專利名稱：用于核酸分析的容器的制作方法
技術領域：
本發(fā)明為采集樣本的容器，尤其是血液樣本，采集的血液樣本在此容器內保持穩(wěn)定，能夠用于分離和分析核酸。
從采集標本時樣本內核酸就要保持穩(wěn)定的狀態(tài)，要達到這一目的似乎不太可能。從現(xiàn)有的血液采集及貯存的角度來看有以下幾點原因細胞內含有的核酸酶(一種生物酶)可在接觸底物(如RNA，DNA)的同時馬上破壞核酸。細胞在正常人體環(huán)境中，細胞內外的核酸酶處于生理調控下。血液的采集過程或多或少會導致細胞內的核酸變化，故核酸酶在細胞內和/或細胞未溶解時，其核酸酶被釋放出來。另外，核酸的合成會增多或減少。特別是長時間保存血標本更會導致細胞的老化或破壞。
用常規(guī)方法采集的血標本經過長期保存后的另一個問題是樣本物質劇烈變化。這些變化包括細胞的溶解可導致分離核酸的標準方法達不到滿意的效果，核酸也無法再生。
除開標本內核酸的穩(wěn)定保存問題外，常規(guī)的采血方法還存在其他問題。在核酸分離過程中，常規(guī)的抗凝劑分離的純度不夠，故對后續(xù)的核酸分析如PCR擴增(多聚酶鏈反應)造成一定的影響。例如，肝素即是一種普遍了解的PCR的抑制劑。
最后，核酸的容量分析還引發(fā)了一個問題，那就是從樣本采集到核酸分析這整個過程中如何才能進行標準化控制。最理想的是一種在質量和數(shù)量上都已確定的標準化核酸，在采集標本過程中就已被加入樣本物質中，所以其存在于從采集到檢測樣本的整個過程中。而常規(guī)采集方法也達不到此目的。
常規(guī)采血方法的另一個缺點是有傳染樣本的危險，而且分離核酸需手工進行。與潛在傳染的細菌接觸是不可避免的。
以下以現(xiàn)有的例子來講述一種方法。從病人(EP0818542A1)體內采血后直接將血樣本與胍酸鹽混合。運用此方法時，胍酸鹽本來為粉末狀以保持其更高的穩(wěn)定性。然而，此方法有較大的缺陷。如，胍酸鹽必須首先在血標本中進行溶解。此溶解過程受環(huán)境特別是溫度的影響，不能在用過的非透明樣本中進行控制。故用于診斷/醫(yī)療目的的相應產品則存在很大的問題。
核酸酶的活性非常高，僅在高度變性狀態(tài)下才能抑制其活性。其變性依賴于溶解的胍酸鹽的濃度。根據在EP0818542中描述的方法，并未在一開始就提供具有抑制濃度的已溶解的胍酸鹽。因此，在胍酸鹽溶解的過程中核酸的降解無法控制。此外，上述方法中無還原性物質加入，無該物質的加入則有效的抑制，特別是RNA酶，通常無法得到保證。
常規(guī)方法采集的樣本不能直接用于固相分離核酸。胍酸鹽的應用不符合內部核酸標準。而這些標準對控制分析過程和準確的容量來說是必不可少的。
這一發(fā)明提供了一種標本接收容器，內裝有一種溶液，能使核酸保持穩(wěn)定，并提供可連接核酸的固相物質。
此發(fā)明有以下優(yōu)點1.樣本，特別是血樣本，在采集時就已溶解，因為此容器內已盛有相應樣本溶解液，同時此溶解液也是核酸穩(wěn)定劑。2.核酸穩(wěn)定劑有以下作用樣本物質，特別是其內的核酸在接觸此溶液后就可穩(wěn)定保存下來。3.核酸穩(wěn)定劑是選擇性的，用具處理的標本在其下的分離方法中可直接運用。4.核酸穩(wěn)定劑溶解能在后面分離過程中被有效的除去，故不會對，如PCR等過程產生抑制。5.核酸穩(wěn)定劑中可加入內標物質，從而可以控制從采集樣本到檢測核酸的整個過程。6.容器內的固相物質對于連接其上的核酸物質特別適合其后期的分離。而且，核酸結合到固相物質上后易化了后續(xù)的分離過程，因為在容器內即已完成分離樣本核酸和其他物質的第一步。
