專利名稱：：乙醇含量的測量裝置及其方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種乙醇含量的測量裝置及其方法，特別涉及利用氧化酶系統(tǒng)檢測乙醇含量的裝置及其使用方法?，F(xiàn)有技術(shù)由于酒類商品銷售量大，銷售金額龐大，以摻水提高產(chǎn)量的劣質(zhì)酒流入市面的欺騙事件時(shí)有所聞。此外，政府及社會(huì)對酒后駕車的行為日益重視，并提高酒后駕車的刑責(zé)和罰金。因此，對于摻水假酒的篩檢或用于酒后駕車的檢測方法很有市場潛力。氣相層析法雖可對酒類樣本各成份提供精確的檢測，然而由于其前處理及分析步驟極為冗長；加之儀器本身價(jià)格昂貴、體積龐大，且需要經(jīng)過專業(yè)訓(xùn)練的人員才能操作，導(dǎo)致檢測成本過高，基本上并不符合銷售商與一般大眾實(shí)時(shí)篩檢的需求。生物傳感器(biosensor)主要是由生物辨認(rèn)組件及信號傳輸組件所構(gòu)成。由傳統(tǒng)酶電極的概念加以放大，目前凡是涉及到生物催化與生物親和力的都在生物傳感器的應(yīng)用范圍內(nèi)。生物傳感器還具有下列多項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)，可克服傳統(tǒng)分析方法的缺陷，因此很有發(fā)展?jié)摿?。生物傳感器的?yōu)點(diǎn)包括(l)通過應(yīng)用固定化技術(shù)，生物辨認(rèn)組件可重復(fù)使用，降低成本；(2)生物辨認(rèn)組件專一性高，可避免非標(biāo)的物干擾；(3)操作簡易；(4)靈敏度高，所需樣本量低；(5)應(yīng)答快速，降低分析時(shí)間；(6)數(shù)字信號輸出，達(dá)到微小化，易攜帶，可用于現(xiàn)場探測。因此，本發(fā)明將分子生物技術(shù)與電化學(xué)式酶生物傳感器的概念相結(jié)合，開發(fā)生物微傳感器來檢測液態(tài)或酒類樣本中乙醇的含量。本發(fā)明與其它傳統(tǒng)分析方法相比，除了有便利、快速、靈敏且體積小等優(yōu)點(diǎn)，還具備實(shí)時(shí)輸出的特性。本發(fā)明的裝置可供檢驗(yàn)單位、酒類銷售商乃至于一般家庭民眾直接用于市面上摻水假酒的篩檢，及飲酒人上路前自行對酒測值快速檢
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明摘述本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種乙醇含量的檢測方法，其包括(1)利用氧化酶將溶液中的乙醇氧化并產(chǎn)生H202;(2)用電子媒介物與所述&02反應(yīng)，并產(chǎn)生還原電流；并(3)測量所述還原電流，并將所測量的電流代入預(yù)先以乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液與相對電流所建立的線性方程式中，以測定溶液中的乙醇含量。本發(fā)明的另一目的在于提供一種乙醇含量的檢測裝置，其包含基板；參考電極，其位于所述基板上；及工作電極，其位于所述基板上且不接觸參考電極，而該工作電極包括一個(gè)工作區(qū)域，其中該工作區(qū)域中至少包含氧化酶和電子媒介物。本發(fā)明的另一目的在于提供一種利用乙醇含量檢測裝置的乙醇濃度檢測方法，其中所述乙醇含量測量裝置包含基板；參考電極，其位于所述基板上；及工作電極，其位于所述基板上且不接觸參考電極，而該工作電極包括一個(gè)工作區(qū)域，其中該工作區(qū)域中至少包含氧化酶和電子媒介物，而所述方法包括(1)將所述裝置與起始電解質(zhì)溶液接觸適當(dāng)時(shí)間，并測量起始電流值(Ii);(2)將所述裝置與待測乙醇溶液樣本接觸適當(dāng)時(shí)間，并測量最終電流值(If);并(3)將所述起始電流值(Ii)和最終電流值(If)的差值(AI)與乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液及其相對電流信號差值比較，測定樣本中乙醇的濃度。