本發(fā)明屬于免疫學檢測，具體涉及一種用于免疫組化染色的抗體預混液及其制備方法。

背景技術：

1、免疫組織化學技術是目前臨床組織病理檢測中最常用的一種免疫學檢測方法，該方法可以用于腫瘤的分型、預后的預測以及用藥的指導。

2、目前的檢測方法中，無論是手工檢測還是機器檢測都涉及比較冗長的檢測步驟：烤片、脫蠟水化、抗原修復、一抗孵育、二抗孵育、dab顯色、蘇木素復染以及脫水透明和封片，全部流程通常需要4-6個小時。存在染色流程步驟多，染色流程和所消耗的時間長，使得該項目的檢測效率比較低的問題。

技術實現(xiàn)思路

1、為了解決上述問題中的至少一種，本發(fā)明提供了一種用于免疫組化染色的抗體預混液及其制備方法，將一抗和二抗提前進行預混，預混后的抗體進行免疫組化染色時極大地縮短了染色時間，在使染色過程的操作更加簡便的同時也不容易出錯。

2、為了達到上述目的，本發(fā)明采用了如下技術手段：

3、本發(fā)明的第一方面提供了一種用于免疫組化染色的抗體預混液的制備方法，方法包括：將一抗和二抗按照不小于2：1的體積比預混至少5min，預混結(jié)束后用超濾管進行超濾。

4、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述一抗和二抗的混合體積比優(yōu)選為(4-16)：1。

5、在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方案中，在35-37℃的溫度下預混5-40分鐘。優(yōu)選地，在35-37℃的溫度下預混10-30min。

6、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述一抗為單克隆抗體，所述二抗為能與一抗結(jié)合的多克隆抗體，并且所述二抗上標記有顯色劑。

7、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述二抗采用顯色劑直接標記或者與結(jié)合有顯色劑的多聚物偶聯(lián)，所述顯色劑選自酶、熒光素、同位素、金屬離子、量子點中的一種。

8、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述超濾管為100kda超濾管。

9、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述超濾的離心速度為10000-12000rpm，離心時間為4-6分鐘。在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方案中，超濾的離心速度為10000rpm，離心時間為5分鐘。

10、本發(fā)明的第二方面提供根據(jù)第一方面所述的方法制備得到的抗體預混液在手工/全自動免疫組織化學檢測試劑盒中的應用。

11、在本發(fā)明的一些實施方案中，免疫組化染色過程中，采用抗體預混液進行孵育，孵育時間為15-20分鐘。

12、一種手工/全自動免疫組織化學檢測試劑盒，包括第一方面所述方法中用到的一抗、二抗以及超濾管，所述一抗的體積至少為二抗體積的2倍，在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方案中，超濾管為100kda超濾管，在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方案中，一抗與二抗的體積比為(4-16)：1。

13、一種利用前述試劑盒進行手工/全自動免疫組織化學檢測以縮短檢測時間的方法，在免疫組化染色孵育步驟中，將試劑盒中的一抗和二抗進行預混，進一步地，在35-37℃的溫度下預混5-40分鐘，優(yōu)選10-30min，預混結(jié)束后用超濾管進行超濾，然后用抗體預混液進行一步孵育，采用超濾后的抗體預混液進行孵育15-20分鐘。優(yōu)選地，抗體預混液采用一抗與二抗按照體積比(4-16)：1的比例，預混結(jié)束后用采用100kda超濾管進行超濾。

14、本發(fā)明的第三方面提供了一種縮短手工/全自動免疫組織化學檢測時間的方法：在免疫組化染色孵育步驟中，采用一抗和二抗的抗體預混液進行一步孵育，所述抗體預混液采用一抗與二抗按照體積比不小于2:1的比例進行混合，預混結(jié)束后用超濾管進行超濾，采用超濾后的抗體預混液進行孵育15-20分鐘。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，抗體預混液采用一抗與二抗按照體積比(4-16)：1的比例，在35-37℃的溫度下預混5-40分鐘，優(yōu)選10-30min，預混結(jié)束后用超濾管進行超濾，優(yōu)選地，采用100kda超濾管。

15、本發(fā)明的有益效果

16、相對于現(xiàn)有技術，本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明通過提前將免疫組化染色過程中需要分步孵育的一抗和二抗按照至少2:1的體積比進行預混，將分步孵育簡化為一步孵育，減少檢測步驟，一抗、二抗預混后更縮短了染色時間，一步孵育15-20min即可完成，使得染色過程的操作更加簡便的同時也不容易出錯。

17、染色時間縮短也帶來整個免疫組化檢測所用時間縮短，簡化了免疫組化檢測流程，檢測效率提升，較常規(guī)染色操作，節(jié)約時間36.6％。

技術特征：

1.一種用于免疫組化染色的抗體預混液的制備方法，其特征在于：所述方法包括將一抗和二抗按照不小于2:1的體積比進行預混至少5min，預混結(jié)束后用超濾管進行超濾。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述一抗和二抗的預混體積比為(4-16)：1。

3.根據(jù)權利1或2所述的方法，其特征在于：所述預混的時間為5-40min，預混溫度為35℃-37℃。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述一抗為單克隆抗體，所述二抗為能與所述一抗結(jié)合的多克隆抗體，且所述二抗上標記有顯色劑。

5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于，所述二抗采用顯色劑直接標記或者與結(jié)合有顯色劑的多聚物偶聯(lián)，所述顯色劑選自酶、熒光素、同位數(shù)、金屬離子、量子點中的一種。

6.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述超濾管為100kda超濾管。

7.根據(jù)權利要求6所述的方法，其特征在于，所述超濾的離心速度為10000-12000rpm，離心時間為4-6分鐘。

8.根據(jù)權利要求1-7任一項中所述方法制備得到的抗體預混液在制備手工/全自動免疫組織化學檢測試劑盒中的應用。

9.根據(jù)權利要求8所述的應用，其特征在于：免疫組化染色過程中，采用抗體預混液進行孵育，孵育時間為15-20分鐘。

10.一種縮短手工/全自動免疫組織化學檢測時間的方法，其特征在于：在免疫組化染色抗體孵育步驟中，將一抗與二抗按照體積比不小于2:1的比例進行混合，預混結(jié)束后用超濾管進行超濾，采用超濾后的抗體預混液進行一步孵育，孵育時間為15-20分鐘。

技術總結(jié)
本發(fā)明公開了一種用于免疫組化染色的抗體預混液及其制備方法：將一抗和二抗按照不小于2：1的體積比進行預混至少5min，預混結(jié)束后用超濾管進行超濾。本發(fā)明通過提前將免疫組化染色過程中需要分步孵育的一抗和二抗按照不小于2：1的體積比進行預混，將分步孵育簡化為一步孵育，減少檢測步驟，一抗、二抗預混后更縮短了染色時間，也使得染色過程的操作更加簡便的同時也不容易出錯；簡化了免疫組化檢測流程，檢測效率提升，較常規(guī)染色操作，節(jié)約時間36.6％。

技術研發(fā)人員：吳佳,章月凱,殷梵鈞,蔡寧
受保護的技術使用者：圖凌（杭州）生物醫(yī)藥有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/10/21