核酸穩(wěn)定劑可有選擇性，故在細胞溶解后核酸可直接與相應的層向進行連接，或在添加其他物質后進行連接。前者如預先用胍酸鹽提供一層光滑固相層。后者如預先提供一種生物素包被的表面，而后加一種能結合核酸的鏈霉素。
此容器在外形上類似于常規(guī)的采血標本容器(如小試管)，其內盛有一定體積的核酸抑制劑和固相的核酸連接物質。這種小試管內有少量氣體，造成低壓狀態(tài)，故其內僅可采集一定量的血樣本。用普通的采集方法即能用于此小試管。其內盛有的溶液含有以下物質，故有上述優(yōu)點。一種胍酸鹽，如二巰基；及合適的緩沖系統(tǒng)，如枸櫞酸鹽，tris，MES或HEPES。含有以上成分的溶液被裝入小的真空管中，此溶液能在此管中保存而不會喪失其保持核酸穩(wěn)定的性能，特別是對于供血者，此系統(tǒng)在采血過程中一般沒問題，非常安全。
此溶液中含有胍酸鹽，其作用為溶解細胞，并保持核酸穩(wěn)定，而核酸連接固相物質，緩沖系統(tǒng)，還原劑和去污劑，在貯存中是穩(wěn)定的，此溶液將新鮮采集的血標本轉化成為一種物質，此物質能穩(wěn)定保存，并且能直接用于其他的分析，如核酸分離。
硫氫酸胍和/或氯化胍是胍酸鹽中較為常用的物質。
胍鹽的推薦濃度為1-8.0M。
Tris或枸櫞酸鈉可用于緩沖液系統(tǒng)，其PH值用HCI來調節(jié)了。其他可能的緩沖液有HEPES，MOPS，MES，枸櫞酸鹽和磷酸鹽緩沖液，如PBS。
提供核酸結合的物質為固相，最適合的是采用玻璃顆粒，核酸結合多聚物，包被有核酸結合物質的顆粒，或包被氧化硅的顆粒。另外，核酸結合的固相物質的表面可包被特異性結合分子(如鏈霉素，寡聚核甘酸，核酸肽鏈(PNAS)等，它們可與核酸分子的標志分子或直接與核酸結合。這類物質的形狀與采血系統(tǒng)和后續(xù)的分離方法有關。采血后核酸進行額外處理，此后能直接應用的外形尤為合適。適用于常規(guī)分離方法的表面也特別合適，如磁珠分選。
合適的固相物質可以購得，如包被氧化硅的磁性顆粒，在血/骨髓標本mRNA分離試劑盒中即含有此顆粒。
緩沖劑的離子濃度為10-300M，最合濃度為10-100M。
去污劑最好選擇Triton-X-100，還可選擇NP-40，Tween20，Polydocanol或其他去污劑。
去污劑濃度一般為5-30％(w/v)，最好為10-20％(w/v)。
還原劑用DTT較好，然而，亦可應用β-巰基乙醇，TCEP(tris(2-carboxyethyl)phosphine)或其他還原劑。
還原劑的濃度一般為0.1-10％(w/v)，最好為0.5-2％(w/v)。
溶液的PH值為3.0-9.0，最佳為4.0-7.5。
溶液的PH值要特別選擇，故加入樣本物質后。調節(jié)的PH值為5.0-7.5。由于試管內存在一個低氣壓環(huán)境，故樣本采集容器有限，在采集樣本前加入一定濃度的緩沖液，并保持一定溶液體積，采集一定體積樣本后即可得到相應的PH值環(huán)境。采集樣本后PH最佳值為6.3-6.9。
