一種從中國白酒發(fā)酵酒醅中提取總rna的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從中國白酒發(fā)酵酒醅中提取總RNA的方法，屬于生物技術領域。本發(fā)明針對白酒酒醅樣品的特殊性，通過聯(lián)合月桂酸鈉(Sodium Laurate，SL)抽提法以及異硫氰酸胍?酚?氯仿抽提法(Trizol)，能在2小時內快速提取群落微生物的總RNA。利用本發(fā)明的方法提取的微生物總RNA產量高、完整性好、純度較好，能有效提取樣品中的真核和原核微生物。
【專利說明】
-種從中國白酒發(fā)酵酒酷中提取總RNA的方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明設及一種從中國白酒發(fā)酵酒酷中提取總RNA的方法，屬于生物技術領域。
【背景技術】
[0002] 現有技術條件下，95% W上微生物不可培養(yǎng)，運是傳統(tǒng)微生物生態(tài)學在掲示自然 界微生物群落結構、生態(tài)功能及其相互關系研究中的最大障礙。近年來，通過宏轉錄組學的 方法，從mRNA水平上研究環(huán)境微生物，取得了很大的成功，且獲得的結果更準確、可靠。隨著 對群落微生物的結構和功能研究的深入，需要提取某一種生態(tài)體系內全部微生物的總RNA 作為分析群落微生物結構和功能的基本要求。
[0003] 目前有的關于群落微生物的總RNA提取方法最接近的是提取±壤中群落微生物的 總RNA，但是±壤微生物和中國醬香型白酒發(fā)酵酒酷相比，存在很大的不同?！廊乐泻S富 的腐殖酸、多糖、多酪等物質，使提取的微生物總RNA純度不高，且環(huán)境中廣泛存在著RNA酶， RNA易被其降解，給RNA提取帶來了許多困難。酪類化合物在勻漿時極易被氧化成釀類物質， 與RNA不可逆地結合，從而影響總RNA的分離純化。多糖的許多理化性質與RNA相似，在提取 過程中能與RNA共沉淀，難W分離。與±壤的情況不同的是，白酒酒酷中主要是各種糧食，主 要是高梁。糧食中不僅富含多糖多酪，而且在微生物的利用過程中產生了更多的次級代謝 產物。各種次級代謝產物更是會和RNA發(fā)生難W預料的反應。
[0004] 目前RNA的提取方法主要是異硫氯酸脈-酪-氯仿抽提法(Trizol)、十二烷基硫酸 鋼（Sodium Dodec}d Sulfate，SDS)法、十六烷基S甲基漠化錠（Cetyltrimethylammonium Bromide，CTAB)法和熱棚酸法等。其中SDS法針對原核微生物的總RNA提取效果較好，但是針 對有細胞壁的真核微生物，SDS的破壁效果非常不好，所W無法使用在既有真核又有原核的 群落微生物總RNA提取中。而CTAB法操作需要預熱，溫度過高會使得RNA降解酶變得活躍導 致RNA被降解，同時CTAB法好使也比較長，操作麻煩，通常還需要LiCl配合使用。熱棚酸法不 僅需要添加蛋白酶，KC1等配合試劑，同時還需要你預熱，溫度過高也會使得RNA降解酶變得 活躍導致RNA被降解。
[0005] 此外，運些方法都是單一的針對某一類或某一種微生物，并不適用于提取群落微 生物尤其是真核和原核微生物混合在一起的情況。通過對中國白酒的發(fā)酵酒酷進行16S和 ITS擴增子的鑒別，發(fā)現在中國白酒半自然發(fā)酵的發(fā)酵方式，尤其是中國醬香型白酒的發(fā)酵 方式決定了白酒的發(fā)酵酒酷中存在種類和數量眾多的群落微生物，包括許多常見的W及特 殊的真核和原核生物，尤其是各式各樣的霉菌，酵母，細菌，放線菌等等。因此，開發(fā)一種簡 便的、適合快速提取群落微生物的總RNA的方法，尤其是適合白酒發(fā)酵過程的群落微生物的 總RNA提取方法，是非常有必要的。

【發(fā)明內容】

[0006] 基于上述問題，本發(fā)明的目的是在于提供了一種從中國白酒發(fā)酵酒酷中提取總 RNA的方法，通過聯(lián)合月桂酸鋼(Sodium Laurate，SL)抽提法W及異硫氯酸脈-酪-氯仿抽提 法(Trizol)，能在2小時內快速提取群落微生物的總RNA。利用本發(fā)明的方法提取的微生物 總RNA產量高、完整性好、純度較好，能有效提取樣品中的真核和原核微生物。
