本發(fā)明涉及磁性微球，特別是涉及一種t細(xì)胞分選磁性微球及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、t細(xì)胞，全稱為t淋巴細(xì)胞，是免疫系統(tǒng)中的一種關(guān)鍵細(xì)胞類型，主要負(fù)責(zé)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。它們?cè)谧R(shí)別和消除病原體、腫瘤細(xì)胞以及進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。t細(xì)胞根據(jù)其表面分子的不同，可以進(jìn)一步細(xì)分為多種亞群，如輔助t細(xì)胞（th細(xì)胞）、細(xì)胞毒性t細(xì)胞（ctls）、調(diào)節(jié)性t細(xì)胞（tregs）等，每種亞群都有其獨(dú)特的功能和生物學(xué)特性。

2、t細(xì)胞分選技術(shù)是指通過特定的方法將t細(xì)胞的不同亞群從混合細(xì)胞群體中分離出來的過程。這一技術(shù)在免疫學(xué)研究、細(xì)胞治療、疫苗開發(fā)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。通過精確的t細(xì)胞分選，研究人員可以更深入地研究特定t細(xì)胞亞群的功能，為疾病的診斷和治療提供新的策略。

3、目前，t細(xì)胞分選主要依賴于流式細(xì)胞術(shù)和磁珠分選技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)通過熒光標(biāo)記的抗體識(shí)別特定t細(xì)胞表面標(biāo)志物，再利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行快速分析和分選。而磁珠分選技術(shù)則是利用帶有特定抗體的磁珠與目標(biāo)t細(xì)胞結(jié)合，主要策略包括有cd4/cd8的分選或cd3的分選，通過磁場(chǎng)的作用實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離。這些方法各有優(yōu)勢(shì)，但也存在一些局限性。

4、盡管磁珠分選技術(shù)因其操作簡(jiǎn)便、分離效率高而受到青睞，但在實(shí)際應(yīng)用中仍面臨一些挑戰(zhàn)。其中，抗體的選擇至關(guān)重要，因?yàn)榭贵w的親和力和特異性直接影響到t細(xì)胞的分選效率和純度。不當(dāng)?shù)目贵w選擇可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合，降低分選的準(zhǔn)確性，甚至影響細(xì)胞的活性和功能。

5、鑒于上述問題，開發(fā)一種新的t細(xì)胞分選磁珠及其分選方法，特別是選擇適配于t細(xì)胞分選的磁珠上的抗體，顯得尤為必要。這種磁珠應(yīng)具備高親和力和高特異性，以確保t細(xì)胞的高效、準(zhǔn)確分選。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明旨在提供一種獲取t細(xì)胞純度高、t細(xì)胞回收率高的磁性微球及其制備方法。

2、用于解決問題的方案

3、本發(fā)明提供一種用于t細(xì)胞分選的磁性微球，所述磁性微球包括磁性納米顆粒和特異性抗體，所述特異性抗體選自cd8抗體和/或cd4抗體；

4、其中，所述磁性納米顆粒為表面修飾有羧基的磁性納米顆粒；

5、所述cd8抗體選自克隆號(hào)為qa18a37、hit8a、s21010a、sk1和rpa-t8的cd8單克隆抗體中的一種或多種；

6、所述cd4抗體選自克隆號(hào)為sk3、hit4b、hit4a、rpa-t4和okt4的cd4單克隆抗體抗體中的一種或多種。

7、優(yōu)選地，所述cd8抗體選自克隆號(hào)為sk1的cd8單克隆抗體。

8、優(yōu)選地，所述cd4抗體選自克隆號(hào)為hit4a的cd4單克隆抗體。

9、優(yōu)選地，所述磁性納米顆粒和特異性抗體的質(zhì)量比為1:0.1~1，優(yōu)選為1：0.1~0.5，更優(yōu)選為1:0.3。

10、優(yōu)選地，所述磁性微球的粒徑為40~60nm。

11、本發(fā)明提供上述任一項(xiàng)所述磁性微球的制備方法，所述方法包括以下步驟：

12、（1）利用活化試劑活化磁性納米顆粒；

13、（2）將步驟（1）獲得的活化后的磁性納米顆粒與特異性抗體進(jìn)行偶聯(lián)；

14、（3）封閉步驟（2）獲得的偶聯(lián)物，即得到所述的磁性微球；

15、其中，所述活化后的磁性納米顆粒與所述特異性抗體的質(zhì)量比為1:0.1~1，優(yōu)選為1：0.1~0.5，更優(yōu)選為1:0.3。

16、優(yōu)選地，所述活化試劑含有的組分及其濃度分別為0.1~0.5g/l?edc、0.1~0.5g/lnhs、3~5g/l?mes和20~35?g/l?nacl；

