專利名稱：具有保護(hù)柱的色譜系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及色譜分離(chromatographic separation),以及具體來說，涉及諸如單克隆抗體之類的生物分子的大規(guī)模色譜分離。更具體來說，它涉及具有保護(hù)柱(guardcolumn)的色譜系統(tǒng)以及操作這種系統(tǒng)的半連續(xù)方法。
背景技術(shù)：
在生物制藥領(lǐng)域，遺傳工程和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)近來的進(jìn)步已經(jīng)推動(dòng)比以前更高的表達(dá)水平，從而對下游純化、特別是捕獲步驟施加相當(dāng)大的負(fù)擔(dān)。雖然新色譜樹脂的引入顯著提高基于常規(guī)單柱色譜的過程的效率，但是能夠通過工作在具有若干柱的循環(huán)模式來實(shí)現(xiàn)附加增益。這一直應(yīng)用于不同種類的連續(xù)或半連續(xù)色譜中，例如W02008153472中描述的模擬移動(dòng)床(SMB)以及由 Heeter 等人(Herrter G.A.和 Liapis A.1., J Chromatography A711,3-21 (1995))所述的周期逆流色譜(PCC)。溶質(zhì)的色譜柱的結(jié)合能力是生產(chǎn)型色譜(process chromatography)中的極重要因素。結(jié)合能力直接影響色譜步驟的生產(chǎn)率和成本。結(jié)合能力根據(jù)動(dòng)態(tài)/穿透能力(dynamic/breakthrough capacity)或者作為最大結(jié)合能力來定義。動(dòng)態(tài)能力取決于溶液流經(jīng)填充有色譜介質(zhì)的柱的條件，例如定義為柱體積與進(jìn)樣流率(feed flow rate)之間的比率的停留時(shí)間。如果停留時(shí)間是無限長，則最大結(jié)合能力表示柱的穿透能力。初始穿透能力定義為柱在流出物中首次檢測到溶質(zhì)時(shí)的點(diǎn)所吸收的結(jié)合溶質(zhì)量。穿透能力還能夠定義為給定百分比的穿透的能力，其中百分比表示來自柱的流出物中存在的以進(jìn)樣中存在的溶質(zhì)的百分?jǐn)?shù)所表達(dá)的結(jié)合溶質(zhì)的量。按照這個(gè)定義，最大結(jié)合能力將等于100%的穿透、即在沒有更多溶質(zhì)能夠結(jié)合到柱的點(diǎn)的穿透能力。因此，為了確定最大能力，在不同的穿透等級來測量穿透能力，其中等級通過樣本上樣(sample loading)期間來自柱的流出物中測量的溶質(zhì)的濃度等級來定義。常常通過連續(xù)監(jiān)測通過放置在流出物管線中的檢測器的流量中的信號來確定這些濃度。這些濃度(信號)對時(shí)間(或者所上樣的體積或質(zhì)量)的線圖稱作穿透曲線。色譜圖上的穿透的位置及其形狀與柱上能夠結(jié)合多少溶質(zhì)以及多快使所有吸收部位處于溶質(zhì)飽和相關(guān)。它還表明，還有多少溶質(zhì)在任何給定時(shí)間能夠結(jié)合到柱。在雜質(zhì)存在的情況下的溶質(zhì)的穿透結(jié)合能力是優(yōu)化發(fā)展純化規(guī)程的時(shí)間的最關(guān)鍵參數(shù)之一。用于單克隆抗體的下游處理的典型過程涉及使用具有蛋白A配體的樹脂以極高選擇性來結(jié)合抗體的捕獲步驟。這是極有效的步驟，因?yàn)樵谶@里去除雜質(zhì)的大多數(shù)。但是，由于蛋白A樹脂的成本，存在例如通過增加樹脂的結(jié)合能力的利用的化學(xué)工程方法來優(yōu)化效率的強(qiáng)烈動(dòng)機(jī)。