一種以氨基酸水解液及水稻秸稈為原料生產(chǎn)木霉固體菌種的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種以氨基酸水解液及水稻秸稈為原料生產(chǎn)木霉固體菌種的方法。本發(fā)明利用具有良好植物根際促生作用的絲狀真菌Trichoderma harzianum，在28℃培養(yǎng)條件下充分利用富含木質(zhì)纖維素的水稻秸稈和廢棄畜禽氨基酸水解液養(yǎng)分快速生長并產(chǎn)孢，固體發(fā)酵5?6天后貴州木霉NJAU4742的厚垣孢子數(shù)量高達(dá)到2.4×1010spore/g，將該固體菌種直接添加到腐熟有機(jī)肥中，可快速生產(chǎn)穩(wěn)定且有效活菌數(shù)>2×108的木霉氨基酸生物有機(jī)肥，該生物有機(jī)肥對番茄具有很好根際促生作用。CGMCC No.1216620160411
【專利說明】
一種以氨基酸水解液及水稻秸稈為原料生產(chǎn)木霉固體菌種的 方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物肥料領(lǐng)域，涉及一種以氨基酸水解液及水稻秸桿為原料生產(chǎn)木霉 固體菌種的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 水稻秸桿是一種重要的農(nóng)業(yè)資源，可用于畜禽飼料、造紙原料、建筑材料、生物質(zhì) 能源及有機(jī)肥原材料等。我國水稻種植面積達(dá)3000萬hm 2,水稻秸桿資源豐富。由于利用率 不高，特別是大部分農(nóng)村的稻草仍被丟棄或焚燒等的利用不合理導(dǎo)致浪費(fèi)了資源造成了嚴(yán) 重的環(huán)境污染，不利于環(huán)境保護(hù)，更不利于生態(tài)的可持續(xù)發(fā)展，近幾十年來，證實了稻秸桿 經(jīng)微生物降解后在土壤肥料方面具有絕對的優(yōu)勢和潛力。水稻秸桿作為一種重要的生物質(zhì) 資源，將越來越多地被用作有機(jī)肥的主要原料。水稻秸桿富含纖維素，還含有鉀、鈣、磷等多 種化學(xué)元素，是土壤中有機(jī)質(zhì)的主要來源，通過在田間自然腐爛，不但可以肥田、改善土壤 土質(zhì)，還可以增加下茬作物的產(chǎn)量。
[0003] 另一方面，高度集約化的養(yǎng)殖業(yè)中動物正常死亡率提高，而遇到突發(fā)性疫病死亡 率就更高。如果這些廢棄畜禽不進(jìn)行有效的無害化處理，直接丟棄將造成嚴(yán)重的環(huán)境污染， 被不法分子獲得并進(jìn)入市場則對人們的身體健康及公共安全造成嚴(yán)重威脅。廢棄畜禽也是 引發(fā)動物疫病的重要傳染源，目前國內(nèi)對病死畜禽的處理方法主要有:直接深埋，建沼氣池 將其發(fā)酵，直接焚燒等方法。這些方法都有其弊端，如造成環(huán)境污染或水質(zhì)污染，而將廢棄 畜禽酸水解生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸，其不僅無害化解決了上述問題，同時為新型生物有機(jī)肥的研 制提供豐富的原料。微生物有機(jī)肥不僅具有較好的肥效，添加的氨基酸水解液更能為功能 微生物提供豐富的養(yǎng)分，使其在土壤中更易于根際定殖并刺激植物生長及誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系 統(tǒng)抗性。
