本發(fā)明涉及一種n-芴甲氧羰基-s-乙酰氨甲基-青霉胺的檢測(cè)方法，尤其涉及一種能夠有效質(zhì)控n-芴甲氧羰基-s-乙酰氨甲基-青霉胺及其異構(gòu)體的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

1、隨著生物技術(shù)的發(fā)展，生物活性廣、安全性好、選擇性高的多肽藥物備受關(guān)注。n-芴甲氧羰基-s-乙酰氨甲基-青霉胺是一種保護(hù)氨基酸，作為合成多肽藥物的基本原料，其由青霉胺結(jié)構(gòu)中的硫醇基和氨基分別經(jīng)過乙酰氨基甲基(acm)和n-芴甲氧羰基(fmoc)保護(hù)后得到。然后n-芴甲氧羰基-s-乙酰氨甲基-青霉胺通過液相或固相合成方法制得含有l(wèi)-青霉胺或d-青霉胺的肽，以產(chǎn)生高純度的多肽藥物。

2、為確保多肽藥物臨床用藥的安全有效，必須從合成原料進(jìn)行源頭控制，才能有效控制終產(chǎn)品的質(zhì)量。多肽藥物的質(zhì)量控制必須包含對(duì)n-芴甲氧羰基-s-乙酰氨甲基-青霉胺的質(zhì)量控制，特別是手性雜質(zhì)，但是針對(duì)其手性雜質(zhì)尚未形成有效的檢測(cè)方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、發(fā)明目的：本發(fā)明旨在提供一種針對(duì)n-芴甲氧羰基-s-乙酰氨甲基-青霉胺及其異構(gòu)體能夠有效洗脫、分離和定量的檢測(cè)方法。

2、技術(shù)方案：本發(fā)明所述的具有如下結(jié)構(gòu)的n-芴甲氧羰基-s-乙酰氨甲基-青霉胺及其異構(gòu)體的檢測(cè)方法，

3、

4、包括以下步驟：

5、(1)配制樣品：以正己烷-低級(jí)烷醇溶液將樣品配制成設(shè)定濃度；

6、(2)檢測(cè)：采用正相色譜柱，以正己烷為流動(dòng)a，酸性電荷遷移劑-低級(jí)烷基醇溶液為流動(dòng)相b，流動(dòng)相a的體積分?jǐn)?shù)不低于90％，進(jìn)行洗脫；

7、(3)分析：記錄色譜圖，計(jì)算結(jié)果。

8、優(yōu)選，步驟(1)配制的樣品包含定位溶液、供試品溶液、供試品加標(biāo)溶液和稀釋劑，具體配制方法如下：

9、定位溶液：取fmoc-l-pen(acm)-oh和fmoc-d-pen(acm)-oh各適量，加稀釋液溶解并稀釋制成每1ml中各約含0.1mg的溶液。

10、供試品溶液：取fmoc-l/d-pen(acm)-oh適量，加稀釋液溶解并稀釋制成每1ml中約含1.0mg的溶液。

11、稀釋液：正己烷-低級(jí)烷基醇溶液。

12、優(yōu)選，步驟(1)所述的低級(jí)烷基醇選自甲醇、無水乙醇、異丙醇中的至少一種。

13、進(jìn)一步優(yōu)選，所述的低級(jí)烷基醇為無水乙醇。

14、優(yōu)選，步驟(1)所述正己烷與低級(jí)烷醇的體積比為1:1。

15、優(yōu)選，步驟(2)所述的酸性電荷遷移劑選自三氟乙酸、乙酸、甲酸、甲基磺酸中的至少一種。

16、進(jìn)一步優(yōu)選，所述的酸性電荷遷移劑為三氟乙酸。

17、優(yōu)選，步驟(2)所述的低級(jí)烷基醇選自無水乙醇、異丙醇中的至少一種。

18、進(jìn)一步優(yōu)選，所述的低級(jí)烷基醇為無水乙醇。

19、優(yōu)選，步驟(2)所述的酸性電荷遷移劑在流動(dòng)相b中的體積分?jǐn)?shù)為0.05％～0.5％。

20、進(jìn)一步優(yōu)選，所述的酸性電荷遷移劑在流動(dòng)相b中的體積分?jǐn)?shù)為0.1％。

21、優(yōu)選，步驟(2)所述洗脫的流動(dòng)相中，流動(dòng)相a:流動(dòng)相b＝90:10(v/v)。

22、進(jìn)一步優(yōu)選，所述的流動(dòng)相為正己烷:0.1％三氟乙酸-無水乙醇溶液＝90:10(v/v)。

23、優(yōu)選，步驟(2)所述的正相色譜柱以表面涂敷有纖維素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)的硅膠為填充劑。

