專利名稱：：自動血球計數(shù)儀配套試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及血液分析的一種材料，特別是一種與自動血球計數(shù)儀配套的試劑。目前，國內(nèi)各級醫(yī)院使用的自動血球計數(shù)儀，所用配套試劑，全部依賴原儀器生產(chǎn)廠家供應(yīng)，而該試劑配方又被廠家保密，國內(nèi)尚未開發(fā)生產(chǎn)，各使用單位，都要進(jìn)口配套試劑，價格昂貴，使檢驗成本大大提高。本發(fā)明目的在于提供一種可與幾個主要系列半自動血球計數(shù)儀和全自動血球計數(shù)儀配套使用的試劑，該試劑包括血液細(xì)胞稀釋液、溶血劑和儀器管道清潔劑。本發(fā)明的指導(dǎo)思想該試劑用于臨床測定7個項目結(jié)果，即WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC，其中后三種結(jié)果是由前面的結(jié)果經(jīng)機(jī)內(nèi)電腦計算得出，故在研制和調(diào)查數(shù)據(jù)時只考慮前4項結(jié)果因素，血液標(biāo)本加入稀釋液中，使血細(xì)胞呈混懸狀態(tài)，其形態(tài)不變，基本保持體內(nèi)環(huán)境，故對試劑的基本要求如下1、血液細(xì)胞對試劑的要求(1)對稀釋液的要求①穩(wěn)定而等滲的滲透壓②適宜的PH和比重、粘度③良好的導(dǎo)電性能(2)對溶血劑要求白細(xì)胞破壞迅速、完全，并保持HGB的穩(wěn)定性。(3)對清潔劑要求去污力強(qiáng)，管道清潔干凈、徹底，不影響稀釋液理化性質(zhì)。2、儀器對試劑要求，要求試劑無色、無污染、無顆粒，性質(zhì)穩(wěn)定。本底要求WBC±0.3RBC±0.16HGB±0.30HCT±0.10％因此，本發(fā)明的配套試劑配方為配方一(1)血液細(xì)胞稀釋液(每10000ml試劑中所含組份量)氯化鈉50～90g氯化鉀1～5g磷酸氨二鈉50～90g磷酸二氫鉀4～8g乙二胺四乙酸二鈉20～50g余量為蒸餾水。(2)溶血劑(每1000ml試劑中所含組份量)十六烷三甲基溴化銨30～60g異丙醇100～300ml氰化鉀20～50mg余量為蒸餾水。(3)儀器管道清潔劑(每1000ml試劑中組份含量)上述血液細(xì)胞稀釋液940～980ml吐溫8010～30ml次氯酸鈉10～30ml配方二(1)血液細(xì)胞稀釋液氯化鈉50～90g氯化鉀1～5g碳酸氫鈉10～30g肝素1～10萬單位余量為蒸餾水。(2)溶血劑十二烷三甲基氯化銨30～60g異丙醇50～200ml吐溫8050～200ml余量為蒸餾水。(3)儀器管道清洗劑(每1000ml試劑中組份量)上述血液細(xì)胞稀釋液940～980ml吐溫8010～30ml次氯酸鈉10～30ml在試劑的研制過程中，發(fā)明人根據(jù)指導(dǎo)思想的要求，先后經(jīng)過近百次實驗，選出配方和生產(chǎn)工藝，反復(fù)實驗，不斷改進(jìn)提高，使試劑各項性能和本底完全符合試驗項目要求，并進(jìn)行了理化性質(zhì)的對比實驗，其各種試驗數(shù)據(jù)如下1、與日本光電公司原裝試劑理化性質(zhì)對比實驗結(jié)果方法(1)滲透壓和比重用折射儀測定(2)PH用酸度計測定(3)粘度用粘度計測定(4)導(dǎo)電性用檢流計測定表1兩種試劑理化特性對照表</tables>2、兩種試劑對比試驗結(jié)果方法任意采取100份標(biāo)本，均為雙份，1份用進(jìn)口試劑測定，另一份用研制試劑測定，各自記錄結(jié)果，作統(tǒng)計學(xué)處理，求出t值，P，比較測定結(jié)果的差異。