本發(fā)明屬于藥物分析，特別是涉及一種高效液相色譜法分離和檢測酒石酸阿福特羅中間體中有關物質(zhì)的方法。

背景技術：

1、酒石酸阿福特羅化學名為n-[2-羥基-5-[(1r)-1-羥基-2-[(1r)-2-(4-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺-l-(+)-酒石酸鹽，由美國sepracor公司研制開發(fā)，2006年10月獲fda批準，并于2007年4月首先在美國上市，商品名為brovana。本品適用于慢性阻塞性肺疾病(copd)患者支氣管收縮的長期維持治療，包括慢性支氣管炎和肺氣腫。酒石酸阿福特羅的合成主要分為外消旋法和不對稱合成法。

2、酒石酸阿福特羅的合成路線為(酒石酸阿福特羅的合成工藝研究，陳嬌等，廣州化工)：

3、

4、其中間體4(本申請中命名為中間體ⅱ)為具有治療活性的結構，其異構體(s)-n-[2-(芐氧基)-5-(2-溴-1-羥乙基)苯基]甲酰胺(本申請中命名為雜質(zhì)ⅱ-5)為非活性異構體，作為雜質(zhì)進行質(zhì)量控制；另外，n-[2-(芐氧基)-5-(2-溴-1-羥乙基)苯基]乙酰胺(本申請中命名為雜質(zhì)ⅱ-9)的來源為中間體ⅱ制備過程中生成的乙酰化雜質(zhì)。

5、雜質(zhì)ⅱ-5的結構式為：

6、

7、雜質(zhì)ⅱ-9的結構式為：

8、

9、經(jīng)查詢文獻及專利，現(xiàn)有沒有查詢到分離酒石酸阿福特羅中間體中對映異構體ⅱ-5和雜質(zhì)ⅱ-9的文獻和專利，處于技術空缺狀態(tài)。由于對映異構體和酒石酸阿福特羅中間體較難分離，且雜質(zhì)ⅱ-9和酒石酸阿福特羅中間體結構相似，兩者也較難分離，現(xiàn)有技術無法有效監(jiān)控酒石酸阿福特羅中間體。

技術實現(xiàn)思路

1、為了克服現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供了一種高效液相色譜法分離和檢測酒石酸阿福特羅中間體中有關物質(zhì)的方法，能夠有效分離酒石酸阿福特羅中間體ⅱ中異構體雜質(zhì)及雜質(zhì)ⅱ-9。本發(fā)明提供的技術方案如下所述：

2、一種高效液相色譜法分離和檢測酒石酸阿福特羅中間體中有關物質(zhì)的方法，所述的中間體為中間體ⅱ，結構式為：

3、

4、采用高效液相色譜法，色譜柱填料用纖維素-三(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)鍵合硅膠為填充劑；

5、流動相為正己烷-乙醇溶液。

6、進一步的，流動相中，正己烷與乙醇體積比例為87∶13～89∶11，優(yōu)選88∶12。

7、優(yōu)選的，所述色譜柱采用大賽璐oz-3，4.6mm×250mm，3μm或效能相當?shù)纳V柱。

8、優(yōu)選的，色譜柱柱溫為20～30℃，優(yōu)選25℃。

9、優(yōu)選的，流動相流速為0.9～1.1ml/min，優(yōu)選1.0ml/min。

10、優(yōu)選的，檢測器采用紫外檢測器，檢測波長為214nm。

11、優(yōu)選的，所述酒石酸阿福特羅中間體中有關物質(zhì)包括異構體雜質(zhì)ⅱ-5和雜質(zhì)ⅱ-9。

12、優(yōu)選的，所述方法還包括樣品的制備：

13、供試品溶液：取本品加稀釋劑溶解并稀釋至濃度為0.4mg/ml。

14、對照品溶液：?、?5對照品和ⅱ-9對照品各適量，精密稱定，加稀釋劑溶解并定量稀釋制成每1ml中含ⅱ-5?10μg和ⅱ-9?10μg的溶液。

15、優(yōu)選的，所述方法還包括測定法：

16、精密量取稀釋劑、供試品溶液與對照品溶液，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標法以峰面積計算供試品溶液中雜質(zhì)ⅱ-5和雜質(zhì)ⅱ-9的含量，％；

