專利名稱：一種免疫組化質(zhì)量控制參照物及質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物病理檢測(cè)領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及一種免疫組化質(zhì)量控制參照物及利用該參照物進(jìn)行質(zhì)量控制的方法。
背景技術(shù)：
為了促進(jìn)免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化、檢測(cè)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果的可靠性，免疫組化過程應(yīng)該進(jìn)行有效的質(zhì)量控制。免疫組織化學(xué)質(zhì)量控制是指，采取不斷優(yōu)化的措施和技術(shù)制定實(shí)驗(yàn)室制度及常規(guī)工作，規(guī)范和完善實(shí)驗(yàn)室的免疫組織化學(xué)染色操作流程與步驟，保證免疫組織化學(xué)染色質(zhì)量達(dá)到最佳結(jié)果，并可以做出準(zhǔn)確的診斷。在臨床病理診斷和形態(tài)學(xué)研究中，免疫組織化學(xué)染色是一種很重要的技術(shù)和手段。免疫組化技術(shù)應(yīng)用于病理診斷始于上世紀(jì)70年代，目前在全球病理界已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，它已成為病理醫(yī)生常規(guī)工作中不可缺少的部分。免疫組化技術(shù)擁有特異性、敏感性強(qiáng)及操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，使得免疫組化技術(shù)在疾病診斷領(lǐng)域得到了廣泛的推廣和應(yīng)用。免疫組化技術(shù)不僅能提高了病理診斷的準(zhǔn)確性，同時(shí)也滲透到了臨床和基礎(chǔ)學(xué)科，在探討疾病的病因?qū)W、發(fā)病機(jī)制及科研工作中起到了不可估量的作用。免疫組化技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單，靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，在各級(jí)醫(yī)院的臨床病理診斷、研究等相關(guān)學(xué)科中得到廣泛應(yīng)用，但是由于實(shí)驗(yàn)條件的差別及其他技術(shù)因素的影響，使得免疫組化染色結(jié)果差別很大，從而影響到病理診斷的結(jié)果，目前提高免疫組化染色技術(shù)水平的需要越來越迫切，而且任重道遠(yuǎn)。質(zhì)量控制由室內(nèi)質(zhì)控(internalquality control, IQC)和室間質(zhì)控(externalquality assurance, EQA)兩部分組成。IQC是指實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部自己制定免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)的質(zhì)控方法和程序；EQA是由某個(gè)外部機(jī)構(gòu)或組織，對(duì)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室之間的不同免疫組織化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)和評(píng)估，是在實(shí)驗(yàn)室之間進(jìn)行的。IQC和EQA對(duì)于實(shí)現(xiàn)免疫組織化學(xué)染色的標(biāo)準(zhǔn)化方面起到了非常重要的作用，并推動(dòng)了我國(guó)免疫組織化學(xué)在病理診斷中的應(yīng)用與發(fā)展。對(duì)于免疫組織化學(xué)染色的內(nèi)部質(zhì)控程序來說，主要的步驟便是對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)樣品(即參照物)的設(shè)立。只有設(shè)立陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，才能確保免疫組織化學(xué)染色過程的準(zhǔn)確性、抗體及相關(guān)試劑的有效性，確認(rèn)染色結(jié)果的真實(shí)性，檢測(cè)是否存在假陽性或假陰性結(jié)果。對(duì)照的設(shè)立包括試劑對(duì)照、組織對(duì)照以及內(nèi)部對(duì)照等。由于免疫組織化學(xué)染色有可能出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果，因此每次實(shí)驗(yàn)都必須同時(shí)設(shè)立陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，以達(dá)到質(zhì)控的最佳效果。目前免疫組織化學(xué)常規(guī)對(duì)照的設(shè)立，是由一張單獨(dú)的切片上包含有待測(cè)抗體陽性或陰性的組織組成的。在日常免疫組織化學(xué)染色中，每一種抗體都需設(shè)立一張單獨(dú)的陽性或陰性組織對(duì)照片，以確認(rèn)抗體及其他試劑是否有效，染色過程是否運(yùn)行正常。目前采用的陽性、陰性對(duì)照組織方法，雖然具有一定的效果，但是由于每張組織片都有一定差異，因此很難為檢測(cè)組織提供一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)含量的參考。且目前市場(chǎng)上沒有利用非生物組織的材料作為免疫組化質(zhì)量控制的對(duì)照材料?；诖?，本發(fā)明提供了一種免疫組化質(zhì)量控制參照物及利用該參照物進(jìn)行質(zhì)量控制的方法。該參照物是一種待測(cè)抗原含量穩(wěn)定的組織切片對(duì)照物。

