專利名稱：纖維化生物標(biāo)志物的測(cè)定的制作方法
纖維化生物標(biāo)志物的測(cè)定本發(fā)明涉及對(duì)生物標(biāo)志物的測(cè)定，其可用于纖維化疾病的診斷和其發(fā)展的預(yù)后，包括指示慢性損傷后發(fā)生纖維化之風(fēng)險(xiǎn)的生物標(biāo)志物。特別地，根據(jù)本發(fā)明，發(fā)現(xiàn)如下所述生物標(biāo)志物是可用的 與1、II1、IV、V和VI型膠原、彈性蛋白、C-反應(yīng)蛋白，以及蛋白聚糖，包括雙糖鏈蛋白聚糖(Biglycan)、飾膠蛋白聚糖(Decorin)、多功能蛋白聚糖(Versican)和基底膜蛋白聚糖(Perlecan)的降解片段有關(guān)的生物標(biāo)志物。纖維化疾病(包括表I中列出的那些疾病)是發(fā)病和死亡的一個(gè)主要原因，例如，在全世界范圍內(nèi)，每年有800，000人死于肝硬化1。表1.不同的纖維化疾病權(quán)利要求
1.纖維化的診斷或定量方法，其包括獲取患者生物流體樣品，進(jìn)行免疫測(cè)定以測(cè)量所述樣品中天然存在的含新表位的蛋白質(zhì)片段，以及將在所述患者中所述測(cè)量相比于正常水平的升高與纖維化的存在情況或程度相關(guān)聯(lián)，其中所述免疫測(cè)定通過(guò)包括以下步驟的方法進(jìn)行 將所述樣品中天然存在的蛋白質(zhì)片段與免疫結(jié)合伴侶相接觸，所述免疫結(jié)合伴侶與由蛋白酶切割蛋白質(zhì)形成的新表位反應(yīng)，以及測(cè)量肽片段與所述免疫結(jié)合伴侶的結(jié)合程度從而測(cè)量其中的包含所述新表位的蛋白質(zhì)片段，并且其中所述蛋白質(zhì)是III型膠原、I型膠原、IV型膠原、V型膠原或VI型膠原、彈性蛋白、雙糖鏈蛋白聚糖、飾膠蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖、神經(jīng)蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纖調(diào)蛋白聚糖、絲甘蛋白聚糖、黏結(jié)蛋白聚糖、β蛋白聚糖、波形蛋白或C-反應(yīng)蛋白，前提是當(dāng)切割I(lǐng)型膠原形成所述新表位時(shí)，所述切割不是在I型膠原被組織蛋白酶K切割的位點(diǎn)處。
2.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合具有N-末端序列KNGETG...的III型膠原片段。
3.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合具有N-末端序列KAFVFP. · · (SEQ ID NOl 167)的 CRP 片段。
4.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割I(lǐng)II型膠原所產(chǎn)生的肽中存在的N-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的N-末端序列
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割I(lǐng)II型膠原所產(chǎn)生的肽中存在的C-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的C-末端序列:
6.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割I(lǐng)型膠原所產(chǎn)生的肽中存在的N-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的N-末端序列
7.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割I(lǐng)型膠原所產(chǎn)生的肽中存在的C-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的C-末端序列:___
8.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割I(lǐng)V型膠原所產(chǎn)生的肽中存在的N-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的N-末端序列
9.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割I(lǐng)V型膠原所產(chǎn)生的肽中存在的C-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的C-末端序列
10.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割雙糖鏈蛋白聚糖、飾膠蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖或基底膜蛋白聚糖所產(chǎn)生的肽中存在的N-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的N-末端序列
11.權(quán)利要求1中要求的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割雙糖鏈蛋白聚糖、飾膠蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖或基底膜蛋白聚糖所產(chǎn)生的肽中存在的C-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的C-末端序列:
12.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割C-反應(yīng)蛋白所產(chǎn)生的肽中存在的N-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的N-末端序___
