一種輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分的方法。本發(fā)明提供的輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分的方法，包括如下步驟：（1）將NF-κB-luc轉(zhuǎn)基因小鼠或TNF-α-luc轉(zhuǎn)基因小鼠分為兩組，第一組飼喂普通飼料，第二組飼喂待測飼料，所述待測飼料為待測食品與普通飼料的混合物；（2）所述步驟（1）進行3-14天（如3-7天、7-14天、3天、7天或14天）后，通過活體成像分別檢測第一組小鼠的熒光強度和第二組小鼠的熒光強度，如果第二組小鼠的熒光強度顯著高于第一組小鼠的熒光強度，待測食品中含有轉(zhuǎn)基因植物成分。本發(fā)明提供的方法操作簡便，成本低廉，結(jié)果判斷簡易，具有非常大的推廣和應(yīng)用價值。
【專利說明】一種輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]轉(zhuǎn)基因生物在聯(lián)合國公約《生物安全議定書》上，各個國家全部都接受的一個概念，稱做“改性活生物體” Living Modified Organisms,簡稱LMOs,或者叫“遺傳飾變生物”Genetically Modified Organisms,GMOs。LMOs或GMOs就是指憑借現(xiàn)代生物技術(shù)獲得的遺傳材料新異組合的活生物體。實際上就是將外源DNA導(dǎo)入生物體基因組，引起了遺傳改變，改變了遺傳組成的生物，就是轉(zhuǎn)基因生物。
[0003]從1996年開始，轉(zhuǎn)基因植物大面積的推廣，如轉(zhuǎn)基因大豆、轉(zhuǎn)基因玉米、轉(zhuǎn)基因番茄等。在世界上，美國是轉(zhuǎn)基因技術(shù)發(fā)展最快的國家，其國內(nèi)轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物種類最多，種植面積也最大。目前美國60%以上的加工食品都是以轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物為原料。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分的方法。
[0005]本發(fā)明提供了一種輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分的方法，包括如下步驟:(I)將NF-K B-1uc轉(zhuǎn)基因小鼠分為兩組，第一組飼喂普通飼料，第二組飼喂待測飼料，所述待測飼料為待測食品與普通飼料的混合物；(2)所述步驟(I)進行3-14天(如3-7天、7-14天、3天、7天或14天)后，通過活體成像分別檢測第一組小鼠的熒光強度和第二組小鼠的熒光強度，如果第二組小鼠的熒光強度顯著高于第一組小鼠的熒光強度，待測食品中含有轉(zhuǎn)基因植物成分。所述待測飼料具體可為將I體積份待測食品與3體積份普通飼料混合得到的混合物。所述普通飼料具體可為北京華阜康生物科技股份有限公司的大小鼠維持料(產(chǎn)品代號為1022)。所述活體成像是采用精諾真活體動物成像系統(tǒng)進行的。所述轉(zhuǎn)基因植物可為轉(zhuǎn)基因玉米，更具體可為NK603轉(zhuǎn)基因玉米。
[0006]本發(fā)明還保護NF-K B-1uc轉(zhuǎn)基因小鼠在輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分中的應(yīng)用。所述轉(zhuǎn)基因植物可為轉(zhuǎn)基因玉米，更具體可為NK603轉(zhuǎn)基因玉米。
[0007]本發(fā)明還保護一種輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分的方法，包括如下步驟:(I)將TNF-a -1uc轉(zhuǎn)基因小鼠分為兩組，第一組飼喂普通飼料，第二組飼喂待測飼料，所述待測飼料為待測食品與普通飼料的混合物；(2)所述步驟(I)進行3-14天(如3-7天、7-14天、3天、7天或14天)后，通過活體成像分別檢測第一組小鼠的熒光強度和第二組小鼠的熒光強度，如果第二組小鼠的熒光強度顯著高于第一組小鼠的熒光強度，待測食品中含有轉(zhuǎn)基因植物成分。所述待測飼料具體可為將I體積份待測食品與3體積份普通飼料混合得到的混合物。所述普通飼料具體可為北京華阜康生物科技股份有限公司的大小鼠維持料(產(chǎn)品代號為1022)。所述活體成像是采用精諾真活體動物成像系統(tǒng)進行的。所述轉(zhuǎn)基因植物可為轉(zhuǎn)基因玉米，更具體可為ΝΚ603轉(zhuǎn)基因玉米。
[0008]本發(fā)明還保護TNF-α -1uc轉(zhuǎn)基因小鼠在輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分中的應(yīng)用。所述轉(zhuǎn)基因植物可為轉(zhuǎn)基因玉米，更具體可為NK603轉(zhuǎn)基因玉米。
[0009]本發(fā)明提供的方法操作簡便，成本低廉，結(jié)果判斷簡易，具有非常大的推廣和應(yīng)用價值。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1為實施例1中通過精諾真活體動物成像系統(tǒng)IVIS? 100觀察小鼠的照片。