6本發(fā)明的乙醇含量檢測裝置及其檢測方法不僅可降低檢測成本，還能大幅提高使用方便性，兼具靈敏度高、操作簡易、應(yīng)答快速及體積微小化等諸多優(yōu)點(diǎn)。發(fā)明詳述本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種乙醇含量的檢測方法，其包括(1)利用氧化酶將溶液中的乙醇氧化并產(chǎn)生H202;(2)用電子媒介物與所述11202反應(yīng)，并產(chǎn)生還原電流；并(3)測量所述還原電流，并將所測量的電流代入預(yù)先以乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液與相對電流所建立的線性方程式中，以測定溶液中的乙醇含量。在本發(fā)明中，所述氧化酶只要能將乙醇氧化產(chǎn)生H202即可，并無特別限制。在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述氧化酶為醇類氧化酶(alcoholoxidase;AOX)。在本發(fā)明中，對于所使用的電子媒介物并無特別限制，只要能與&02反應(yīng)并產(chǎn)生還原電流即可，其適當(dāng)?shù)膶?shí)例例如有麥爾多拉藍(lán)(MeldolaBlue,MB，8-dimethylamino-2,3-benzophenoxazine)、普魯士藍(lán)(PrussianBlue,potassiumhexacyanoferrate)、二氯酚青定基酚(dichlorophenolindophenol)、X寸苯二酮(p-benzoquinone)、鄰苯二胺(o-phenylenediamine)、3,4-二羥苯甲醛(3，4-dihydroxybenzaldehyde)及其混合物等。優(yōu)選地，所述電子媒介物為普魚+藍(lán)日丄J&Lo本文中所述的乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液與相對電流所預(yù)先建立的線性方程式，是標(biāo)準(zhǔn)參考的乙醇濃度與電流的方程式，其用本發(fā)明的方法測量不同已知濃度的乙醇溶液，并將這些乙醇濃度與所測得的相對電流建立線性方程式而獲得。本發(fā)明的另一目的在于提供一種乙醇含量的檢測裝置，其包含基板；參考電極，其位于所述基板上；及工作電極，其位于所述基板上且不接觸參考電極，而該工作電極包括一個(gè)工作區(qū)域，其中該工作區(qū)域中至少包含氧化酶及電子媒介物。在本發(fā)明中，用作本發(fā)明電極的材料并無特別限制，只要能夠達(dá)到本發(fā)明的目的而沒有不良效果的均可用于本發(fā)明，其可包括例如氧化銦、玻璃、金、白金、鈀、石墨及碳黑等材料。在電極結(jié)構(gòu)方面，無論是平板電極、網(wǎng)印電極(screenprintingelectrode)、實(shí)心針狀電極或鏤空針狀電極等結(jié)構(gòu)均可應(yīng)用于本發(fā)明。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例中，所述電極為網(wǎng)印電在本發(fā)明中，對于所使用的電子媒介物并無特別限制，只要能與&02反應(yīng)并產(chǎn)生還原電流即可，其適當(dāng)實(shí)例例如有麥爾多拉藍(lán)、普魯士藍(lán)、二氯酚靛基酚、對苯二酮、鄰苯二胺、3，4二羥苯甲醛及其之混合物等。優(yōu)選地，所述電子媒介物為普魯士藍(lán)。