[0004] 木霉(Trichoderma sp.)是一類重要的生防真菌，按傳統(tǒng)分類系統(tǒng)，屬于半知菌亞 門（Deuteromycotina)、絲抱綱（Hyphomycetes)、絲抱目（Hyphomycetales)、絲抱科 (Hyphomycetaceae)。近年來人們發(fā)現(xiàn)，生防木霉不僅對植物病原真菌具有詰抗效應(yīng)并能促 進(jìn)植物的生長，同時木霉有很強(qiáng)的根際定植能力，其代謝產(chǎn)物有抗生素、生長素等分泌物具 有溶磷、固氮等作用促進(jìn)植物生長。已有大量報道指出，貴州木霉對辣椒、馬鈴薯、萵苣、黃 瓜、白菜、豌豆、花生、長春花和菊花等多種作物有促生效應(yīng)。在土壤中加入貴州木霉可以有 效地促進(jìn)植物的生長，提高作物的產(chǎn)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是為了解決水稻秸桿和養(yǎng)殖場廢棄畜禽及屠宰下腳料資源不合理 利用導(dǎo)致的環(huán)境污染問題，提供一種以水稻秸桿和廢棄畜禽氨基酸水解液為原料生產(chǎn)木霉 固體菌種的方法，所得木霉固體菌種可直接添加到腐熟有機(jī)肥中生產(chǎn)高附加值的木霉生物 有機(jī)肥。
[0006] 本發(fā)明的目的可通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0007] -種以氨基酸水解液及水稻秸桿為原料生產(chǎn)木霉固體菌種的方法，將水稻秸桿粉 碎加入稀釋后的廢棄畜禽氨基酸水解液中浸泡過夜，然后用Κ0Η調(diào)節(jié)浸泡秸桿的pH值至 3.5-4.5，將調(diào)好pH的水稻秸桿撈出，調(diào)節(jié)含水量至70%-75% (w/w)，攪拌至蓬松狀，向其中 添加玉米粉攪拌均勻后作為基質(zhì)，向基質(zhì)中接種貴州木霉發(fā)酵菌液，攪拌均勻后平鋪在淺 盤內(nèi)，并置于暗室中發(fā)酵。
[0008] 本發(fā)明所述方法中，水稻秸桿在浸泡前優(yōu)選粉碎為〇. 5-1.5cm的細(xì)粉末狀。
[0009] 本發(fā)明所述方法中，廢棄畜禽氨基酸水解液優(yōu)選通過以下方法制備得到：（1)在密 閉容器中先將病死畜禽動物經(jīng)自動化粉碎、所有固形物和液體自動轉(zhuǎn)入密閉的水解罐后， 在初始酸濃度c(l/2H 2S〇4)為3-5mol L-^δΟ-ΙΟΟΓ和1-2個大氣壓下水解2-5小時；
[0010] (2)水解結(jié)束待水解罐內(nèi)溶液冷卻至80°C以下時，利用能出入水解罐加料口漂浮 直立在油脂上的真空倒吸裝置分離上層油脂；
[0011] (3)油脂被分離后，在水解罐中按水解液與氫氧化鉀質(zhì)量比為4:1慢慢加入氫氧化 鉀，邊加邊攪拌，調(diào)整溶液pH值為1-3;或按水解液與龍蝦殼或螃蟹殼質(zhì)量比為10:3在水解 液中加入龍蝦殼或螃蟹殼，升溫至溫度80°C、1_2個大氣壓內(nèi)下維持1-2小時，然后待溫度降 至30°C以下，按水解液與氫氧化鉀質(zhì)量比為12.5:1慢慢加入氫氧化鉀，調(diào)整溶液pH值為1-3；
[0012] (4)將調(diào)整pH值后的水解液從水解罐中放入由聚四氟乙烯塑料制成的容器內(nèi)，讓 其自然沉淀1-1.5小時，收集氨基酸溶液;必要時可將溶液再次放入沉淀容器中進(jìn)行二次沉 淀2-3小時，收集氨基酸溶液。
[0013] 本發(fā)明所述方法中，優(yōu)選將水稻秸桿加入30~40體積倍稀釋后的廢棄畜禽氨基酸 水解液中浸泡過夜;進(jìn)一步優(yōu)選將水稻秸桿加入30體積倍稀釋后的廢棄畜禽氨基酸水解液 中浸泡過夜；以起到軟化秸桿并在低pH條件下對秸桿進(jìn)行滅菌的作用。
[0014] 本發(fā)明所述方法中，優(yōu)選用Κ0Η調(diào)節(jié)浸泡秸桿的pH值至3.5。
[0015]本發(fā)明所述方法中，所述的玉米粉添加量優(yōu)選為10wt%~40wt%(以秸桿干重為 基準(zhǔn)），進(jìn)一步優(yōu)選30wt%。
[0016] 本發(fā)明所述方法中，貴州木霉孢子通過貴州木霉發(fā)酵液的形式添加，發(fā)酵液添加 量為20%~50%(g/100ml)，優(yōu)選20%;所述的貴州木霉發(fā)酵液中木霉數(shù)量約為10 8spore/ mL〇
[0017] 本發(fā)明所述方法中，淺盤中秸桿厚度為2cm-5cm，保鮮膜封口戳開少許孔(氧氣）； 暗室中發(fā)酵的溫度為28°C-32°C，發(fā)酵的時間為7-10天。
