專利名稱：快速Feulgen染色方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物細(xì)胞、組織染色技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種快速Feulgen染色方法。
背景技術(shù)：
在常規(guī)的細(xì)胞涂片、組織印片、冷凍切片、快速石蠟切片或滴片的病理診斷過(guò)程中，單憑病理細(xì)胞、組織的形態(tài)判斷其良惡性狀態(tài)遇到困難時(shí)，細(xì)胞核DNA含量的測(cè)量和倍體分析可提供重要參考。為此，要求細(xì)胞核DNA的Feulgen染色法能滿足臨床快速病理診斷的要求。
根據(jù)細(xì)胞核DNA細(xì)胞化學(xué)染色的原理，染色過(guò)程中的鹽酸水解和Schiff’s試劑染色兩項(xiàng)操作步驟是非常關(guān)鍵和重要的。細(xì)胞核DNA經(jīng)鹽酸水解，使其脫氧戊糖和嘌呤之間的糖苷鍵斷開(kāi)，戊糖端形成醛基，與Schiff’s試劑結(jié)合生成紫紅色化合物。傳統(tǒng)的Feulgen染色法使用1N的鹽酸，在60℃的條件下水解細(xì)胞核DNA一小時(shí)，水解結(jié)果不穩(wěn)定，染色效果較差，已被十多年前的改良Feulgen染色法所替代，即室溫條件下，使用5N的鹽酸水解和Schiff’s試劑染色各約一小時(shí)左右，取得了良好的染色效果，并廣泛用于細(xì)胞核DNA含量的定量分析。然而，這些方法的完整染色時(shí)間達(dá)兩個(gè)多小時(shí)，不適合臨床快速病理診斷應(yīng)用。所以，不斷有人作縮短Feulgen染色時(shí)間的嘗試。龔志錦等在室溫下用7N、8N鹽酸水解細(xì)胞核DNA的Feulgen染色法，取得了較好染色效果，染色時(shí)間縮短至45～50分鐘。凌玉琴等應(yīng)用微波爐處理的Feulgen染色法，極大地縮短了染色時(shí)間。但是，染色過(guò)程中對(duì)微波爐輸出功率的準(zhǔn)確性要求很高，染色效果不穩(wěn)定，F(xiàn)eulgen染色液也只能一次性使用。因此，其在臨床診斷方面的應(yīng)用受到極大的限制。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種快速、簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、易于自動(dòng)化操作的Feulgen染色方法，該方法具有良好的染色效果，大大縮短了染色時(shí)間。
本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種快速Feulgen染色方法，包括如下步驟將細(xì)胞涂片、組織印片、冷凍切片、石蠟切片或滴片等先放入4～6N鹽酸水解3～10min，再放入Schiff’s試劑中染色8～15min，自來(lái)水沖洗2～5min，蒸餾水漂洗2～3次，快速梯度乙醇脫水，封片。
為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，所述鹽酸和Schiff’s試劑均須先預(yù)熱達(dá)50～70℃，所述整個(gè)鹽酸水解過(guò)程和Schiff’s試劑染色過(guò)程均在50～70℃的溫度進(jìn)行。
所述鹽酸和Schiff’s試劑可以反復(fù)多次使用而不需任何處理。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果本發(fā)明采用4～6N鹽酸水解過(guò)程和Schiff’s試劑染色過(guò)程都在50～70℃恒溫箱內(nèi)進(jìn)行，操作簡(jiǎn)單，染色效果穩(wěn)定，染色時(shí)間縮短到不足20分鐘，既滿足臨床快速診斷要求，也適合進(jìn)行細(xì)胞核DNA含量與倍體的定量分析，而且4～6N鹽酸溶液和Schiff’s試劑可以反復(fù)多次使用。如果與自動(dòng)染片機(jī)結(jié)合，整個(gè)Feulgen染色過(guò)程可由機(jī)器自動(dòng)完成，適合試劑或染色機(jī)生產(chǎn)廠家研發(fā)新的染色機(jī)和染色試劑盒進(jìn)行推廣。


圖1為快速Feulgen染色法染肝細(xì)胞核涂片圖。
圖2為10只小鼠肝細(xì)胞涂片的DNA含量直方圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
實(shí)施例1生后30天昆明小白鼠10只，制備肝細(xì)胞懸液涂片，室溫干燥，4％多聚甲醛固定3min。每只小鼠的肝細(xì)胞涂片按下述方法進(jìn)行Feulgen染色5N鹽酸和Schiff’s試劑放入60℃的恒溫箱中預(yù)熱至60℃，固定后的肝細(xì)胞涂片先放入5N鹽酸水解5min，再放入Schiff’s試劑中染色10min，自來(lái)水沖洗3min，蒸餾水漂洗3次，快速梯度乙醇脫水，封片。5N鹽酸和Schiff’s試劑均須先預(yù)熱達(dá)60℃，整個(gè)鹽酸水解過(guò)程和Schiff’s試劑染色過(guò)程均在60℃的溫度下進(jìn)行。