在本發(fā)明中，所述工作電極上的工作區(qū)域中所固定的氧化酶只要能將乙醇氧化產(chǎn)生H202即可，并無特別限制。在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述氧化酶為醇類氧化酶。而氧化酶的固定量約為62.9至約314.6嗎/cm2。本發(fā)明的另一目的在于提供利用乙醇含量檢測裝置的乙醇濃度檢測方法，其中所述乙醇含量測量裝置包含基板；參考電極，其位于所述基板上；及工作電極，其位于所述基板上且不接觸參考電極，而該工作電極包括一個(gè)工作區(qū)域，其中該工作區(qū)域中至少包含氧化酶和電子媒介物，而所述方法包括(1)將所述裝置與起始電解質(zhì)溶液接觸適當(dāng)時(shí)間，并測量起始電流值(Ii);(2)將所述裝置與待測乙醇溶液樣本接觸適當(dāng)時(shí)間，并測量最終電流值(If);及(3)將所述起始電流值(Ii)與最終電流值(If)的差值(AI)與乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液及其相對電流信號差值比較，測定該樣本中乙醇之濃度。在本發(fā)明中，用作本發(fā)明電極的材料并無特別限制，只要能夠達(dá)到本發(fā)明的目的而沒有不良效果的均可應(yīng)用于本發(fā)明，其可包括例如氧化銦、玻璃、白金、金、鈀、石墨及碳黑等材料。在電極結(jié)構(gòu)方面，無論是平板電極、網(wǎng)印電極、實(shí)心針狀電極或鏤空針狀電極等結(jié)構(gòu)均可應(yīng)用于本發(fā)明。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例中，所述電極為網(wǎng)印電極。8在本發(fā)明中，對于所使用的電子媒介物并無特別限制，只要能與&02反應(yīng)并產(chǎn)生還原電流即可，其適當(dāng)?shù)膶?shí)例例如有麥爾多拉藍(lán)、普魯士藍(lán)、二氯酚靛基酚、對苯二酮、鄰苯二胺、3,4二羥苯甲醛等。優(yōu)選地，所述電子媒介物為普魯士藍(lán)。在本發(fā)明中，所述工作電極上的工作區(qū)域中所固定的氧化酶只要能將乙醇氧化產(chǎn)生H202即可，并無特別限制。在一個(gè)具體實(shí)施例中，所述氧化酶為醇類氧化酶。而氧化酶的固定量約為62.9至約314.6昭/cm2。上述乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液及其相對應(yīng)電流信號差值可預(yù)先建立成乙醇濃度與電流的線性方程式，它是標(biāo)準(zhǔn)參考乙醇濃度與電流的方程式，用本發(fā)明的方法測量不同已知乙醇濃度的溶液，并將這些乙醇濃度與所測量的電流關(guān)系建立線性方程式而獲得。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于提供結(jié)合分子生物技術(shù)、酶固定與電化學(xué)相關(guān)技術(shù)，應(yīng)用于以酶反應(yīng)為基礎(chǔ)的電化學(xué)乙醇探測用生物微傳感器，并可針對真實(shí)酒類樣本中乙醇的含量進(jìn)行快速且靈敏的探測，可達(dá)到實(shí)時(shí)且低成本傳感器的目的，并大幅提高使用方便性。本發(fā)明的探測裝置可直接用于摻水假酒的篩檢，并可供檢驗(yàn)單位、酒類銷售商，乃至于一般民眾進(jìn)行酒類質(zhì)量的管控，達(dá)到維護(hù)人體健康的目的。此外，本發(fā)明還可提供飲酒人于上路前自行對酒測值的快速檢測，以提供飲酒人駕駛安全信息。在本發(fā)明說明書中，除另行定義之外，本文中所使用的所有技術(shù)和科學(xué)用語的意義本領(lǐng)域技術(shù)人員通常都知道。本領(lǐng)域技術(shù)人員也能體會(huì)任何相似或相同于這里所描述的方法和材料，也可用于實(shí)施或測試本發(fā)明。