在蛋白A步驟之后，抗體在其它色譜步驟中、例如結(jié)合-洗脫(bind-elute)陽離子交換色譜和/或在結(jié)合洗脫或流通多峰(flowthrough multimodal)或陰離子交換色譜中進(jìn)一步純化。另外，在這些步驟中，需要增加所使用樹脂的能力利用，特別是當(dāng)步驟運(yùn)行于結(jié)合-洗脫模式時(shí)。較大柱之前的小的一次性保護(hù)柱的使用是從單柱色譜眾所周知的，作為增加主柱的使用壽命的手段。當(dāng)不可逆垢發(fā)生時(shí)，只有保護(hù)柱將被損壞并且能夠更換為新柱。但是，這個(gè)布置將不會(huì)提供樹脂能力利用的任何改進(jìn)。雖然例如SMB和PCC等的連續(xù)色譜方法具有改進(jìn)能力利用的可能性，但是它們是建立和運(yùn)行的復(fù)雜方法，其中涉及大量閥和柱的控制。因此，需要一種與單柱色譜相比增加能力利用的簡單穩(wěn)健的解決方案。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)方面是提供一種用于生物分子的大規(guī)模色譜分離的有效過程。這采用如權(quán)利要求1所述的色譜系統(tǒng)以及采用如權(quán)利要求13所述的色譜方法來實(shí)現(xiàn)。這種系統(tǒng)和方法的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于，有效地利用色譜介質(zhì)的結(jié)合能力。另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于，延長色譜介質(zhì)的使用壽命。這些效果均有助于色譜分離的改進(jìn)經(jīng)濟(jì)性。在從屬權(quán)利要求中描述本發(fā)明的其它適當(dāng)實(shí)施例。


圖1示出按照本發(fā)明的色譜系統(tǒng)；
圖2示出按照本發(fā)明的色譜分離的方法。定義
本文中的術(shù)語“進(jìn)樣”表示提供給色譜系統(tǒng)并且包含待純化的目標(biāo)物質(zhì)的液體。目標(biāo)物質(zhì)能夠是生物分子，例如單克隆抗體。進(jìn)樣的示例能夠是澄清的發(fā)酵液、生物流體等以及來源于前一個(gè)分離步驟并且包含經(jīng)部分純化的目標(biāo)物質(zhì)的液體。本文中的術(shù)語“保護(hù)柱”表示與主色譜柱串聯(lián)連接并且具有比主柱顯著要小的體積的色譜柱。
具體實(shí)施例方式在圖1所示的一個(gè)方面，本發(fā)明公開一種色譜系統(tǒng)，其中包括:主柱1，包含色譜樹脂；第一保護(hù)柱2 ；以及第二保護(hù)柱3，其中第一保護(hù)柱2連接到主柱I的第一端4，第二保護(hù)柱3連接到主柱的第二端5。換言之，主柱的各端連接有一個(gè)保護(hù)柱。具有主柱的各端連接有一個(gè)保護(hù)柱的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于，因此有可能以色譜樹脂的改進(jìn)能力利用來運(yùn)行分離。在某些實(shí)施例中，第一和第二保護(hù)柱的柱床(bed)體積各小于主柱I的柱床體積的大約50%、例如小于大約25%、小于大約15%或者小于大約10%。其優(yōu)點(diǎn)在于，更有效地使用色譜樹脂。主體積的柱床體積能夠?yàn)橹辽僖簧?，例如至?0升或者至少100升，因?yàn)樵诶缟镏扑幍姆蛛x的大規(guī)模制備型色譜中存在使用本發(fā)明的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)，其中增加樹脂能力利用是重要的。在一些實(shí)施例中，第一濃度檢測器6連接在主柱I的第一端4與第一保護(hù)柱2之間，以及第二濃度檢測器7連接在主柱I的第二端5與第二保護(hù)柱3之間。第一和第二濃度檢測器能夠是紫外吸收檢測器，它們對于檢測例如蛋白質(zhì)的濃度是便利的。