專利名稱：：一種測定土壤微生物生物量氮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及土壤中微生物生物量氮的測定，具體的說是一種改進(jìn)土壤微生物生物量氮的測定方法。
背景技術(shù)：
：土壤微生物生物量是指土壤中體積小于5jamM0jamS活的微生物總量，其養(yǎng)分占土壤中相應(yīng)元素的比例很小，但在評價其對作物營養(yǎng)的作用時意義很大。因?yàn)樗浅；钴S并可迅速參與養(yǎng)分循環(huán)，既是養(yǎng)分循環(huán)過程的動力和進(jìn)入土壤的有機(jī)物質(zhì)的"轉(zhuǎn)化者"，又是土壤能量和養(yǎng)分特別是C、N、P、S等元素內(nèi)部供應(yīng)機(jī)制的"源"和"庫"(文獻(xiàn)l:JenkinsonDS，LaddJN，Microbialbiomassinsoil:Measurementandturnover,SoilBiochemistry,1981，(5):415-471)。微生物量氮是指活的微生物體內(nèi)所含有的氮，不同土壤類型及生態(tài)環(huán)境條件下其變異很大，耕層土壤微生物量氮一般為30-60kg，ha—1(文獻(xiàn)2:WidmerP，BrookesPC，ParryLC.Microbialbiomassnitrogenmeasurementsinsoilscontaininglargeamountsofinorganicnitrogen.SoilBiologyandBiochemistry,1989，21(6):865—867)，在數(shù)量上低于或接近作物的吸氮量；并且周轉(zhuǎn)較快，每年通過微生物周轉(zhuǎn)的氮是土壤微生物量氮的l.5倍以上。^見，大部分礦化的氮主要來自土壤微生物量氮，因此，微生物量氮對土壤氮素供應(yīng)和循環(huán)具有重要的意義(文獻(xiàn)3:MacartyGW，MeisingerJJ，JenniskensFMM.Relationshipsbetweentotal—N，biomass—Nandactive-NinsoilunderdifferenttillageandNfertilizertreatments.SoilBiologyandBiochemistry,1995，27(10):1245—1250)?，F(xiàn)階國內(nèi)外測定土壤微生物量氮的方法多采用氯仿熏蒸浸提法，主要步驟包括①熏蒸-浸提取新鮮土壤30g(相當(dāng)于干土25g左右)于小燒杯中，放入裝有30ml氯仿(帶沸石)、30mlNaOH和濕潤濾紙的真空干燥器中，密閉抽氣至氯仿沸騰3min，關(guān)閉閥門。在25"C黑暗條件下培養(yǎng)24h，打開干燥器檢驗(yàn)是否漏氣，若不漏氣，取出氯仿和NaOH，用真空泵反復(fù)抽氣，直到土壤聞不到氯仿氣味為止。另作不熏蒸作為對照。將熏蒸和不熏蒸土樣用100ml硫酸鉀溶液振蕩浸提30min，過濾。②測定吸取浸提液30.0ml于消煮管中，加10ml硫酸鉻鉀溶液和0.3g鋅粉，充分混勻，室溫下放置至少2h，再加入0.6ml硫酸銅溶液和8ml濃硫酸。緩慢加熱(150°C)約2h至消煮管中水分全部蒸發(fā)掉，然后高溫(硫酸發(fā)煙)消煮3h。待溶液完全冷卻后，將消煮管接到定氮蒸餾器上，向蒸餾管中加入NaOH溶液，蒸餾，用標(biāo)準(zhǔn)稀HC1溶液滴定硼酸吸收液。(文獻(xiàn)4:魯如坤，土壤農(nóng)業(yè)化學(xué)分析方法，北京中國農(nóng)業(yè)科技出版社，2000:228-233)。使用該方法對土壤微生物量氮進(jìn)行測定有以下缺點(diǎn)①該方法使用硫酸鉻鉀作還原劑不可取。硫酸鉻鉀中的Cr"誘發(fā)是癌癥的因素之一，該類藥品在歐洲國家明令禁止施用；土壤中的微生物量氮絕大部分為有機(jī)氮，有機(jī)氮不需要還原劑就可以被消解成NH4+-N。因此說，該方法使用硫酸鉻鉀是多此一舉。②方法本身耗時K。就拿蒸水歩驟說，將溫度調(diào)至15(TC，由于消煮管內(nèi)壁光滑，一定產(chǎn)牛爆沸現(xiàn)象。若阻止爆沸現(xiàn)象的發(fā)生，則有兩種途徑降低溫度或放沸石。降低溫度至11(TC，則需至少2天2夜才能將水蒸干；若放沸石，則會在轉(zhuǎn)移步驟中引起麻煩。