[0018] 一種木霉菌劑生物有機(jī)肥制備方法，包括按照本發(fā)明上述方法制備木霉固體菌種 (有效活菌數(shù)lxl〇1()Sp〇re/g dw)，按1%的量直接與發(fā)酵好的氨基酸有機(jī)肥進(jìn)行復(fù)配，攪拌 混勻后獲得貴州木霉氨基酸生物有機(jī)肥，其中有效活菌數(shù)高達(dá)到4.8X108sp〇re/g。
[0019] 本發(fā)明所述的木霉菌劑生物有機(jī)肥制備方法還可包括對貴州木霉氨基酸生物有 機(jī)肥的分篩和/或造粒。
[0020] 本發(fā)明所述的貴州木霉適用于所有的貴州木霉，尤其適用于具有促生作用，用于 生產(chǎn)生物肥料的貴州木霉，如自行分離及市售的木霉生防菌株均適用于本發(fā)明方法;優(yōu)選 保藏號為06]\1〇^?^0.12166的貴州木霉?^\1]4742(1'1'；!_(311〇(161'11^8111211〇1161186)
[0021] 有益效果：
[0022] 本發(fā)明是一種能將水稻秸桿添加廢棄畜禽氨基酸水解液通過接種根際促生菌貴 州木霉菌種，快速生產(chǎn)木霉固體菌種及木霉氨基酸生物有機(jī)肥，本發(fā)明的有益效果在于：
[0023] (1)本發(fā)明針對工廠化木霉固體發(fā)酵存在的上述瓶頸問題，一改傳統(tǒng)的固體材料 滅菌之思路，通過調(diào)控固體材料的pH值，創(chuàng)造一個讓木霉快速生長、繁殖和抑制其他雜菌生 長的固體發(fā)酵材料的酸度，同時，篩選出最佳的木霉?fàn)I養(yǎng)配方，創(chuàng)造性地建立了一種廉價的 木霉固體菌種發(fā)酵專利技術(shù)工藝，本發(fā)明克服了木霉菌株長期以來固體發(fā)酵產(chǎn)孢量低的問 題，為生產(chǎn)木霉氨基酸生物有機(jī)肥提供堅實的基礎(chǔ);按1 %的量直接與發(fā)酵好的氨基酸有機(jī) 肥進(jìn)行復(fù)配，攪拌混勻后獲得貴州木霉氨基酸生物有機(jī)肥，其中有效活菌數(shù)高達(dá)到4.8 X 108sp〇re/g，達(dá)到生物有機(jī)肥的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。
[0024] (2)本發(fā)明所制備的生物有機(jī)肥的有效活菌數(shù)比菌絲更能長期穩(wěn)定存放，所得生 物有機(jī)肥品質(zhì)優(yōu)良。
[0025] (3)實現(xiàn)了養(yǎng)殖場大量廢棄物的資源化利用實現(xiàn)了構(gòu)建生態(tài)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn) 略。將廢棄豬肉酸解生產(chǎn)農(nóng)用氨基酸，其不僅給廢棄豬肉的合理無害化處理提供了新思路， 為木霉有益菌株的產(chǎn)孢提供了良好的養(yǎng)分條件，還有利于新型生物有機(jī)肥的研制。
[0026] (4)本發(fā)明拓寬了木霉固體發(fā)酵產(chǎn)孢培養(yǎng)基主料水稻秸桿的有效循環(huán)利用，既有 利于自然生態(tài)保護(hù)，減少環(huán)境污染，又可變廢為寶，降低木霉發(fā)酵生產(chǎn)成本，產(chǎn)生良好的經(jīng) 濟(jì)效益，最大可能地實現(xiàn)經(jīng)濟(jì)社會效益，同時也符合當(dāng)今循環(huán)可持續(xù)發(fā)展的戰(zhàn)略方針。
【附圖說明】
[0027] 圖1貴州木霉NJAU4742的厚垣孢子懸浮液
[0028]圖2貴州木霉4742的厚垣孢子血球計數(shù)板計數(shù)
[0029]圖3不同稀釋倍數(shù)氨基酸水解液浸泡對貴州木霉NJAU4742產(chǎn)孢子的影響
[0030]圖4貴州木霉NJAU4742不同初始pH值得固體發(fā)酵結(jié)果
[0031] 圖5貴州木霉NJAU4742不同初始pH的產(chǎn)孢曲線
[0032]圖6不同初始pH對貴州木霉NJAU4742產(chǎn)孢的影響
[0033]圖7不同玉米粉添加量對貴州木霉NJAU4742產(chǎn)孢的影響