17、計算公式：

18、

19、式中：a供試為供試品溶液色譜圖中ⅱ-5或ⅱ-9的峰面積；

20、a對照為對照品溶液色譜圖中ⅱ-5或ⅱ-9的峰面積；

21、m供試為供試品的稱樣量，mg；

22、m對照為ⅱ-5或ⅱ-9對照品的稱樣量，mg；

23、v供試為供試品溶液的稀釋體積，ml；

24、v對照為ⅱ-5或ⅱ-9對照品溶液的稀釋體積，ml；

25、n為ⅱ-5或ⅱ-9對照品的含量。

26、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：

27、1、本發(fā)明提供的檢測方法有效解決了酒石酸阿福特羅中間體中對映異構體和雜質(zhì)ⅱ-9因與中間體結構相似而造成常規(guī)方法色譜圖完全重合、難分離的問題，與其他色譜柱，包括c8的色譜柱、不同填料的反相手性異構體色譜柱和不同填料的正相手性異構體色譜柱等相比，發(fā)現(xiàn)使用正相手性異構體色譜柱，具有低背壓的優(yōu)勢，將酒石酸阿福特羅中間體、對映異構體和雜質(zhì)ⅱ-9達到有效的分離；同時，色譜柱需要與特定成分和比例的流動相配合，可準確地對上述兩個雜質(zhì)進行定量分析，更好的控制了酒石酸阿福特羅中間體的質(zhì)量。

28、2、本發(fā)明方法專屬性和適用性強，檢測靈敏度高，線性關系良好，精密度和準確度高，檢測方法的耐用性較好，檢測效率高，色譜條件存在一定程度波動時，不影響雜質(zhì)的準確檢出和定量，可有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量。

29、3、現(xiàn)有技術中，酒石酸阿福特羅中間體中對映異構體和雜質(zhì)ⅱ-9缺乏有效的檢測方法，而本發(fā)明為長期缺乏有效檢測手段的雜質(zhì)提供了一種檢測手段，彌補了本行業(yè)不能對酒石酸阿福特羅中間體進行更為全面的質(zhì)量控制的不足。

30、4，本發(fā)明提供的方法可以實現(xiàn)即使存在其他雜質(zhì)也不會影響對映異構體和雜質(zhì)ⅱ-9的有效檢出和準確定量，因此，本發(fā)明為酒石酸阿福特羅中間體提供了一種完善的分析方法。

技術特征：

1.一種高效液相色譜法分離和檢測酒石酸阿福特羅中間體中有關物質(zhì)的方法，所述的中間體為中間體ⅱ，結構式為：

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，流動相中，正己烷與乙醇體積比例為87∶13～89∶11。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，流動相中，正己烷與乙醇體積比例為88∶12。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜柱采用大賽璐oz-3，4.6mm×250mm，3μm或效能相當?shù)纳V柱。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，色譜柱柱溫為20～30℃。

6.根據(jù)權利要求1所述的方法，流動相流速為0.9～1.1ml/min，優(yōu)選1.0ml/min。

7.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，檢測器采用紫外檢測器，檢測波長為214nm。

8.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述酒石酸阿福特羅中間體中有關物質(zhì)包括異構體雜質(zhì)ⅱ-5和雜質(zhì)ⅱ-9，所述雜質(zhì)ⅱ-5的結構式為：

9.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括樣品的制備：

10.根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法還包括測定法：

技術總結
本發(fā)明公開了一種高效液相色譜法分離和檢測酒石酸阿福特羅中間體中有關物質(zhì)的方法，采用高效液相色譜法，色譜柱填料用纖維素?三(3?氯?4?甲基苯基氨基甲酸酯)鍵合硅膠為填充劑；流動相為正己烷?乙醇溶液。本發(fā)明提供的檢測方法有效解決了酒石酸阿福特羅中間體中對映異構體和雜質(zhì)Ⅱ?9因與中間體結構相似而造成常規(guī)方法色譜圖完全重合，難分離的問題，與其他色譜柱，包括C8的色譜柱、不同填料的反相手性異構體色譜柱和不同填料的正相手性異構體色譜柱等相比，發(fā)現(xiàn)使用正相手性異構體色譜柱，具有低背壓的優(yōu)勢，將酒石酸阿福特羅中間體、對映異構體和雜質(zhì)Ⅱ?9達到有效的分離，可準確地對上述兩個雜質(zhì)進行定量分析，更好的控制了酒石酸阿福特羅中間體的質(zhì)量。

技術研發(fā)人員：劉飛飛,徐東,肖楠,劉燕芳,王麗峰,姜明明,孫孝麗,孫迎基,李鐵軍
受保護的技術使用者：山東泰合醫(yī)藥科技有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/10/21