③消煮后的產(chǎn)物為固態(tài)，不容易全部轉(zhuǎn)移。消煮結(jié)束冷卻后，消煮管中的固態(tài)產(chǎn)物需要一點(diǎn)一點(diǎn)刮出，因此在向蒸餾瓶中轉(zhuǎn)移的過程中會存在損失。另外，為了加快試驗(yàn)的進(jìn)程，加入的沸石會凝固在試管底部的中間，這又加劇了轉(zhuǎn)移產(chǎn)物的難度。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種重復(fù)性好，重現(xiàn)性高，并且簡單易行的測定土壤中微生物生物量氮的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明釆用的技術(shù)方案如卜一種測定土壤微生物生物量氮的方法，1)采用熏蒸-浸提的方法對土樣進(jìn)行處理以不熏蒸土樣為對照，將熏蒸和不熏蒸土樣分別用4倍重量體積的0.5M硫酸鉀溶液振蕩浸提，過濾，得浸提液，分別進(jìn)行以下步驟2)-4)中的操作；2)向消煮管中一次加入浸提液5.0ml，混合加速劑l-3g，以及濃硫酸8-10ml，搖勻；3)采用梯度升溫的方式對上述溶液進(jìn)行加熱溶液預(yù)先加熱至lOO-ll(TC，開始梯度升溫，依次使溶液于9-10min內(nèi)升溫至120-130°C、10-12min內(nèi)升溫至140-]55°C、11-13min內(nèi)升溫至160-170°C、12-14min內(nèi)升溫至180-195°C、13-15min內(nèi)升溫至200-220°C、14-17min內(nèi)升溫至205-240°C、16-19min內(nèi)升溫至240-260°C、45-65min內(nèi)升溫至340-380°C，恒溫3-4h至溶液澄清，冷卻；4)將消煮管中的溶液倒入蒸餾瓶中，用蒸餾水洗滌消煮管2-3次，每次蒸餾水用量為10-20ml，同時加入70-100ml10MNaOH溶液進(jìn)行蒸餾，采用硼酸接收，采用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液進(jìn)行滴定，確定所消耗的鹽酸溶液的用量；5)配制乙酰苯胺標(biāo)準(zhǔn)溶液取乙酰苯胺試劑1.9296克，加二次蒸餾水溶解，定容至1000ml容量瓶中，此溶液含有有機(jī)氮200mg/1，以此溶液為母液進(jìn)行逐級稀釋至0-40倍；選取稀釋后任意濃度的乙酰苯胺溶液5.0ml進(jìn)行以下歩驟2)-4)中的操作；以蒸餾水5.0ml、混合加速劑l-3g、濃硫酸8-10ml配制的溶液為對照組，將對照組同樣進(jìn)行以下步驟2)-4)中的操作；按如下過程對試驗(yàn)結(jié)果的計算a.計算標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的回收率回收率％=~^^^^——^-^-x100n標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)x5其中V^—滴定對照組時所消耗的HC1溶液體積，V—滴定乙酰苯胺溶液時消耗的HC1溶液體積，n標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一乙酰苯胺的質(zhì)量濃度，5—吸取乙酰苯胺溶液的體積。b.有機(jī)氮含量的計算(H)xCHclxl4xtSxl000W(JN)=-,,一-回收率。/。xm其中Vws—滴定熏蒸樣品時所消耗的HC1溶液體積，V—滴定未熏蒸樣品時所消耗的HC1溶液體積，tS—樣品的稀釋倍數(shù)(即總浸提液與步驟2)-4)中所采用的浸提液5.0ml倍數(shù)比)，m—烘干土質(zhì)量(通常土樣中的重量含水量為83-85%);C.微生物生物量氮的計算其中Ew—薰蒸土樣有機(jī)氮量與未薰蒸土樣有機(jī)氮之差，K^一氯仿薰蒸殺死微生物體中的氮被浸提出來的比例，通常取0.45。采用熏蒸-浸提的方法(參見文獻(xiàn)4)對土樣進(jìn)行處理，具體過程為取土壤25-30g，放入帶沸石的裝有25-40ml氯仿、20-40mlNaOH和濕潤濾紙的真空干燥器中，密閉抽氣至氯仿沸騰3-5min，關(guān)閉閥門；在室溫黑暗條件下培養(yǎng)24-48h，打開干燥器檢驗(yàn)是否漏氣，若不漏氣，取出氯仿和NaOH，用真空泵反復(fù)抽氣，直到土壤聞不到氯仿氣味為止；另作不熏蒸作為對照；將熏蒸和不熏蒸土樣分別用100ml0.5M硫酸鉀溶液振蕩浸提30-60min，過濾，得浸提液。