下面實(shí)施例參照相關(guān)圖式說明本發(fā)明。實(shí)施例僅為示范性的，且不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。實(shí)施方式實(shí)施例1PBSPE電極與H202的電化學(xué)反應(yīng)本實(shí)施例采用網(wǎng)印電極(購自泰博(巧瑩)科技股份有限公司)制備本發(fā)明的檢測裝置，該檢測裝置100的結(jié)構(gòu)如圖1所示，包含PVC材質(zhì)的基板102;參考電極104，其位于基板102上；工作電極106，其位于基板102上且不與參考電極104接觸；工作區(qū)域108，其位于工作電極106上；及PVC絕緣層llO。SPE電極的基材為PVC材質(zhì)，網(wǎng)印碳膠共分三道程序，首先在工作區(qū)域108以外的區(qū)域刷上銀膠，而后在工作區(qū)域108第一與二層以純碳膠進(jìn)行網(wǎng)印，第三層則視需要用適當(dāng)比例的碳膠與普魯士藍(lán)(PB)(比例可隨所需而調(diào)整，普魯士藍(lán)比例越高電流值越大)進(jìn)行印刷，最后再覆蓋上PVC絕緣層，這種含普魯士藍(lán)的網(wǎng)印電極簡稱為PBSPE電極。由圖1可明顯看出，放大工作區(qū)域108的面積目的在于增加酶與電子媒介物的固定量，以增大電流輸出信號，同時(shí)降低探測極限的下限。在PBSPE電極與H202的電化學(xué)反應(yīng)方面，首先用桌上型電化學(xué)儀檢驗(yàn)H202對PBSPE電極的電化學(xué)影響。在電化學(xué)儀施加固定還原電位-0.2伏特的條件下，當(dāng)電極上的電子媒介物PB與H202作用而被氧化時(shí)，此電位可立即將其還原并產(chǎn)生還原電流，在電流計(jì)上即測量到電流輸出信號的變化，電流信號與H202濃度正相關(guān)，如圖2所示。每luMH202產(chǎn)生電流約30nA。由此可知，在提供特定還原電位的情況下，PBSPE電極可用于檢測樣品中的H202濃度。實(shí)施例2網(wǎng)印電極上含明膠的氧化酶的固定在氧化酶固定方面，以PBS緩沖液配制8M明膠(購自Difco)溶液，并置于42'C加熱盤中融化后備用。取0.5ul醇類氧化酶(AOX;購自Sigma;lu/ul)與2.5ul明膠溶液(8%)混合后，均勻涂布于網(wǎng)印電極的工作區(qū)域108表面，放置在4"C干燥，之后保存在防潮罐中待試驗(yàn)時(shí)取用。實(shí)施例3乙醇濃度的測定利用實(shí)施例2所完成的固定化氧化酶的電極測定乙醇濃度，首先，取5mlPBS作為電解液，工作電壓設(shè)為-0.2伏特，在不斷攪拌的情況下進(jìn)行計(jì)時(shí)電流法實(shí)驗(yàn)。酵素電極置于電解液時(shí)先進(jìn)行預(yù)平衡若干秒以獲得穩(wěn)定的背景電流，然后再依次滴加不同濃度的乙醇溶液，探測并記錄其電流值。圖3即為固定化氧化酶電極探測不同濃度乙醇的結(jié)果。探測乙醇濃度時(shí)，溶液中乙醇與包埋在明膠內(nèi)的AOX酵素反應(yīng)產(chǎn)生H202，隨后擴(kuò)散至電極表面，再經(jīng)由電子媒介物PB轉(zhuǎn)化為電流輸出信號。因此，由圖3可知，前50秒電極于PBS緩沖液中進(jìn)行預(yù)平衡，此時(shí)尚未添加乙醇，故沒有上升電流信號。在第50秒加入乙醇，電流值即迅速上升，這是因試片上的AOX與乙醇反應(yīng)產(chǎn)生H202所致。由圖3的斜率決定電流差值的截取時(shí)間。截取第60秒至第80秒的電流差值，以乙醇濃度對電流差值作圖，所得的乙醇濃度校正曲線如圖4。