但是，它們也能夠是能夠用于檢測非UV吸收物質(zhì)的折射率檢測器，或者它們能夠是用于各種目標(biāo)物質(zhì)或污染物的特定檢測器。在這些位置具有檢測器的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于，因此有可能監(jiān)測主柱在上流和下流兩個(gè)方向的主柱的穿透，從而提供一旦檢測到穿透則控制通過系統(tǒng)的流徑的可能性。穿透的監(jiān)測能夠手動(dòng)或自動(dòng)進(jìn)行，并且流徑的控制能夠手動(dòng)或自動(dòng)進(jìn)行。
在一個(gè)實(shí)施例中，色譜系統(tǒng)還包括確定單元18，確定單元18電連接到第一濃度檢測器6和第二濃度檢測器7，并且適合檢測表示提供給主柱的一端4、5的進(jìn)樣材料的組成的進(jìn)樣信號以及表示來自主柱的相對端5、4的流出物的流出物信號。在一個(gè)實(shí)施例中，確定單元18能夠適合確定主柱I的穿透點(diǎn)和/或飽和點(diǎn)。確定單元18能夠是計(jì)算機(jī)、可編程邏輯控制器或者能夠根據(jù)從濃度檢測器信號所計(jì)算的函數(shù)來控制閥的任何其它類型的數(shù)字或模擬單元。能夠通過比較第一檢測器6和第二檢測器7上測量的信號，來計(jì)算穿透點(diǎn)。在第一檢測器6上測量的信號表示(在UV檢測器的情況下)進(jìn)樣中存在的全部UV吸收成分、即結(jié)合到第一保護(hù)柱2的成分以及經(jīng)過的成分的濃度。信號在非吸收物質(zhì)穿透保護(hù)柱2時(shí)到達(dá)第一坪值(plateau)，然后在第一保護(hù)柱2變?yōu)轱柡蜁r(shí)到達(dá)第二坪值。第二坪值表示進(jìn)樣流中存在的全部物質(zhì)的總濃度。第二檢測器7監(jiān)測來自柱I的流出物流中的物質(zhì)的濃度。在第二檢測器上測量的信號之間的差達(dá)到例如第一檢測器上測量的第二坪值與第二檢測器上測量的第一坪值之間的差的1%的預(yù)定值時(shí)，達(dá)到第一穿透點(diǎn)。稱作飽和點(diǎn)的第二穿透點(diǎn)按照類似方式來確定，除了兩個(gè)檢測器上測量的信號之間的差達(dá)到另一個(gè)值、例如70%之外。在某些實(shí)施例中，第一保護(hù)柱2經(jīng)由第一閥10連接到進(jìn)樣槽8或者廢料容器9，以及第二保護(hù)柱3經(jīng)由第二閥17連接到進(jìn)樣槽15或者廢料容器16，條件是:當(dāng)?shù)谝槐Ｗo(hù)柱連接到進(jìn)樣槽時(shí)，則第二保護(hù)柱連接到廢料容器，而當(dāng)?shù)谝槐Ｗo(hù)柱連接到廢料容器時(shí)，則第二保護(hù)柱連接到進(jìn)樣槽。在一個(gè)實(shí)施例中，確定單元18電連接到第一和第二閥，并且適合控制所述第一和第二閥的位置。這個(gè)布置的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于，當(dāng)確定單元檢測穿透或飽和點(diǎn)時(shí)，它能夠自動(dòng)將出射流從主柱轉(zhuǎn)向例如進(jìn)樣槽。在一些實(shí)施例中，色譜系統(tǒng)還包括:主柱I與第一保護(hù)柱2之間的第三閥12，其中第三閥12適合將流體從主柱I轉(zhuǎn)向洗出液槽(eluate tank) 11或者廢料容器16 ;以及主柱I與第二保護(hù)柱3之間的第四閥14，其中第四閥14適合將流體從主柱I轉(zhuǎn)向洗出液槽13或者廢料容器16，并且其中確定單元18適合控制第三和第四閥的位置。這個(gè)布置的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于，當(dāng)確定單元檢測洗滌循環(huán)完成時(shí)，它能夠自動(dòng)開始洗脫循環(huán)。