所述加速劑由K2S04、CuSO^nSe組成，它們的重量比為90-100:9-10:1，歩驟4)中所采用的硼酸重量濃度為1%，用量為10-20ml。使用本發(fā)明改進(jìn)方法對土壤微生物生物量氮進(jìn)行測定，有如下優(yōu)點(diǎn)1.該方法安全、環(huán)保，有利于生態(tài)環(huán)境的可持續(xù)發(fā)展。原方法在消煮過程中使用KCr(S04)2作還原劑，KCr(S04)2中的Cr"誘發(fā)是癌癥的因素之一，該類藥品在歐洲國家明令禁止施用，可想而知，大劑量的傾倒會影響環(huán)境威脅人類。而且，若C一+在消煮過程中被氧化成C一+，其對環(huán)境的影響會更大。況且，土壤中的微生物量氮絕大部分為有機(jī)氮，有機(jī)氮不需要還原劑就可以被消解成皿4+^。本發(fā)明使用K2S04、CuS04和Se粉作混合加速劑，這三種藥品毒性較小或沒有，對環(huán)境的脅迫較KCr(S04)2小很多。2.該方法省時。原有方法的蒸水步驟需要耗費(fèi)很長時間，若加入沸石，又會對轉(zhuǎn)移步驟產(chǎn)生影響，二者很難權(quán)衡。本發(fā)明直接采用吸取浸體液5ml進(jìn)行消煮，省去蒸水步驟，直接向浸提液中加入催化劑和濃硫酸后消煮，省時省事。3.該方法精密度高，準(zhǔn)確性好。原有方法消煮產(chǎn)物為紅色沉淀，很難全部轉(zhuǎn)移至蒸餾瓶中，若有沸石則更難轉(zhuǎn)移。本發(fā)明方法的蒸餾產(chǎn)物為透明澄清的液體，可以全部轉(zhuǎn)移，消煮管也易清洗。對標(biāo)準(zhǔn)樣品的測定結(jié)果顯示，本發(fā)明的方法測定結(jié)果平行性更好，準(zhǔn)確性也令人滿意。具體實(shí)施方式實(shí)施例1對比原有的方法和改進(jìn)的方法測定乙酰苯胺標(biāo)準(zhǔn)溶液中的氮含量。參照文獻(xiàn)4，使用本發(fā)明改進(jìn)的方法對進(jìn)口乙酰苯胺標(biāo)準(zhǔn)溶液中的氮含量進(jìn)行測定。向消煮管中一次加入浸提液5.0ml，混合加速劑3gJ加速劑質(zhì)量組成為K2SO4:CuSO4:Se二90:9:l)，以及濃硫酸8ml，搖勻；采用梯度升溫的方式對溶液進(jìn)行加熱至34(TC，恒溫，3h后，冷卻；將消煮管中的溶液倒入蒸餾瓶中，用蒸餾水洗滌消煮管2-3次，同時加入NaOH溶液進(jìn)行蒸鎦，硼酸接收，標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液進(jìn)行滴定。具體過程如下1)配制乙酰苯胺標(biāo)準(zhǔn)溶液取德國進(jìn)口乙酰苯胺試劑1.9296克，加二次蒸餾水溶解，定容至1000ml容量瓶中，此溶液含有有機(jī)氮200mg/1。將該儲備液按40及8倍數(shù)稀釋，得到5及25mg/1濃度的溶液。以蒸餾水5.0ml、混合加速劑3g、濃硫酸8ml配制的溶液為對照組；2)取3根消煮管，消煮管中分別加入上述溶液5.0ml，混合加速劑(質(zhì)量比為K2SO4:CuSO4:Se二90:9:l)3g，以及濃硫酸8ml，搖勻；3)采用梯度升溫的方式對上述溶液進(jìn)行加熱溶液預(yù)先加熱至100-ll(TC，開始梯度升溫，依次使溶液于9-10min內(nèi)升溫至120-130°C、10-12min內(nèi)升溫至140-155°C、ll-13min內(nèi)升溫至160-170°C、12-14min內(nèi)升溫至180-195°C、13-15min內(nèi)升溫至200-220。C、14-17min內(nèi)升溫至205-240°C、16隱19min內(nèi)升溫至240-260。