[0007] 所述從白酒發(fā)酵酒酷中提取總RNA的方法，步驟如下：
[0008] (1)將酒酷樣品用無菌PBS緩沖液懸浮并加入玻璃珠縱滿震蕩；
[0009] (2)低速離屯、后取上清，沉淀用PBS緩沖液重復洗涂、低速離屯、，合并上清；
[0010] (3)將步驟(2)得到的上清高速離屯、，取沉淀，冷凍；
[0011] (4)將按體積份數計，由15-25份月桂酸鋼抽提緩沖液、15-25份化izol、0.5-1.5份 琉基乙醇和0.5-1.5份二硫蘇糖醇(m/V)組成的抽提混合液，輕輕混勻，放置冰上；
[0012] (5)將步驟(3)的冷凍的樣品置于預冷的研鉢中，倒入液氮，迅速研磨至粉末，期間 不斷加入液氮，防止研磨過程中RNA被降解；
[0013] (6)將研磨好的粉末移入裝有抽提混合液的Rnase-free離屯、管中，反復緩慢的搖 勻；
[0014] (7)高速離屯、，吸取上清液置于RNase-打ee離屯、管中；
[0015] (8)加入0.8-1.2倍體積(相對于上一步吸取得到的上清液體積而言）的氯仿，蓋好 管蓋，輕輕混勻，放置冰上；
[0016] (9)高速離屯、，吸取上清液置于化ase-打ee離屯、管中；
[0017] (10)加入0.5-1倍體積(相對于上一步吸取得到的上清液體積而言）的異丙醇，混 勻，冰上放置；
[001引（11)高速離屯、，棄去上清液；
[0019] (12)加入體積濃度為70-80%的乙醇洗涂沉淀，高速離屯、后棄去上清液；
[0020] (13)加入RNase-Free d地2〇,即得到溶解的RNA。
[0021] 在本發(fā)明的一種實施方式，PBS緩沖液濃度為O.lmol/L(配置方法:42.3ml Imol/ Lfe出P〇4和57.7mL Imol/L Na2HP〇4,用去離子水定容至IL后121°C滅菌15min)。
[0022] 在本發(fā)明的一種實施方式，PBS緩沖液中含有0.25-0.5% (v/v)的腐殖酸清除劑。 添加了腐殖酸清除劑后，得到的總RNA濃度濃度不變而純度更高。
[0023] 在本發(fā)明的一種實施方式，所述步驟（1)中樣品與PBS按照l:2(m/v)的比例混合， 玻璃珠加量為樣品量的1/5;震蕩時間為2-3min。
[0024] 在本發(fā)明的一種實施方式，所述步驟(2)的離屯、時間為4-8min。
[00巧]在本發(fā)明的一種實施方式，化ase-打ee離屯、管是采用的1.5mL的。
[0026] 在本發(fā)明的一種實施方式，研磨好的粉末與抽提混合液是按照1:8-1:12(m/v)的 比例添加，即每Ig研磨好的粉末加入8-12mL抽提混合液。
[0027] 在本發(fā)明的一種實施方式，所述低速離屯、是指450-55化pm，高速離屯、是指11000- 13000rpm〇
[002引在本發(fā)明的一種實施方式，所述月桂酸鋼抽提緩沖液：pH 8.0的Tris-HCl 0.1mol/L，NaC10.1mol/L，p冊.0的邸TA 0.02mol/L，月桂酸鋼lOg/L，抑 8.0。
[0029] 在本發(fā)明的一種實施方式，所述Trizol試劑可^是1]1￥；[1：1'0旨6]1公司的T斑就憾 Reagent, Si gma公司的TRI.氏說g紐傅)等，也可W是上述公司的Tr i Z 01試劑按照一定比例混合 得到的。
[0030] 在本發(fā)明的一種實施方式，步驟(3)、（7)、（9)、（11)的離屯、的時間為8-15111111，步驟 (12)的離屯、的時間為2-5min。
[0031] 在本發(fā)明的一種實施方式，所述步驟(6)中反復緩慢搖勻10-25min。
[0032] 在本發(fā)明的一種實施方式，步驟(7)、（9)、（ 11)、（ 12)的離屯、是在0-4°C的條件下進 行的。
[0033] 在本發(fā)明的一種實施方式，所述步驟(8)放置冰上0.5-2min。
[0034] 在本發(fā)明的一種實施方式，所述步驟(10)在冰上放置15-25min。
[0035] 在本發(fā)明的一種實施方式，步驟(12)加入的乙醇體積為ImL。
[0036] 在本發(fā)明的一種實施方式，步驟（13)是先室溫放置l-2min，加入30-50UL RNase- 化66 cM也0。
