本發(fā)明屬于食品檢測，具體涉及一種利用斑馬魚模型快速評價(jià)抑制升糖功效的方法。

背景技術(shù)：

1、隨著我國人民生活水平的提高，人們的日常飲食中攝入的精制碳水量也日益增高，過量碳水化合物的攝入是導(dǎo)致超重、肥胖和糖尿病等代謝性疾病的主要原因之一。面對逐年上升的肥胖率及肥胖引起的代謝性疾病發(fā)病率的升高，控制精制碳水化合物的攝入量是治療肥胖及糖尿病等代謝性疾病的重要策略之一。

2、近年來，人們的健康意識也不斷提高，肥胖或糖尿病患者常借助藥物或功能性食品控制碳水化合物攝入量，包括選擇食用低升糖指數(shù)、高飽腹感的食物替代傳統(tǒng)的高升糖指數(shù)的食物、食用白蕓豆提取物等淀粉酶阻斷劑來減少碳水化合物，甚至注射或服用司美格魯肽等藥物來抑制食欲，從而減少能量攝入，但司美格魯肽作為一種新型藥物，存在胃腸道不良反應(yīng)、引發(fā)低血糖、急性胰腺炎等風(fēng)險(xiǎn)。對于大多數(shù)具有控制碳水化合物攝入量需求的人群而言，通過食用阻斷碳水化合物吸收的功能食品是一種更低風(fēng)險(xiǎn)，高性價(jià)比的方式。目前，市面上在售的碳水阻斷劑種類繁多，質(zhì)量良莠不齊，消費(fèi)者如何選擇一款具有良好的阻斷碳水化合物吸收的產(chǎn)品是一個(gè)難題。對于功能食品制造商而言，宣稱具有阻斷碳水吸收、抑制食物升糖的原料數(shù)量也十分龐大，因此，如何從海量的原料中篩選出較優(yōu)的原料進(jìn)行配方設(shè)計(jì)也是一個(gè)需要攻克的難題。

3、目前，常規(guī)的評價(jià)抑制食物升糖能力的方法主要包括人體的血糖測試（《ws/t652-2019食物血糖生成指數(shù)測定方法》）、小鼠的口服糖耐量實(shí)驗(yàn)、體外的α-淀粉酶或α-葡萄糖苷酶的酶活抑制評價(jià)實(shí)驗(yàn)。人體或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)存在檢測周期長、成本高、實(shí)驗(yàn)操作要求高等問題。而體外的α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶等酶活實(shí)驗(yàn)僅在體外水平檢測抑制酶活的能力，并不能全面反應(yīng)阻斷碳水吸收類產(chǎn)品對生命體抑制升糖能力的整體評價(jià)。

4、斑馬魚作為一種新型的模式生物，其基因與人類基因的同源性高達(dá)87%，是保健品或功能性食品的一種重要評價(jià)模型。中國發(fā)明專利申請cn116508687a公開了一種用于測試升糖指數(shù)的斑馬魚模型的構(gòu)建方法，利用斑馬魚模型測試了葡萄糖、大米、蕎麥面等碳水化合物的升糖指數(shù)，但該法沒有提出如何評價(jià)阻斷碳水類功能原料或食品的評價(jià)方法。

5、劉均等人在“基于斑馬魚模型評價(jià)白茶的降糖作用”（現(xiàn)代食品科技，2023，39(3):45-54）中以葡萄糖和四氧嘧啶聯(lián)合誘導(dǎo)斑馬魚的糖尿病模型，評價(jià)了白茶對于糖尿病斑馬魚的降糖作用，該模型同樣不適用于評價(jià)原料或產(chǎn)品阻斷碳水化合物吸收的效果。

6、中國發(fā)明專利申請cn117491323a公開了一種利用斑馬魚模型快速評價(jià)抗糖化功效的方法，所述方法包括：選取受精后48-72小時(shí)的斑馬魚幼魚，置于含有糖化誘導(dǎo)試劑和待測樣品的斑馬魚培養(yǎng)基中，在25-29℃條件下培養(yǎng)6-28小時(shí)；測定斑馬魚培養(yǎng)基中晚期糖化終末產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度，以相對熒光強(qiáng)度表征待測樣品的抗糖化功效。所述糖化誘導(dǎo)試劑為丙酮醛、乙二醛、3-脫氧葡萄糖醛酮、葡萄糖、果糖中的一種或多種。但是該發(fā)明是利用斑馬魚評價(jià)抗糖化原料抑制糖對肌膚真皮層膠原蛋白、彈力蛋白的糖化效果，不適用于評價(jià)一些原料阻斷大分子碳水吸收的功效。

7、因此，開發(fā)一種檢測快速、成本低廉的評價(jià)阻斷碳水化合物吸收能力的體內(nèi)方法具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種利用斑馬魚模型快速評價(jià)抑制升糖功效的方法技術(shù)，提供一種操作簡單快速、檢測成本低、能實(shí)現(xiàn)大批量操作的評價(jià)產(chǎn)品阻斷碳水吸收、抑制食物升糖的方法。

2、為了達(dá)到本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明采用的具體技術(shù)方案為：

3、一種利用斑馬魚模型快速評價(jià)抑制升糖功效的方法，包括以下步驟：

4、（1）選取受精后5-7天的斑馬魚幼魚分別置于養(yǎng)殖用水中，設(shè)置空白對照組、模型對照組、陽性對照組和待測樣品組，其中模型對照組、陽性對照組和待測樣品組中均加入麥芽糊精，進(jìn)行培養(yǎng)；

