專利名稱：一種含有磺酰脲類農(nóng)藥殘留的人參樣品測定前的處理方法
技術領域：
本發(fā)明屬于農(nóng)藥殘留量的測定技術領域，涉及人參中15種磺酰脲類藥物殘留量 測定的方法。特別是一種含有15種磺酰脲類藥物殘留量的人參殘留樣測定前的處理方法。
背景技術：
農(nóng)藥殘留指的是在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中施用農(nóng)藥后一部分農(nóng)藥直接或間接殘存于谷物、蔬 菜、果品、畜產(chǎn)品、水產(chǎn)品中以及土壤和水體中的現(xiàn)象。農(nóng)藥殘留問題是隨著農(nóng)藥大量生產(chǎn) 和廣泛使用而產(chǎn)生的。目前使用的農(nóng)藥，有些在較短時間內可以通過生物降解成為無害物 質，而一些有機氯類農(nóng)藥卻難以降解，是殘留性強的農(nóng)藥。蔬菜農(nóng)藥殘留超標，會直接危及 人體的神經(jīng)系統(tǒng)和肝、腎等重要器官。同時殘留農(nóng)藥在人體內蓄積，超過一定量度后會導致 一些慢性疾病，如肌肉麻木、咳嗽等，甚至會誘發(fā)血管疾病、糖尿病和癌癥等。由于農(nóng)藥殘留 對人類和生物危害很大，各國對農(nóng)藥的施用都進行嚴格的管理，并對食品中農(nóng)藥殘留容許 量作了規(guī)定。在我國發(fā)生較多的引起農(nóng)藥殘留中毒的農(nóng)藥品種主要是有機磷農(nóng)藥和氨基甲酸 酯類農(nóng)藥，如氧化樂果、樂果、馬拉硫磷、甲胺磷、久效磷、倍硫磷、百克威、抗芽威和西維因 等。這些農(nóng)藥是通過抑制昆蟲中樞神經(jīng)中的膽堿酯酶使之死亡而發(fā)揮殺蟲作用的。但這些 農(nóng)藥對人體內的膽堿酯酶也有抑制作用，它能阻斷神經(jīng)遞質的傳遞，引起肌肉麻痹造成中 毒。國家雖明文規(guī)定劇毒、高毒農(nóng)藥不得用于蔬菜、瓜果、茶葉和中草藥材，例如氧化樂果、 對硫磷、甲拌磷、甲胺磷、水胺硫磷、呋哺丹等。但某些地區(qū)的菜農(nóng)仍然使用甲胺磷、甲基對 硫磷等劇毒高毒農(nóng)藥于蔬菜，不時出現(xiàn)消費者因食用含有甲胺磷農(nóng)藥的蔬菜而急性中毒。近20年來問世的磺酰脲類除草劑具有高效、低毒、低殘留等特點，已經(jīng)成為當前 使用量最大的一類除草劑，在農(nóng)作物種植和中草藥栽培中被廣泛應用于草害的防治。雖然 用量小，毒性較低，但由于大多數(shù)屬于長殘效除草劑，因此該類除草劑在作物及中藥材中的 殘留問題，對人類健康和環(huán)境造成的毒害以及其對后茬作物產(chǎn)生的危害都已經(jīng)引起廣泛關 注。美國、歐盟、日本等發(fā)達國家，相繼對進出口農(nóng)產(chǎn)品中該類除草劑殘留制定了最大殘留 限量標準(MRLs)，不過在中草藥中的限量要求尚無相關規(guī)定，但在不久的將來也會被提上 記事日程。由于磺酰脲類除草劑極性強，沸點高，受熱不穩(wěn)定，一般不適合直接采用氣相色譜 法分析。目前，檢測該類藥物殘留最常用的方法是高效液相色譜法(HPLC)，但靈敏度低且缺 乏選擇性，往往對樣品的凈化程度要求很高，多種藥物同時檢測時對凈化的要求則更高。檢 測的樣品基質以大米、大豆、蔬菜等農(nóng)產(chǎn)品和土壤，水等環(huán)境樣品居多，尚無中藥材中該類 藥物測定方法的報道。