發(fā)明內(nèi)容
為了在免疫組化質(zhì)控過程中提供穩(wěn)定的易于獲得的參照物，本發(fā)明提供了提供一種免疫組化質(zhì)量控制參照物及利用該參照物進(jìn)行質(zhì)量控制的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下:
一種用于免疫組織化學(xué)技術(shù)質(zhì)量控質(zhì)的參照物，所述參照物包括三個(gè)對(duì)照物:質(zhì)量控制的陽性對(duì)照物、質(zhì)量控制的陰性對(duì)照物以及抗原修復(fù)對(duì)照物。所述質(zhì)量控制的陽性對(duì)照物的制備方法為:將抗原經(jīng)過葡聚糖材料處理、固化、然后包埋于石蠟中。所述質(zhì)量控制的陰性對(duì)照物的制備方法為:將不含有抗原的葡聚糖材料包埋于石臘中。所述抗原修復(fù)對(duì)照物的制備方法為:將抗原經(jīng)過葡聚糖材料處理并固化，再經(jīng)福爾馬林浸泡后包埋于石蠟中。本發(fā)明將制備好的質(zhì)量控制的陽性對(duì)照物、質(zhì)量控制的陰性對(duì)照物以及抗原修復(fù)對(duì)照物從石蠟塊中取出，按順序包埋在同一個(gè)石蠟塊中，在切片機(jī)上實(shí)現(xiàn)切片并黏貼于載玻片上作為免疫組化質(zhì)量控質(zhì)的參照物。本發(fā)明還提供了一種免疫組化質(zhì)量控制的方法，該方法是利用包埋有待測(cè)目標(biāo)抗原的材料模擬常規(guī)石蠟組織切片，在切片機(jī)上切成薄片黏貼于載玻片上與待檢測(cè)組織一同進(jìn)行免疫組化染色，達(dá)到質(zhì)量控制的目的；所述包埋有待測(cè)目標(biāo)抗原的材料即上述的參照物。所述的包埋有待測(cè)目標(biāo)抗原的材料，是指利用葡聚糖與待測(cè)目標(biāo)抗原混合后經(jīng)過固化形成的固體顆粒。所述的待測(cè)目標(biāo)抗原，是指與病理組織中待檢測(cè)抗原相同的蛋白或者具有相同的抗原決定族的蛋白質(zhì)。所述質(zhì)量控制的陰性對(duì)照，是指沒有包埋目標(biāo)抗原的材料經(jīng)過常規(guī)石蠟切片制作，貼于載玻片上與待檢測(cè)組織一同染色；
所述質(zhì)量控制的陽性對(duì)照，是指包埋了目標(biāo)抗原的材料經(jīng)過常規(guī)石蠟切片制作，但是不經(jīng)過福爾馬林固定，使得目標(biāo)抗原的抗原決定簇不被封閉；
所述抗原修復(fù)對(duì)照，是指是包埋了目標(biāo)抗原的材料經(jīng)過常規(guī)石蠟切片制作，并經(jīng)過福爾馬林固定，使得目標(biāo)抗原的抗原決定簇被封閉。本發(fā)明方法利用體外獲得的與組織中待檢測(cè)抗原具有相同的蛋白或具有相同的抗原決定簇的蛋白質(zhì)作為對(duì)照物，包埋于多糖材料中并經(jīng)過固化形成固體顆粒，經(jīng)過脫水、透明、浸蠟和包埋等程序制作成石蠟塊，在組織切片機(jī)實(shí)現(xiàn)切片并與待測(cè)組織貼于同一張載玻片上，與待測(cè)組織一同進(jìn)行免疫組化染色。本發(fā)明方法設(shè)計(jì)了三個(gè)對(duì)照(即參照物)用于免疫組化的質(zhì)量控制，包括陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和抗原修復(fù)對(duì)照，通過參照物染色的結(jié)果直接判斷染色的成功與否，以及染色失敗后的原因。具體如下: (I)陰性對(duì)照片呈現(xiàn)陰性結(jié)果，陽性對(duì)照片呈現(xiàn)陽性結(jié)果，抗原修復(fù)對(duì)照呈現(xiàn)陽性結(jié)果。說明染色過程成功，染色結(jié)果可以用于病理診斷。(2)陰性對(duì)照呈現(xiàn)陰性結(jié)果，陽性對(duì)照呈現(xiàn)陽性結(jié)果，抗原修復(fù)對(duì)照呈現(xiàn)陰性結(jié)果。說明染色過程失敗，而且失敗原因是抗原修復(fù)，被封閉的抗原決定簇沒有暴露出來，應(yīng)當(dāng)選擇新的修復(fù)方法或提高修復(fù)強(qiáng)度。( 3 )陰性對(duì)照、陽性對(duì)照、抗原修復(fù)對(duì)照都為陰性結(jié)果，說明染色過程失敗，失敗的原因可能是實(shí)驗(yàn)試劑或操作過程的失誤。(4)陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和抗原修復(fù)對(duì)照都呈現(xiàn)陽性。說明染色過程失敗，即產(chǎn)生了非特異性染色。本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明提供的參照物為非生物組織材料，該材料穩(wěn)定性高，為免疫組化技術(shù)的質(zhì)量控制提供了一個(gè)可靠的參照物。傳統(tǒng)的質(zhì)控方法是提供陽性腫瘤參照片，但是腫瘤組織的來源有限，不同組織的染色結(jié)果差異較大，無法為免疫組化過程提供一個(gè)穩(wěn)定的質(zhì)控參考標(biāo)志物。本發(fā)明提供的參照物成本低廉，具有長(zhǎng)久的穩(wěn)定性。通過該方法制備的參照片，其標(biāo)志物濃度一致，同時(shí)還具有來源可靠、穩(wěn)定、質(zhì)控信號(hào)一致的特點(diǎn)。


