用于cea定量檢測(cè)的試劑盒及其制備、使用方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒，其包括如下試劑：偶聯(lián)有CEA抗體的生物功能化磁納米復(fù)合粒子、酶標(biāo)記的CEA抗體和化學(xué)發(fā)光底物，其中偶聯(lián)有CEA抗體的生物功能化磁納米復(fù)合粒子由納米級(jí)的磁核與包含各種功能基團(tuán)的高分子材料復(fù)合而成。本發(fā)明將納米磁珠分離技術(shù)、化學(xué)發(fā)光和酶免疫分析技術(shù)結(jié)合起來(lái)，具有靈敏度高、線性范圍寬、特異性高、反應(yīng)迅速等優(yōu)點(diǎn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒及其制備、使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于體外臨床檢驗(yàn)和納米【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地涉及一種用于定量檢測(cè)癌胚抗原(CEA)的試劑盒、其制備方法以及使用該試劑盒檢測(cè)CEA的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]癌胚抗原(Cacinoembryonic antigen, CEA)是一種高度糖基化的分子量為180-220kDa的細(xì)胞表面糖蛋白。CEA是一個(gè)廣譜性的腫瘤標(biāo)志物，結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等疾病均可高水平的表達(dá)。檢測(cè)體液(血清、胸腔積液、痰液、唾液、精液、尿液、腹水等)CEA的含量對(duì)于腫瘤的診斷、預(yù)后、術(shù)后療效觀察具有重要的臨床意義。正常血清CEA參考值為5ng/mL。
[0003]1969年，放射免疫分析法最早用于CEA的檢測(cè)。盡管放射免疫分析法是最常用于抗原檢測(cè)的一種方法，但是用于標(biāo)記的放射性元素對(duì)操作者身體有很大的傷害。因此，酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)、壓電免疫分析法、化學(xué)發(fā)光分析法、比色法、熒光免疫分析法和脂質(zhì)體免疫分析法等方法被陸續(xù)開(kāi)發(fā)出來(lái)。然而，這些方法中的大部分步驟繁瑣，或者耗時(shí)太長(zhǎng)，或者需要復(fù)雜昂貴的儀器設(shè)備，或者需要高度專(zhuān)業(yè)的操作人員，等等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004](一 )要解決的技術(shù)問(wèn)題
[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提出一種新的用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒及其制備、使用方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)無(wú)法簡(jiǎn)單、快速、靈敏、低成本地對(duì)CEA進(jìn)行檢測(cè)。
[0006]( 二 )技術(shù)方案
[0007]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒包括如下試劑:偶聯(lián)有CEA抗體的生物功能化磁納米復(fù)合粒子、酶標(biāo)記的CEA抗體和化學(xué)發(fā)光底物。
[0008]根據(jù)本發(fā)明的一種【具體實(shí)施方式】，所述偶聯(lián)有CEA抗體的生物功能化磁納米復(fù)合粒子由納米級(jí)的磁核與包含各種功能基團(tuán)的高分子材料復(fù)合而成。
[0009]根據(jù)本發(fā)明的一種【具體實(shí)施方式】，所述高分子材料為聚乙烯亞胺、聚乙烯醇、聚苯乙烯、聚氯乙烯、二氧化硅、多糖和牛血清白蛋白中的一種或幾種。
[0010]根據(jù)本發(fā)明的一種【具體實(shí)施方式】，所述磁核為鐵、鈷、鎳的粉體或氧化物或其合金。
[0011]根據(jù)本發(fā)明的一種【具體實(shí)施方式】，所述化學(xué)發(fā)光底物包括魯米諾和過(guò)氧化物。
[0012]根據(jù)本發(fā)明的一種【具體實(shí)施方式】，所述酶標(biāo)記的CEA抗體為CEA的單克隆抗體或多克隆抗體。
[0013]根據(jù)本發(fā)明的一種【具體實(shí)施方式】,所述酶標(biāo)記的CEA抗體的濃度為300?2000ng/
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[0014]本發(fā)明還提出一種相應(yīng)的制造用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒的方法，