[0011]圖2為實施例1中左肺、右肺和腹部的總熒光強度。
[0012]圖3為實施例2中通過精諾真活體動物成像系統(tǒng)IVIS? 100觀察NF- κ B-1uc轉(zhuǎn)基因小鼠的照片。
[0013]圖4為實施例2中NF-K B-1uc轉(zhuǎn)基因小鼠每個時間點，所有部位的熒光強度之和。
[0014]圖5為實施例2中通過精諾真活體動物成像系統(tǒng)IVIS? 100觀察TNF- a -1uc轉(zhuǎn)基因小鼠的照片。
[0015]圖6為實施例2中TNF-a -1uc轉(zhuǎn)基因小鼠每個時間點，所有部位的熒光強度之和。
[0016]圖7為實施例3中各組TNF-a -1uc轉(zhuǎn)基因小鼠的相對熒光強度。
[0017]圖8為實施例3中各組NF-κ B-1uc轉(zhuǎn)基因小鼠的相對熒光強度。
【具體實施方式】
[0018]以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。
[0019]NF-K B-1uc轉(zhuǎn)基因小鼠:購自南京模式動物研究所，產(chǎn)品目錄號為D0161。
[0020]TNF- a -1uc轉(zhuǎn)基因小鼠:購自南京模式動物研究所，產(chǎn)品目錄號為D0089。
[0021]脂多糖:購自SIGMA公司，產(chǎn)品目錄號為L2880。
[0022]熒光素酶底物(D-Luciferin)=Caliper 公司，貨號為 122796。
[0023]血管緊張素II (Angiotension II，Ang II):SIGMA 公司，貨號為 Α9525。
[0024]實施例中所用的轉(zhuǎn)基因玉米為NK603轉(zhuǎn)基因玉米(又稱轉(zhuǎn)基因玉米NK603，是在普通玉米中導(dǎo)入抗草甘膦基因得到的)。
[0025]實施例1、應(yīng)用脂多糖誘導(dǎo)炎癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子NF-K B
[0026]食物中的蛋白成分可通過影響腸道細(xì)菌引起機體的炎癥反應(yīng)。本實施例中利用小鼠攝入脂多糖的方法模擬體內(nèi)腸道細(xì)菌變化導(dǎo)致的炎性條件，利用精諾真小動物活體成像技術(shù)，檢測炎癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子NF-κ B的激活情況。
[0027]取NF-K B-1uc轉(zhuǎn)基因小鼠，腹腔注射脂多糖(用pH7.2的PBS緩沖液作為溶劑)，劑量為“ Img脂多糖/Kg小鼠”，分別于注射脂多糖后O小時(即剛完成注射)、I小時和2.5小時后，腹腔注射熒光素酶底物(I50mg熒光素酶底物/kg體重),然后立即通過精諾真活體動物成像系統(tǒng)IVIS? 100觀察小鼠，照片見圖1。左肺、右肺和腹部的總熒光強度見圖2。
[0028]可以觀察到，腹腔注射脂多糖I小時和2.5小時后，均可在小鼠左肺、右肺和腹部觀察到明顯的熒光，即小鼠左肺、右肺和腹部的NF-K B被明顯激活。
[0029]實施例2、應(yīng)用Ang II誘導(dǎo)炎癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子NF- κ B或炎癥因子TNF- α
[0030]高鹽飲食會引發(fā)機體內(nèi)Ang II增高，而增高的Ang II可引發(fā)體內(nèi)部分炎癥相關(guān)基因活性變化。本實施例中，在轉(zhuǎn)基因小鼠中利用Ang II灌泵(背部)，然后檢測炎癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子NF-κ B或炎癥因子TNF-α的變化。
[0031]取NF-κ B-1uc轉(zhuǎn)基因小鼠，在背部植入Ang II灌泵(用ρΗ7.2的PBS緩沖液作為Ang II的溶劑)，劑量為“1500ng/(lKg小鼠.分鐘)”，分別于植入后O天(即剛完成植入)、I天、3天、5天和7天后，腹腔注射熒光素酶底物，然后立即通過精諾真活體動物成像系統(tǒng)IVTS^ 100觀察小鼠，照片見圖3。每個時間點，所有部位的熒光強度之和見圖4。
[0032]取TNF- a -1uc轉(zhuǎn)基因小鼠，在背部植入Ang II灌泵(用ρΗ7.2的PBS緩沖液作為AngII的溶劑)，劑量為“1500ng/(lKg小鼠.分鐘)”，分別于植入后O天(即剛完成植入)、I天、3天、5天和7天后，腹腔注射熒光素酶底物，然后立即通過精諾真活體動物成像系統(tǒng)IVIS? 100觀察小鼠，照片見圖5。每個時間點，所有部位的熒光強度之和見圖6。
[0033]實施例3、檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分
[0034]一、采用TNF-α -1uc轉(zhuǎn)基因小鼠檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分