高效液相色譜-質譜聯(lián)用技術(HPLC-MS/MQ靈敏度高，選擇性好， 能輕松檢測多種藥物殘留量，已成為磺酰脲類藥物多殘留分析的首選方法，尤其對中藥材 這種基質非常復雜的樣品來說。超高效液相色譜(UPLC)基于1. 7 μ m的小粒徑，比傳統(tǒng)的HPLC具有更高的分離能 力，更快的分析速度，目前已經(jīng)被成功應用于大豆中多種極性除草劑殘留量的檢測[10]。本專利采用UPLC-MS/MS技術對15種磺酰脲類除草劑進行了測定，旨在建立快速有效的檢測 中藥材中磺酰脲類除草劑殘留量的方法，進而對國內市場上中藥材受除草劑污染狀況進行調查。是否能準確的檢測出微量的殘留其關鍵是樣品的前處理方法，樣品處理的好，可 以減少雜質干擾，減少雜質對儀器的污染，提高分析結果的靈敏度和準確度。本專利所建立 的樣品前處理方法為我單位自行研制的方法，國內公開文獻沒有查到相關報道。
發(fā)明內容
本發(fā)明公開了一種含有含有磺酰脲類農(nóng)藥殘留的人參樣品測定前的處理方法，其 特征在于(1)準確稱取粉碎樣品2g，精確至O.Olg，加入20mL乙腈，渦旋aiiin，4000rpm離 心5min，取上清液于蒸發(fā)瓶中；殘渣用10-20mL乙腈重復提取一次，渦旋anin，4000rpm離 心5min，合并上清液；將提取液在40°C蒸干，殘渣用體積比甲醇-二氯甲烷10 90，5mL溶 解，待凈化；(2)石墨化碳柱先用IOmL甲醇-二氯甲烷，體積比10 90活化，并用固相萃取柱 轉接頭將石墨化碳柱與50mL注射器相連；(3)將樣品液轉移至注射器中，再用體積比10 90的甲醇-二氯甲烷洗滌樣品 瓶，每次5mL，洗兩次，并將洗滌液全部轉移至注射器中，收集所有流出液；待樣品液全部流 完后，再用20mL，體積比20 80的甲酸甲醇-二氯甲烷洗脫，合并流出液；將其在40°C 下蒸干后，用體積比40 60的2mL乙腈-0. 甲酸水復容，并過0.22 μ m濾膜，待測。本發(fā)明更加詳細的制備方法如下1儀器與試劑超高效液相色譜儀(Acquity UPLC，美國Waters公司)；三重四級桿質譜儀，配電噴霧離子源(Quattro Premier XE，美國Waters公司)； 旋渦混合器OiL-901，江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司)；高速離心機(H1650，湘儀離心機儀器有限公司)；旋轉蒸發(fā)儀(Laborota4000efficient，德國 Heidolph)；固相萃取儀(日本GL Sciences)；Milli-Q超純水儀(美國Millipore公司)等。所有農(nóng)藥標準品純度均不低于 99 %，購自德國 Dr. Ehrenstorfer 公司。前處理過程中使用的乙腈、甲醇、二氯甲烷、甲酸均為分析純，購自天津科密歐化 學試劑有限公司。作為流動相使用的乙腈、甲酸為色譜純，購自Fisher公司。水為超純水。 PSA 柱(500mg，3mL)，ENVI-carb 柱(500mg，6mL)，購自美國 Varian 公司；C18 柱(lg，6mL)， 購自Agilent公司；50mL聚丙烯塑料離心管購自北京北方偉業(yè)有限公司。 分別稱取標準品各5. OOmg于50mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，配制 成濃度為100 μ g/mL的標準儲備液，于4°c條件下保存。分別吸取上述標準儲備液各0. 5mL 于50mL容量瓶，用乙腈定容至刻度，制成濃度為1 μ g/mL的混合標準工作液。2樣品前處理方法2. 1 提取