溶液內含有4.5M二硫氰酸胍，50mMtris/HCI，15％Triton-X-100，100mMDTT，玻璃珠或包被氧化硅的磁珠作為固相物質，采血后PH值調節(jié)為6-7.5，這是最適合的環(huán)境。
此容器的另一優(yōu)點為采學時其內有一低壓，在對血管穿刺后，固定體積的血液可被采集入此容器內，血液體積可根據能力進行調節(jié)。相應的抽真空容器均能在市面上買到。
此容器裝入血標本后能迅速用來作其他的分析，或為保持較長時間(最多為數(shù)天或數(shù)周)而不會影響標本的質量。
此方法的創(chuàng)新之處在于新鮮采集標本可直接注入上述的血液采集容器的溶液中，所以防止了一切可能造成核酸物質改變的過程。容器內核酸已直接與固相物質連接，或在后續(xù)反應步驟中與固相物質結合。
后續(xù)核酸分析所證實的核酸數(shù)據就真實反映了采集血液時期核酸的量和核酸的種類。
容器內采集的血量最佳為溶液量的0.1-4倍，后者量通常為0.5-5.0ml。因此，加入血液后胍鹽的最終濃度為1.0-5.0M，最好為1.0-3.0M。
如果血標本是用于作核酸分析的話，所發(fā)明的容器則最宜用于采血。
上述采血系統(tǒng)的溶液部分可保證細胞的迅速溶解和通過抑制樣本核酸酶的活性而保持樣本的穩(wěn)定性。用此法采得的血樣甚至能在室溫下保持數(shù)天。此系統(tǒng)在從采血到核酸的分離和分析過程中均能保證無污操作，排除污染樣本的可能。對于傳統(tǒng)的核酸分離系統(tǒng)，其他的操作步驟(如將血樣本轉移到核酸分離體系中等)是必要的，這有可能會造成樣本污染。
即使保存較長時間，核酸結合到固相上以后仍能非常容易地從標本中分離出來。溶解標本時，由于固相物質的存在可使核酸立即結合到其表面上，這樣就能避免由于保存較長時間而形成沉淀造成的損失，并且結合有核酸的固相表面能容易地從此系統(tǒng)中被分離出來。
用此采血系統(tǒng)采集的標本能用常規(guī)的方法進行核酸分離。若用的是包被有氧化硅的磁性顆粒，可用現(xiàn)有標準方法分離核酸(磁性分選，洗滌，提純核酸)。
現(xiàn)有的發(fā)明包括樣本接收系統(tǒng)，它的構造可使其達到以下目的1.控制采樣和自動穩(wěn)定標本中的核酸(DNA，RNA)。2.采集標本過程中無需應用抗凝劑。3.使核酸與系統(tǒng)中的固相物質結合(直接或在另一步驟后)。4.用此采樣系統(tǒng)采集后的標本可完整轉入分離核酸系統(tǒng)中進行處理。5.包括采樣后的此系統(tǒng)在儲存時是穩(wěn)定的。
此外，用上述的采集系統(tǒng)采集并保存的樣本令人驚奇的能保存較長時間而保證核酸無降解。
圖2凝膠分析(1％瓊脂糖)28S和18SrRNA在樣本采集系統(tǒng)中保存不同的時間后的圖形示例。欄1采樣后立即分離純化RNA(無貯存期)。欄2在-20℃保存一個月后。欄3在4℃保存6天后。其RNA的量為采血量120μl獲得的量。
圖3在采樣系統(tǒng)中保存不同時期后的DNA用凝膠(1％瓊脂糖)分析的圖示。欄1采樣后立即分離(無貯存期)。欄2在-20℃保存一個月后。欄3在4℃保存6天后。DNA的量為采集量10μl獲得的量。
