專利名稱：一種油菜硫甙的速測方法及其測試板的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于對油菜籽中硫甙含量進行速測的方法及其測定所用的測試板，它的應(yīng)用能有效促進雙低油菜的推廣和發(fā)展，以提高油菜的內(nèi)在品質(zhì)。
背景技術(shù)：
油菜是我國第一大油料作物，菜籽油占我國食用植物油總量的60％，而菜籽餅粕則是飼料業(yè)的優(yōu)質(zhì)蛋白源。雙低油菜即低芥酸低硫甙油菜，它對油菜籽中芥酸和硫甙兩項內(nèi)在化學(xué)品質(zhì)指標有明確的限量，其中菜籽油芥酸含量應(yīng)低于2％，這樣的菜籽油營養(yǎng)價值高，有益于人體健康；菜籽餅粕中硫甙的含量應(yīng)低于30μmol/g，這樣的餅粕毒性低，蛋白含量高，氨基酸組成平衡，是優(yōu)質(zhì)的飼料蛋白源。而普通油菜中其芥酸和硫甙的含量可分別高達40％和100μmol/g以上，造成普通菜籽油芥酸含量高，營養(yǎng)價值低，餅粕因硫甙降解產(chǎn)物對畜禽有毒而難于用作飼料。因此雙低油菜是目前油料發(fā)展的方向。然而，要發(fā)展雙低油菜，能否快速有效地進行芥酸硫甙含量的測定是一項急需解決的配套措施，否則就無法將雙低油菜與普通油菜分開收購、單獨加工，難以實現(xiàn)雙低油菜的優(yōu)質(zhì)優(yōu)用。就硫甙的測定來說，目前已存在有硫甙的液相色譜測定方法，但該方法不僅程序復(fù)雜，耗時長，費用高，而且需要在實驗室借助昂貴的儀器設(shè)備來進行，這顯然不適于在分布面廣、檢測量大的種植和收購現(xiàn)場使用；也存在有氯化鈀法測定硫甙的方法，雖測試方法較為簡便，但因測量誤差大、不穩(wěn)定而不能實用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的是針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題而提供一種簡便有效的油菜硫甙速測方法及其測試板，以促進雙低油菜的推廣和發(fā)展。
本發(fā)明油菜硫甙速測方法的技術(shù)方案為取1-5g菜籽樣品粉碎后，稱取0.20-0.80g置于具塞試管中，加入1.0-5.0ml蒸餾水，搖勻，發(fā)生硫甙降解反應(yīng)，反應(yīng)數(shù)分鐘后過濾，取20-80μl濾液置于硫甙測試板，加入磷酸二氫鉀水溶液60-240μl反應(yīng)數(shù)分鐘后，形成有色產(chǎn)物，由于溶液顏色深淺與樣品中硫甙含量有關(guān)，采用分光光度法并根據(jù)標準曲線用測量儀即可測定硫甙含量。
上述方案中，菜籽樣品粉碎后的細度為30-50目；磷酸二氫鉀水溶液的濃度為20-80mmol/L，制取方法為室溫下取分析純磷酸二氫鉀6.80g溶解后，定溶至1000ml，紫外線滅菌后，用瓶分裝；硫甙的測試結(jié)果用μmol/g表示。
本發(fā)明的硫甙測試板由下述方法制作而成稱取6.0-6.5mg顯色劑(Chrom G)用無水乙醇溶解后定溶10ml，取5-20μl置于測試板每孔，真空干燥1-2小時后待用，稱取18.24-34.20g磷酸氫二鉀溶解后，定溶1000ml，用磷酸調(diào)pH6.0后備用，將硫甙測試酶(Gln MEN)溶于上述磷酸氫二鉀緩沖液，配制濃度為80-180U/ml，取10-50μl置于上述測試板每孔，冷凍真空干燥2小時后即成。
本發(fā)明的測定硫甙的機理在于利用酶的專一性，使菜籽中硫甙與內(nèi)源酶和特異性外源酶產(chǎn)生反應(yīng)，反應(yīng)后生成產(chǎn)物再與顯色劑反應(yīng)形成有特征吸收峰的有色產(chǎn)物，由于溶液顏色深淺與樣品中硫甙含量有關(guān)，采用分光光度法用一定波長單色光根據(jù)標準曲線用測量儀即可測定硫甙的含量。
本發(fā)明的優(yōu)點在于1、測試方法簡便，測試速度快，可適于各種油菜籽品種的測試；2、測試費用低，速測儀的價格低，體積小，有助于該項技術(shù)的普及推廣；3、測定精度較高，誤差為±4μmol/g，達到了國際標準；4、對環(huán)境適應(yīng)性強，便于在現(xiàn)場使用，實用性強，能有效促進雙低油菜的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。


圖1為本發(fā)明速測方法的流程框圖。
具體實施例方式
以下詳細說明本發(fā)明的實施例。
實施例1稱取2g華雙3號油菜菜籽樣品粉碎，細度40目，取0.50g于具塞試管，加入3.0ml蒸餾水并搖勻，發(fā)生硫甙降解反應(yīng)，室溫下反應(yīng)3-10分鐘后過濾，取50μl濾液置于硫甙測試板，加入磷酸二氫鉀水溶液150μl，反應(yīng)5-15分鐘形成有色產(chǎn)物，根據(jù)硫甙含量與形成有色產(chǎn)物間相關(guān)關(guān)系，用測量儀測出硫甙含量為27.5μmol/g。