24、進(jìn)一步優(yōu)選，所述正相色譜柱的柱長為250mm，直徑為4.6mm，填料粒徑為5μm。

25、更進(jìn)一步優(yōu)選，所述的正相色譜柱為daicel?chiralpak?ic(4.6×250mm，5μm)。

26、優(yōu)選，步驟(2)所述檢測(cè)的檢測(cè)波長為210～280nm。

27、進(jìn)一步優(yōu)選，所述檢測(cè)的檢測(cè)波長為265nm。

28、優(yōu)選，步驟(2)所述色譜柱的柱溫為20～45℃，流動(dòng)相的流速為0.7～1.2ml/min。

29、進(jìn)一步優(yōu)選，所述色譜柱的柱溫為38～42℃，流動(dòng)相的流速為0.7～0.9ml/min。

30、更進(jìn)一步優(yōu)選，所述色譜柱的柱溫為40℃，流動(dòng)相的流速為0.8ml/min。

31、優(yōu)選，步驟(3)采用面積歸一化法計(jì)算各組分含量。

32、有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下顯著優(yōu)點(diǎn)：

33、本發(fā)明設(shè)計(jì)的n-芴甲氧羰基-s-乙酰氨甲基-青霉胺及其異構(gòu)體的檢測(cè)方法，通過對(duì)配制溶劑以及液相色譜條件的優(yōu)化，解決了樣品的溶解問題，改善了色譜峰峰形、雜質(zhì)干擾和分離度。該方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高、操作簡便且穩(wěn)定性良好，為n-芴甲氧羰基-s-乙酰氨甲基-青霉胺工業(yè)化生產(chǎn)提供了高效、可靠的檢測(cè)方法。

技術(shù)特征：

1.一種n-芴甲氧羰基-s-乙酰氨甲基-青霉胺及其異構(gòu)體的檢測(cè)方法，所述n-芴甲氧羰基-s-乙酰氨甲基-青霉胺及其異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)如下：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(1)所述的低級(jí)烷基醇選自甲醇、無水乙醇、異丙醇中的至少一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(1)所述正己烷與低級(jí)烷醇的體積比為1:1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)所述的酸性電荷遷移劑選自三氟乙酸、乙酸、甲酸、甲基磺酸中的至少一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)所述的低級(jí)烷基醇選自無水乙醇、異丙醇中的至少一種。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)所述的酸性電荷遷移劑在流動(dòng)相b中的體積分?jǐn)?shù)為0.05％～0.5％。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)所述的正相色譜柱以表面涂敷有纖維素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)的硅膠為填充劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述正相色譜柱的柱長為250mm，直徑為4.6mm，填料粒徑為5μm。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)所述檢測(cè)的檢測(cè)波長為210～280nm。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)所述色譜柱的柱溫為20～45℃，流動(dòng)相的流速為0.7～1.2ml/min。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種N?芴甲氧羰基?S?乙酰氨甲基?青霉胺及其異構(gòu)體的檢測(cè)方法，通過對(duì)配制溶劑以及液相色譜條件的優(yōu)化，解決了樣品的溶解問題，改善了色譜峰峰形、雜質(zhì)干擾和分離度。該方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高、操作簡便且穩(wěn)定性良好，為N?芴甲氧羰基?S?乙酰氨甲基?青霉胺工業(yè)化生產(chǎn)提供了高效、可靠的檢測(cè)方法。

技術(shù)研發(fā)人員：楊秀艷,張偉偉,李安排
受保護(hù)的技術(shù)使用者：蘇州正濟(jì)醫(yī)藥研究有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21