由濃度校正曲線可知，本裝置的固定化酵素電極對乙醇濃度的線性探測范圍約為0-200ppm，乙醇濃度在此范圍時(shí)其濃度與電流信號成正相關(guān)；若乙醇濃度高于200ppm時(shí)，其電流差值斜率則漸趨平緩，實(shí)際原因是乙醇受質(zhì)過飽和，故電流信號無法再增大。實(shí)施例4網(wǎng)印電極上不含明膠的氧化酶的固定用含有0.05%Tween20的PBS緩沖溶液配制不含明膠的氧化酶溶液。將0.5ulAOX(lu/ul)、2.5ulPBS(0.05%Tween20)及適量酵素保存劑混合后，均勻涂布于網(wǎng)印電極的工作區(qū)域108表面，放置在4"C晾干，之后保存在防潮罐中待實(shí)驗(yàn)時(shí)取用。適當(dāng)?shù)慕退乇４鎰┌―EAE-葡聚糖(DEAE-dextran)、NEOPROTEINSAVOR、高分子電解質(zhì)(ployelectrolyte)、多元醇(polyalcohol;PVA)、市售安定劑(主要成份為BSA)等，其中優(yōu)選為DEAE-葡聚糖。酵素保存劑添加的濃度，換算成AOX:PBS:酵素保存劑的比例約為4/20/1、4/20/10、8/20/1或8/20/10。最適合使用濃度為AOX:PBS:5%DEAE-葡聚糖8/20/10。將本實(shí)施例所制備的電極試片室溫風(fēng)干保存，每隔一段時(shí)間測試電極試片的電流，表現(xiàn)將其與原始電流值相比較測試保存一段時(shí)間后的電流穩(wěn)定度，其結(jié)果如圖5所示。由該圖可知，測試結(jié)果顯示室溫風(fēng)干保存半個(gè)月其電流穩(wěn)定度仍高達(dá)93%。實(shí)施例5乙醇濃度的測定用實(shí)施例4所制備的電極試片測定乙醇濃度，用含0.05%Tween20的PBS緩沖溶液配制待測乙醇樣本，以便增加溶液與電極表面的親和能力，使乙醇樣本可均勻擴(kuò)散，故完全覆蓋電極表面所需的樣本體積可減少至20ul。檢測乙醇濃度時(shí)，先將電極試片與緩沖液接觸而預(yù)平衡，之后，取待測乙醇樣本20ul滴在電極表面，當(dāng)液面與電極接觸時(shí)可產(chǎn)生電流，探測并紀(jì)錄該電流值，電極對不同濃度乙醇的電流與時(shí)間的關(guān)系如圖6所示。由圖6可知，樣本中乙醇濃度越高，第21秒的電流平衡值越高。將乙醇濃度與第21秒電流讀數(shù)作圖，所得結(jié)果如圖7所示，本實(shí)施例方法的乙醇濃度線性探測范圍約為0-100ppm。實(shí)施例6本發(fā)明在市售酒類上的應(yīng)用以市售40%威士忌做一系列稀釋(1600、5333、8000倍稀釋)，利用本發(fā)明的乙醇含量檢測裝置測量酒精含量濃度，其結(jié)果如圖8所示。由該圖可看出隨著稀釋倍數(shù)增加，電流變化值將越小，經(jīng)由所建立的濃度與電流變化值相關(guān)式換算測量所得的乙醇濃度，與理論值(即40%/稀釋倍數(shù))及氣相層析儀(GC)確認(rèn)后的濃度相比較如下表1。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表1可知，用本發(fā)明的乙醇含量檢測裝置測得的乙醇濃度與氣相層析儀確認(rèn)后的濃度值相當(dāng)接近，兩者誤差可小于13%，且稀釋倍數(shù)越低準(zhǔn)確度越高。本發(fā)明的乙醇含量檢測裝置的乙醇探測范圍(即相關(guān)式線性范圍)可為0-200ppm，針對不同酒類可調(diào)整不同稀釋倍率，使待測乙醇濃度落在此線性范圍內(nèi)。實(shí)施例7本發(fā)明在酒測上的應(yīng)用經(jīng)由人體試驗(yàn)受測者先喝5cc三多利威士忌(SUNTORYWHISKY;40%)，5分鐘后將唾液取出并稀釋IO倍，以本發(fā)明的乙醇含量檢測裝置重復(fù)進(jìn)行三次乙醇濃度測量，其結(jié)果如圖9所示。取80至j120秒的電流變化量套入已建立的濃度與電流變化值關(guān)系式中，換算出唾液中乙醇?xì)埩魸舛热缦卤?