17、利用偶聯(lián)緩沖液進(jìn)行所述偶聯(lián)，所述偶聯(lián)緩沖液含有的組分及其濃度分別為5~10g/l?nacl、0.1~1g/l?kcl、2~5g/l?na2hpo4·12h2o、0.1~1g/l?kh2po4；

18、利用封閉緩沖液進(jìn)行所述封閉，所述封閉緩沖液含有的組分及其濃度分別為5~10g/l?tris、5~15?g/l?bsa、0.1~2?ml/l?pc300和1~5?ml/l乙醇胺。

19、本發(fā)明提供上述任一項(xiàng)所述磁性微球或上述所述制備方法獲得的磁性微球在制備t細(xì)胞分選產(chǎn)品中的用途。

20、本發(fā)明提供一種分選t細(xì)胞的方法，所述方法包括：

21、（1）將上述任一項(xiàng)所述磁性微球或采用上述所述制備方法獲得的磁性微球與含待分選細(xì)胞接觸，孵育；

22、（2）將步驟（1）孵育后的混合物置于分離柱中，添加磁場(chǎng)，去除未結(jié)合磁性微球的細(xì)胞；

23、（3）去除磁場(chǎng)，收集目標(biāo)細(xì)胞。

24、優(yōu)選地，每10~30μl的所述磁性微球與每107個(gè)所述待分選細(xì)胞混合。

25、優(yōu)選地，收集所述目標(biāo)細(xì)胞包括利用空氣塞從所述分離柱中移出結(jié)合磁珠的細(xì)胞。

26、優(yōu)選地，所述待分選細(xì)胞為pbmc。

27、發(fā)明的效果

28、本發(fā)明選擇表面富含羧酸的磁性納米顆粒與特定的抗體（例如cd4或cd8抗體）通過化學(xué)共價(jià)偶聯(lián)，使二者牢固結(jié)合，進(jìn)而獲得本發(fā)明的磁性微球，將其應(yīng)用于t細(xì)胞分選時(shí)，具有高回收率以及高純度的優(yōu)勢(shì)。

技術(shù)特征：

1.一種用于t細(xì)胞分選的磁性微球，其特征在于：所述磁性微球包括磁性納米顆粒和特異性抗體，所述特異性抗體選自cd8抗體和/或cd4抗體；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁性微球，其特征在于：所述cd8抗體選自克隆號(hào)為sk1的cd8單克隆抗體；

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁性微球，其特征在于：所述磁性納米顆粒和特異性抗體的質(zhì)量比為1:0.1~1。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的磁性微球，其特征在于：所述磁性納米顆粒和特異性抗體的質(zhì)量比為1:0.3。

5.根據(jù)權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的磁性微球，其特征在于：所述磁性微球的粒徑為40~60nm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所述磁性微球的制備方法，其特征在于：所述方法包括以下步驟：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于：所述活化試劑含有的組分及其濃度分別為0.1~0.5g/l?edc、0.1~0.5g/l?nhs、3~5g/l?mes和20~35?g/l?nacl；

8.權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所述磁性微球或權(quán)利要求6或7所述制備方法獲得的磁性微球在制備t細(xì)胞分選產(chǎn)品中的用途。

9.一種分選t細(xì)胞的方法，其特征在于：所述方法包括：

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于：每10~30μl的所述磁性微球與每107個(gè)所述待分選細(xì)胞混合；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種T細(xì)胞分選磁性微球及其制備方法和應(yīng)用，具體為一種用于T細(xì)胞分選的磁性微球，所述磁性微球包括磁性納米顆粒和特異性抗體，所述特異性抗體選自CD8抗體和/或CD4抗體；其中，所述磁性納米顆粒為表面修飾有羧基的磁性納米顆粒；所述CD8抗體選自克隆號(hào)為QA18A37、HIT8a、S21010A、SK1和RPA?T8的CD8單克隆抗體中的一種或多種；所述CD4抗體選自克隆號(hào)為SK3、HIT4b、HIT4a、RPA?T4和OKT4的CD4單克隆抗體抗體中的一種或多種。本發(fā)明提供的磁性微球具有優(yōu)異的T細(xì)胞分選效果。

技術(shù)研發(fā)人員：蔡雙朋,杜德壯,王潘,趙鵬,劉涵,林家旺,劉照關(guān)
受保護(hù)的技術(shù)使用者：蘇州為度生物技術(shù)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21