無(wú)機(jī)氮源(硫酸銨、硝酸鈉、氯化銨)，考察不同氮源對(duì)菌株WZS01產(chǎn)酶的影響，發(fā)現(xiàn)蛋白胨為氮源時(shí)，相對(duì)反應(yīng)初速度高于其他氮源。進(jìn)一步考察了蛋白胨濃度對(duì)菌株WZSOI的產(chǎn)酶的影響。蛋白胨濃度為0.5%、1%、1.5%的相對(duì)應(yīng)初速度之比分別為0.57:1:0.77。
[0024]
實(shí)施例3菌體不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)摩爾產(chǎn)率的影響
將加入了 0.8%(重量體積比)的聚氨酯泡沫(密度10Kg/m3)的培養(yǎng)基(2.5%葡萄糖、1%蛋白胨、0.5%酵母)進(jìn)行滅菌，冷卻后接種1%的解淀粉芽孢桿菌WZSOI種子液，30 °C培養(yǎng)15、18、21、24小時(shí)。將吸附有菌體的聚氨酯泡沫干燥后，使用比色法測(cè)得上述培養(yǎng)時(shí)間的蔗糖-6-乙酸酯合成反應(yīng)初速度之比為0.83:l:0.92:0.64o
[0025]
實(shí)施例4將吸附菌體的聚氨酯泡沫用于蔗糖-6-乙酸酯的合成
I)在25mL的具塞單□反應(yīng)燒瓶中，稱(chēng)取0.2g干燥的吸附有菌體的聚氨酯泡沫，含10%蔗糖的DMF 2mL，叔丁醇8mL，乙酸乙烯酯0.56mL，32°C反應(yīng)18小時(shí);吸附有菌體的密度為1Kg/m3、30Kg/m3、50Kg/m3聚氨酯，摩爾產(chǎn)率分別為83.3%、57.1%和21.2%。0.2g干燥的游離菌體在相同條件下，催化該反應(yīng)，蔗糖-6-乙酸酯的摩爾轉(zhuǎn)化率僅為17.0%。
[0026]2)在251^的具塞單口反應(yīng)燒瓶中，分別稱(chēng)取0.18、0.158、0.28、0.258吸附有菌體的聚氨酯泡沫，含10%蔗糖的DMF 2mL，叔丁醇8mL，乙酸乙烯酯0.56mL，32°C反應(yīng)18小時(shí)，摩爾產(chǎn)率分別為 36.1%、55.2%、83.3%、81.9%。
[0027]3)在25mL的具塞單口反應(yīng)燒瓶中，稱(chēng)取0.2g吸附有菌體的聚氨酯泡沫，含10%蔗糖的DMF 2mL，叔丁醇8mL，乙酸乙烯酯0.56mL，在30、32、34、36、38°C反應(yīng)12小時(shí)，摩爾產(chǎn)率分別為 54.6%、73.0%、67.5%、62.3%、58.3%。
[0028]4)在25mL的具塞單口反應(yīng)燒瓶中，分別稱(chēng)取0.2g吸附有菌體的聚氨酯泡沫，含10%蔗糖的DMF 2mL，叔丁醇8mL，乙酸乙烯酯0.56mL，在32°C反應(yīng)16、18、20、22、24小時(shí)，HPLC檢測(cè)蔗糖-6乙酸酯含量，摩爾產(chǎn)率分別為78.8%、83.3%、90.6%、95.6%、92.8%。
[0029]
實(shí)施例5解淀粉芽孢桿菌WZSOI用于三氯蔗糖-6-乙酸酯的水解
(I)在25mL的具塞單口反應(yīng)燒瓶中，濕菌體3%、4%、5%，甲醇含量20%，底物三氯蔗糖-6-乙酸酯3.5%，25mM磷酸鹽緩沖液pH7.1，在36 °C反應(yīng)2h，HPLC檢測(cè)三氯蔗糖含量，相應(yīng)的摩爾產(chǎn)率分別為31.1%、45.5%、44.9%。
[0030](2)在25mL的具塞單口反應(yīng)燒瓶中，濕菌體4%，甲醇含量15%、20%、25%，底物三氯蔗糖-6-乙酸酯3.5%，25mM磷酸鹽緩沖液pH7.1，在36°C反應(yīng)2h，HPLC檢測(cè)三氯蔗糖含量，相應(yīng)的摩爾產(chǎn)率分別為44.9%、45.5%、39.5%。
[0031](3)在25mL的具塞單口反應(yīng)燒瓶中，濕菌體4%，甲醇含量20%，底物三氯蔗糖-6-乙酸酯3.5%，25mM磷酸鹽緩沖液pH7.1，在30、32、34、36、38、40 °C反應(yīng)2h，HPLC檢測(cè)三氯蔗糖含量，相應(yīng)的摩爾產(chǎn)率分別為31.4%、33.2%、37.8%、44.7%、41.9%、32.1%。