圖1為載玻片對(duì)照片正確染色結(jié)果示意 圖2為免疫組化過程抗原修復(fù)不徹底對(duì)照片染色結(jié)果示意 圖3為免疫組化過程抗染色失敗結(jié)果示意 圖4為免疫組化過程抗染色失敗結(jié)果示意圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明中陰性對(duì)照材料的制備步驟如下:稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于IOmL雙蒸水中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 y L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒進(jìn)行與病理組織同樣的程序，經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，用二甲苯透明，石蠟浸泡，最后石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。按照與病理組織一樣的程序切片和貼片。本發(fā)明中陽性對(duì)照材料的制備步驟如下:量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為0.1mg/L到10mg/L濃度范圍的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 y L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。本發(fā)明中抗原修復(fù)對(duì)照材料的制備步驟如下:量取IOmL雙蒸水，加入終濃度
0.lmg/L到10mg/L濃度范圍的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉,溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙狻Ｔ俜Q取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 y L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過福爾馬林(35-40%甲醛和10-15%甲醇水溶液)固定，梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。下面通過具體實(shí)施示例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步說明，但是不能以此限制本發(fā)明的范圍。以下所用生化試劑除特別標(biāo)明外均購自生工生物工程(上海)有限公司，抗體和臨床組織石蠟切片為申請(qǐng)人(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)提供，操作步驟若無說明均為常規(guī)操作步驟。實(shí)施例1、陰性對(duì)照材料的制備
稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于IOmL雙蒸水中，充分?jǐn)嚢枞芙狻Ｔ俜Q取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒進(jìn)行與病理組織同樣的程序，經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，用二甲苯透明，石蠟浸泡，最后石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。按照與病理組織一樣的程序切片和貼片。實(shí)施例2、陽性對(duì)照材料的制備
量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為0.lmg/L的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙狻Ｔ俜Q取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。實(shí)施例3、抗原修復(fù)對(duì)照材料的制備
量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為lmg/L的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加A 20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過福爾馬林(35-40%甲醛和10-15%甲醇水溶液)固定，梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。實(shí)施例4、質(zhì)量控質(zhì)參照物的制作