所示。所測得的乙醇平均殘留濃度為48.3ppm，且變異系數(shù)僅6.32%o表2<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>為進(jìn)一步確認(rèn)本發(fā)明的乙醇含量檢測裝置對唾液中乙醇?xì)埩魷y量的適用性，針對人體飲用10cc三多利威士忌，漱口后，每隔10分鐘采集唾液稀釋IO倍后進(jìn)行殘留乙醇濃度定量，結(jié)果如圖10所示。由該圖可知，隨著延遲采樣時(shí)間延長，電流信號將漸次變小，僅在前30分鐘所采集的唾液樣品中可測到乙醇?xì)埩簟Ｒ虼?，若以本發(fā)明的裝置進(jìn)行酒測，只需將唾液進(jìn)行10倍稀釋，若檢測結(jié)果超過50ppm，則相當(dāng)于超過吐氣檢驗(yàn)法所規(guī)定的酒精濃度每公升0.25毫克以上。唾液和血液中酒精濃度比值約為1.20，即駕駛?cè)丝稍诘缆否{駛前，以本發(fā)明的乙醇含量檢測裝置先行判別酒測值是否已超出法規(guī)規(guī)氾。上述實(shí)施例僅為示范性且不應(yīng)視為對本發(fā)明的限制。上述教示可應(yīng)用在其它類型裝置。說明書內(nèi)容旨在更詳盡說明本發(fā)明，并不應(yīng)以此限制本發(fā)明的申請專利范圍。圖1說明本發(fā)明網(wǎng)印電極的結(jié)構(gòu)。圖2說明不同H202濃度所產(chǎn)生的相對PBSPE電極的電流信號。圖3說明以固定化氧化酶電極探測不同濃度乙醇的電流-時(shí)間圖。圖4說明乙醇濃度校正曲線圖。圖5說明本發(fā)明的電極試片在室溫風(fēng)干保存后，電極試片的電流表現(xiàn)與原始電流值的比較圖。圖6說明以未固定化氧化酶電極探測不同濃度乙醇的電流-時(shí)間圖。圖7說明以未固定化氧化酶電極探測不同濃度乙醇的乙醇濃度與第21秒電流讀數(shù)圖。圖8說明利用本發(fā)明的乙醇含量檢測裝置測量市售40%威士忌稀釋后的酒精濃度中，電流與時(shí)間的關(guān)系圖。圖9說明以本發(fā)明的乙醇含量檢測裝置重復(fù)進(jìn)行三次唾液中乙醇的濃圖10說明以本發(fā)明的乙醇含量檢測裝置進(jìn)行唾液中乙醇的濃度測量中，電流與時(shí)間的關(guān)系圖。主要組件符號說明100檢測裝置102基板104參考電極106工作電極108工作區(qū)域110絕緣層權(quán)利要求1、一種乙醇含量的檢測方法，其包括(1)利用氧化酶將溶液中的乙醇氧化并產(chǎn)生H2O2；(2)以電子媒介物與所述H2O2反應(yīng)，并產(chǎn)生還原電流；并(3)測量所述還原電流，并將測量的電流代入預(yù)先以乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液與相對電流所建立的線性方程式中，以測定溶液中的乙醇含量。2、權(quán)利要求1的檢測方法，其中所述氧化酶為醇類氧化酶。3、權(quán)利要求1的檢測方法，其中所述電子媒介物為麥爾多拉藍(lán)、普魯士藍(lán)、二氯酚靛基酚、對苯二酮、鄰苯二胺、3，4二羥苯甲醛及其混合物等。4、權(quán)利要求1的檢測方法，其中所述電子媒介物為普魯士藍(lán)。5、一種乙醇含量的檢測裝置，其包含基板；參考電極，其位于所述基板上；及工作電極，其位于所述基板上且不接觸參考電極，而該工作電極包括一個(gè)工作區(qū)域，其中該工作區(qū)域中至少包含氧化酶及電子媒介物。6、權(quán)利要求5的檢測裝置，其中所述氧化酶為醇類氧化酶。7、權(quán)利要求5的檢測裝置，其中所述工作電極的工作區(qū)域中所固定的醇類氧化酶量約為62.9至約314.6嗎/cm2。8、權(quán)利要求5的檢測裝置，其中所述電子媒介物為麥爾多拉藍(lán)、普魯士藍(lán)、二氯酚靛基酚、對苯二酮、鄰苯二胺、3,4二羥苯甲醛及其混合物。