[0032](4)在25mL的具塞單口反應(yīng)燒瓶中，濕菌體4%，甲醇含量20%，底物三氯蔗糖-6-乙酸酯濃度3.5%，25mM磷酸鹽緩沖液pH5.1、6.3、7.1、7.8、8.0，36°C反應(yīng)4h，HPLC檢測(cè)三氯蔗糖含量，相應(yīng)的摩爾產(chǎn)率分別為21.8%、61.6%、76.1%、73.3%、66.0%。
[0033](5)在25mL的具塞單口反應(yīng)燒瓶中，濕菌體4%，甲醇含量20%，25mM磷酸鹽緩沖液(pH7.1)，底物三氯蔗糖-6-乙酸酯濃度1.0%、3.5%、5.6%，36 °C反應(yīng)16h，HPLC檢測(cè)三氯蔗糖含量，相應(yīng)的摩爾產(chǎn)率分別為96.9%、93.8%、64%。
[0034](6)在25mL的具塞單口反應(yīng)燒瓶中，濕菌體4%，甲醇含量20%，25mM磷酸鹽緩沖液(pH7.1)，底物三氯蔗糖-6-乙酸酯濃度3.5%，36°C反應(yīng)12、16、20、24h，HPLC檢測(cè)三氯蔗糖含量，相應(yīng)的摩爾產(chǎn)率分別為93.2%、94.5%、96.4%、99.6%。
[0035](7)在25mL的具塞單口反應(yīng)燒瓶中，使用重量體積比I.0%、1.5%、2.0%干燥后的吸附有菌體的聚氨酯泡沫作為三氯蔗糖-6-乙酸酯水解反應(yīng)的催化劑，甲醇含量20%，25mM磷酸鹽緩沖液(PH7.1)，底物三氯蔗糖-6-乙酸酯濃度3.5%，36°C反應(yīng)16h，HPLC檢測(cè)三氯蔗糖含量，相應(yīng)的摩爾產(chǎn)率分別為82.2%、84.5%、88.4%。
[0036]
實(shí)施例6蔗糖-6-乙酸酯的純化和鑒定
將Ig蔗糖溶于50mL溶劑(DMF:叔丁醇=1:4(V/V))，加入0.8g吸附有解淀粉芽孢桿菌WZSOl的聚氨酯泡沫，2.8 mL乙酸乙烯酯，32°C反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后離心，取上清。60°C低壓蒸餾去除叔丁醇，向得到的含有蔗糖6酯的DMF溶液加入4倍體積的二氯甲烷，離心收集沉淀，即為蔗糖-6-乙酸酯粗品，純度86.1%。
[0037]取0.4g粗品用硅膠G層析柱純化，洗脫液為乙腈:甲醇:水=8:1:1 (V/V)，流速為0.8mL/min，收集流出液，60 °C下真空濃縮，得到0.15g蔗糖-6-乙酸酯，純度為96%。
[0038]對(duì)上述產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)確定:
紅外光譜分析(KI壓片法):3392.81C-0H)，2924.90(烷烴飽和C-H)，1729.35(C=0)，1253.88(酯基C-0)，1046.28(C_0_C)，927.97(α-糖苷鍵)。
[0039]核磁共振波分析13C 圖譜結(jié)果:13C 匪 R(400MHz，C2D6SO): 170.85 (-C0CH2),103.91 (C2，)， 91.58 (Cl), 82.75 (C5’)，77.12 (C3，)， 74.66 (C4，)， 72.88 (C3),71.63 (C2), 70.34 (C5), 70.17 (C4), 63.95 (C，)，62.74 (C6，)，62.43 (Cl，)，20.84 (-C0CH2)。
[0040]上述圖譜符合蔗糖-6-乙酸酯的結(jié)構(gòu)特征。
[0041]
實(shí)施例7三氯蔗糖的純化和鑒定
將2g三氯蔗糖-6-乙酸酯溶于50mL溶劑(甲醇:pH7.0磷酸緩沖液=1:4(V/V))，加入濕重I.6g解淀粉芽孢桿菌WZSOI菌體，36°C反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后離心，取上清，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在60°C下真空去除甲醇和水，烘干，得到黃色固體結(jié)晶，純度98.6%，未檢測(cè)到三氯蔗糖6乙酸酯。
[0042]對(duì)上述產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)確定:
紅外光譜分析(KI壓片法):3398.61 (-0H)，2924.19(烷烴飽和C-H)，1088.82(C-0-C)，919.03、862.27、739.22(C-Cl)。與蔗糖-6-乙酸酯的紅外譜圖相比，羰基C=0、酯基C-O的吸收峰均消失了，這兩處變化證實(shí)了6位上的乙?；呀?jīng)脫除成功。
[0043]核磁共振波分析13C圖譜結(jié)果:13C NMR (400 MHz, D2O) δ, 104.03 (C2，)，93.36(Cl), 81.81 (C5，)， 77.04 (C3，)， 76.17 (C4，)， 71.24 (C5), 68.88 C3), 68.50(C2), 63.99 (C4), 62.25 (C6), 58.37 (s), 50.01 (s), 45.75 (C6，)， 44.59 (Cl)。
[0044]上述圖譜符合三氯蔗糖的結(jié)構(gòu)特征。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種解淀粉芽抱桿菌amyloliquefaciens)^ZSOl，保藏號(hào)為CCTCCNO:M2016096。2.如權(quán)利要求1所述的一種解淀粉芽孢桿菌在三氯蔗糖合成過(guò)程中催化蔗糖-6-乙酸酯合成的應(yīng)用。3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于以蔗糖和乙酸乙烯酯作為底物，叔丁醇作為反應(yīng)介質(zhì)，吸附有解淀粉芽孢桿菌的聚氨酯泡沫作為催化劑進(jìn)行反應(yīng)生成蔗糖-6-乙酸酯。4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的吸附有解淀粉芽孢桿菌的聚氨酯泡沫通過(guò)以下步驟得到:將加入了重量體積比為0.6?1.0%密度為10?50Kg/m3的聚氨酯泡沫的培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，冷卻后接種1%的解淀粉芽孢桿菌種子液，30 °C培養(yǎng)18?24小時(shí)后干燥得到。5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述的培養(yǎng)基包括葡萄糖2.0?3.5%、蛋白胨0.5 ?1.5%、酵母粉 0.1%。6.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于向反應(yīng)體系中加入重量體積比1.0?2.5%干燥后的吸附有解淀粉芽孢桿菌的聚氨酯泡沫，控制反應(yīng)溫度30?38°C，反應(yīng)時(shí)間16?24小時(shí)。7.如權(quán)利要求1所述的一種解淀粉芽孢桿菌在三氯蔗糖合成過(guò)程中催化三氯蔗糖-6-乙酸酯水解的應(yīng)用。8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于以三氯蔗糖-6-乙酸酯作為底物，甲醇作為三氯蔗糖-6-乙酸酯的助溶劑，含有解淀粉芽孢桿菌的濕菌體或干燥后的吸附有菌體的聚氨酯泡沫為催化劑，在PH5.1?8.0的緩沖體系中進(jìn)行水解生成三氯蔗糖。9.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于向反應(yīng)體系中加入重量體積比3?5%的濕菌體或重量體積比1.0?2.0%干燥后的吸附有菌體的聚氨酯泡沫，控制反應(yīng)溫度30?40°C，反應(yīng)時(shí)間12?24小時(shí)。10.如權(quán)利要求1所述的一種解淀粉芽孢桿菌在三氯蔗糖合成過(guò)程中催化蔗糖-6-乙酸酯合成和催化三氯蔗糖-6-乙酸酯水解的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK106047744SQ201610295481
【公開(kāi)日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年5月6日
【發(fā)明人】孫杰, 陳梁, 婁波, 沈漢軍, 金文究, 汪釗, 白彥兵
【申請(qǐng)人】杭州鑫富科技有限公司