圖4分離出的MS2-RNA在與血清/穩(wěn)定劑(含或不含DTT)，在40℃下，孵育180分鐘后，對其進行凝膠分析的圖示。欄1陽性對照MS-2RNA；欄2DNAmarker；欄3-欄5與含有DTT的穩(wěn)定劑(3倍濃度)孵育后MS-2RNA；欄6-欄8與不含DTT的穩(wěn)定劑孵育后的MS-2RNA(3倍濃度)。
圖5MS2-RNA分離出后，與血清/穩(wěn)定劑在40℃下孵育3天后用凝膠分析的圖示。加入血清后(RNA即在其中孵育)穩(wěn)定劑中二硫氰酸鹽含量(GTC含量)在相應的欄中的標本。欄12.70M GTC，欄22.5M GTC，欄32.36M GTC，欄42.2M GTC，欄52.08M GTC，欄61.94M GTC，欄71.80M GTC，欄81.66M GTC。
圖6MS2-RNA在分離后，與血清/穩(wěn)定劑在40℃下孵育1-8天后，經PCR擴增后的產物的凝膠分析圖示。欄11天后分離的RNA擴增產物，欄28天后分離出的RNA的擴增產物，欄3DNA marker，欄4MS2-RNA陽性，對照0.8μg溶于10μl RT(1∶50倍稀釋)，取1μl進行擴增。
圖7在血清/穩(wěn)定劑中在常溫下保存6天(欄2-12)和13天(欄14-19)后分離MS2-RNA進行凝膠分析的圖示。在混合血清和穩(wěn)定劑后其PH值在每欄中均有標記。欄1，13，20DNAmarker，欄2PH8.0，欄3PH7.7，欄4PH7.5，欄5PH7.35，欄6PH7.18，欄7，14PH7.07，欄8，15PH6.94，欄9，16PH6.8，欄10，17PH6.72，欄11，18PH6.68，欄12，19PH6.7。欄12，19中的穩(wěn)定劑中的RNA與欄11中的RNA有相同的PH值，然而，前者的GTC含量為5M，后者為4M。
圖8標準凝膠分析(1％瓊脂糖)證實RNA和DNA存在的圖示。欄1分子量標記，欄2-4分離后的核酸，欄2含MS2 RNA(7天)的全血lysate中分離的核酸，欄3含MS2RNA(0天，對照)的全血lysate中分離的核酸，欄4全血lysate的核酸(7天)，欄5全血lysate(0天，對照)的核酸。上層帶顯示DNA(在4個標本中均容易辨別)，欄2，3中低位條件顯示為添加的和分離后的MS2RNA。
下面的例子將解釋本發(fā)明例1.
血液采集系統(tǒng)要有以上的優(yōu)點，血液采集系統(tǒng)應由以下組成一根盛有體積固定的核酸穩(wěn)定液的小試管，其內還有核酸連接固相物質和一定體積的真空，并用隔膜封口。構建此隔膜應與目前的樣本采集試劑盒相容(cannula等)。用已有的例示預先備好2.2ml試劑，調整真空體積使得采集樣本的過程中恰好流入2.2ml血液，血液流入試管后其中的核酸立即轉化為穩(wěn)定的形式。
對以下示例給予評估如果沒有特別提到，在所有示例中核酸穩(wěn)定物質(N-sS)由以下物質組成45mMtris，5M二硫氰酸胍，0.8％(w/v)dithriothreitol，18％(w/v)Triton-X-100，PH6.0。
在所有提到的示例中，核酸固定物質與樣本以1∶1的比例混合(1體積N-sS加1體積樣本物質)在所有示例的采集過程中，通過直接采集血液注入小試管中而使其保持穩(wěn)定。
例2.