這個(gè)布置的第二優(yōu)點(diǎn)在于，當(dāng)確定單元檢測穿透點(diǎn)時(shí)，它能夠自動(dòng)將第二保護(hù)柱3與主柱I串聯(lián)連接。這防止第二保護(hù)柱3暴露于產(chǎn)物耗盡進(jìn)樣流。在某些實(shí)施例中，所述第一和第二保護(hù)柱包括具有基本上與主柱中的色譜樹脂相同的選擇性的色譜樹脂。這意味著，保護(hù)柱和主柱中的樹脂在離子強(qiáng)度、PH等的給定條件下結(jié)合相同物質(zhì)。為了提供相同選擇性，樹脂能夠采用相同類型的配體、適當(dāng)?shù)匾越葡嗤呐潴w含量或者以小于大約20%的配體含量的差來置換。具有基本上相同的選擇性的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于，來自主柱的任何目標(biāo)物質(zhì)穿透將由主柱之后的保護(hù)柱來捕獲。在一些實(shí)施例中，所述主柱以及所述第一和第二保護(hù)柱包括具有Fe片段-結(jié)合親合配體的色譜樹脂。這類配體常用于單克隆抗體處理中的捕獲步驟，其中它們的高成本對增加步驟效率和樹脂的使用壽命施加壓力。它們對抗體具有極高選擇性，從而允許對洗脫使用單級梯度，這對于本發(fā)明的方法和系統(tǒng)是特別有利的。親合配體能夠是蛋白質(zhì)配體，例如:蛋白 A、變異種類的蛋白 A，如 EP1485407 B1、W0200803914U W02010080065、EP2202310A2、EP2157099 Al、JP2006304633,US20100168395、CN101337986、W02009146755等中所述；蛋白G或Fe結(jié)合單域抗體片段，例如W02009011572中所述。備選地，親合配體能夠是肽、核酸或小有機(jī)分子。樹脂的配體含量例如能夠在1-15 mg/ml樹脂的范圍之內(nèi)。在一些實(shí)施例中，所述第一和第二保護(hù)柱包括體積平均粒度比主柱中的色譜樹脂的體積平均粒度要大至少大約10%、例如至少大約25%或者大約50%的色譜樹脂。主柱樹脂的平均粒度能夠?yàn)榇蠹s50-100微米、例如80-95微米，而保護(hù)柱樹脂的平均粒度能夠?yàn)榇蠹s100-250微米、例如130-210微米。樹脂的平均粒度能夠有利地在整個(gè)第一和第二保護(hù)柱是相同的。在一個(gè)具體示例中，主柱能夠填充有85微米平均粒度的蛋白A官能MabSelect樹脂(GE Healthcare Life Sciences),以及保護(hù)柱填充有按照本領(lǐng)域已知方法(如ΕΡ873353Β1中所述)采用蛋白A來官能化的200微米平均粒度的Sepharose Big Beads(GE Healthcare Life Sciences)。在保護(hù)柱中具有較大粒度樹脂的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于,反壓(back pressure)將比較低,而通常與較大顆粒關(guān)聯(lián)的穿透曲線的較低陸度不成問題,因?yàn)楸Ｗo(hù)柱不必在其穿透點(diǎn)附近使用。在圖2所示的一個(gè)方面，本發(fā)明公開一種用于目標(biāo)物質(zhì)的色譜分離的方法，包括下列步驟:
a)通過將進(jìn)樣從進(jìn)樣槽8經(jīng)由第一保護(hù)柱2通過主柱I傳送到i)廢料容器16或者 )經(jīng)由第二保護(hù)柱3傳送到廢料容器16，以將目標(biāo)物質(zhì)上樣至主柱I上，
b)通過經(jīng)由第一保護(hù)柱2通過主柱I和第二保護(hù)柱3傳送洗滌流體，來洗滌柱，以及
