專利名稱：一種海水中環(huán)境內分泌干擾物的快速檢測方法
一種海水中環(huán)境內分泌干擾物的快速檢測方法技術領域
本發(fā)明屬于海洋環(huán)境化學分析技術領域，具體涉及海水樣品中的環(huán)境內分泌干擾 物的快速樣品前處理和檢測方法。
背景技術：
環(huán)境內分泌干擾物(Endocrine disrupting chemicals，EDCs)對人類和野生動物 健康的危害作用已成為全球關注的焦點。大量的實驗室研究及流行病學調查結果均提示， 環(huán)境中大量存在的EDCs可能危害人類和野生動物的內分泌、神經、免疫等系統(tǒng)的正常功能 并導致內分泌紊亂、生長發(fā)育異常、出生缺陷等，從而嚴重影響人類的生存與發(fā)展。由于大 部分EDCs比傳統(tǒng)污染物極性更強，加上其在環(huán)境中的低濃度和環(huán)境基質的復雜性，使得對 EDCs的定量分析，尤其是多組分同時分析遭遇巨大挑戰(zhàn)。
環(huán)境內分泌干擾物包括了具不同性質的廣泛的化合物，主要的分析方法有生物測 試方法和儀器分析方法。在儀器分析方法中固相微萃取技術與其它分析技術相比，具有有 機溶劑用量少、對待測物的選擇性高、萃取速度快、樣品回收率高等優(yōu)點，因此適用于分析 含量很低并且結構復雜的環(huán)境內分泌干擾物。發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種海水中環(huán)境內分泌干擾物的快速檢測方 法，該方法對目標化合物的定量線性范圍跨越了三個數量級，相對標準偏差RSD為3.0 9. 6%，加標回收率為83. 9 101. 0%o
本發(fā)明的一種海水中環(huán)境內分泌干擾物的快速檢測方法，包括
(1)海水樣品通過調節(jié)離子濃度、調節(jié)pH和水浴超聲輔助萃取后，采用固相微萃 取裝置富集目標化合物，然后進行頂空衍生化；
(2)熱脫附后使用氣相色譜質譜聯(lián)用定量分析環(huán)境內分泌干擾物。
所述步驟(1)底液以質量比計算，含NaCl濃度為10%。
所述步驟(1)使用lmol/L的鹽酸調節(jié)溶液pH為5。
所述的待測環(huán)境內分泌干擾物為壬基酚、辛基酚、乙烯雌酚、雌酮和雌二醇。
所述步驟(1)固相微萃取的萃取介質選取聚酰胺制成的涂層。
所述步驟(1)中的超聲輔助萃取條件為超聲功率50w，頻率45kHz，45士 1°C超聲處 理 30min_60mino
所述步驟⑴頂空衍生化是在細1的樣品瓶中加入100μ L的N，0雙(三甲基硅烷 基)三氟乙酰胺衍生化試劑，用帶隔膜的瓶蓋密封；用固相微萃取裝置的萃取頭刺穿隔膜， 將聚酰胺涂層暴露在衍生化試劑形成的飽和蒸氣中，時間60min-90min，溫度為25 士 1°C， 磁力攪拌速率為500-1000rmp。
所述步驟O)中的氣相色譜質譜聯(lián)用方法如下所述
氣相色譜條件用HP-5MS柱或相當者，進樣口使用直徑為4mm的玻璃襯管，溫度為280°C，采用不分流模式進樣，恒定流速l.Oml/min，載氣為氦氣；柱升溫程序為初始溫度 為 90°C，保持 2min，以 30°C /min 從 90°C到 180°C，以 10°C /min 從 180°C到 240°C，以 3°C / min 從 240°C到 270°C,15°C /min 從 270°C到 300°C，最后 300°C保持 2min ；
質譜條件電子轟擊源，50-550amu數據采集全掃描，選擇離子方式以分子離子峰定量。
采用固相微萃取技術與氣相色譜-質譜聯(lián)用建立了同時測定五種環(huán)境內分泌干 擾物的分析方法。目標化合物分別為壬基酚(technical grade nonylphenol，，t_NP)、辛 基酚(octylphenol，0P)、乙烯雌酚(diethylstilbestrol，DES)、雌酮(estronej》和雌二 醇(17 β -estradiol, E2)。