[0034]圖8貴州木霉NJAU4742氨基酸生物有機(jī)肥產(chǎn)品
[0035]圖9貴州木霉NJAU4742氨基酸生物有機(jī)肥盆栽促生效果
[0036]生物材料保藏信息
[0037] NJAU4742,分類命名貴州木霉(Trichoderma guizhouense)，保藏于中國微生物菌 種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科 學(xué)院微生物研究所，保藏日期為2016年4月11日，菌株保藏號CGMCC No.12166。
【具體實施方式】
[0038] 以下實施例以貴州木霉NJAU4742(Trichoderma guizhouense)為例舉例說明本發(fā) 明的技術(shù)方案，但并不因此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。實際上，發(fā)明人按照本發(fā)明方法，以多 種自行分離及市售的木霉生防菌株進(jìn)行固體發(fā)酵，均獲得了與實施例1相似的效果，但鑒于 專利公開充分的要求，以下僅以貴州木霉NJAU4742(Trichoderma guizhouense)為例，說明 本發(fā)明的木霉固體菌種發(fā)酵方法。
[0039] 實施例1
[0040] 1、菌株的觀察
[0041 ]菌株為貴州木霉1^\114742(1'1'；[0110(161'1]^8111211〇1161186)，具有以下特征:貴州木霉 分離至中藥渣堆肥，進(jìn)化上屬于哈茨木霉分支;其菌絲能夠強(qiáng)重寄生灰葡萄孢菌、交鏈格孢 菌、核盤菌、立枯絲核菌、齊整小核菌和尖孢鐮刀菌;貴州木霉有獨(dú)特的光照敏感性，提高孢 子濃度;原位熒光研究表明貴州木霉能定殖土壤和植物根際，促進(jìn)植物生長，抑制植物病害 發(fā)生，提高農(nóng)作物的產(chǎn)量。
[0042] 2、菌株的培養(yǎng)
[0043] 1)將菌株NJAU4742接種到固體培養(yǎng)基TOA玻璃培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)條件為：28°C、7天， 將培養(yǎng)皿上的綠色孢子用5mL的無菌水洗刮下來，用無菌紗布過濾到滅完菌的玻璃瓶中制 備成了孢子懸液備用，如圖1所示。
[0044] 2)將貴州木霉NJAU4742孢子液按照1 %接種到配置好的PDA培養(yǎng)基中搖瓶培養(yǎng)，裝 液量為三角玻璃瓶體積的20 % -50 %，培養(yǎng)條件為:溫度為28°C、180rmp、4天，培養(yǎng)結(jié)束后， 利用血球計數(shù)板檢測發(fā)酵的結(jié)果，如圖2所示。
[0045] 實施例2
[0046] 1、廢棄畜禽氨基酸水解液的制備方法
[0047] (1)在密閉容器中先將病死畜禽動物經(jīng)自動化粉碎、所有固形物和液體自動轉(zhuǎn)入 密閉的水解罐后，在初始酸濃度c(l/2H 2S〇4)為3-5mol Ι^ΑΟ-ΙΟΟΓ和1-2個大氣壓下水解 2-5小時；
[0048] (2)水解結(jié)束待水解罐內(nèi)溶液冷卻至80°C以下時，利用能出入水解罐加料口漂浮 直立在油脂上的真空倒吸裝置分離上層油脂；
[0049] (3)油脂被分離后，在水解罐中按水解液與氫氧化鉀質(zhì)量比為4:1慢慢加入氫氧化 鉀，邊加邊攪拌，調(diào)整溶液pH值為1-3;或按水解液與龍蝦殼或螃蟹殼質(zhì)量比為10:3在水解 液中加入龍蝦殼或螃蟹殼，升溫至溫度80°C、1_2個大氣壓內(nèi)下維持1-2小時，然后待溫度降 至30°C以下，按水解液與氫氧化鉀質(zhì)量比為12.5:1慢慢加入氫氧化鉀，調(diào)整溶液pH值為1-3；
[0050] (4)將調(diào)整pH值后的水解液從水解罐中放入由聚四氟乙烯塑料制成的容器內(nèi)，讓 其自然沉淀1-1.5小時，收集氨基酸溶液;必要時可將溶液再次放入沉淀容器中進(jìn)行二次沉 淀2-3小時，收集氨基酸溶液。
[0051 ] 2、液體菌株的制備