[0015]該方法包括制造偶聯(lián)有CEA抗體的生物功能化磁納米復(fù)合粒子的步驟，[0016]且該步驟包括如下分步驟:第一步、將生物素化的CEA抗體加入磁珠中，
[0017]并搖動(dòng)反應(yīng)一段時(shí)間，使二者進(jìn)行偶聯(lián)形成生物功能化磁納米復(fù)合粒子；第二步、將BSA加入磁珠中再次進(jìn)行搖動(dòng)反應(yīng)以封閉磁珠上未反應(yīng)的位點(diǎn)；第三步、在磁珠中加入PBS溶液配制成生物功能化磁納米復(fù)合粒子。
[0018]根據(jù)本發(fā)明的一種【具體實(shí)施方式】，在第一步之前，還包括用洗滌液洗滌親和素修飾的磁珠的步驟。
[0019]本發(fā)明還提出一種使用試劑盒檢測(cè)CEA的方法，該方法利用一校準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)，得到CEA濃度的校準(zhǔn)曲線，并根據(jù)該校準(zhǔn)曲線檢測(cè)樣品的CEA濃度，所述校準(zhǔn)步驟和檢測(cè)步驟均包括如下步驟:第一步、利用生物功能化磁納米復(fù)合粒子對(duì)校準(zhǔn)品或樣品中的CEA進(jìn)行捕獲；第二步、利用酶標(biāo)記的CEA抗體與所述第一步中的捕獲的CEA及生物功能化磁納米復(fù)合粒子形成雙抗體夾心結(jié)構(gòu)；第三步、在所述雙抗體夾心結(jié)構(gòu)中加入所述化學(xué)發(fā)光底物，然后放入到化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀中，讀取光強(qiáng)最大值。。
[0020](三)有益效果
[0021]本發(fā)明將納米磁珠分離技術(shù)、化學(xué)發(fā)光和酶免疫分析技術(shù)結(jié)合起來(lái)，具有靈敏度高、線性范圍寬、特異性高、反應(yīng)迅速等優(yōu)點(diǎn)。用本發(fā)明的方法開(kāi)發(fā)的CEA檢測(cè)試劑盒能夠靈敏、快速、可靠的檢測(cè)出CEA的含量，從而為臨床上腫瘤的診斷、分期、觀察術(shù)后療效及預(yù)后提供一個(gè)準(zhǔn)確的參考值。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0022]圖1是化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度與時(shí)間的關(guān)系曲線圖(以30ng/mL的CEA為例)；
[0023]圖2是由校準(zhǔn)溶液測(cè)得的校準(zhǔn)曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0024]為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合具體實(shí)施例，并參照附圖，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
[0025]本發(fā)明包括兩個(gè)方面，一是生物功能化磁納米復(fù)合粒子及其制備方法，二是利用該生物功能化磁納米復(fù)合粒子對(duì)CEA的檢測(cè)方法。
[0026]根據(jù)本發(fā)明的第一方面，制備生物功能化的磁性納米復(fù)合粒子的方法包括:將親和素包被的磁納米復(fù)合粒子與生物素修飾的抗體在37°C的搖床中搖30分鐘，并用2% BSA封閉。本發(fā)明用生物功能化的磁性納米復(fù)合粒子作為抗體的移動(dòng)負(fù)載取代了傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫法(ELISA)的固相負(fù)載，
[0027]優(yōu)點(diǎn)在于加快了免疫反應(yīng)，縮短了孵育時(shí)間。常規(guī)ELISA的一次檢測(cè)周期為3?4小時(shí)，而本發(fā)明的檢測(cè)周期為25?30分鐘。
[0028]根據(jù)本發(fā)明的另一方面:利用該生物功能化磁納米復(fù)合粒子對(duì)CEA的檢測(cè)方法包括如下步驟:第一步，向樣本中加入生物功能化磁納米復(fù)合粒子來(lái)捕獲樣本中的CEA ;第二步，再加入酶標(biāo)記的CEA抗體形成雙抗體夾心結(jié)構(gòu)；第三步，加入化學(xué)發(fā)光底物，產(chǎn)生光強(qiáng)并檢測(cè)，光強(qiáng)的大小代表CEA濃度的高低。
[0029]按照檢測(cè)方法中所述的步驟進(jìn)行檢測(cè)，最后得出光強(qiáng)與時(shí)間的關(guān)系曲線圖如附圖1所示。如圖1所示，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證光強(qiáng)的最大值與CEA濃度線性相關(guān)，所以取光強(qiáng)的最大值作為信號(hào)。
[0030]實(shí)施例1:試劑盒