C、45-65min內(nèi)升溫至340-380°C，恒溫3-4h至溶液澄清，冷卻至室溫；4)將消煮管中的溶液倒入蒸餾瓶中，用蒸餾水洗滌消一煮管2次，每次蒸餾水用量為20ml，同時加入100ml10MNaOH溶液進(jìn)行蒸餾，用10ml重量濃度為1%硼酸接收，采用0.05M的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液進(jìn)行滴定，確定所消耗的鹽酸溶液的用量；本方法的原理如下1)乙酰苯胺在消煮的過程中轉(zhuǎn)變成銨態(tài)氮C8//9iW^^M/4+2)銨態(tài)氮在堿性條件下轉(zhuǎn)變成氨氣A^4+^~>AW3t試驗(yàn)結(jié)果的計算回收率％=(、灘誠—v加)xc肥X14X1000x!00n標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)x5乙酰苯胺標(biāo)準(zhǔn)溶液中氮的含量為回收率。/。xn物質(zhì)；對比例以文獻(xiàn)4(魯如坤，土壤農(nóng)業(yè)化學(xué)分析方法，北京中國農(nóng)業(yè)科技出版社，2000:228-233)的原方法對同樣的乙酰苯胺標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定。對比原方法和改進(jìn)方法對乙酰苯胺標(biāo)準(zhǔn)溶液中的氮進(jìn)行測定，測定的乙酰苯胺標(biāo)準(zhǔn)溶液中氮的含量，結(jié)果參見表1所示。由結(jié)果可以看出，使用原方法的測定結(jié)果既不穩(wěn)定也不準(zhǔn)確，而改進(jìn)方法靈敏度高準(zhǔn)確性也好。表1原方法與改進(jìn)方法測定乙酰苯胺標(biāo)準(zhǔn)溶液中的氮結(jié)果對比氮濃度(5mg/1)氮濃度(25mg/l)原方法編號改進(jìn)方法原方法編號改進(jìn)方法4.4714.9523.27524.564.3224.9123.13625.124.3435.0323.47724.834.2645.0224.15824.94編號l-8分別為實(shí)驗(yàn)的組數(shù);注使用原方法和改進(jìn)的方法測定乙酰苯胺中氮含量的差異源于每次加熱的方式不盡相同編號l:從IO(TC時開始梯度升溫，加熱10min升溫至120°C，加熱1lmin升溫至140。C，加熱12min升溫至160°C，加熱13min升溫至180°C，加熱15min升溫至200°C，加熱14min升溫至225°C，加熱16min升溫至250°C，加熱60min升溫至34(TC，恒溫，3h后，冷卻；編號2:從105。C時開始梯度升溫，加熱9min升溫至120°C，加熱llmin升溫至14(TC，加熱12min升溫至160°C，加熱13min升溫至180°C，加熱15min升溫至215'C，加熱14min升溫至225°C，加熱16min升溫至250°C，加熱60min升溫至340。C，恒溫，3h后，冷卻；編號3:從110°C時開始梯度升溫，加熱10min升溫至130°C，加熱1lmin升溫至14(TC，加熱12min升溫至160°C，加熱13min升溫至180°C，加熱14min升溫至21(TC，加熱14min升溫至225°C，加熱17min升溫至255°C，加熱57min升溫至34(TC，恒溫，3h后，冷卻；編號4:從IO(TC時開始梯度升溫，加熱10min升溫至12(TC，加熱12min升溫至15(TC，加熱13min升溫至170°C，加熱13min升溫至180°C，加熱14min升溫至210°C，加熱14min升溫至225°C，加熱16min升溫至250°C，加熱60min升溫至34(TC，恒溫，3h后，冷卻；編號5:從105。C時開始梯度升溫，加熱9min升溫至120°C，加熱llmin升溫至140。C，加熱12min升溫至160°C，加熱13min升溫至180°C，加熱14min升溫至210°C，加熱17min升溫至240°C，加熱16min升溫至260°C，加熱50min升溫至340。C，恒溫，3h后，冷卻；編號6:從IO(TC時開始梯度升溫，加熱10min升溫至12(TC，加熱llmin升溫至14(TC;加熱12min升溫至160°C，加熱13min升溫至180°C，加熱13min升溫至200。C，加熱15min升溫至220°C，加熱16min升溫至250。C，加熱60min升溫至34(TC，恒溫，3h后，冷卻；編號7:從IO(TC時開始梯度升溫，加熱llmin升溫至125。C，加熱10min升溫至140。C，加熱12min升溫至160°C，加熱13min升溫至180°C，加熱14min升溫至21(TC，加熱14min升溫至225°C，加熱17min升溫至255°C，加熱57min升溫至34(TC，恒溫，3h后，冷卻；編號8:從105。