本發(fā)明涉及生物組織樣本制作，尤其涉及一種降低組織自發(fā)熒光的方法。

背景技術(shù)：

1、核酸熒光探針檢測(cè)技術(shù)主要使用帶有熒光染料的探針特異性結(jié)合目標(biāo)核酸序列，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)靶核酸的檢測(cè)，該技術(shù)具有靈敏性高、特異性強(qiáng)的特性。近年來(lái)，基于核酸熒光探針檢測(cè)技術(shù)已發(fā)展出多種檢測(cè)方法，包括原位雜交、實(shí)時(shí)熒光定量pcr、分子信標(biāo)檢測(cè)等，該技術(shù)在檢測(cè)速度、準(zhǔn)確性和敏感性等多方面都具有優(yōu)勢(shì)，并成為了早期發(fā)現(xiàn)和監(jiān)測(cè)疾病的理想工具。

2、在熒光檢測(cè)中，自發(fā)熒光是常見的干擾因素，肝臟、腎臟等代謝旺盛的組織細(xì)胞中，存在大量的nadp-nadph轉(zhuǎn)換現(xiàn)象，同時(shí)累積核黃素、脂褐素等內(nèi)源性物質(zhì)；而在一些血管豐富的組織中，膠原蛋白和彈性蛋白含量也較高。這些類型的分子在熒光顯微鏡下具有較強(qiáng)的自發(fā)熒光和背景，嚴(yán)重影響熒光探針成像結(jié)果。比如紅細(xì)胞中的血紅素基團(tuán)，其卟啉環(huán)結(jié)構(gòu)導(dǎo)致其呈現(xiàn)紅色自發(fā)熒光；膠原蛋白主要集中在300-450nm左右的藍(lán)光區(qū)域；nadh發(fā)射波長(zhǎng)約為450nm；而脂褐素在500-695nm處背景信號(hào)最強(qiáng)烈。針對(duì)這一系列問(wèn)題，一些掃描儀器以及軟件通過(guò)優(yōu)化算法去除背景信號(hào)，然而對(duì)于真實(shí)信號(hào)的識(shí)別依舊存在較大問(wèn)題。

3、有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種降低組織自發(fā)熒光的方法，該方法能有效降低組織背景熒光，排除假陽(yáng)性信號(hào)干擾，從而實(shí)現(xiàn)相關(guān)信號(hào)的精準(zhǔn)檢測(cè)。

2、具體的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

3、第一方面，本發(fā)明提供降低組織自發(fā)熒光的方法，組織樣本依次經(jīng)固定處理和滲透處理后，還包括如下處理a、b、c和d中的至少一種降噪處理步驟；

4、處理a：置于20±2?mg/ml的茚三酮溶液中反應(yīng)10-20min；

5、處理b：置于0.1±0.01?g/ml的sds溶液中反應(yīng)15-25min；

6、處理c：置于1±0.1?vol%的蘇丹黑b溶液中反應(yīng)5-15min；

7、處理d：置于50±5?mm的nh4cl溶液中反應(yīng)15-25min。

8、作為其中一種優(yōu)選地實(shí)施方式，所述組織樣本為植物樣本，所述方法包括處理a。

9、作為其中一種優(yōu)選地實(shí)施方式，所述組織樣本為兩棲類動(dòng)物肢干樣本，所述方法包括處理b和/或處理c。

10、作為其中一種優(yōu)選地實(shí)施方式，所述組織樣本為動(dòng)物腦樣本，所述方法包括處理c。

11、作為其中一種優(yōu)選地實(shí)施方式，所述組織樣本為動(dòng)物肝臟樣本，所述方法包括處理d。

12、本發(fā)明針對(duì)不同組織類型，采用不同的背景清除試劑及處理方法，可有效排除假陽(yáng)性信號(hào)干擾，降低組織自發(fā)熒光，實(shí)現(xiàn)相關(guān)熒光信號(hào)的精準(zhǔn)檢測(cè)。

13、優(yōu)選地，所述組織樣本的切片厚度為10±5?um。

14、優(yōu)選地，所述固定處理所用試劑為70?vol%的甲醇溶液，處理溫度為-20±5℃，處理時(shí)間為30-60min。

15、優(yōu)選地，所述滲透處理所用試劑為1±0.1?vol%的sds溶液，處理時(shí)間為1.5-3min。

16、優(yōu)選地，選用的染色劑包括dapi溶液。

17、優(yōu)選地，染色時(shí)間為4-6min。

18、有益效果

19、本發(fā)明提供了一種降低組織自發(fā)熒光的方法，組織樣本依次經(jīng)固定處理和滲透處理后，還包括降噪處理步驟。本發(fā)明所述降噪處理步驟可針對(duì)不同組織類型，采用不同的背景清除試劑及處理方法，進(jìn)而能有效排除假陽(yáng)性信號(hào)干擾，降低組織自發(fā)熒光，實(shí)現(xiàn)相關(guān)熒光信號(hào)的精準(zhǔn)檢測(cè)。

技術(shù)特征：

1.降低組織自發(fā)熒光的方法，其特征在于，組織樣本依次經(jīng)固定處理和滲透處理后，還包括如下處理a、b、c和d中的至少一種降噪處理步驟；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述降低組織自發(fā)熒光的方法，其特征在于，所述組織樣本為植物樣本，所述方法包括處理a。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述降低組織自發(fā)熒光的方法，其特征在于，所述組織樣本為兩棲類動(dòng)物肢干樣本，所述方法包括處理b和/或處理c。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述降低組織自發(fā)熒光的方法，其特征在于，所述組織樣本為動(dòng)物腦樣本，所述方法包括處理c。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述降低組織自發(fā)熒光的方法，其特征在于，所述組織樣本為動(dòng)物肝臟樣本，所述方法包括處理d。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述降低組織自發(fā)熒光的方法，其特征在于，所述組織樣本的切片厚度為10±5?um。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述降低組織自發(fā)熒光的方法，其特征在于，所述固定處理所用試劑為70?vol%的甲醇溶液，處理溫度為-20±5℃，處理時(shí)間為30-60min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述降低組織自發(fā)熒光的方法，其特征在于，所述滲透處理所用試劑為1±0.1?vol%的sds溶液，處理時(shí)間為1.5-3min。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任意一項(xiàng)所述降低組織自發(fā)熒光的方法，其特征在于，選用的染色劑包括dapi溶液。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述降低組織自發(fā)熒光的方法，其特征在于，染色時(shí)間為4-6min。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及生物組織樣本制作技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種降低組織自發(fā)熒光的方法。在本發(fā)明提供的降低組織自發(fā)熒光的方法中，組織樣本依次經(jīng)固定處理和滲透處理后，還包括降噪處理步驟。所述降噪處理針對(duì)不同組織類型可采用不同的背景清除試劑及處理方法，能有效排除假陽(yáng)性信號(hào)干擾，降低組織自發(fā)熒光，實(shí)現(xiàn)相關(guān)熒光信號(hào)的精準(zhǔn)檢測(cè)。

技術(shù)研發(fā)人員：鄭洪坤,劉敏,張夢(mèng)龍,李佳
受保護(hù)的技術(shù)使用者：青島百創(chuàng)智能制造技術(shù)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21