專利名稱：一種測定飼料中維生素c含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測定飼料中維生素C含量的測定方法。
背景技術(shù)：
維生素C是水產(chǎn)養(yǎng)殖中必需添加的維生素添加劑之一。維生素C含量的檢測方法大多采用氧化還原滴定法(碘量法和靛酚藍(lán)法)，這一類方法的特點(diǎn)是所用設(shè)備成本低廉，操作簡便，只適合檢測單一的維生素C制品和簡單基質(zhì)樣品中維生素C含量的測定，多用于醫(yī)藥和食品行業(yè)。目前飼料行業(yè)多用碘量測定法維生素C原料制品，以此來判定其質(zhì)量。對于維生素預(yù)混合飼料和配合飼料中維生素C的檢測尚未頒布方法標(biāo)準(zhǔn)，雖有人發(fā)表過“配合飼料中維生素C測定的分光光度法”、也有人試圖用高效液相色譜技術(shù)解決這一難題，但由于維生素C極易被氧化的特點(diǎn)和飼料基質(zhì)的復(fù)雜，加之檢測過程繁瑣和設(shè)備昂貴，因此無法實(shí)現(xiàn)飼料中這一關(guān)鍵成分檢測。分光光度法針對不同配合飼料樣品方法無可重復(fù)性，液相色譜法最好也只能得到70%的添加同收率。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種測定飼料中維生素C的方法。
本發(fā)明所提供的測定飼料中維生素C的方法，是采用伏安極譜法(即應(yīng)用伏安極譜儀進(jìn)行檢測)，包括下述步驟:
I)將待測樣品即含維生素C的飼料用pH值3-5的乙酸緩沖溶液配制成溶液，然后進(jìn)行超聲提取，得到待測樣品溶液；
2)分為下述a)或b):
a)采用標(biāo)準(zhǔn)加入法，取數(shù)份等體積的所述待測樣品溶液，并向其中加入不同量的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中一份樣品溶液中不加標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后用pH值3-5的乙酸緩沖溶液定容至相同體積，對所得的溶液均以-0.2V為起始電位、0.3為終止電位進(jìn)行電位掃描，繪制各溶液的極譜圖(即1-U曲線)并記錄極譜波峰電流值；
b)采用標(biāo)準(zhǔn)加入法，先取所述樣品溶液用pH值3-5的乙酸緩沖溶液稀釋后，以-0.2V為起始電位、0.3V為終止電位進(jìn)行電位掃描，繪制極譜圖(即1-U曲線)并記錄極譜波峰電流值；然后依次向所述稀釋后的溶液中加入維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液，每次加入標(biāo)準(zhǔn)溶液混合均勻后，均以-0.2V為起始電位、0.3V為終止電位進(jìn)行電位掃描，繪制極譜圖(即1-U曲線)并記錄極譜波峰電流值；
3)以加入的維生素C的濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的極譜波峰電流值為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線，用外推法(延長工作曲線和橫坐標(biāo)相交的數(shù)的絕對值)，即可得到待測樣品中的維生素C濃度。
其中，所述飼料中的維生素C既可以是維生素C原粉，也可以是包膜維生素C(如市售的包膜維生素C:惠爾C)。因包膜維生素C的緩釋效應(yīng)可以有效提高其利用率，因而在目前的飼料中被廣泛添加使用。
所述飼料具體可為添加維生素C的水產(chǎn)飼料，如魚飼料等。
步驟I)中所述乙酸緩沖溶液優(yōu)選pH值為4.6的乙酸緩沖溶液。配制方法如下:取IL去離子水溶液，添加0.1mol的乙酸和0.1mol的乙酸鈉，混勻即得。
步驟I)中所述超聲提取的功率為60-80W，提取時(shí)間為3-10min。
步驟I)中所述待測樣品溶液中的維生素C濃度應(yīng)不小于0.5mg/L，才能保證準(zhǔn)確測定。
步驟2)中所述電位掃描的掃描速率為0.0050 0.01V/s，具體可選擇0.0062V/So
步驟2)中通常取三份等體積的待測樣品溶液，一份O標(biāo)準(zhǔn)添加，另兩份加入不同量的維生素C標(biāo)準(zhǔn)液。
由于飼料中的成分比較復(fù)雜且待測維生素C的含量低，而標(biāo)準(zhǔn)加入法恰恰適用于樣品組分復(fù)雜的情況。采用該方法能消除基體效應(yīng)帶來的影響，有利于提高測定的準(zhǔn)確度。