[0031]該實(shí)施例是一種CEA定量檢測(cè)試劑盒，該試劑盒基于生物功能化磁納米復(fù)合粒子技術(shù)，并具有高靈敏度和快速響應(yīng)。所謂試劑盒是一種包括多種試劑的套裝產(chǎn)品，試劑盒中的各種試劑共同用于完成特定的功能。
[0032]根據(jù)本發(fā)明，試劑盒至少包括如下試劑:偶聯(lián)有CEA抗體的生物功能化磁納米復(fù)合粒子、酶標(biāo)記的CEA抗體和化學(xué)發(fā)光底物液。其中偶聯(lián)有CEA抗體的生物功能化磁納米復(fù)合粒子用于捕獲CEA抗原并且在外部磁場(chǎng)的作用下將CEA與其他介質(zhì)分離；酶標(biāo)記的CEA抗體用于與CEA及生物功能化磁納米復(fù)合粒子形成夾心結(jié)構(gòu)并且催化化學(xué)發(fā)光底物發(fā)光，化學(xué)發(fā)光底物液用于產(chǎn)生光學(xué)信號(hào)且此信號(hào)強(qiáng)度與CEA成比例關(guān)系。
[0033]在該實(shí)施例中，偶聯(lián)有CEA抗體的生物功能化磁納米復(fù)合粒子由納米級(jí)的磁核與包含各種功能基團(tuán)的高分子材料復(fù)合而成，其中高分子材料為聚乙烯亞胺、聚乙烯醇、聚苯乙烯、聚氯乙烯、二氧化硅、多糖和牛血清白蛋白中的一種或幾種。磁核為鐵、鈷、鎳的粉體或氧化物或其合金。生物功能化磁納米復(fù)合粒子是通過(guò)親和素修飾的磁珠與生物素修飾的抗體偶聯(lián)或氨基修飾的磁珠與抗體偶聯(lián)或者羧基修飾的磁珠與抗體偶聯(lián)制作的。本實(shí)施例中磁珠與抗體質(zhì)量比為250: 1，也可以是150: I?300: I之間的某一個(gè)值。
[0034]在該實(shí)施例中,所述化學(xué)發(fā)光底物包括魯米諾(Iuminol)和過(guò)氧化物，
[0035]過(guò)氧化物例如為過(guò)氧化氫，化學(xué)發(fā)光底物用于產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號(hào)。
[0036]在該實(shí)施例中，所述酶標(biāo)記的CEA抗體為CEA的單克隆抗體或多克隆抗體。本實(shí)施例中酶標(biāo)抗體的濃度為2 μ g/mL,也可以是300?2000ng/mL之間的某個(gè)值。
[0037]根據(jù)本發(fā)明，所述試劑盒還可包括濃縮洗滌液和校準(zhǔn)品。
[0038]在該實(shí)施例中，所述濃縮洗滌液是PBST (磷酸鹽緩沖液中加入5 %的Tween-20配制而成，詳見(jiàn)實(shí)施例2)，但是，其也可以是0.1m0IL-1Tris-HCl緩沖液，或者其他可以用來(lái)洗滌磁珠的緩沖液。
[0039]在該實(shí)施例中，所述校準(zhǔn)品是濃度為0、5、10、20、40、80、200ng/mL的七個(gè)點(diǎn)，但是，其也可以是O?200ng/mL范圍內(nèi)具有合理梯度的若干個(gè)濃度點(diǎn)的CEA。
[0040]實(shí)施例2:試劑盒的制備方法
[0041]試劑盒的制備方法包括制備該試劑盒中每一種試劑的步驟，在本發(fā)明中，其主要在于生物功能化磁納米復(fù)合粒子的制備方法，其也是本發(fā)明的創(chuàng)新和關(guān)鍵所在。生物功能化磁納米復(fù)合粒子是一種具有超順磁性的由納米粒子復(fù)合而成的微球，在該微球上偶聯(lián)生物抗體形成生物功能化磁納米復(fù)合粒子。
[0042]第一步、將生物素化的CEA抗體加入磁珠中，并搖動(dòng)反應(yīng)一段時(shí)間，
[0043]使二者進(jìn)行偶聯(lián)形成生物功能化磁納米復(fù)合粒子；第二步、將BSA(bovine serumalbumin)加入磁珠中再次進(jìn)行搖動(dòng)反應(yīng)以封閉磁珠上未反應(yīng)的位點(diǎn)；第三步、在磁珠中加A PBS(phosphate buffered saline)溶液配制成生物功能化磁納米復(fù)合粒子。
[0044]在該實(shí)施例中，以親和素修飾的磁珠為例，取100 μ L濃度為10mg/mL的親和素修飾的磁珠用250 μ L的PBST (濃縮洗滌液按照1: 100稀釋得到)洗滌3?5次，加入40 μ L生物素化的CEA抗體，置于120轉(zhuǎn)、37°C的搖床中10?30分鐘后取出，用200 μ LPBST洗滌4次。然后加入ImL 2%的BSA進(jìn)行封閉反應(yīng)20min，該反應(yīng)在搖床中進(jìn)行。然后取出用200 μ LPBST洗滌4次加入500 μ L磷酸鹽緩沖液PBS配成lmg/mL的免疫磁珠。置于4°C避
光保存。
[0045]CEA校準(zhǔn)品的制備，與一般試劑盒中校準(zhǔn)品的制備過(guò)程類(lèi)似。在該實(shí)施例中，將100 μ g/mL進(jìn)口的CEA溶液(Biodesign公司，人源,校準(zhǔn)級(jí)別)用抗原稀釋液(牛血清、防腐劑等)進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)?ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、200ng/mL,進(jìn)行分裝即可。