5、（2）測定斑馬魚體內(nèi)葡萄糖含量，以相對葡萄糖含量表征待測樣品的抑制升糖功效。

6、優(yōu)選地，所述斑馬魚為ab品系斑馬魚，各組中斑馬魚幼魚的數(shù)量為15-30尾。

7、優(yōu)選地，所述麥芽糊精在養(yǎng)殖用水中的質(zhì)量濃度為4%-8%。

8、優(yōu)選地，所述養(yǎng)殖用水的原料包括去離子水、人工海鹽和碳酸氫鈉。

9、進(jìn)一步優(yōu)選地，所述養(yǎng)殖用水中人工海鹽的質(zhì)量濃度為350-450mg/l，所述碳酸氫鈉的質(zhì)量濃度為150-250mg/l。

10、優(yōu)選地，所述培養(yǎng)的溫度為26.5-28.5℃，培養(yǎng)的時(shí)間為23-25h。

11、優(yōu)選地，步驟（1）中陽性對照組中還加入阿卡波糖，待測樣品組中還加入待測樣品，所述待測樣品為食品或其有效成分。

12、優(yōu)選地，步驟（2）中測定斑馬魚體內(nèi)葡萄糖含量的方法包括以下步驟：

13、收集各組的全部斑馬魚，水洗，pbs溶液洗滌，然后加入pbs溶液，冷凍麻醉致死，勻漿，離心，取上清液，用葡萄糖檢測試劑盒檢測各組的葡萄糖含量，用酶標(biāo)儀檢測波長在500-510nm處的吸光值，重復(fù)測試，取平均值。

14、優(yōu)選地，步驟（2）中所述相對葡萄糖含量的計(jì)算公式為：

15、葡萄糖相對含量=待測樣品吸光度平均值/空白對照樣品吸光度平均值×100。

16、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

17、（1）相比常規(guī)的用于評價(jià)食物升糖指數(shù)或評價(jià)產(chǎn)品抑制食物升糖能力的人體或動(dòng)物模型的檢測方法，本發(fā)明方法具有檢測時(shí)間短，操作簡便、檢測成本低、可實(shí)現(xiàn)大批量操作的優(yōu)勢，可進(jìn)行不同原料阻斷碳水吸收能力的橫向?qū)Ρ取?/p>

18、（2）相比常規(guī)的用于評價(jià)阻斷碳水吸收類產(chǎn)的體外酶活方法，本發(fā)明方法利用與人類基因同源性高的斑馬魚模型，在動(dòng)物體內(nèi)可更全面反應(yīng)阻斷碳水吸收類產(chǎn)品對生命體抑制升糖能力的整體評價(jià)。

19、（3）相比已有的以葡萄糖為主要的升糖誘導(dǎo)劑的斑馬魚高糖模型，本發(fā)明方案首次引入以麥芽糊精為升糖誘導(dǎo)劑的高糖模型，以阿卡波糖作為陽性對照，本發(fā)明采用斑馬魚模型可實(shí)現(xiàn)對阻斷碳水吸收類產(chǎn)品的功效評價(jià)，而已有的以葡萄糖為升糖誘導(dǎo)劑的斑馬魚模型不能實(shí)現(xiàn)阻斷碳水吸收類產(chǎn)品的功效評價(jià)。

技術(shù)特征：

1.一種利用斑馬魚模型快速評價(jià)抑制升糖功效的方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述斑馬魚為ab品系斑馬魚，各組中斑馬魚幼魚的數(shù)量為15-30尾。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述麥芽糊精在養(yǎng)殖用水中的質(zhì)量濃度為4%-8%。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述養(yǎng)殖用水的原料包括去離子水、人工海鹽和碳酸氫鈉。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述養(yǎng)殖用水中人工海鹽的質(zhì)量濃度為350-450mg/l，所述碳酸氫鈉的質(zhì)量濃度為150-250mg/l。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)的溫度為26.5-28.5℃，培養(yǎng)的時(shí)間為23-25h。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中陽性對照組中還加入阿卡波糖，待測樣品組中還加入待測樣品，所述待測樣品為食品或其有效成分。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中測定斑馬魚體內(nèi)葡萄糖含量的方法包括以下步驟：

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中所述相對葡萄糖含量的計(jì)算公式為：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用斑馬魚模型快速評價(jià)抑制升糖功效的方法。所述方法包括以下步驟：（1）選取受精后5?7天的斑馬魚幼魚分別置于養(yǎng)殖用水中，設(shè)置空白對照組、模型對照組、陽性對照組和待測樣品組，其中模型對照組、陽性對照組和待測樣品組中均加入麥芽糊精，進(jìn)行培養(yǎng)；（2）測定斑馬魚體內(nèi)葡萄糖含量，以相對葡萄糖含量表征待測樣品的抑制升糖功效。本發(fā)明方法具有檢測時(shí)間短，操作簡便、檢測成本低、可實(shí)現(xiàn)大批量操作的優(yōu)勢，可進(jìn)行不同原料阻斷碳水吸收能力的橫向?qū)Ρ取?br/>
技術(shù)研發(fā)人員：鄧昌勇,史慧茹,鄭雅丹
受保護(hù)的技術(shù)使用者：浙江衡美健康科技股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21