[0052]所述的貴州木霉NJAU4742菌劑接種到PDA液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)，裝液 量為20%，接種量為106cfu/mL孢子，搖床溫度28°C、170rpm、培養(yǎng)4天。
[0053] 所述的roA培養(yǎng)基為:去皮土豆，切成小塊放入鍋中煮沸20-30min，用2層紗布過濾 并定容到lOOOmL，加入20g葡萄糖，分裝后115°C，30min，滅菌。
[0054] 3、貴州木霉NJAU4742固體發(fā)酵
[0055] 從農(nóng)田收集水稻秸桿，風(fēng)干后利用粉碎機(jī)將其粉碎成0.5-lcm長的片段待用。用自 來水將廢棄畜禽氨基酸水解液稀釋數(shù)倍后加入到粉碎的水稻秸桿中，充分拌勻后浸泡過 夜。過夜后用適當(dāng)溶度K0H調(diào)節(jié)秸桿pH值，將調(diào)好pH的秸桿過濾并將含水量調(diào)至75%左右， 并按照一定比例添加玉米粉，攪拌均勻后即為固體發(fā)酵基質(zhì)。按2% (孢子濃度108sp〇re/ mL，V/w)的接種量將液體菌種接種到固體基質(zhì)中，采用淺盤發(fā)酵法28°C避光培養(yǎng)7-10天。發(fā) 酵結(jié)束時，發(fā)酵基質(zhì)表面會由白色菌絲逐漸轉(zhuǎn)為綠色，貴州木霉NJAU4742產(chǎn)生大量的孢子， 利用梯度稀釋平板計數(shù)法，檢測固體發(fā)酵過程中貴州木霉的產(chǎn)孢情況。
[0056] 3.1貴州木霉NJAU4742發(fā)酵產(chǎn)孢優(yōu)化實驗
[0057] 3.1.1不同稀釋倍數(shù)廢棄畜禽氨基酸水解液對貴州木霉NJAU4742產(chǎn)孢的影響
[0058]從圖3中可知，稀釋不同倍數(shù)的氨基酸水解液浸泡秸桿過夜后調(diào)節(jié)pH3.5后進(jìn)行發(fā) 酵第7天，各處理產(chǎn)孢表現(xiàn)為30倍>40倍>50倍>60倍，方差分析結(jié)果也表明，秸桿發(fā)酵7天后 不同處理之間差異顯著；
[0059] 3.1.2不同pH條件下產(chǎn)孢試驗
[0060]從氨基酸水解液浸泡后調(diào)節(jié)至不同的初始PH，發(fā)酵結(jié)束后檢測厚垣孢子數(shù)量，結(jié) 果如圖5所示。pH3.5處理的孢子含量顯著高于其他處理，通過測定各個處理每天的pH變化 表明秸桿發(fā)酵產(chǎn)孢是在第3天開始第3、4、5天大量產(chǎn)孢第6、7天產(chǎn)孢速度降低pH3.5處理在 發(fā)酵的第一天其pH就能達(dá)到5.5左右且在發(fā)酵過程中基本保持不變而NJAU4742最適生長pH 在5.5左右良好的環(huán)境條件，從而增強(qiáng)了其產(chǎn)孢能力。
[0061 ]圖6是不同初始pH對木霉產(chǎn)孢的影響，結(jié)果表明，說明氨基酸水解液浸泡過夜后用 Κ0Η調(diào)節(jié)浸泡液至3.5后浸泡秸桿30min，無論是NJAU4742菌絲生長量還是產(chǎn)孢量量都明顯 高于其他處理，PH4.0處理跟pH4.5處理的產(chǎn)孢量跟生物量低于pH3.5但高pH3.0和pH2.5。因 此，將pH設(shè)置為3.5~4.5，優(yōu)選3.5。
[0062] 3.1.3不同添加量玉米粉對貴州木霉NJAU4742產(chǎn)孢的影響
[0063] 圖7是將發(fā)酵好的水稻猜桿稱5.0g添加到50mL無菌水中，28°C，180rpm，30min后用 4層無菌紗布過濾后的10倍稀釋液，進(jìn)行產(chǎn)孢計數(shù)，由結(jié)果可知，玉米粉30 %的添加量與對 照相比孢子顏色明顯深。添加30%的玉米粉發(fā)酵秸桿處理對貴州木霉NJAU4742產(chǎn)孢有明顯 的促進(jìn)作用與對照相比差異顯著，增加了孢子量且與對照相比增加達(dá)到5.26倍;處理10%、 20%、40%與對照相比，分別增加到對照的3.70、4.18、3.45倍，但通過涂布計數(shù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)0( 產(chǎn)菌絲量顯著高于添加玉米粉的處理。