獲得的陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和抗原修復(fù)對(duì)照材料，從石蠟塊中取出，按順序包埋在同一個(gè)石蠟塊中，經(jīng)過組織切片機(jī)切片貼于載玻片上，作為免疫組化質(zhì)控參照物。實(shí)施例5、陽性對(duì)照材料的制備
量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為10mg/L的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加A 20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。實(shí)施例6、陽性對(duì)照材料的制備
量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為lmg/L的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙狻Ｔ俜Q取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加A 20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。實(shí)施例7、抗原修復(fù)對(duì)照材料的制備
量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為0.lmg/L的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過福爾馬林(35-40%甲醛和10-15%甲醇水溶液)固定，梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。實(shí)施例8、抗原修復(fù)對(duì)照材料的制備
量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為10mg/L的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過福爾馬林(35-40%甲醛和10-15%甲醇水溶液)固定，梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。實(shí)施例9、具體應(yīng)用
分別取一塊乳腺癌病理組織蠟塊和本專利技術(shù)制作的蠟塊(即含參照物的蠟塊)。然后按照公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)的程序各組織取一片進(jìn)行切片、載玻片貼片?？酒?，68°C，20分鐘，公認(rèn)的二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水(二甲苯I 20min — 二甲苯II 20min — 100%酒精I(xiàn)Omin — 100%酒精I(xiàn)Omin — 95%酒精5min — 80%酒精5min — 70%酒精5min),阻斷滅活內(nèi)源性過氧化物酶:3%H20237°C孵育lOmin，PBS沖洗3X5min ;取出后進(jìn)行抗原修復(fù):置0.0lM枸櫞酸緩沖液(PH6.0)中用煮沸(95°C，15-20min)，自然冷卻20min以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3X5min。正常羊血清工作液封閉，37°C lOmin，傾去勿洗。滴加抗ER的一抗4°C冰箱孵育過夜，PBS沖洗3X5min ;滴加生物素標(biāo)記二抗，37°C孵育30min，PBS沖洗3X5min ;滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，37°C孵育30min，PBS沖洗3X5min ； DAB/H202反應(yīng)染色，自來水充分沖洗后，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。在進(jìn)行病理組織結(jié)果判斷之前，首先確定試劑及其整個(gè)處理中試劑的有效性及處理過程是否正確。根據(jù)對(duì)照片的結(jié)果進(jìn)行判斷。(具體判定方法為:圖1-4中的圓形斑點(diǎn)中，深色斑點(diǎn)為陽性，無色斑點(diǎn)為陰性):
本專利技術(shù)制備的對(duì)照質(zhì)控片染色結(jié)果若如圖1所示，即陰性對(duì)照片呈現(xiàn)陰性結(jié)果，陽性對(duì)照片呈現(xiàn)陽性結(jié)果，抗原修復(fù)對(duì)照呈現(xiàn)陽性結(jié)果。則說明染色過程成功，染色結(jié)果可以用于病理診斷。