c)通過將洗脫流體經(jīng)由第 一保護(hù)柱2或第二保護(hù)柱3通過主柱I傳送到洗出液槽11、13來洗脫目標(biāo)物質(zhì)。在上樣步驟a)中，目標(biāo)物質(zhì)、例如生物分子、如蛋白質(zhì)、免疫球蛋白、IgG或單克隆抗體能夠結(jié)合到第一保護(hù)柱中和主柱中的色譜樹脂，使得只將耗盡進(jìn)樣傳送到廢料容器。這能夠繼續(xù)進(jìn)行，直到主柱表明產(chǎn)物穿透。此時(shí)，第二保護(hù)柱能夠連接到主柱，并且沒有結(jié)合在主柱上的目標(biāo)物質(zhì)則被吸收在第二保護(hù)柱上。這個(gè)過程能夠繼續(xù)進(jìn)行，直到第一保護(hù)柱和主柱飽和，并且某種目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合到第二保護(hù)柱中的色譜樹脂。流量則能夠在步驟b)改變成洗滌模式，其中洗滌流體沿任何方向被傳送通過全部三個(gè)柱，但是優(yōu)選地沿與步驟a)中相同的方向，以及從主柱浸出的任何目標(biāo)物質(zhì)由主柱之后的保護(hù)柱來捕獲。當(dāng)洗滌完成時(shí)，流量能夠在步驟c)改變到洗脫模式，其中洗脫流體通過保護(hù)柱之一和主柱沿任何方向、但是優(yōu)選地沿與步驟a)中相同的方向、例如通過第二保護(hù)柱然后通過主柱來傳送到洗出液槽，其中收集分離的目標(biāo)物質(zhì)。這種方法的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于，來自主柱的任何穿透目標(biāo)物質(zhì)能夠由保護(hù)柱在上樣和洗滌期間來捕獲，然后在洗脫期間回收。在某些實(shí)施例中，該方法還包括下列步驟
d)通過將進(jìn)樣從進(jìn)樣槽15經(jīng)由第二保護(hù)柱3通過主柱I傳送到i)廢料容器9或者 )傳送到第一保護(hù)柱2以及廢料容器9，以將目標(biāo)物質(zhì)上樣至主柱I上。這個(gè)上樣步驟沿與上樣步驟a)相反的方向執(zhí)行，并且能夠例如在步驟a)、b)和c)按照這種順序的序列之后運(yùn)行。其優(yōu)點(diǎn)在于，第一保護(hù)柱準(zhǔn)備好捕獲開始穿透主柱從而通過穿透點(diǎn)的任何產(chǎn)物。在某些實(shí)施例中，步驟b)和c)在步驟d)之后重復(fù)進(jìn)行，其中重復(fù)步驟b)和c)中的流向與原始步驟b)和C)中的流向相反。重復(fù)步驟C)中的流通過第二保護(hù)柱然后通過主柱到洗出液槽8。在一些實(shí)施例中，步驟a)還包括測量離開主柱的流體中的目標(biāo)物質(zhì)的濃度，以及當(dāng)所述濃度達(dá)到預(yù)定值時(shí)結(jié)束步驟a)。
在某些實(shí)施例中，步驟a)還包括確定主柱的穿透點(diǎn)或飽和點(diǎn)，并且當(dāng)達(dá)到所述穿透或飽和點(diǎn)時(shí)結(jié)束步驟a)。其優(yōu)點(diǎn)在于，有效地利用主柱中的樹脂，并且基本上所有穿透目標(biāo)物質(zhì)均由保護(hù)柱來捕獲。在一些實(shí)施例中，步驟b)還包括測量離開主柱的流體中的目標(biāo)物質(zhì)的濃度，以及當(dāng)所述濃度低于預(yù)定值時(shí)結(jié)束步驟b)。其優(yōu)點(diǎn)在于，使洗滌流體的消耗為最小。本書面描述使用示例來公開本發(fā)明，其中包括最佳模式，以及還使本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠?qū)嵤┍景l(fā)明，包括制作和使用任何裝置或系統(tǒng)并且執(zhí)行任何結(jié)合的方法。要指出，以上所公開的本發(fā)明的各個(gè)方面的具體實(shí)施例能夠在本發(fā)明的范圍之內(nèi)自由組合到其它實(shí)施例。本發(fā)明的專利范圍由權(quán)利要求書來定義，并且可包括本領(lǐng)域的技術(shù)人員想到的其它示例。