樣本與N-sS混合后核酸的穩(wěn)定性用二氧化硅衍生顆粒從樣本裂解物中分離DNA和RNA。
材料和方法樣本物質采集后，在4℃下儲存6天，-20℃下儲存1月，然后進行DNA和RNA的分離?？捎酶呒兌萊NA分離試劑盒(Boehringer Mannheim，Cat-No1808665)來進行RNA的分離。內說明書所述的步驟的修改如下2.4毫升樣本裂解物加入4個等量的600ul的柱上，這樣2.4ml樣本裂解物都得到運用，RNA最后用100ul洗脫緩沖液進行洗脫。
用QiaAmp Blood試劑盒(Qiagen-Cat-No29104)來分離DNA(圖示3)，在說明書所述的標準步驟在不同點進行修改400ul樣本直接上柱，未予使用試劑盒中的結合劑，加入25ul蛋白酶K消化液，室溫下孵育10分鐘，然后將柱子轉入收集皿中，按說明書進行離心。除開乙醇的使用外，所有其它的步驟均按說明書上所述進行，洗脫液的體積為200ul。
例3.
用于RNA的長時間穩(wěn)定的穩(wěn)定劑中的還原劑(例如DTT)的重要性材料和方法可用的穩(wěn)定溶液4.0MGTC；13.5％Triton-X-100，45mMtris/HCl，120mMDTT(亦可不加)，700ul血清與700ul穩(wěn)定液混合，孵育2分鐘后加入MS2-RNA(0.8ug/ul，從RocheDiagnostics購得)，在40℃孵育180分鐘，然后根據實驗1將其分成400ul一等分與高純度RNA試劑盒(Roche)反應，將樣本以50ul洗脫液洗脫，冷凍于-20℃，經瓊脂糖凝膠分析證明有效。
結論在穩(wěn)定劑中不加入還原劑不能獲得RNA長時間的穩(wěn)定。
例4.
在血清/穩(wěn)定劑中MS2-RNA的穩(wěn)定對GTC濃度的依賴材料和方法可用的穩(wěn)定液3-5MGTC；13.5mM Triton-X-100，50mMDTT，42mMtris/HCl；溶液的PH值大約4.0；加入血清后的溶液PH值大約為6.7。
2ml血清與2ml穩(wěn)定液混合，孵育2-5分鐘，加入90ulMS2-RNA(0.8ug/ul，Roche)并在40℃孵育。根據實驗1按常規(guī)間歇采集400ul樣本，應用高純度RNA試劑盒(Roche)，按樣本50ul洗脫液洗脫后冷凍于-20℃，取20ul洗脫液加入1.5％瓊脂糖凝膠中進行電泳分析RNA完整性，通過腺病毒逆轉錄和PCR分析證明有效。通過腺病毒逆轉錄(Roche)對10ul的洗脫液進行逆轉錄，然后在子循環(huán)上通過量化PCR進行分析。
逆轉錄混合液4.0ul腺病毒逆轉錄緩沖液2.0ul dNTP’s(終濃度10mM)0.5ul RNA酶抑制劑(Roche，20單位)1.0ul 引物2827(終濃度1uM)1.9ul DMPC水0.6ul 逆轉錄腺病毒(Roche，15單位)10ul 模板RNA20ul在子循環(huán)機上運行PCR程序，其退火溫度為61℃，采用SYBR-Green作為檢測系統(tǒng)。所有在20個循環(huán)后的樣本為陰性，因為所有檢測到的信息均是由于引物二聚體產生的。此結論可被子循環(huán)機上的溶解曲線證實。逆轉錄產物以1∶50的雙蒸水稀釋，取1ul進行PCR操作，體系為10ul，如下PCR體系1.6ul MgCl2(儲存濃度為25mM)5.9ul DMPC水0.25ul 引物2827(儲存濃度20mM)0.25ul 引物2335(儲存濃度20mM)1.0ul SYBR-Green-Mastermix(Roche)1.0ul 逆轉錄混合物10ulPCR擴增產物完全用2％瓊脂糖凝膠進行分析(見圖示6)結論圖示5示40℃孵育30天后瓊脂糖凝膠能檢測到的純化的MS2-RNA，所有的RNA樣本在40℃經過8天后，仍可被擴增和檢測到產物，但與GTC反應的RNA完整性在三天后就有明顯的差異。相應的血清/溫度劑中鹽的濃度小于2M對RNA的完整性有幫助。