[0064] 實施例3貴州木霉NJAU4742固體發(fā)酵
[0065]在大容量的中轉(zhuǎn)箱中加入10L自來水后，再加入285mL的廢棄畜禽氨基酸水解液充 分溶解后加入1.5Kg粉碎的水稻秸桿，攪拌均勻后常溫浸泡過夜(可以軟化秸桿并利用低pH 條件對秸桿進(jìn)行滅菌），過夜后用固體Κ0Η和少許氨基酸原液調(diào)節(jié)秸桿pH至3.5,將調(diào)好pH的 原料撈出后，調(diào)節(jié)含水量為75%并攪拌至蓬松狀，同時添加150g玉米粉，充分?jǐn)嚢杈鶆蚣吹?貴州木霉4742的發(fā)酵基質(zhì)，按照20%(孢子濃度10 88口〇^/1111^，￥/\￥)的接種量進(jìn)行接種貴州 木霉4742發(fā)酵液，并將固體基質(zhì)平鋪在淺盤內(nèi)，秸桿厚度約2cm-5cm，置于28°C_32°C的暗室 中發(fā)酵第3-4天直至產(chǎn)孢，貴州木霉NJAU4742的厚垣孢子數(shù)量高達(dá)到2.4 X 101()spore/g。 [0066]實施例4貴州木霉NJAU4742氨基酸生物有機(jī)肥的生產(chǎn) [0067] 1、氨基酸的添加
[0068] 取已經(jīng)完全腐熟的普通有機(jī)肥(含水率在25%)，堆成條垛形狀后，添加10-15%的 廢棄畜禽氨基酸水解液，并用翻拋機(jī)不斷的翻堆，將氨基酸水解液與腐熟有機(jī)肥充分的混 勻，不能有塊狀的固體存在。每天測定堆體的溫度和pH的變化情況，并根據(jù)具體情況用翻拋 機(jī)進(jìn)行翻堆，待溫度和pH回升后立即停止堆肥(該過程一般持續(xù)6天）。
[0069] 2、功能菌的貴州木霉NJAU4742的添加
[0070]將發(fā)酵好的貴州木霉NJAU4742固體菌株(有效活菌數(shù)lxl01()Sp〇r e/g dw)，按1%的 量直接與準(zhǔn)備好的氨基酸有機(jī)肥進(jìn)行復(fù)配，攪拌混勻后獲得貴州木霉NJAU4742氨基酸生物 有機(jī)肥，其中有效活菌數(shù)高達(dá)到4.8 X 108sp〇re/g，達(dá)到生物有機(jī)肥的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。
[0071] 3、分篩與造粒
[0072] 充分拌勻的氨基酸生物有機(jī)肥，通過篩選機(jī)將比較粗的部分篩選出來，而細(xì)的部 分為氨基酸生物有機(jī)肥，該產(chǎn)品為黑色粉末狀固體，并帶有一定的醬香味，為優(yōu)質(zhì)的氨基酸 生物有機(jī)肥，產(chǎn)品如圖8中粉末狀肥料。
[0073] 為了適應(yīng)不同地區(qū)對產(chǎn)品的需求，采用低溫干燥技術(shù)對粉末狀的氨基酸生物有機(jī) 肥進(jìn)行造粒，產(chǎn)品如圖8中顆粒狀肥料。
[0074]實例5貴州木霉NJAU4742氨基酸生物有機(jī)肥的盆栽促生效果
[0075] 1、試驗設(shè)計
[0076]表1番茄促生盆栽實驗處理
[0077]
[0078] 2、實驗結(jié)果
[0079]由圖9可看出在紅土中化肥CK處理番茄的株高跟莖粗都顯著低于氨基酸有機(jī)肥處 理，且添加了 3%木霉的有機(jī)肥對番茄的促生又顯著高于氨基酸有機(jī)肥。處理AA、AT3與對照 CK相比，株高分別比對照增加了 128.8%、163.9%，莖粗分別比CK增加了 115.6%、122.6%。 通過涂布計數(shù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)AT3處理番茄根際土木霉活菌數(shù)達(dá)到2.3 X 107顯著其他兩個處理， 說明木霉根際定繁能力強(qiáng)且對番茄有顯著的促生作用。
【主權(quán)項】