表2兩種試劑對比試驗結(jié)果</tables>3、研制試劑的重復(fù)性實驗方法用定值全血質(zhì)控物作批內(nèi)重食性實驗，取10份同批號定值全血質(zhì)控物10ul，精確加入稀釋液5ml，上機(jī)稀釋后，測定RBC、HCT，然后在稀釋的紅細(xì)懸液中加入溶血劑3滴，3秒鐘紅細(xì)胞完全溶解，上要測定WBC、HCB，測定完畢，記錄結(jié)果，求出X、SD、CV。表3研制試劑的重復(fù)性實驗結(jié)果4、研制試劑的線性試驗方法配制不同濃度的定值全血質(zhì)控物表4將配成的已知濃度標(biāo)本上機(jī)測定，打印出雙份結(jié)果，求出X，每測定1份標(biāo)本，沖洗管道3次，以所得結(jié)果為縱坐標(biāo)，已知濃度為橫坐標(biāo)，觀察線性。圖1WBC線性試驗圖標(biāo)本W(wǎng)BC×109/L12.123.634.0545.3圖2RBC線性試驗圖標(biāo)本RBC×1012/L10.84521.6932.42543.29圖3HCB線性試驗圖標(biāo)本HCBg/L12.2525.1537.149.45圖4HCT線性試驗圖標(biāo)本HCT％111.3220.6328.6439.15、溶血劑的溶血性能測定方法將兩種溶血劑按倍比稀釋至1∶1～1∶8192，分別加入5％的紅細(xì)胞懸液3滴，觀察溶血程序和速度。表5兩種溶血劑溶血性能對比結(jié)果6、精密度試驗方法用本發(fā)明試劑對下述被檢物同時進(jìn)行10次測定，每測定1次，清洗管道3次，結(jié)果如下表6本發(fā)明試劑特異性試驗結(jié)果7、血紅蛋白穩(wěn)定性試驗結(jié)果方法將1∶500稀釋的紅細(xì)胞懸液每5ml加入溶血劑3滴，分別在不同時間測定血紅蛋白量，以觀察其穩(wěn)定性。表7血紅蛋白穩(wěn)定性試驗結(jié)果</tables>8、稀釋液對細(xì)胞形態(tài)影響觀察試驗方法將研制的稀釋液中加入10ul末稍血液，程1∶500稀釋在不同時間用高倍視野觀察血細(xì)胞形態(tài)，以測定血細(xì)胞在稀釋中的穩(wěn)定性。結(jié)果兩種試劑分別觀察24小時，血液細(xì)胞形態(tài)均無改變，數(shù)量無下降。根據(jù)以上實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的自動血球計數(shù)儀配套試劑與日本原裝試劑相比較，其滲透壓、比重、粘度、PH、導(dǎo)電性試驗結(jié)果均在允許范圍之內(nèi)，線性試驗提示線性良好，溶血劑溶血性能和靈敏度、特異性均符合試劑要求，HCB穩(wěn)定性、血液細(xì)胞穩(wěn)定性良好，血細(xì)胞形態(tài)無改變，并送上級和兄弟醫(yī)院在不同型號儀器使用，其分布圖顯示良好。經(jīng)國家藥檢部門化驗，其滲透壓、比重、粘度、PH值、導(dǎo)電性能等項指標(biāo)達(dá)到和接近進(jìn)口試劑標(biāo)準(zhǔn)，可完全替代進(jìn)口試劑應(yīng)用于臨床。本發(fā)明試劑與進(jìn)口試劑相比，配制生產(chǎn)工藝簡單，原料可就地解決，化驗成本降低80％，大大減輕了患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，具有明顯經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。