實施例2取4g中雙5號油菜菜籽樣品粉碎，細度50目，取0.60g于具塞試管，加入3.6ml蒸餾水并搖勻，發(fā)生硫甙降解反應(yīng)，室溫下反應(yīng)8分鐘后過濾，取60μl濾液置于硫甙測試板，加入磷酸二氫鉀水溶液180μl，反應(yīng)9分鐘形成有色產(chǎn)物，根據(jù)硫甙含量與形成有色產(chǎn)物間相關(guān)關(guān)系，用測量儀測定硫甙含量為25.6μmol/g。
實施例3為本發(fā)明硫甙測試板的實施例稱取6.2mg顯色劑(Chrom G)用無水乙醇溶解后定溶10ml，取10μl置于測試板每孔，真空干燥1-2小時后待用，稱取22.8g磷酸氫二鉀溶解后，定溶1000ml，用磷酸調(diào)pH6.0后備用，將硫甙測試酶(Gln MEN)溶于上述磷酸氫二鉀緩沖液，配制濃度為100U/ml，取20μl置于上述測試板每孔，冷凍真空干燥2小時后即成。
權(quán)利要求
1.一種油菜硫甙的速測方法，其特征在于取1-5g菜籽樣品粉碎后，稱取0.20-0.80g置于具塞試管中，加入1.0-5.0ml蒸餾水，搖勻，發(fā)生硫甙降解反應(yīng)，反應(yīng)數(shù)分鐘后過濾，取20-80μl濾液置于硫甙測試板，加入磷酸二氫鉀水溶液60-240μl反應(yīng)數(shù)分鐘后，形成有色產(chǎn)物，采用分光光度法并根據(jù)標準曲線用測量儀即可測定硫甙含量。
2.按權(quán)利要求1所述的油菜硫甙的速測方法，其特征在于菜籽樣品粉碎后的細度為30-50目。
3.按權(quán)利要求1或2所述的油菜硫甙的速測方法，其特征在于磷酸二氫鉀水溶液的濃度為20-80mmol/L。
4.按權(quán)利要求3所述的油菜芥酸的速測方法，其特征在于稱取2g菜籽樣品粉碎，細度40目，取0.50g于具塞試管，加入3.0ml蒸餾水并搖勻，發(fā)生硫甙降解反應(yīng)，室溫下反應(yīng)3-10分鐘后過濾，取50μl濾液置于硫甙測試板，加入磷酸二氫鉀水溶液150μl，反應(yīng)5-15分鐘形成有色產(chǎn)物，根據(jù)硫甙含量與形成有色產(chǎn)物間相關(guān)關(guān)系，用測量儀測出硫甙含量。
5.按權(quán)利要求3所述的油菜芥酸的速測方法，其特征在于取4g菜籽樣品粉碎，細度50目，取0.60g于具塞試管，加入3.6ml蒸餾水并搖勻，發(fā)生硫甙降解反應(yīng)，室溫下反應(yīng)8分鐘后過濾，取60μl濾液置于硫甙測試板，加入磷酸二氫鉀水溶液180μl，反應(yīng)9分鐘形成有色產(chǎn)物，根據(jù)硫甙含量與形成有色產(chǎn)物間相關(guān)關(guān)系，用測量儀測出硫甙含量。
6.一種油菜硫甙的速測測試板，其特征在于它由下述方法制作而成稱取6.0-6.5mg顯色劑(Chrom G)用無水乙醇溶解后定溶10ml，取5-20μl置于測試板每孔，真空干燥1-2小時后待用，稱取18.24-34.20g磷酸氫二鉀溶解后，定溶1000ml，用磷酸調(diào)pH6.0后備用，將硫甙測試酶(GlnMEN)溶于上述磷酸氫二鉀緩沖液，配制濃度為80-180U/ml，取10-50μl置于上述測試板每孔，冷凍真空干燥2小時后即成。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于對油菜籽中硫甙含量進行速測的方法及其測定所用的測試板,它的應(yīng)用能有效促進雙低油菜的推廣和發(fā)展,以提高油菜有內(nèi)在品質(zhì)。本發(fā)明油菜硫甙速測方法的技術(shù)方案為:取1－5g菜籽樣品粉碎后,稱取0.20－0.80g置于具塞試管中,加入1.0－5.0ml蒸餾水,搖勻,發(fā)生硫甙降解反應(yīng),反應(yīng)數(shù)分鐘后過濾,取20－80μl濾液置于硫甙測試板,加入磷酸二氫鉀水溶液60－240μl反應(yīng)數(shù)分鐘后,形成有色產(chǎn)物,由于溶液顏色深淺與樣品中硫甙含量有關(guān),采用分光光度法并根據(jù)標準曲線用測量儀即可測定硫甙含量。本發(fā)明測試方法簡便,測試速度快,費用低,可適于各種油菜籽品種的測試;測定精度較高,對環(huán)境適應(yīng)性強,便于在現(xiàn)場使用,實用性強。
文檔編號G01N21/77GK1341851SQ0113350
公開日2002年3月27日 申請日期2001年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月28日
發(fā)明者李培武, 張文, 周霞, 李光明, 楊湄, 吳渝, 汪雪芳, 吳宣誠, 仝乘風(fēng), 胡樂華, 甘東生, 孟子園, 陳小媚, 丁小霞, 陳洪, 謝立華 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所