1. 一種以氨基酸水解液及水稻秸桿為原料生產(chǎn)木霉固體菌種的方法，其特征在于，包 括將水稻秸桿粉碎后加入稀釋后的廢棄畜禽氨基酸水解液中浸泡過夜，然后用KOH調(diào)節(jié)浸 泡秸桿的pH值至3.5-4.5，將調(diào)好pH的水稻秸桿撈出，調(diào)節(jié)含水量至70 %-75 %，攪拌至蓬松 狀，向其中添加玉米粉攪拌均勻后作為基質(zhì)，向基質(zhì)中接種貴州木霉發(fā)酵液，攪拌均勻后平 鋪在淺盤內(nèi)，并置于暗室中發(fā)酵。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，水稻秸桿在浸泡前粉碎為0.5-1.5cm的細(xì) 粉末狀。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，廢棄畜禽氨基酸水解液通過以下方法制備 得到： (1) 在密閉容器中先將病死畜禽動物經(jīng)自動化粉碎、所有固形物和液體自動轉(zhuǎn)入密閉 的水解罐后，在初始酸濃度c (1/2H2S04)為3-5mo 1 L-1、80-100 °C和1-2個大氣壓下水解2-5 小時； (2) 水解結(jié)束待水解罐內(nèi)溶液冷卻至80°C以下時，利用能出入水解罐加料口漂浮直立 在油脂上的真空倒吸裝置分離上層油脂； (3) 油脂被分離后，在水解罐中按水解液與氫氧化鉀質(zhì)量比為4:1慢慢加入氫氧化鉀， 邊加邊攪拌，調(diào)整溶液pH值為1-3;或按水解液與龍蝦殼或螃蟹殼質(zhì)量比為10:3在水解液中 加入龍蝦殼或螃蟹殼，升溫至溫度80°C、1_2個大氣壓內(nèi)下維持1-2小時，然后待溫度降至30 °C以下，按水解液與氫氧化鉀質(zhì)量比為12.5:1慢慢加入氫氧化鉀，調(diào)整溶液pH值為1-3; (4) 將調(diào)整pH值后的水解液從水解罐中放入由聚四氟乙烯塑料制成的容器內(nèi)，讓其自 然沉淀1-1.5小時，收集氨基酸溶液;必要時可將溶液再次放入沉淀容器中進(jìn)行二次沉淀2-3小時，收集氨基酸溶液。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，將水稻秸桿加入30~40倍稀釋后的廢棄畜 禽氨基酸水解液中浸泡過夜;優(yōu)選將水稻秸桿加入30倍稀釋后的廢棄畜禽氨基酸水解液中 浸泡過夜。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，用KOH調(diào)節(jié)浸泡秸桿的pH值至3.5。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的玉米粉添加量為秸桿干重的10 %~ 40%，優(yōu)選 30 %。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的貴州木霉發(fā)酵液的添加量為20%~ 50%，優(yōu)選 20 %。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，淺盤中猜桿厚度為2cm-5cm;暗室中發(fā)酵的 溫度為28°C_32°C，發(fā)酵的時間為7-10天。9. 一種木霉菌劑生物有機(jī)肥制備方法，其特征在于包括按照權(quán)利要求1~8中任一項所 述的方法制備木霉固體菌種，按1 %的量直接與發(fā)酵好的氨基酸有機(jī)肥進(jìn)行復(fù)配，攪拌混勻 后獲得貴州木霉氨基酸生物有機(jī)肥，其中有效活菌數(shù)高達(dá)到4.8X10 8sp〇re/g。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，還包括對貴州木霉氨基酸生物有機(jī)肥的 分篩和/或造粒。
【文檔編號】C12R1/885GK106085871SQ201610440785
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月18日
【發(fā)明人】沈其榮, 劉東陽, 李 榮, 劉秋梅, 王帥
【申請人】南京農(nóng)業(yè)大學(xué)