抗苯乙醇胺a單克隆抗體、抗原檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及抗苯乙醇胺A單克隆抗體，以及產(chǎn)生該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株、含有該抗苯乙醇胺A單克隆抗體的檢測(cè)試劑盒，屬于免疫學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】和瘦肉精檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明所述的抗苯乙醇胺A單克隆抗體的效價(jià)高達(dá)1：409600，親和常數(shù)為8.8×108L/mol，與β-激動(dòng)劑類似物的交叉反應(yīng)率CR(％)均小于0.1％，半數(shù)抑制率IC50為0.18ng/ml。以該抗體為基礎(chǔ)的試劑盒靈敏度高、穩(wěn)定性好、精密度高，可用于苯乙醇胺A殘留的快速檢測(cè)。
CCTCC NO：C2014222
20141128
【專利說(shuō)明】抗苯乙醇胺A單克隆抗體、抗原檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及抗苯乙醇胺A單克隆抗體，以及產(chǎn)生該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株、 含有該抗苯乙醇胺A單克隆抗體的檢測(cè)試劑盒，屬于免疫學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】和瘦肉精檢測(cè)技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 苯乙醇胺A(PhenylethanolamineA,PEAA)俗稱克倫巴胺，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 2-[4-(4_硝基苯基）丁基-2-羥基氨基]-1-甲氧基苯乙醇，英文名稱2-(4-(nit rophenyl)butan-2-ylamino) _1_(4-me-thoxyphenyl)ethanol,分子式為C19H24N204,化學(xué) 結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
【權(quán)利要求】
1. 一種抗苯乙醇胺A單克隆抗體，其特征在于，該單克隆抗體由保藏號(hào)為CCTCC N0:C2014222的雜交瘤細(xì)胞株P(guān)EAA-3B5產(chǎn)生。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗苯乙醇胺A單克隆抗體，其特征在于，該抗苯乙醇胺A單克 隆抗體的亞型為IgGjK)。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的苯乙醇胺A單克隆抗體在用于配制檢測(cè)生物樣品中的苯乙 醇胺A殘留的非診斷目的試劑盒中的應(yīng)用。
4. 一種產(chǎn)生如權(quán)利要求1或2所述抗苯乙醇胺A單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株 PEAA-3B5,其特征在于，其保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC NO :C2014222。
5. -種檢測(cè)試劑盒，其特征在于，該試劑盒含有如權(quán)利要求1所述的苯乙醇胺A單克隆 抗體。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有經(jīng)辣根過(guò)氧化物 酶、黑曲霉葡萄糖氧化酶、小牛腸堿性磷酸酶或大腸桿菌P-D-半乳糖苷酶標(biāo)記的苯乙醇 胺A單克隆抗體。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還含有用苯乙醇胺A和 載體蛋白的偶聯(lián)物PEAA-0VA預(yù)包被的檢測(cè)板、苯乙醇胺A標(biāo)準(zhǔn)品液、顯色液和洗滌液。
8. -種制備權(quán)利要求1或2所述的苯乙醇胺A單克隆抗體的方法，其特征在于，包括如 下步驟： ⑴將苯乙醇胺A與牛血清白蛋白或雞卵白蛋白采用重氮化法連接，制備人工抗原； ⑵用步驟⑴所得抗原免疫小鼠，免疫后小鼠斷尾取血，檢測(cè)該血清的效價(jià)和抑制，選取 免疫效果好的小鼠； ⑶取步驟(2)所述免疫效果好的小鼠的脾細(xì)胞，使其與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，以選擇性 培養(yǎng)基培養(yǎng)所得融合細(xì)胞，測(cè)定抗體的效價(jià)和抑制，篩選陽(yáng)性孔，通過(guò)有限稀釋法對(duì)陽(yáng)性孔 進(jìn)行亞克隆，直至建立單一抗苯乙醇胺A單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株； ⑷將步驟⑶中所得的單一抗苯乙醇胺A單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株注入石蠟油致敏 的同系小鼠腹腔，制備腹水； (5)將步驟⑷制備的腹水經(jīng)過(guò)辛酸硫酸銨和Protein G親和層析柱純化，獲得抗苯乙醇 胺A的單克隆抗體。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK104459137SQ201410727621
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月4日
【發(fā)明者】李春生, 李君華, 吳萌, 李亞璞, 程華, 陳英珠, 張小兵, 董超, 閆靜輝 申請(qǐng)人:河北省科學(xué)院生物研究所