如果這類其它示例具有與權(quán)利要求書的文字語言完全相同的結(jié)構(gòu)單元，或者如果它們包括具有與權(quán)利要求書的文字語言的非實(shí)質(zhì)差異的等效結(jié)構(gòu)單元，則它們意在落入權(quán)利要求書的范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種色譜系統(tǒng)，包括:主柱(I)，包含色譜樹脂；第一保護(hù)柱(2);以及第二保護(hù)柱(3)，其中所述第一保護(hù)柱(2)連接到所述主柱(I)的第一端(4)，所述第二保護(hù)柱(3)連接到所述主柱的第二端(5)。
2.如權(quán)利要求1所述的色譜系統(tǒng)，其中，所述第一(2)和第二(3)保護(hù)柱的柱床體積各小于所述主柱⑴的所述柱床體積的大約50%,例如小于大約25%或者小于大約15%。
3.如權(quán)利要求1或2所述的色譜系統(tǒng)，其中，第一濃度檢測器(6)連接在所述主柱(I)的所述第一端(4)與所述第一保護(hù)柱(2)之間，以及第二濃度檢測器(7)連接在所述主柱(I)的所述第二端(5)與所述第二保護(hù)柱(3)之間。
4.如權(quán)利要求3所述的色譜系統(tǒng)，其中，所述第一和第二濃度檢測器(6，7)是紫外吸收檢測器。
5.如權(quán)利 要求3或4中的任一項(xiàng)所述的色譜系統(tǒng)，還包括確定單元(18)，所述確定單元(18)電連接到所述第一和第二濃度檢測器，并且適合檢測表示提供給所述主柱的一端(4,5)的進(jìn)樣材料的組成的進(jìn)樣信號以及表示來自所述主柱的所述相對端(5，4)的流出物的流出物信號。
6.如權(quán)利要求5所述的色譜系統(tǒng)，其中，所述確定單元(18)適合確定所述主柱(I)的穿透點(diǎn)和/或飽和點(diǎn)。
7.如以上權(quán)利要求中的任一項(xiàng)所述的色譜系統(tǒng)，其中，所述第一保護(hù)柱(2)經(jīng)由第一閥(10)連接到進(jìn)樣槽⑶或者廢料容器(9)，以及所述第二保護(hù)柱(3)經(jīng)由第二閥(17)連接到進(jìn)樣槽(15)或者廢料容器(16)，條件是:當(dāng)所述第一保護(hù)柱連接到進(jìn)樣槽時(shí)，則所述第二保護(hù)柱連接到廢料容器，而當(dāng)所述第一保護(hù)柱連接到廢料容器時(shí)，則所述第二保護(hù)柱連接到進(jìn)樣槽。
8.如權(quán)利要求7所述的色譜系統(tǒng)，其中，確定單元(18)電連接到所述第一和第二閥，并且適合控制所述第一和第二閥的位置。
9.如權(quán)利要求8所述的色譜系統(tǒng)，還包括:所述主柱(I)與所述第一保護(hù)柱(2)之間的第三閥(12)，所述第三閥適合將流體從所述主柱(I)轉(zhuǎn)向流出液槽(11)或者所述廢料容器(16);以及所述主柱⑴與所述第二保護(hù)柱(3)之間的第四閥(14)，所述第四閥適合將流體從所述主柱(I)轉(zhuǎn)向流出液槽(13)或者所述廢料容器(16)，并且其中所述確定單元(18)適合控制所述第三和第四閥的位置。
10.如以上權(quán)利要求中的任一項(xiàng)所述的色譜系統(tǒng)，其中，所述第一和第二保護(hù)柱包括具有基本上與所述主柱中的色譜樹脂相同的選擇性的色譜樹脂。
11.如以上權(quán)利要求中的任一項(xiàng)所述的色譜系統(tǒng)，其中，所述主柱以及所述第一和第二保護(hù)柱包括具有Fe片段-結(jié)合親合配體的色譜樹脂。
12.如以上權(quán)利要求中的任一項(xiàng)所述的色譜系統(tǒng)，其中，所述第一和第二保護(hù)柱包括體積平均粒度比所述主柱中的色譜樹脂的所述體積平均粒度要大至少大約10%、例如至少大約25%或者大約50%的色譜樹脂。