[0046]該實(shí)施例的化學(xué)發(fā)光底物液購(gòu)自北京科躍中楷生物技術(shù)有限公司。
[0047]該實(shí)離例的濃縮洗滌液的制備:濃縮洗滌液由在濃度為lmol/L、pH為7.4的磷酸鹽緩沖液中加入5%的Tween-20配制而成。
[0048]在試劑盒的開(kāi)發(fā)過(guò)程中，發(fā)明人對(duì)生物功能化磁納米復(fù)合粒子的偶聯(lián)效率、生物功能化磁納米復(fù)合粒子的穩(wěn)定性、反應(yīng)中孵育時(shí)間的優(yōu)化、干擾性實(shí)驗(yàn)、HR標(biāo)記CEA抗體濃度的優(yōu)化、發(fā)光底物液體積的優(yōu)化、光強(qiáng)隨時(shí)間的變化過(guò)程等進(jìn)行了探索和優(yōu)化。CEA抗體與磁粒子的偶聯(lián)效率可達(dá)75% ;通過(guò)對(duì)4°C避光保存的同一批次制備的磁珠，每3天對(duì)10ng/mL的CEA進(jìn)行檢測(cè)，30天內(nèi)測(cè)定10次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.02%，表明該生物功能化磁納米復(fù)合粒子在30天內(nèi)具有很好的穩(wěn)定性；反應(yīng)中水浴的時(shí)間優(yōu)化為10分鐘，使得總的檢測(cè)時(shí)間控制在25分鐘以?xún)?nèi)；干擾性實(shí)驗(yàn)中向CEA抗原溶液中加入甲胎蛋白AFP和糖蛋白CA125，隨著AFP和CA125濃度的增高光強(qiáng)信號(hào)并沒(méi)有明顯變化，與純的CEA溶液相比光強(qiáng)信號(hào)值增加2.1%，可以忽略，表明該試劑盒具有很好的抗干擾性。
[0049]實(shí)施例3:使用試劑盒檢測(cè)CEA的方法
[0050]1、對(duì)于試劑盒和樣本的預(yù)處理。
[0051]在該實(shí)施例中，將試劑盒置于室溫(18-26°C )平衡10-15分鐘；取濃縮洗滌液100 μ L用去離子水按照1: 100稀釋備用；將待測(cè)的樣本(血液、胸腔積液、痰液、唾液、精液、尿液、腹水)等進(jìn)行預(yù)處理，取上清液，置于室溫平衡10-15分鐘。
[0052]2、利用所述試劑盒對(duì)樣本進(jìn)行CEA的檢測(cè)。
[0053]步驟一:該步驟為校準(zhǔn)品的檢測(cè)過(guò)程，利用校準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)。該步驟包括以下三個(gè)步驟:
[0054]第一步，該步驟利用生物功能化磁納米復(fù)合粒子對(duì)溶液中的CEA進(jìn)行捕獲。在該實(shí)施例中，將50 μ L生物功能化磁納米復(fù)合粒子與50 μ L校準(zhǔn)品進(jìn)行混合，37°C水浴5分鐘后取出，孵育時(shí)間還可以為5?15分鐘。
[0055]第二步，該步驟利用酶標(biāo)抗體與上一步中的CEA及生物功能化磁納米復(fù)合粒子形成雙抗體夾心結(jié)構(gòu)。在該實(shí)施例中，加入50 μ L辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的CEA抗體，37°C水浴10分鐘，根據(jù)本發(fā)明，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體體積與生物功能化磁納米復(fù)合粒子體積還可以為20?100 μ L之間的某個(gè)體積；孵育時(shí)間還可以為5?15分鐘。
[0056]該步驟還包括洗滌過(guò)程，將樣本在磁場(chǎng)中進(jìn)行洗滌，洗去多余的酶標(biāo)記抗體。在該實(shí)施例中，用200 μ L洗滌液反復(fù)清洗5次，洗滌液的體積還可以是200?500 μ L之間的某個(gè)值。
[0057]第三步，該步驟為化學(xué)發(fā)光檢測(cè)過(guò)程。在該實(shí)施例中，取化學(xué)發(fā)光底物液50μ L加到上述步驟形成的雙抗體夾心結(jié)構(gòu)中，然后放入到化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀中，讀取光強(qiáng)最大值?；瘜W(xué)發(fā)光底物的體積還可以是30?80 μ L之間的某個(gè)值。七個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)依次按照上述操作步驟進(jìn)行檢測(cè)，得出各自的光強(qiáng)值。優(yōu)選的是，每個(gè)點(diǎn)平行檢測(cè)三次，將光強(qiáng)值作為縱軸，CEA濃度作為橫軸，作出光強(qiáng)與濃度的校準(zhǔn)曲線圖并得出校準(zhǔn)方程。檢測(cè)結(jié)果可參考附圖2。
[0058]步驟二、該步驟為實(shí)際樣本的檢測(cè)過(guò)程。