為了得到較為精確的外推結(jié)果，多采用三個(gè)點(diǎn)(包括待測樣溶液本身)來作外推曲線，并且第一份加入的標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測溶液的濃度之比應(yīng)適當(dāng)。增量值的大小可這樣選擇，使第一個(gè)加入量產(chǎn)生的波峰電流值約為試樣原波峰電流值的一半。
本發(fā)明采用伏安極譜法測定飼料(包括添加包膜維生素C)中的維生素C含量，樣品處理簡單，操作過程省時(shí)，避免了繁瑣的操作過程造成的維生素C氧化；應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)添加法工作曲線排除了樣品的基質(zhì)干擾；采用靈敏度高的電化學(xué)檢測器加之檢測是在屏蔽氧氣的條件下完成，方法回收率高，檢測結(jié)果準(zhǔn)確。對該方法的精密度和準(zhǔn)確度進(jìn)行分析，結(jié)果證明利用本發(fā)明方法測定飼料中的維生素C含量，重現(xiàn)性好，靈敏度高，準(zhǔn)確性好，檢測限低，為準(zhǔn)確測定飼料中的維生素C提供了一種全新的方法。


圖1為待測樣品及標(biāo)準(zhǔn)外加樣品的極譜圖。
圖2為待測樣品及標(biāo)準(zhǔn)外加樣品的極譜波峰電流值-濃度工作曲線圖。
具體實(shí)施方式
下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明的方法進(jìn)行說明，但本發(fā)明并不局限于此。
下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和材料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。
實(shí)施例1、伏安極譜法測定配飼料中維生素C的含量
1、儀器
1.伏安極譜儀(瑞士萬通797) ；2.超聲波儀(KQ-300VDV) ；3.電子分析天平(METTLER-AE240) ；4.pH 計(jì)(METTLERT0LED0)。5.離心機(jī)(ANKE TDL-5-A)
2試劑及樣品
2.1乙酸緩沖溶液
pH = 4.6，配制方法如下:1L去離子水溶液中添加0.1mol的乙酸和0.1mol的乙酸鈉，混勻即可
2.2L-抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:CS = 0.lmg/mL(需測定當(dāng)天配制)
2.3惠爾C(北京英惠爾生物技術(shù)有限公司出售的包膜維生素C)
2.4含維生素C的配合飼料樣品，其中VC標(biāo)示量為不小于80mg/kg (北京英惠爾生物技術(shù)有限公司)
2.5空白配合飼料樣品(即上述含包膜維生素C的配合飼料樣品除去包膜維生素C的飼料樣品)
3、方法
準(zhǔn)確稱量5.0Og樣品，加入IOOml的乙酸緩沖溶液，搖勻，80W超聲提取5min，5000r/min(4200Xg)離心10分鐘，收集上清液(待測)。
取20ml乙酸緩沖溶液，加100 μ I樣品溶液，按照0.0062V/s的掃描速率以-0.2V為起始電位、0.3V為終止電位進(jìn)行電位掃描，依序2次加入100 μ I L-抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(Cs = 0.lmg/mL)，同樣品溶液進(jìn)行電位掃描測定，繪制各樣品的極譜圖(即1-U曲線)并記錄極譜波峰電流值。采用外推法，計(jì)算待測樣品中維生素C的濃度。
3.1方法線性
權(quán)利要求
1.一種測定飼料中維生素C的方法，包括下述步驟: 1)將含維生素C的飼料用pH值為3-5的乙酸緩沖溶液配制成溶液，然后進(jìn)行超聲提取，得到待測樣品溶液； 2)分為下述a)或b): a)采用標(biāo)準(zhǔn)加入法，取數(shù)份等體積的所述待測樣品溶液，并向其中加入不同量的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中一份樣品溶液中不加標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后用pH值3-5的乙酸緩沖溶液定容至相同體積，對所得的溶液均以-0.2V為起始電位、0.3V為終止電位進(jìn)行電位掃描，繪制各溶液的極譜圖并記錄極譜波峰電流值； b)采用標(biāo)準(zhǔn)加入法，先取所述待測樣品溶液用pH值3-5的乙酸緩沖溶液稀釋定容得到稀釋液，對所述稀釋液以-0.2V為起始電位、0.3V為終止電位進(jìn)行電位掃描，繪制極譜圖并記錄極譜波峰電流值；然后依次向所述稀釋定容后的溶液中加入維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液，每次加入標(biāo)準(zhǔn)溶液混合均勻后，均以-0.2V為起始電位、0.3V為終止電位進(jìn)行電位掃描,繪制極譜圖并記錄極譜波峰電流值； 