[0037] 在本發(fā)明的一種實施方式，所述方法具體是：
[003引（1)取25g樣品溶于50ml無菌0.1mol/L PBS(42.3ml lmol/LNaH2P04和57.7ml Imol/L化抽K)4,用去離子水定容至IL后121°C滅菌15min)緩沖液懸浮，加入5顆5-6mm玻璃 珠，縱滿震蕩2-3min;
[0039] (2)5(K)rpm離屯、5min，取上清，沉淀用PBS緩沖液重復洗涂S次，離屯、后收集全部上 清；
[0040] (3)將上清1200化pm離屯、15min，棄掉上清液，蓋好管蓋，液氮冷凍；
[0041] (4)準備抽提混合液（由20份月桂酸鋼抽提緩沖液，20份Trizoia份琉基乙醇和1 份二硫蘇糖醇組成），輕輕混勻，放置冰上；
[0042] (5)研鉢W液氮預冷，將樣品置于研鉢中，倒入液氮，迅速研磨至粉末，期間不斷加 入液氮，防止研磨過程中RNA被降解；
[0043] (6)將研磨好的粉末（約0.15g)移入裝有混合液的1.5血化ase-打ee離屯、管中，反 復緩慢的搖勻15-20min;
[0044] (7)12000rpm 4°C離屯、lOmin后取出，小屯、吸取上清液置于1.5mL foiase-free離屯、 管中；
[0045] (8)加入等體積的氯仿，蓋好管蓋，輕輕混勻，冰上放置Imin;
[0046] (9)12000rpm 4°C離屯、lOmin后取出，小屯、吸取上清液置于1.5mL foiase-free離屯、 管；
[0047] (10)加入0.7倍體積的異丙醇，混勻，冰上放置15-25min;
[004引 （11)12000巧m 4°C離屯、lOmin，棄去上清液；
[0049] (12)加入1ml 75% (v/v)乙醇洗涂沉淀，12000巧m 4°C離屯、離屯、3min。倒出液體， 注意不要倒出沉淀，余下的液體用槍頭吸出，注意不要吸到沉淀；
[00加](13)室溫放置l-2min，加入30uL RNase-Free d地2〇,反復吹打、混勻，充分溶解 RNA。
[0051 ] 在本發(fā)明的一種實施方式中，所述步驟（13)中RNase-Free d地2〇中還含有RNA保 存試劑和Dnase。
[0052] 本發(fā)明具有W下優(yōu)點和效果：
[0053] 1)操作方便:提取過程簡單、易操作；克服了現有的SDS，CTAB和熱棚酸抽提法中， 需要預熱，需要分批添加蛋白酶，KC1等配合試劑的缺點，有效防止高溫加熱容易加速RNA分 解酶降解RNA的機率，預先混合
[0054] 2)效果優(yōu)良：操作過程，操作過程中全部液體試劑預先添加了 RNA酶抑制劑，全部 在低溫下操作，盡可能的阻礙了 RNA被降解，從而使RNA濃度能在900-1200ng/uL。
[0055] 3)適用范圍廣:適用不同地區(qū)、不同來源的中國白酒酒酷中微生物總RNA的提取， 通過后續(xù)宏轉錄組的分析，真核和原核微生物都有良好的提取率(圖2)。
【附圖說明】
[0056] 圖1:不同抽提方法下的抽提效果;其中泳道1為實施例1得到的RNA，泳道2為實施 例2得到的RNA，泳道3為實施例3得到的RNA，泳道4為Trizol抽提法提取得到的RNA，泳道5為 利用不加琉基乙醇的抽提混合液得到的RNA，泳道6為使用腳ase-Free d地2〇代替PBS得到 的 RNA;
[0化7]圖2:宏轉錄組分析。
【具體實施方式】
[0化引試劑配置：
[0化9] (1)無菌 O.lmol/LPBS 緩沖液：
[0060] 42.3mL Imol/L 化此P〇4和57.7mL Imol/L 化抽P〇4,用去離子水定容至 1L后 12TC 滅菌15min。
[0061] (2)月桂酸鋼抽提緩沖液：
[0062] lYis-HCKp服.0)0.1mol/l;rfeCl O.lmol/L;抓TA(p冊.0)0.02111〇1/1;月桂酸鋼 lOg/L。準確稱取化C1 5.844g，月桂酸鋼lOg置于lOOOmL燒杯中，加入100ml Tris-HCl (lmol/L)，40血邸TA(0.5mol/L)和800mL RNase-free d地2〇,用鹽酸調節(jié)抑至8.0,定容至 1L，滅困后室溫保存。