C時開始梯度升溫，加熱llmin升溫至130。C，加熱llmin升溫至140。C，加熱12min升溫至160°C，加熱13min升溫至180°C，加熱14min升溫至220°C，加熱14min升溫至225°C，加熱16min升溫至250°C，加熱60min升溫至340。C，恒溫，3h后，冷卻。實(shí)施例2使用改進(jìn)的方法測定土壤中微生物生物量氮的含量。具體實(shí)施過程試驗(yàn)步驟為1)熏蒸-浸提取新鮮土壤30g(相當(dāng)于干土25g左右)于小燒杯中，放入裝有30ml氯仿(帶沸石)、30mlNaOH和濕潤濾紙的真空干燥器中，密閉抽氣至氯仿沸騰3min，關(guān)閉閥門。在25'C黑暗條件下培養(yǎng)24h，打開干燥器檢驗(yàn)是否漏氣，若不漏氣，取出氯仿和NaOH，用真空泵反復(fù)抽氣，直到土壤聞不到氯仿氣味為止。另作不熏蒸作為對照。將熏蒸和不熏蒸土樣用100ml硫酸鉀溶液振蕩浸提30min，過濾；2)領(lǐng)淀向消煮管中依次加入浸提液5.0ml，混合加速劑(質(zhì)量比為K2SO4:CuSO4:Se=90:9:l)3g，以及濃硫酸8ml，搖勻；3)采用梯度升溫的方式對溶液進(jìn)行加熱，即從iocrc時開始梯度升溫，加熱10min升溫至120°C，加熱1lmin升溫至140°C，加熱12min升溫至160°C，加熱14min升溫至180°C，加熱15min升溫至200°C，加熱16min升溫至220。C，加熱17min升溫至26(TC，加熱50min升溫至340°C，恒溫，3h后，冷卻至室溫；4)將消煮管中的溶液倒入蒸餾瓶中，用蒸餾水洗滌消一煮管2次，每次蒸餾水用量為20ml，同時加入100ml10MNaOH溶液進(jìn)行蒸餾，用10ml重量濃度為1%硼酸接收，采用0.05M的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液進(jìn)行滴定，確定所消耗的鹽酸溶液的用量；試驗(yàn)結(jié)果的計算1)計算標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的回收率回收車。—(V標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—V空fl)xC肥"4x1000^00n標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)x52)有機(jī)氮含量的計算=(Vn-V絲蒸)xCHdXl4xtsx1000回收率y。xm3)微生物生物量氮的計算co(N)=￡N/&使用改進(jìn)的化學(xué)分析方法與儀器分析方法測定土壤中微生物生物量氮含量結(jié)果如表2所示，儀器分析過程采用總有機(jī)碳自動分析儀進(jìn)行測定，經(jīng)t-檢驗(yàn)比較，兩組結(jié)果平均值之間不存在顯著性差異，說明以所改進(jìn)的方法測定土壤中微生物生物量氮結(jié)果準(zhǔn)確可靠。表2化學(xué)分析方法和儀器分析方法測定土壤中微生物量氮結(jié)果比較(n=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權(quán)利要求1.一種測定土壤微生物生物量氮的方法，其特征在于1)采用熏蒸-浸提的方法對土樣進(jìn)行處理以不熏蒸土樣為對照，將熏蒸和不熏蒸土樣分別用4倍重量體積的0.5M硫酸鉀溶液振蕩浸提，過濾，得浸提液，分別進(jìn)行以下步驟2)-4)中的操作；2)向消煮管中一次加入浸提液5.0ml，混合加速劑1-3g，以及濃硫酸8-10ml，搖勻；3)采用梯度升溫的方式對上述溶液進(jìn)行加熱溶液預(yù)先加熱至100-110℃，開始梯度升溫，依次使溶液于9-10min內(nèi)升溫至120-130℃、10-12min內(nèi)升溫至140-155℃、11-13min內(nèi)升溫至160-170℃、12-14min內(nèi)升溫至180-195℃、13-15min內(nèi)升溫至200-220℃、14-17min內(nèi)升溫至205-240℃、16-19min內(nèi)升溫至240-260℃、45-65min內(nèi)