本發(fā)明的通過配備固相微萃取裝置和氣相色譜-質譜，樣品前處理采用水浴超聲 輔助提取，然后通過固相微萃取富集目標化合物，熱脫附后通過氣相色譜質譜聯(lián)用分析環(huán) 境內分泌干擾物。
有益效果
本發(fā)明的方法對目標化合物的定量線性范圍跨越了三個數量級，相對標準偏差 RSD為3. 0 9. 6%，加標回收率為83. 9 101. 0%，表明目標化合物的檢測具有良好的重 現(xiàn)性。與傳統(tǒng)的萃取技術相比，固相微萃取技術集萃取、濃縮、解吸、進樣于一體，適用于海 洋環(huán)境中分析含量很低并且結構復雜的環(huán)境內分泌干擾物。


圖1目標化合物的全離子掃描圖，濃度為10yg/L，DES為lyg/L，(I)OP，(2)t_NP， (3)DES, (4)El, (5)E2。
具體實施方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內容之后，本領域技術人 員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定 的范圍。
實施例1
(1)量取3ml海水樣品加入帶隔膜和蓋子的樣品瓶中，使用NaCl配置樣品溶 液濃度為100g/L，用lmol/L的鹽酸調節(jié)pH至5，通過固相微萃取裝置的萃取頭刺穿隔膜 將聚酰胺涂層浸入樣品中，攪拌速率為500rmp，在恒溫水浴中使用超聲輔助萃取，所述超 聲輔助條件為超聲功率50w，頻率45紐2，45士11超聲處理301^11 ；萃取完后，在25°C下將 IOOyL的N，0雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺衍生化試劑加入有隔膜密封的樣品瓶中，將 聚酰胺涂層暴露于衍生化試劑形成的飽和蒸氣中進行頂空衍生化反應90min ；
(2)氣相色譜-質譜聯(lián)用分析
色譜條件為毛細管柱型號HP-5Max(30mX0. 25mmX0. 25μπι)，載氣為氦氣；GC進 樣口用直徑為4mm的玻璃襯管，采用不分流模式進樣，恒定流速1. Oml/min ；柱溫升溫程序 初始溫度為 90°C，保持 2min，以 30°C /min 從 90°C到 180°C，以 10°C /min 從 180°C到 240°C， 以 3°C /min 從 240°C到 270°C,15°C /min 從 270°C到 300°C，最后 300°C保持 2min ；
質譜條件為50-550amU數據采集全掃描，選擇離子方式以分子離子峰定量。直接 將固相微萃取裝置的萃取頭插入進樣口進行熱解析，溫度280°C，時間lOmin。
(3)分析結果
采用固相微萃取技術與氣相色譜-質譜聯(lián)用建立了同時測定五種環(huán)境內分泌干 擾物的分析方法。目標化合物分別為壬基酚(technical grade nonylphenol，，t_NP)、辛 基酚(octylphenol，0P)、乙烯雌酚(diethylstilbestrol，DES)、雌酮(estronej》和雌二 醇(17 β-estradiol，E2)。如表1所示該分析方法對目標化合物的定量線性范圍跨越了三 個數量級，相對標準偏差RSD為3. 0 9. 6%，加標回收率為83. 9 101. 0%，表明目標化 合物的檢測具有良好的重現(xiàn)性。與傳統(tǒng)的萃取技術相比，固相微萃取技術集萃取、濃縮、解 吸、進樣于一體，適用于海洋環(huán)境中分析含量很低并且結構復雜的環(huán)境內分泌干擾物。
表1目標化合物的線性范圍、檢出限和加標回收率化合物 線性范圍 相關系數 (pg/L)(R2)檢測限 精密度加標回收率