[0063] (3)T;rizol試劑使用的是Invitrogen公司的TRIzol試劑。
[0064] (4)75% (v/v)乙醇：由7.5份無水乙醇和2.5份RNase-free d地2〇配置。
[00化]實施例1:
[0066] 按照W下方法提取中國醬香型白酒發(fā)酵酒酷的微生物總RNA:
[0067] (1)取25g樣品溶于50mL無菌O.lmol/L PBS(42.3ml Imol/LNa出P〇4和57.7mllmol/ LNa抽K)4,用去離子水定容至IL后121°C滅菌15min)緩沖液懸浮，加入5g玻璃珠，縱滿震蕩2- 3min；
[0068] (2) 50化pm離屯、5min，取上清，沉淀用PBS緩沖液重復洗涂S次，離屯、后收集全部上 清;通過步驟（1)和步驟(2)去除了發(fā)酵酒酷中的除微生物W外的其余雜質，包過固體糧食 W及溶于液體的多糖和雜酸；
[0069] (3)將上清1200化pm離屯、15min，棄掉上清液，蓋好管蓋，液氮冷凍；
[0070] (4)準備抽提混合液（由20份月桂酸鋼抽提緩沖液，20份Trizol，1份琉基乙醇和1 份二硫蘇糖醇組成，其中液體按照體積份數算，固體按照質量份數算，質量比體積的單位為 g/mL)，輕輕混勻，放置冰上；
[0071] (5)研鉢W液氮預冷，將樣品置于研鉢中，倒入液氮，迅速研磨至粉末，期間不斷加 入液氮，使微生物細胞破碎，并防止研磨過程中RNA被降解；
[0072] (6)將研磨好的粉末（約0.15g)移入裝有混合液的1.5血化ase-打ee離屯、管中，反 復緩慢的搖勻15-20min;
[0073] (7)12000rpm 4°C離屯、lOmin后取出，小屯、吸取上清液置于1.5mL foiase-free離屯、 管中；
[0074] (8)加入等體積的氯仿，蓋好管蓋，輕輕混勻，冰上放置Imin;
[0075] (9)12000rpm 4°C離屯、lOmin后取出，小屯、吸取上清液置于1.5mL foiase-free離屯、 管；
[0076] (10)加入0.7倍體積的異丙醇，混勻，冰上放置15-25min;
[0077] (11)12000巧m 4°C離屯、lOmin，棄去上清液；
[007引 （12)加入1ml 75% (v/v)乙醇洗涂沉淀，12000巧m 4°C離屯、離屯、3min。倒出液體， 注意不要倒出沉淀，余下的液體用槍頭吸出，注意不要吸到沉淀；
[00巧](13)室溫放置l-2min，加入30uL RNase-Free d地2〇,反復吹打、混勻，充分溶解 RNA。
[0080] 實施例2:
[0081] 按照W下方法提取中國清香型白酒發(fā)酵酒酷的微生物總RNA:
[0082] (1)取25g樣品溶于50mL無菌O.lmol/L PBS緩沖液懸浮，加入5g玻璃珠，縱滿震蕩 2-3min；
[0083] (2) 55化pm離屯、4min，取上清，沉淀用PBS緩沖液重復洗涂S次，離屯、后收集全部上 清;通過步驟（1)和步驟(2)去除了發(fā)酵酒酷中的除微生物W外的其余雜質，包過固體糧食 W及溶于液體的多糖和雜酸；
[0084] (3)將上清1100化pm離屯、8min，棄掉上清液，蓋好管蓋，液氮冷凍；
[0085] (4)準備抽提混合液（由15份月桂酸鋼抽提緩沖液、25份TrizoUO. 5份琉基乙醇和 1.5份二硫蘇糖醇組成），輕輕混勻，放置冰上；
[0086] (5)研鉢W液氮預冷，將樣品置于研鉢中，倒入液氮，迅速研磨至粉末，期間不斷加 入液氮，使微生物細胞破碎，并防止研磨過程中RNA被降解；
[0087] (6)將研磨好的粉末（約0.15g)移入裝有混合液的1.5血化ase-打ee離屯、管中，反 復緩慢的搖勻20min;
[008引 （7)12000rpm 4°C離屯、12min后取出，小屯、吸取上清液置于1.5mL foiase-free離屯、 管中；
[0089] (8)加入0.8倍體積的氯仿，蓋好管蓋，輕輕混勻，冰上放置Imin;
[0090] (9)13000rpm 4°C離屯、15min后取出，小屯、吸取上清液置于1.5mL foiase-free離屯、 管；
[0091] (10)加入1倍體積的異丙醇，混勻，冰上放置15-25min;