9、權(quán)利要求5的檢測裝置，其中所述電子媒介物為普魯士藍(lán)。10、權(quán)利要求5的檢測裝置，其中所述工作電極的工作區(qū)域中進(jìn)一步包含明膠。11、權(quán)利要求5的檢測裝置，其中所述工作電極的工作區(qū)域中進(jìn)一步包含酵素保存劑。12、權(quán)利要求11的檢測裝置，其中所述酵素保存劑為DEAE-葡聚糖、NEOPROTEINSAVOR、高分子電解質(zhì)、多元醇及安定劑。13、權(quán)利要求5的檢測裝置，其使用于檢測酒類中乙醇的含量。14、權(quán)利要求5的檢測裝置，其使用于檢測唾液中乙醇的含量。15、一種利用乙醇含量檢測裝置的乙醇濃度的檢測方法，其中所述乙醇含量測量裝置包含基板；參考電極，其位于所述基板上；及工作電極，其位于所述基板上且不接觸參考電極，而該工作電極包括一個(gè)工作區(qū)域，其中該工作區(qū)域中至少包含氧化酶及電子媒介物，而所述方法包括(1)將所述裝置與起始電解質(zhì)溶液接觸適當(dāng)時(shí)間，并測量起始電流值(Ii);(2)將所述裝置與待測乙醇溶液樣本接觸適當(dāng)時(shí)間，并用所述裝置測量最終電流值(Ifh及(3)將所述起始電流值(Ii)與最終電流值(H)的差值(AI)與乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液及其相對應(yīng)電流信號差值比較，測定該樣本中乙醇的濃度。16、權(quán)利要求15的檢測方法，其中所述氧化酶為醇類氧化酶。17、權(quán)利要求15的檢測方法，其中所述工作電極的工作區(qū)域中所固定的氧化酶量約為62.9至約314.6pg/cm2。18、權(quán)利要求15的檢測方法，其中所述電子媒介物為麥爾多拉藍(lán)、普魯士藍(lán)、二氯酚靛基酚、對苯二酮、鄰苯二胺、3,4二羥苯甲醛及其混合物。19、權(quán)利要求15的檢測方法，其中所述電子媒介物為普魯士藍(lán)。20、權(quán)利要求15的檢測方法，其中所述工作電極的工作區(qū)域中進(jìn)一步包含明膠。21、權(quán)利要求15的檢測方法，其中所述工作電極的工作區(qū)域中進(jìn)一步包含酵素保存劑。22、權(quán)利要求21的檢測方法，其中所述酵素保存劑為DEAE-葡聚糖、NEOPROTEINSAVOR、高分子電解質(zhì)、多元醇及安定劑。23、權(quán)利要求15的檢測方法，其中所述乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液及其相對應(yīng)電流信號差值可預(yù)先建立成乙醇濃度與相對電流的線性方程式。24、權(quán)利要求15的檢測方法，其中所述待測樣本的乙醇含量范圍介于0至200ppm之間。25、權(quán)利要求15的檢測方法，其用于檢測酒類中乙醇的含量。26、權(quán)利要求15的檢測方法，其用于檢測唾液中乙醇的含量。全文摘要本發(fā)明涉及一種乙醇含量的檢測裝置及其方法。本發(fā)明以氧化酶反應(yīng)為基礎(chǔ)研發(fā)出電化學(xué)乙醇探測用生物微傳感器，并可針對真實(shí)酒類樣本或人類唾液中乙醇的含量，進(jìn)行快速且靈敏的探測，可直接用于市面上摻水假酒的篩檢，及飲酒人上路前自行對酒測值的快速檢測。本發(fā)明的乙醇含量檢測裝置及其檢測方法不僅可降低檢測成本，還能大幅提高使用方便性，兼具靈敏度高、操作簡易、應(yīng)答快速及體積微小化等諸多優(yōu)點(diǎn)。文檔編號G01N33/98GK101587087SQ20081010053公開日2009年11月25日申請日期2008年5月20日優(yōu)先權(quán)日2008年5月20日發(fā)明者巫鴻章,林畢修平,錢瑞龍,陳建孝申請人:財(cái)團(tuán)法人生物技術(shù)開發(fā)中心