13.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割C-反應(yīng)蛋白所產(chǎn)生的肽中存在的C-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的C-末端序列I
14.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割彈性蛋白所產(chǎn)生的肽中存在的N-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的N-末端序列 彈性蛋白^^
15.權(quán)利要求1的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割彈性蛋白所產(chǎn)生的肽中存在的C-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的C-末端序列:
16.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割V型膠原所產(chǎn)生的肽中存在的N-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的N-末端序列
17.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割V型膠原所產(chǎn)生的肽中存在的C-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的C-末端序列___
18.權(quán)利要求I的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割VI型膠原所產(chǎn)生的肽中存在的N-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的N-末端序列
19.權(quán)利要求1的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割VI型膠原所產(chǎn)生的肽中存在的C-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的C-末端序列___
20.權(quán)利要求1的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割波形蛋白所產(chǎn)生的肽中存在的N-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的N-末端序列;___
21.權(quán)利要求1的方法，其中所述免疫結(jié)合伴侶特異性地結(jié)合新表位，所述新表位由切割波形蛋白所產(chǎn)生的肽中存在的C-末端氨基酸序列構(gòu)成，所述肽包含選自下列的C-末端序列:__
22.權(quán)利要求1的方法，前提是當(dāng)通過(guò)切割I(lǐng)型膠原形成所述新表位時(shí)，所述切割不在I型膠原被胰蛋白酶切割的位置。
23.測(cè)量包含新表位的蛋白質(zhì)片段的免疫測(cè)定方法，所述蛋白質(zhì)片段在體液樣品中天然存在，其中所述免疫測(cè)定通過(guò)包括如下步驟的方法進(jìn)行:衍尸/Tidi懺熱仔仕觀/I枚勺兄墳閉甘1干1日相按刪，干1日勺苗白酶切割蛋白質(zhì)形成的新表位反應(yīng)，以及測(cè)量肽片段與所述免疫結(jié)合伴侶的結(jié)合程度從而測(cè)量其中的包含所述新表位的蛋白質(zhì)片段，并且其中所述蛋白質(zhì)是神經(jīng)蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纖調(diào)蛋白聚糖、絲甘蛋白聚糖、黏結(jié)蛋白聚糖、β蛋白聚糖、彈性蛋白、I型膠原、IV型膠原、V型膠原或VI型膠原、CRP或波形蛋白，前提是當(dāng)通過(guò)切割I(lǐng)型膠原形成所述新表位時(shí)，所述切割不在I型膠原被組·織蛋白酶K切割的位點(diǎn)處。
全文摘要
對(duì)纖維化進(jìn)行診斷或定量的方法，所述方法包括進(jìn)行免疫測(cè)定來(lái)測(cè)量生物流體樣品中天然存在的包含新表位的蛋白質(zhì)片段，以及將所述患者中所述測(cè)量相對(duì)于正常水平的升高與纖維化的存在或程度相關(guān)聯(lián)。通過(guò)包括如下步驟的方法來(lái)進(jìn)行所述免疫測(cè)定將所述樣品中天然存在的蛋白質(zhì)片段與免疫結(jié)合伴侶相接觸，所述免疫結(jié)合伴侶與蛋白酶切割蛋白質(zhì)形成的新表位反應(yīng)，以及測(cè)量肽片段與所述免疫結(jié)合伴侶的結(jié)合程度從而測(cè)量其中的包含所述新表位的蛋白質(zhì)片段，并且其中所述蛋白質(zhì)是III型膠原、I型膠原、IV型膠原、V型膠原或VI型膠原、彈性蛋白、雙糖鏈蛋白聚糖、飾膠蛋白聚糖、光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖、神經(jīng)蛋白聚糖、短小蛋白聚糖、纖調(diào)蛋白聚糖、絲甘蛋白聚糖、黏結(jié)蛋白聚糖、β蛋白聚糖、波形蛋白或C-反應(yīng)蛋白。
文檔編號(hào)G01N33/68GK103238071SQ201080014281
公開(kāi)日2013年8月7日 申請(qǐng)日期2010年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月30日
發(fā)明者桑內(nèi)·S·韋達(dá)爾, 莫滕·A·卡爾斯達(dá)爾, 戴安娜·J·利明, 娜塔莎·巴拉斯丘克, 海倫妮·斯克若-阿爾基爾, 安東尼奧·塞戈維亞-西爾韋斯特雷, 埃夫斯塔西奧斯·瓦西利亞迪斯 申請(qǐng)人:北歐生物科技公司, 諾瓦提斯公司