MS2-RNA在血清中加入RNA酶后2分鐘可被完全降解，不能被檢測出，此資料未提供。而加入穩(wěn)定劑后RNA的降解可被明顯延遲也證實了這一點。40℃下8天后，保存在血清/穩(wěn)定劑中的MS2-RNA仍能用PCR檢測出。(圖示6)例5血清穩(wěn)定劑中MS2-RNA的穩(wěn)定性，決定于含穩(wěn)定劑的樣品的PH值。
材料和方法所用的試劑4M(5M)GTC14.4％ Triton-x-10050mM DTT45mM trisHcl加入血清后PH值在6.7-8.0之間2.0ml血清于2.5ml穩(wěn)定劑混勻，加入90ulMS2RNA(0.8ug/ml，Roche)后樣品在室溫下孵育。500ul樣品中的RNA用Rocheviral RNAkit提取50ul洗脫液洗脫(按例4進行)。20ul洗脫液用瓊脂糖凝膠檢測(見圖7)結論血清穩(wěn)定劑的PH值和穩(wěn)定劑的緩沖范圍決定了RNA的穩(wěn)定性，當PH為8.0時，2天后完整RNA不能檢測到，而PH6.6至7.0時，室溫下孵育13天仍可檢測到完整的RNA。
除了PH值，GTC的最佳濃度也很重要(見例4)。GTC的終濃度為2.2M時比2.8M時更能使RNA長期保持穩(wěn)定。
例6通過應用包被了二氧化硅的磁性顆?？娠@示穩(wěn)定劑中核酸連接表面的穩(wěn)定性。
材料和方法4.5M GTC所用溶液 15％ Triton-X-100
100mM DTT50mM MES血/骨髓的mRNA分離試劑盒中取出以二氧化硅包被的磁性顆粒，顆粒的量約為35mg/ml。血液采集系統(tǒng)包括小采樣管，內裝有已在室溫下保存14天的穩(wěn)定劑和磁性顆粒。
然后，用上述系統(tǒng)采集全血，另外用一個新鮮制成的采樣系統(tǒng)(小試管，穩(wěn)定劑，磁性顆粒)用來做對照。樣本內核酸分離在上述兩種系統(tǒng)中均可行。用磁場將磁性顆粒分離出后去除余下物質，然后將磁性顆粒重新懸浮于50％的乙醇，10mMTris，PH7.0，以同種液體洗滌數(shù)次后，最后將磁性顆粒在10mM Tris/HCl(PH7.0)中加熱至70℃，此時核酸可從磁性顆粒上分離下來。將顆粒從磁場中分離出來，而其余含有核酸的物質用標準瓊脂糖凝膠進行分析，結論

表1在保存14天后，固相物質的核酸連接能力未受損，樣本以及對照顯示了相同的核酸結合能力。
例7DNA和RNA在與包被有二氧化硅的磁性顆粒連接后7天，其穩(wěn)定性以及可分離純化的證據。
材料和方法4.5M GTC15％ Triton-X-100所用體系100mM DTT50mM MES35mg/ml 顆粒共有4種血液采集系統(tǒng)(小試管)均含有1ml上述液體，均與1ml全血混合。其中2小管加有25ugMS2-RNA(全血裂解物)，均在分離核酸后立即加入(例6示)另外2管則先在室溫下儲存7天后在提取核酸。洗脫后的體積為200ul/200ul全血。用標準瓊脂糖凝膠進行核酸分析。
結論染色體DNA和MS2RNA的穩(wěn)定性在樣本采集系統(tǒng)(溶液，固相物質)保存7天后仍被證實(圖8)