按柯勒照明要求調(diào)整LEICA LB顯微鏡光源，在物鏡(20×NA0.5)與黑白攝像機(jī)之間插入535/35的帶通濾光片，按TIGER細(xì)胞圖像分析儀(已用顯微測(cè)微臺(tái)尺和中國(guó)計(jì)量科學(xué)院出產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)密度片標(biāo)定其幾何標(biāo)尺和吸光度值)測(cè)量吸光度的要求校正系統(tǒng)基準(zhǔn)，隨機(jī)攝取肝細(xì)胞涂片上聚焦的肝細(xì)胞核圖像(每只小鼠不少于10幀，細(xì)胞核總數(shù)不少于500個(gè))，按TIGER細(xì)胞圖像分析儀測(cè)量吸光度的操作要求，測(cè)量單個(gè)肝細(xì)胞核的DNA總量，以面積積分吸光度(IA)表述。
如圖1所示，肝細(xì)胞涂片內(nèi)肝細(xì)胞單個(gè)核分布均勻，大小差異明顯，染色深，呈紫紅色，核內(nèi)結(jié)構(gòu)清晰，背景著色淡。圖2為2c、4c、8c肝細(xì)胞單個(gè)核的DNA總量均值直方圖，其CV值均＜10％，各倍體肝細(xì)胞單個(gè)核的DNA含量均值的比值均接近于2或4，呈明顯的倍數(shù)關(guān)系。
實(shí)施例2本發(fā)明快速Feulgen染色方法，包括如下步驟4N鹽酸和Schiff’s試劑放入50℃的恒溫箱中預(yù)熱至50℃，將肝組織印片先放入4N鹽酸水解3min，再放入Schiff’s試劑中染色8min，自來(lái)水沖洗2min，蒸餾水漂洗2次，快速梯度乙醇脫水，封片。整個(gè)鹽酸水解過(guò)程和Schiff’s試劑染色過(guò)程均在50℃的溫度下進(jìn)行。4N鹽酸溶液和Schiff’s試劑可以反復(fù)多次使用而不需任何處理。
實(shí)施例3本發(fā)明快速Feulgen染色方法，包括如下步驟6N鹽酸和Schiff’s試劑放入70℃的恒溫箱中預(yù)熱至70℃，將肝組織冷凍切片先放入6N鹽酸水解10min，再放入Schiff’s試劑中染色15min，自來(lái)水沖洗5min，蒸餾水漂洗3次，快速梯度乙醇脫水，封片。所述整個(gè)鹽酸水解過(guò)程和Schiff’s試劑染色過(guò)程均在70℃的溫度下進(jìn)行。6N鹽酸溶液和Schiff’s試劑可以反復(fù)多次使用而不需任何處理。
權(quán)利要求
1.一種快速Feulgen染色方法，其特征在于包括如下步驟將細(xì)胞涂片、組織印片、冷凍切片、石蠟切片或滴片先放入4～6N鹽酸水解3～10min，再放入Schiff’s試劑中染色8～15min，自來(lái)水沖洗2～5min，蒸餾水漂洗2～3次，快速梯度乙醇脫水，封片。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Feulgen染色方法，其特征在于，所述鹽酸和Schiff’s試劑均先預(yù)熱達(dá)50～70℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Feulgen染色方法，其特征在于，所述鹽酸水解過(guò)程和Schiff’s試劑染色過(guò)程在50～70℃的溫度進(jìn)行。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Feulgen染色方法，其特征在于，所述鹽酸和Schiff’s試劑能反復(fù)使用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種快速Feulgen染色方法，該染色方法將細(xì)胞涂片、組織印片、冷凍切片、滴片或石蠟切片等先放入4～6N鹽酸水解3～10min，再放入Schiff’s試劑中染色8～15min，自來(lái)水沖洗2～5min，蒸餾水漂洗2～3次，快速梯度乙醇脫水，封片。該Feulgen染色方法快速、簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、易于自動(dòng)化操作，具有良好的染色效果，大大縮短了染色時(shí)間。
文檔編號(hào)G01N1/30GK1837772SQ20061003489
公開(kāi)日2006年9月27日 申請(qǐng)日期2006年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月10日
發(fā)明者夏潮涌, 金日男 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)