[0092] (11)11000巧m 4°C離屯、8min，棄去上清液；
[0093] (12)加入70% (v/v)乙醇洗涂沉淀，12000巧m 4°C離屯、離屯、3min。倒出液體，注意 不要倒出沉淀，余下的液體用槍頭吸出，注意不要吸到沉淀；
[0094] (13)室溫放置l-2min，加入30uL RNase-Free d地2〇,反復吹打、混勻，充分溶解 RNA。
[0095] 實施例3:
[0096] 按照W下方法提取中國濃香型白酒發(fā)酵酒酷的微生物總RNA:
[0097] (1)取25g樣品溶于50mL無菌O.lmol/L PBS緩沖液懸浮，加入5g玻璃珠，漉滿震蕩 2-3min;
[0098] (2) 45化pm離屯、8min，取上清，沉淀用PBS緩沖液重復洗涂S次，離屯、后收集全部上 清;通過步驟（1)和步驟(2)去除了發(fā)酵酒酷中的除微生物W外的其余雜質，包過固體糧食 W及溶于液體的多糖和雜酸；
[0099] (3)將上清1300化pm離屯、12min，棄掉上清液，蓋好管蓋，液氮冷凍；
[0100] (4)準備抽提混合液（25份月桂酸鋼抽提緩沖液、15份化izol、l. 5份琉基乙醇和 0.5份二硫蘇糖醇組成），輕輕混勻，放置冰上；
[0101] (5)研鉢W液氮預冷，將樣品置于研鉢中，倒入液氮，迅速研磨至粉末，期間不斷加 入液氮，使微生物細胞破碎，并防止研磨過程中RNA被降解；
[0102] (6)將研磨好的粉末（約0.15g)移入裝有混合液的1.5血化ase-打ee離屯、管中，反 復緩慢的搖勻15min;
[0103] (7) 11500;rpm 4°C離屯、8min后取出，小屯、吸取上清液置于1.5mL Rnase-free離屯、 管中；
[0104] (8)加入1.2倍體積的氯仿，蓋好管蓋，輕輕混勻，冰上放置Imin;
[0105] (9)13000rpm 4°C離屯、12min后取出，小屯、吸取上清液置于1.5mL foiase-free離屯、 管；
[0106] (10)加入0.5倍體積的異丙醇，混勻，冰上放置15-25min;
[0107] (11)12000巧m 4°C離屯、15min，棄去上清液；
[010引 （12)加入ImL 80%(v/v)乙醇洗涂沉淀，12000巧m 4°C離屯、離屯、3min。倒出液體， 注意不要倒出沉淀，余下的液體用槍頭吸出，注意不要吸到沉淀；
[0109] (13)室溫放置l-2min，加入50uL RNase-Free d地2〇,反復吹打、混勻，充分溶解 RNA。
[0110] 按照實施例1-3的方法得到的RNA溶液的電泳檢測結果（圖1)顯示，使用本發(fā)明的 月桂酸鋼抽提法結合化izol抽提法提取的總RNA均具有兩條完整的28S和18S核糖體RNA條 帶（圖1的泳道1-3)，而對照Trizol抽提法提取的總RNA基本不可見（圖1的泳道4)，表明本發(fā) 明的方法能夠提取高質量的總RNA。
[0111] 對照：
[0112] 對照1:采用Trizol抽提法，具體是指將步驟(4)的抽提混合液換成TrizoK即不含 有月桂酸鋼抽提緩沖液、二硫蘇糖醇和琉基乙醇），其他步驟與實施例1 一致;得到的總RNA 電泳圖如圖1的泳道4。
[0113] 對照2:抽提混合液中不加琉基乙醇;其他步驟與實施例1 一致;得到的總RNA電泳 圖如圖1的泳道5。此外，抽提混合液中不加二硫蘇糖醇，或者同時不加二硫蘇糖醇和琉基乙 醇，得到的總RNA電泳圖與圖1的泳道5的類似。
[0114] 對照3:使用腳ase-Free d地2〇代替步驟（1)和（2)中的PBS緩沖液，其他步驟與實 施例1 一致;得到的總RNA電泳圖如圖1的泳道6。
[0115] 表1總RNA濃度 「01161

[0117] 將實施例1得到的RNA進行宏轉錄組測序，結果如圖2所示。結果表明，提取所得總 RNA中既有結合酵母，畢赤酵母，釀酒酵母運一類真核微生物，也有乳酸菌，鏈球菌，放線菌 運一類原核微生物，說明本提取方法可W有效地同時提取真核W及原核微生物。而且本提 取方法并沒有偏好性，可W完整地保存群落微生物中真核和原核微生物的比例。