本專利技術(shù)制備的對(duì)照質(zhì)控片染色結(jié)果若如圖2所示，即陰性對(duì)照呈現(xiàn)陰性結(jié)果，陽性對(duì)照呈現(xiàn)陽性結(jié)果，抗原修復(fù)對(duì)照呈現(xiàn)陰性結(jié)果。則說明染色過程失敗，而且失敗原因是抗原修復(fù)，被封閉的抗原決定簇沒有完全暴露出來，應(yīng)當(dāng)選擇新的修復(fù)方法或提高修復(fù)強(qiáng)度。病理片的染色結(jié)果可信度有一定程度的下降。本專利技術(shù)制備的對(duì)照質(zhì)控片染色結(jié)果若如圖3所示，即陰性對(duì)照、陽性對(duì)照、抗原修復(fù)對(duì)照都為陰性結(jié)果，說明染色過程失敗，失敗的原因可能是試劑或操作過程的失誤。病理染色結(jié)果不可信，應(yīng)重新進(jìn)行染色操作。本專利技術(shù)制備的對(duì)照質(zhì)控片染色結(jié)果若如圖4所示，即陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和抗原修復(fù)對(duì)照都呈現(xiàn)陽性。說明染色過程失敗，即產(chǎn)生了非特異性染色。病理染色結(jié)果不可信，應(yīng)重新進(jìn)行染色操作。如圖1所示，即陰性對(duì)照斑點(diǎn)呈現(xiàn)陰性結(jié)果，陽性對(duì)照斑點(diǎn)呈現(xiàn)陽性結(jié)果，抗原修復(fù)對(duì)照斑點(diǎn)呈現(xiàn)陽性結(jié)果，染色過程成功，則病理切片可用于進(jìn)一步的診斷。在顯微鏡下觀察，如果呈現(xiàn)棕色結(jié)果，則病理切片為陽性結(jié)果，如果無棕色顏色出現(xiàn)，則病理切片的診斷結(jié)果為陰性。
權(quán)利要求
1.一種用于免疫組織化學(xué)技術(shù)質(zhì)量控質(zhì)的參照物，其特征在于:所述參照物包括三個(gè)對(duì)照物:質(zhì)量控制的陽性對(duì)照物、質(zhì)量控制的陰性對(duì)照物以及抗原修復(fù)對(duì)照物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于免疫組織化學(xué)技術(shù)質(zhì)量控質(zhì)的參照物，其特征在于:所述質(zhì)量控制的陽性對(duì)照物的制備方法為:將抗原經(jīng)過葡聚糖材料處理后，然后包埋于石蠟中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于免疫組織化學(xué)技術(shù)質(zhì)量控質(zhì)的參照物，其特征在于:所述質(zhì)量控制的陰性對(duì)照物的制備方法為:將不含有抗原的葡聚糖材料包埋于石蠟中。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于免疫組織化學(xué)技術(shù)質(zhì)量控質(zhì)的參照物，其特征在于:所述抗原修復(fù)對(duì)照物的制備方法為:將抗原經(jīng)過葡聚糖材料處理并固化，再經(jīng)福爾馬林浸泡后包埋于石蠟中。
5.一種如權(quán)利要求1所述的參照物的應(yīng)用，其特征在于:所述應(yīng)用是將制備好的質(zhì)量控制的陽性對(duì)照物、質(zhì)量控制的陰性對(duì)照物以及抗原修復(fù)對(duì)照物從石蠟塊中取出，按順序包埋在同一個(gè)石蠟塊中，在切片機(jī)上實(shí)現(xiàn)切片并黏貼于載玻片上作為免疫組化質(zhì)量控質(zhì)的參照物。
6.一種免疫組化質(zhì)量控制的方法，其特征在于:該方法是利用包埋有待測(cè)目標(biāo)抗原的材料模擬常規(guī)石蠟組織切片，在切片機(jī)上切成薄片黏貼于載玻片上與待檢測(cè)組織一同進(jìn)行免疫組化染色，達(dá)到質(zhì)量控制的目的；所述包埋有待測(cè)目標(biāo)抗原的材料即為如權(quán)利要求1中所述的參照物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的免疫組化質(zhì)量控制的方法，其特征在于:所述的包埋有待測(cè)目標(biāo)抗原的材料，是指利用葡聚糖與待測(cè)目標(biāo)抗原混合后經(jīng)過固化形成的固體顆粒。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的免疫組化質(zhì)量控制的方法，其特征在于:所述的待測(cè)目標(biāo)抗原，是指與病理組織中待檢測(cè)抗原相同的蛋白或者具有相同的抗原決定簇的蛋白質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種免疫組化質(zhì)量控制參照物及利用該參照物進(jìn)行質(zhì)量控制的方法。本發(fā)明利用葡聚糖溶液固化后的顆粒模擬生物組織，并將目標(biāo)抗原蛋白均勻包埋其中。包埋目標(biāo)抗原的葡聚糖固體顆粒經(jīng)過脫水、透明、浸蠟和石蠟包埋形成蠟塊，在切片機(jī)上實(shí)現(xiàn)切片后貼于載玻片上，與待檢測(cè)組織一同染色。本發(fā)明方法根據(jù)不同的材料設(shè)計(jì)陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和抗原修復(fù)對(duì)照，通過參照物染色結(jié)果到達(dá)質(zhì)量控制的目的。
文檔編號(hào)G01N33/531GK103116018SQ20131002932
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月25日
發(fā)明者林齊心, 熊玉林, 王小亞 申請(qǐng)人:福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司