[0035]1、將TNF- a -1uc轉(zhuǎn)基因小鼠進行分組飼喂，每組3只，分組飼喂方式如下: [0036]第一組:喂養(yǎng)正常飼料(北京華阜康生物科技股份有限公司的大小鼠維持料，產(chǎn)品代號為1022)；
[0037]第二組:飼喂混合鼠料甲(將I體積份轉(zhuǎn)基因玉米的籽粒粉末與3體積份正常飼料混合，得到混合鼠料甲)；
[0038]第三組:飼喂混合鼠料乙(將I體積份普通玉米的籽粒粉末與3體積份正常飼料混合，得到混合鼠料乙);
[0039]第四組:飼喂混合鼠料丙(將I體積份玉米品種屯玉68的籽粒粉末與3體積份正常飼料混合，得到混合鼠料丙)。
[0040]分組飼喂前(O天)、飼喂3天、7天和14天后，腹腔注射熒光素酶底物(150mg熒光素酶底物/kg體重)，然后立即通過精諾真活體動物成像系統(tǒng)IVIS* 100觀察小鼠(飼喂7天后的照片見圖7)。
[0041]第一組小鼠和第二組小鼠飼喂7天后的照片見圖7。O天時，第一組小鼠和第二組小鼠熒光強度相同(每個小鼠個體所有部位的熒光強度之和)，將O天時小鼠的熒光強度作為1，計算飼喂3天、7天和14天后，各組小鼠的相對熒光強度，見圖7。結(jié)果表明，從飼喂3天開始，第二組小鼠的熒光強度顯著高于第一組小鼠。飼喂3天、7天和14天后，第三組小鼠的熒光強度、第四組小鼠的熒光強度均與第一組小鼠沒有顯著差異。飼喂3天、7天和14天后，同組小鼠之間的熒光強度均沒有顯著差異。
[0042]二、采用NF-K B-1uc轉(zhuǎn)基因小鼠檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分
[0043]將NF- κ B-1uc轉(zhuǎn)基因小鼠代替TNF- a -1uc轉(zhuǎn)基因小鼠進行步驟一。
[0044]第一組小鼠和第二組小鼠飼喂14天后的照片見圖8。O天時，第一組小鼠和第二組小鼠熒光強度相同(每個小鼠個體所有部位的熒光強度之和)，將O天時小鼠的熒光強度作為1，計算飼喂3天、7天和14天后，各組小鼠的相對熒光強度，見圖8。結(jié)果表明，從飼喂3天開始，第二組小鼠的熒光強度顯著高于第一組小鼠。飼喂3天、7天和14天后，第三組小鼠的熒光強度和第四組小鼠的熒光強度均與第一組小鼠沒有顯著差異。飼喂3天、7天和14天后，同組小鼠之間的熒光強度均沒有顯著差異。
【權(quán)利要求】
1.一種輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分的方法，包括如下步驟: (1)將NF-KB-1uc轉(zhuǎn)基因小鼠分為兩組，第一組飼喂普通飼料，第二組飼喂待測飼料，所述待測飼料為待測食品與普通飼料的混合物； (2)所述步驟(I)進行3-14天后，通過活體成像分別檢測第一組小鼠的熒光強度和第二組小鼠的熒光強度，如果第二組小鼠的熒光強度顯著高于第一組小鼠的熒光強度，待測食品中含有轉(zhuǎn)基因植物成分。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:所述活體成像是采用精諾真活體動物成像系統(tǒng)進行的。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述待測飼料為將I體積份待測食品與3體積份普通飼料混合得到的混合物。
4.如權(quán)利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于:所述普通飼料為北京華阜康生物科技股份有限公司的大小鼠維持料。
5.NF- K B-1uc轉(zhuǎn)基因小鼠在輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分中的應(yīng)用。
6.一種輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分的方法，包括如下步驟: (1)將TNF-a-1uc轉(zhuǎn)基因小鼠分為兩組，第一組飼喂普通飼料，第二組飼喂待測飼料，所述待測飼料為待測食品與普通飼料的混合物； (2)所述步驟(I)進行3-14天后，通過活體成像分別檢測第一組小鼠的熒光強度和第二組小鼠的熒光強度，如果第二組小鼠的熒光強度顯著高于第一組小鼠的熒光強度，待測食品中含有轉(zhuǎn)基因植物成分。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于:所述活體成像是采用精諾真活體動物成像系統(tǒng)進行的。
8.如權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于:所述待測飼料為將I體積份待測食品與3體積份普通飼料混合得到的混合物。
9.如權(quán)利要求6至8中任一所述的方法，其特征在于:所述普通飼料為北京華阜康生物科技股份有限公司的大小鼠維持料。
10.TNF- a -1uc轉(zhuǎn)基因小鼠在輔助檢測食品中是否含有轉(zhuǎn)基因植物成分中的應(yīng)用。
【文檔編號】G01N21/64GK103926224SQ201410117225
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年3月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月26日
【發(fā)明者】杜杰, 樸春梅, 劉婷婷, 鄭師, 謝道昕 申請人:北京市心肺血管疾病研究所