[0118] 綜上，本發(fā)明的方法適用于各類白酒酒酷中總RNA提取，且提取效果良好，能夠得 至曬條完整的28S和18S核糖體RNA條帶，還可W將真核微生物和原核微生物的總RNA都提取 出來，得到的RNA適合用于后續(xù)宏轉錄組學分析。
[0119] 雖然本發(fā)明已W較佳實施例公開如上，但其并非用W限定本發(fā)明，任何熟悉此技 術的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內，都可做各種的改動與修飾，因此本發(fā)明的保護范 圍應該W權利要求書所界定的為準。
【主權項】
1. 一種從白酒發(fā)酵酒醅中提取總RNA的方法，其特征在于，所述方法的步驟如下： (1) 將酒醅樣品用無菌PBS緩沖液懸浮并加入玻璃珠漩渦震蕩； (2) 低速離心后取上清，沉淀用PBS緩沖液重復洗滌、低速離心，合并上清； (3) 將步驟(2)得到的上清高速離心，取沉淀，冷凍； (4) 將由15-25份月桂酸鈉抽提緩沖液、15-25份Trizol、0.5-1.5份巰基乙醇和0.5-1.5 份二硫蘇糖醇組成的抽提混合液，輕輕混勻，放置冰上； (5) 將步驟(3)的冷凍的樣品置于預冷的研缽中，倒入液氮，迅速研磨至粉末，期間不斷 加入液氮，防止研磨過程中RNA被降解； (6) 將研磨好的粉末移入裝有抽提混合液的Rnase-free離心管中，反復緩慢的搖勻； (7) 高速離心，吸取上清液置于Rnase-free離心管中； (8) 加入0.8-1.2倍體積的氯仿，蓋好管蓋，輕輕混勻，放置冰上； (9) 高速離心，吸取上清液置于Rnase-free離心管中； (10) 加入0.5-1倍體積的異丙醇，混勻，冰上放置； (11) 高速離心，棄去上清液； (12) 加入體積濃度為70-80 %的乙醇洗滌沉淀，高速離心后棄去上清液； (13) 加入RNase-Free ddH20,即得到溶解的RNA。2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述研磨好的粉末與抽提混合液是按照m/ v為1:8-1:12的比例添加。3. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述低速離心是指450-550rpm，高速離心 是指 11000-13000rpm。4. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述月桂酸鈉抽提緩沖液:pH 8.0的1^8_ HC10·lmol/L，NaC10·lmol/L，pH8·0的EDTA0·02mol/L，月桂酸鈉10g/L，pH8·0。5. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(7)、（9)、（11)或（12)的離心是在 0-4 °C的條件下進行的。6. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)、（7)、（9)或（11)的離心的時 間為 8_15min。7. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(12)的離心的時間為2-5min。8. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（13)是先室溫放置l-2min，加入 3〇-50uL RNase-Free ddH2〇〇9. 根據權利要求1-8任一所述方法得到的總RNA。10. 權利要求9所述的總RNA在群落微生物的結構分析、群落微生物的功能分析，或者相 關宏基因組分析方面的應用。
【文檔編號】C12N15/10GK106047865SQ201610659247
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年8月11日 公開號201610659247.3, CN 106047865 A, CN 106047865A, CN 201610659247, CN-A-106047865, CN106047865 A, CN106047865A, CN201610659247, CN201610659247.3
【發(fā)明人】杜海, 徐巖, 宋哲瑋
【申請人】江南大學