[0059]在該實(shí)施例中，將50 μ L生物功能化磁納米復(fù)合粒子與50 μ L樣本進(jìn)行混合，同樣按照上述所述四個(gè)步驟進(jìn)行操作。根據(jù)校準(zhǔn)曲線所得的校準(zhǔn)方程計(jì)算得出樣本中CEA的濃度。優(yōu)選為每個(gè)樣本測(cè)三到五次。
[0060]以上所述的具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果進(jìn)行了進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，應(yīng)理解的是，以上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，包括如下試劑:偶聯(lián)有CEA抗體的生物功能化磁納米復(fù)合粒子、酶標(biāo)記的CEA抗體和化學(xué)發(fā)光底物。
2.如權(quán)利要求1所述的用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，所述偶聯(lián)有CEA抗體的生物功能化磁納米復(fù)合粒子由納米級(jí)的磁核與包含各種功能基團(tuán)的高分子材料復(fù)合而成。
3.如權(quán)利要求2所述的用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，所述高分子材料為聚乙烯亞胺、聚乙烯醇、聚苯乙烯、聚氯乙烯、二氧化硅、多糖和牛血清白蛋白中的一種或幾種。
4.如權(quán)利要求2所述的用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，所述磁核為鐵、鈷、鎳的粉體或氧化物或其合金。
5.如權(quán)利要求1所述的用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物包括魯米諾和過(guò)氧化物。
6.如權(quán)利要求1所述的用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)記的CEA抗體為CEA的單克隆抗體或多克隆抗體。
7.如權(quán)利要求6所述的用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)記的CEA抗體的濃度為300?2000ng/mL。
8.—種制造用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒的方法，其特征在于，該方法包括制造偶聯(lián)有CEA抗體的生物功能化磁納米復(fù)合粒子的步驟，且該步驟包括如下分步驟: 第一步、將生物素化的CEA抗體加入磁珠中，并搖動(dòng)反應(yīng)一段時(shí)間，使二者進(jìn)行偶聯(lián)形成生物功能化磁納米復(fù)合粒子； 第二步、將BSA加入磁珠中再次進(jìn)行搖動(dòng)反應(yīng)以封閉磁珠上未反應(yīng)的位點(diǎn)； 第三步、在磁珠中加入PBS溶液配制成生物功能化磁納米復(fù)合粒子。
9.如權(quán)利要求8所述的制造用于CEA定量檢測(cè)的試劑盒的方法，其特征在于，在第一步之前，還包括用洗滌液洗滌親和素修飾的磁珠的步驟。
10.一種使用檢測(cè)樣品中的CEA的濃度的方法，該方法利用一校準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)，得到CEA濃度的校準(zhǔn)曲線，并根據(jù)該校準(zhǔn)曲線檢測(cè)樣品的CEA濃度，其特征在于，所述校準(zhǔn)步驟和檢測(cè)步驟均包括如下步驟: 第一步、利用生物功能化磁納米復(fù)合粒子對(duì)校準(zhǔn)品或樣品中的CEA進(jìn)行捕獲； 第二步、利用酶標(biāo)記的CEA抗體與所述第一步中的捕獲的CEA及生物功能化磁納米復(fù)合粒子形成雙抗體夾心結(jié)構(gòu)； 第三步、在所述雙抗體夾心結(jié)構(gòu)中加入所述化學(xué)發(fā)光底物，然后放入到化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀中，讀取光強(qiáng)最大值。
11.如權(quán)利要求10所述的使用檢測(cè)樣品中的CEA的濃度的方法，其特征在于，在所述第二步中還包括洗滌步驟，用于洗去多余的酶標(biāo)記抗體。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK103575892SQ201210281112
【公開(kāi)日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2012年8月8日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月8日
【發(fā)明者】曲書(shū)雪, 蔡新霞, 劉軍濤, 黃一清, 王彬 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院電子學(xué)研究所