3)以加入的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的極譜波峰電流值為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線，用外推法得到待測樣品中的維生素C濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟I)中所述乙酸緩沖溶液為PH值4.6的乙酸緩沖溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于:步驟I)中所述超聲提取的功率為60-80W，提取時(shí)間為3-10min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于:步驟2)中所述電位掃描的掃描速率為0.0050 0.01V/so
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于:步驟2)中a)如下:取三份100 μ I所述待測樣品溶液，其中，一份不加入維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液，第二份加入100 μ 1、0.lmg/mL的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液,第三份加入200 μ 1、0.lmg/mL的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液,然后用所述乙酸緩沖溶液定容至20ml，對所得三份溶液均按照0.0062V/S的掃描速率以-0.2V為起始電位、0.3V為終止電位進(jìn)行電位掃描，繪制各溶液的極譜圖并記錄極譜波峰電流值。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于:步驟2)中b)如下:取100μ I所述待測樣品溶液，加入所述乙酸緩沖溶液20ml，按照0.0062V/S的掃描速率以-0.2V為起始電位、0.3V為終止電位進(jìn)行電位掃描繪制極譜圖并記錄極譜波峰電流值；然后依序2次加入100 μ 1、0.lmg/mL的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液,每次加入標(biāo)準(zhǔn)溶液混合均勻后,均以_0.2V為起始電位、0.3V為終止電位進(jìn)行電位掃描，繪制極譜圖并記錄極譜波峰電流值。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于:所述飼料中所含的維生素C為維生素C原粉或包膜維生素C。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于:所述飼料為含維生素C的水產(chǎn)飼料。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種測定飼料中包膜維生素C的方法。該方法是采用伏安極譜法，包括下述步驟1)將待測樣品即含維生素C的飼料用pH值3-5的乙酸緩沖溶液配制成溶液，然后進(jìn)行超聲提取，得到待測樣品溶液；2)采用標(biāo)準(zhǔn)加入法測定樣品中vc的濃度，將樣品及標(biāo)準(zhǔn)加入的樣品均以-0.2V為起始電位、0.3為終止電位進(jìn)行電位掃描，繪制各溶液的極譜圖(即I-U曲線)并記錄極譜波峰電流值；繪制工作曲線，用外推法即可得到待測樣品中的維生素C濃度。本發(fā)明方法重現(xiàn)性好，靈敏度高，準(zhǔn)確性好，檢測限低，為測定飼料中的痕量維生素C提供了一種全新的方法。
文檔編號(hào)G01N27/48GK103163203SQ20131004137
公開日2013年6月19日 申請日期2013年2月1日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月1日
發(fā)明者劉慶生, 任澤林, 范志影, 曾虹, 張萍, 馬書宇, 趙維香, 田園, 李慧, 黃吉波 申請人:北京英惠爾生物技術(shù)有限公司, 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所