13.一種用于目標(biāo)物質(zhì)的色譜分離的方法，包括下列步驟: a)通過將進(jìn)樣從進(jìn)樣槽(8)經(jīng)由第一保護(hù)柱(2)通過主柱(I)和第二保護(hù)柱(3)傳送到廢料容器(16)，以將所述目標(biāo)物質(zhì)上樣至所述主柱(I)上 b)通過經(jīng)由所述第一保護(hù)柱(2)通過所述主柱(I)和所述第二保護(hù)柱(3)傳送洗滌流體，來洗滌所述柱 c)通過將洗脫流體經(jīng)由所述第一保護(hù)柱(2)或者所述第二保護(hù)柱(3)通過所述主柱(1)傳送到洗出液槽(11，13)來洗脫所述目標(biāo)物質(zhì)。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，還包括下列步驟 d)通過將進(jìn)樣從進(jìn)樣槽(15)經(jīng)由所述第二保護(hù)柱(3)通過所述主柱(I)和所述第一保護(hù)柱(2)傳送到廢料容器(9)，以將所述目標(biāo)物質(zhì)上樣至所述主柱(I)上。
15.如權(quán)利要求13或14中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，步驟a)還包括測量離開所述主柱的流體中的目標(biāo)物質(zhì)的濃度，以及當(dāng)所述濃度達(dá)到預(yù)定值時(shí)結(jié)束步驟a)。
16.如權(quán)利要求13-15中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，步驟a)還包括確定所述主柱的穿透點(diǎn)或飽和點(diǎn)，并且當(dāng)達(dá)到所述穿透或飽和點(diǎn)時(shí)結(jié)束步驟a)。
17.如權(quán)利要求13-16中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，步驟b)還包括測量離開所述主柱的流體中的目標(biāo)物質(zhì)的濃度，以及當(dāng)所述濃度低于預(yù)定值時(shí)結(jié)束步驟b)。
18.如權(quán)利要求13-17中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述第一和第二保護(hù)柱包括具有基本上與所述主柱中 的色譜樹脂相同的選擇性的色譜樹脂。
19.如權(quán)利要求13-18中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述主柱以及所述第一和第二保護(hù)柱包括具有Fe片段-結(jié)合親合配體的色譜樹脂。
20.如權(quán)利要求13-19中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述第一和第二保護(hù)柱包括體積平均粒度比所述主柱中的色譜樹脂的所述體積平均粒度要大至少10%、例如至少25%或50%的色譜樹脂。
21.如權(quán)利要求13-20中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述第一(2)和第二(3)保護(hù)柱的所述柱床體積各小于所述主柱(I)的所述柱床體積的大約50%，例如小于大約25%或者小于大約15%。
全文摘要
一種色譜系統(tǒng)，具有主柱(1)，包含色譜樹脂；第一保護(hù)柱(2)；以及第二保護(hù)柱(3)，其中第一保護(hù)柱(2)連接到主柱的第一端(4)，第二保護(hù)柱(3)連接到主柱的第二端(5)，并且所述第一和第二保護(hù)柱的柱床體積各小于主柱的柱床體積的大約50%。
文檔編號G01N30/60GK103180727SQ201180051833
公開日2013年6月26日 申請日期2011年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月27日
發(fā)明者K.拉基 申請人:通用電氣健康護(hù)理生物科學(xué)股份公司