權利要求
1.一種海水中環(huán)境內分泌干擾物的快速檢測方法，其特征在于所述方法包括以下步驟(1)海水樣品通過調節(jié)離子濃度、調節(jié)PH和水浴超聲輔助萃取后，采用固相微萃取裝 置富集目標化合物，然后進行頂空衍生化；(2)熱脫附后使用氣相色譜質譜聯(lián)用定量分析環(huán)境內分泌干擾物。
2.根據權利要求1所述的一種海水中環(huán)境內分泌干擾物的快速檢測方法，其特征在 于所述步驟(1)底液以質量比計算，含NaCl濃度為10%。
3.根據權利要求1所述的一種海水中環(huán)境內分泌干擾物的快速檢測方法，其特征在 于所述步驟⑴使用lmol/L的鹽酸調節(jié)溶液pH為5。
4.根據權利要求1所述的一種海水中環(huán)境內分泌干擾物的快速檢測方法，其特征在 于所述的待測環(huán)境內分泌干擾物為壬基酚、辛基酚、乙烯雌酚、雌酮和雌二醇。
5.根據權利要求1所述的一種海水中環(huán)境內分泌干擾物的快速檢測方法，其特征在 于所述步驟(1)固相微萃取的萃取介質選取聚酰胺制成的涂層。
6.根據權利要求1所述的一種海水中環(huán)境內分泌干擾物的快速檢測方法，其特征在 于所述步驟(1)中的超聲輔助萃取條件為超聲功率50w，頻率45kHz，45士 1°C超聲處理 30min_60mino
7.根據權利要求1所述的一種海水中環(huán)境內分泌干擾物的快速檢測方法，其特征在 于所述步驟(1)頂空衍生化是在細1的樣品瓶中加入100 μ L的N，0雙(三甲基硅烷基) 三氟乙酰胺衍生化試劑，用帶隔膜的瓶蓋密封；用固相微萃取裝置的萃取頭刺穿隔膜，將聚 酰胺涂層暴露在衍生化試劑形成的飽和蒸氣中，時間60min-90min，溫度為25士 1°C，磁力 攪拌速率為500-1000rmp。
8.根據權利要求1所述的一種海水中環(huán)境內分泌干擾物的快速檢測方法，其特征在 于所述步驟O)中的氣相色譜質譜聯(lián)用方法如下所述氣相色譜條件用HP-5MS柱或相當者，進樣口使用直徑為4mm的玻璃襯管，溫度為 280°C，采用不分流模式進樣，恒定流速l.Oml/min，載氣為氦氣；柱升溫程序為初始溫度 為 90°C，保持 2min，以 30°C /min 從 90°C到 180°C，以 10°C /min 從 180°C到 240°C，以 3°C / min 從 240°C到 270°C,15°C /min 從 270°C到 300°C，最后 300°C保持 2min ；質譜條件電子轟擊源，50-550amu數據采集全掃描，選擇離子方式以分子離子峰定量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種海水中環(huán)境內分泌干擾物的快速檢測方法，包括以下步驟(1)海水樣品通過調節(jié)離子濃度、調節(jié)pH和水浴超聲輔助萃取后，采用固相微萃取裝置富集目標化合物，然后進行頂空衍生化；(2)熱脫附后使用氣相色譜質譜聯(lián)用定量分析環(huán)境內分泌干擾物。本發(fā)明有效解決了在海洋環(huán)境調查中分析環(huán)境內分泌干擾物時采樣量大，采樣周期長，樣品不利保存，而且在化學分析中還要進行繁復的前處理才能進行測試的問題。對選定的目標化合物分析得到了滿意的結果，具有有機溶劑用量少、對待測物的選擇性高、萃取速度快、樣品回收率高等優(yōu)點，可適用于海洋環(huán)境中分析含量很低并且結構復雜的環(huán)境內分泌干擾物。
文檔編號G01N30/02GK102043028SQ20101054566
公開日2011年5月4日 申請日期2010年11月16日 優(yōu)先權日2010年11月16日
發(fā)明者平仙隱, 晁敏 申請人:中國水產科學研究院東海水產研究所