準確稱取粉碎樣品2g(精確至0. Olg)于50mL聚丙烯塑料離心管中，加入20mL乙 腈，于旋渦混合器上渦旋aiiin，4000rpm離心5min，取上清液于蒸發(fā)瓶中。殘渣用IOmL乙 腈重復提取一次，渦旋2min，4000rpm離心5min，合并上清液于上述蒸發(fā)瓶中。將提取液在 40°C下于旋轉蒸發(fā)儀上蒸干，殘渣用5mL甲醇-二氯甲烷(10+90，V V)溶解，待凈化。2. 2 凈化石墨化碳柱(瓦里安ENVI-Carbon柱，500mg，6mL，)先用IOmL甲醇-二氯甲烷 (10+90, V V)活化，并用固相萃取柱轉接頭將石墨化碳柱與50mL注射器相連。將樣品液 轉移至注射器中，再用甲醇-二氯甲烷(10+90，V V)洗滌樣品瓶，每次5mL，洗兩次，并將 洗滌液全部轉移至注射器中，收集所有流出液。待樣品液全部流完后，再用20mLl%甲酸甲 醇-二氯甲烷O0+80，V V)洗脫，合并流出液。將其在40°C下蒸干后，用2mL乙腈-0. 甲酸水00+60，V V)復容，并過0.22 μ m濾膜。3、儀器條件3. 1色譜條件色譜柱=AcquityBEH C18 (2. ImmX 100mm, 1. 7 μ m)；流動相A相乙腈；B相0. 1 %甲酸水溶液；梯度洗脫條件見表1。進樣量10yL;柱溫30°C。表1梯度洗脫條件
權利要求
1. 一種含有磺酰脲類農(nóng)藥殘留的人參樣品測定前的的處理方法，其特征在于按如下的 步驟進行(1)準確稱取粉碎樣品2g，精確至O.Olg，加入20mL乙腈，渦旋anin，4000rpm離心 5min，取上清液于蒸發(fā)瓶中；殘渣用10-20mL乙腈重復提取一次，渦旋anin，4000rpm離心 5min，合并上清液；將提取液在40°C蒸干，殘渣用體積比甲醇-二氯甲烷10 90，5mL溶解， 待凈化；(2)石墨化碳柱先用IOmL甲醇-二氯甲烷，體積比10 90活化，并用固相萃取柱轉接 頭將石墨化碳柱與50mL注射器相連；(3)將樣品液轉移至注射器中，再用體積比10 90的甲醇-二氯甲烷洗滌樣品瓶，每 次5mL，洗兩次，并將洗滌液全部轉移至注射器中，收集所有流出液；待樣品液全部流完后， 再用20mL，體積比20 80的甲酸甲醇-二氯甲烷洗脫，合并流出液；將其在40°C下蒸 干后，用體積比40 60的2mL乙腈-0. 甲酸水復容，并過0.22 μ m濾膜，待測。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含有磺酰脲類農(nóng)藥殘留的人參樣品測定前的處理方法，它是準確稱取粉碎樣品2g，精確至0.01g，加入20ml乙腈，渦旋2min，4000rpm離心5min，取上清液于蒸發(fā)瓶中；殘渣用10ml乙腈重復提取一次，渦旋2min，4000rpm離心5min，合并上清液；將提取液在40℃蒸干，殘渣用甲醇-二氯甲烷10∶90，5ml溶解，待凈化；石墨化碳柱先用10ml甲醇-二氯甲烷，體積比10∶90活化，并用固相萃取柱轉接頭將石墨化碳柱與50mL注射器相連；并過0.22μm濾膜，待測。本發(fā)明公開的處理方法，測定速度快，設備簡單、測定成本低，準確度、穩(wěn)定性和可靠性高。
文檔編號G01N30/14GK102128901SQ20101059691
公開日2011年7月20日 申請日期2010年12月20日 優(yōu)先權日2010年12月20日
發(fā)明者劉磊, 張玉婷, 李娜, 李輝, 邵輝, 郭永澤 申請人:天津市農(nóng)業(yè)科學院中心實驗室