升溫至340-380℃，恒溫3-4h后，冷卻；4)將消煮管中的溶液倒入蒸餾瓶中，用蒸餾水洗滌消煮管2-3次，每次蒸餾水用量為10-20ml，同時加入70-100ml10MNaOH溶液進(jìn)行蒸餾，采用硼酸接收，采用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液進(jìn)行滴定，確定所消耗的鹽酸溶液的用量；5)配制乙酰苯胺標(biāo)準(zhǔn)溶液取乙酰苯胺試劑1.9296克，加二次蒸餾水溶解，定容至1000ml容量瓶中，此溶液含有有機(jī)氮200mg/l，以此溶液為母液進(jìn)行逐級稀釋至0-40倍；選取稀釋后任意濃度的乙酰苯胺溶液5.0ml進(jìn)行以下步驟2)-4)中的操作；以蒸餾水5.0ml、混合加速劑1-3g、濃硫酸8-10ml配制的溶液為對照組，將對照組同樣進(jìn)行以下步驟2)-4)中的操作；按如下過程對試驗(yàn)結(jié)果的計算a.計算標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的回收率其中V空白—滴定對照組時所消耗的HCl溶液體積，V標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—滴定乙酰苯胺溶液時消耗的HCl溶液體積，n標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—乙酰苯胺的質(zhì)量濃度，5—吸取乙酰苯胺溶液的體積。b.有機(jī)氮含量的計算其中V熏蒸—滴定熏蒸樣品時所消耗的HCl溶液體積，V未熏蒸—滴定未熏蒸樣品時所消耗的HCl溶液體積，ts—樣品的稀釋倍數(shù)，m—烘干土質(zhì)量；c.微生物生物量氮的計算ω(N)＝EN/KEN其中EN—薰蒸土樣有機(jī)氮量與未薰蒸土樣有機(jī)氮之差，KEN—薰蒸殺死微生物體中的氮被浸提出來的比例，通常取0.45。2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述采用熏蒸-浸提的方法對土樣進(jìn)行處理過程為取土壤25-30g，放入帶沸石的裝有25-40ml氯仿、20-40mlNaOH和濕潤濾紙的真空干燥器中，密閉抽氣至氯仿沸騰3-5min，關(guān)閉閥門；在室溫黑暗條件下培養(yǎng)24-48h，打開干燥器檢驗(yàn)是否漏氣，若不漏氣，取出氯仿和NaOH，用真空泵反復(fù)抽氣，直到土壤聞不到氯仿氣味為止；另作不熏蒸作為對照；將熏蒸和不熏蒸土樣分別用100ml0.5M硫酸鉀溶液振蕩浸提30-60min，過濾，得浸提液。3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述加速劑由K2S04、CuS04和Se組成，它們的重量比為90-100:9-10:1。4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟4)中所采用的硼酸重量濃度為1%，用量為10-20ml。5.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟3)中溶液最終冷卻至室溫。全文摘要本發(fā)明涉及一種測定土壤微生物生物量氮的方法，采用熏蒸-浸提的方法對土樣進(jìn)行處理以不熏蒸土樣為對照，將熏蒸和不熏蒸土樣分別用4倍重量體積的0.5M硫酸鉀溶液振蕩浸提，過濾，得浸提液；向消煮管中依次加入5ml浸提液、3g混合加速劑、以及8ml濃硫酸，搖勻。緩慢加熱至硫酸發(fā)煙，高溫消煮3h至溶液澄清，冷卻。將消煮產(chǎn)物無損失的轉(zhuǎn)移至蒸餾瓶中，同時加入NaOH溶液進(jìn)行蒸餾，硼酸接收，標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液進(jìn)行滴定。本發(fā)明方法重復(fù)性好，重現(xiàn)性高，簡單易行。文檔編號G01N33/50GK101419226SQ20071015766公開日2009年4月29日申請日期2007年10月24日優(yōu)先權(quán)日2007年10月24日發(fā)明者樺周,宇萬太,璐張,強(qiáng)馬申請人:中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所