權利要求
1.一種用于接受標本的容器，內裝有核酸穩(wěn)定劑和能連接核酸的固相物質。
2.根據權利要求1所述的容器，其特征在于核酸穩(wěn)定劑為水溶液，含有以下物質--胍鹽--緩沖物質--還原物和/或--去污劑
3.根據權利要求2所述的容器，其特征在于胍鹽可為二硫氰酸胍或氯化胍。
4.根據權利要求2或3所述的容器，其特征在于胍鹽的濃度可為1-8M。
5.根據權利要求2-4之一所述的容器， 其特征在于在加入樣本后，溶液的PH值為4-7.5，緩沖物質可為tris，HEPES，MOBS，MES，枸櫞酸鈉和磷酸鹽緩沖液。
6.根據權利要求1-5之一所述的容器，其特征在于固相物質分別可為羊毛狀物，濾器，顆粒，膠，小球，栓子，和/或小棒，而且可直接與容器連接。
7.根據權利要求2-6之一所述的容器，其特征在于緩沖物質的濃度為10-300mM。
8.根據權利要求2-7之一所述的容器，其特征在于去污劑可為Triton-X-100，NP-40，Polydocanal和Tween20。
9.根據權利要求2-8之一所述的容器，其特征在于去污劑濃度為5-30％質量體積百分比濃度。
10.根據權利要求2-9所述的容器，其特征在于還原劑可為dithiothreitol，2-巰基乙醇和TECP。
11.根據權利要求2-10之一所述的容器，其特征在于還原劑的濃度為0.1-10.0％質量體積百分比濃度。
12.根據權利要求2-11之一所述的容器，其特征在于溶液的PH值為4.0-7.5。
13.根據權利要求2-12之一所述之容器， 其特征在于溶液含有以下成分-4.5M二硫氰酸胍-50mMMES-15％(w/v)Triton-X-100-100mMDTT在加入血標本后PH值為6.0-7.5。
14.根據權利要求2-13之一所述的容器，其特征在于其內存在一利于接受標本的低壓環(huán)境，特別是血標本。
15.根據權利要求2-14之一所述的容器，其特征在于其內可采集全血標本。
16.一種采血的方法，含有直接將全血注入根據權利要求1-14之一所述的容器內這一步驟。
17.根據權利要求16所述的采血方法，其特征在于采血量是容器內溶液體積的0.1-4.0倍。
18.根據權利要求17所述的采血方法，其特征在于在采血加入容器后其胍鹽的終濃度為1.0-5.0M。
19.一種從全血標本中穩(wěn)定和/或分離核酸的方法，含有將全血直接導入根據權利要求1-14之一所述的容器內這一步驟，而且如果需要的話，還可分離與固相物質連接的核酸。
20.根據權利要求16-19之一所述的方法，其特征在于加入樣品后PH值在4.5-7.5之間。
21.用于采集全血，特別是人類的全血的，根據權利要求1-14之一所述的容器的用途。
22.在標本容器內，特別是在采血容器內含有胍鹽，緩沖物質，去污劑和/或還原劑，以及核酸連接固相物質的溶液的用途。
23.在標本容器內，特別是在采血容器內的核酸連接固相物質的用途。
24.在標本容器內，特別是在采血容器內的權利要求22所述的溶液和權利要求23所述的固相物質的用途。
全文摘要
此發(fā)明與采樣容器有關，此容器內裝有核酸穩(wěn)定溶液和核酸連接固相物質。此容器特別適用于采集血樣后進行核酸分析。
文檔編號G01N33/48GK1434746SQ01805250
公開日2003年8月6日 申請日期2001年2月15日 優(yōu)先權日2000年2月15日
發(fā)明者艾爾克·黑爾弗滕本 申請人:抗原生物技術股份有限公司