實施例以下所選各組份均要求分析純，用分析天平精確稱取。配方一1、血液細(xì)胞稀釋液氯化鈉57.5g氯化鉀1.0g磷酸氫二鈉60g磷酸二氫鉀5.7g乙二胺四乙酸二鈉25g分別用蒸餾水溶解后混合，稀釋至10000ml，用施氏濾器正壓過濾微孔濾膜0.45um，過濾后目測，試劑透明清亮，無沉淀、顆粒、絮狀物，背累計數(shù)Hb、RBC、HCT均為“0”，WBC為0.0-0.1×109/L，PH6.5，滲透壓1.33415～1.33420m/L，比重1.003，電阻30Ω，粘度0.93，各項指標(biāo)均合格，封存嚴(yán)密，標(biāo)明產(chǎn)品名稱、批號、效期及保存條件、注意事項、附說明等。2、溶血劑a、十六烷三甲基溴化銨50gb、異丙醇200mlc、氯化鉀30mg將組份b加入組份a中，再加適量蒸餾水，待溶解后，加組份c，溶解后加蒸餾水稀釋液至1000ml、0.45um微孔，施氏濾器過濾后，目測試劑清亮透明，無沉淀和絮狀物，背累計數(shù)Hb為0，WBC0.2×109/L以下，檢測合格后分裝。3、儀器管道清洗劑用上述血液細(xì)胞稀釋液960ml，加非離子表面活性劑吐溫8020ml，次氯酸鈉20ml，為了區(qū)別，可加少量染料呈有色液體，按上述方法過濾，檢測標(biāo)準(zhǔn)同前，分裝，包裝要求同前。此配方一試劑分別適用于MEK系列、F系列、K系列、T系列、HC等系列半自動血球計數(shù)儀使用。配方二1、血液細(xì)胞稀釋液氯化鈉61.425g氯化鉀3.725碳酸氫鈉20g肝素5萬單位前三種分別用適量蒸餾水溶解后，混合搖勻，再加入肝素，用蒸餾水稀釋至10000ml，過濾同配方一，檢測標(biāo)準(zhǔn)PH7.0～7.3，滲透壓305～315mosm/kg，比重1.005～1.008，導(dǎo)電率14.2～14.3ms/cm，粘度0.88～0.92，目測包裝同配方一。2、溶血劑a、十二烷三甲基氯化銨50gb、異丙醇100mlc、吐溫80100ml將組份a加入組份b中，溶解后加蒸餾水適量，再加入組份c，用蒸餾水稀釋至1000ml，過濾，檢測標(biāo)準(zhǔn)、包裝同配方一。3、儀器管道清洗劑取上述血液細(xì)胞稀釋液960ml，加入非離子表面活性劑吐溫8020ml，次氯酸鈉20ml，其過濾、檢測、包裝等均同前。配方二分別運(yùn)用各種系列全自動血液細(xì)胞分類計數(shù)儀使用。權(quán)利要求1.一種自動血球計數(shù)儀配套試劑，其特征在于該試劑中的血液細(xì)胞稀釋液組成為(每10000ml試劑中所含組份量)氯化鈉50～90g氯化鉀1～5g磷酸氫二鈉50～80g磷酸二氫鉀4～8g乙二胺四乙酸二鈉20～50g余量為蒸餾水。2.一種自動血球計數(shù)儀配套試劑，其特征在于該試劑中的溶血劑組成為(每1000ml試劑中所含組份量)十六烷三甲基溴化銨30～60g異丙醇100～300ml氰化鉀20～50mg余量為蒸餾水。3.一種自動血球計數(shù)儀配套試劑，其特征在于該試劑中的儀器管道清潔劑組成為(每1000ml試劑中組份含量)上述血液細(xì)胞稀釋液940～980ml吐溫8010～30ml次氯酸鈉10～30ml4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的自動血球計數(shù)配套試劑，其特征在于該試劑中的血液細(xì)胞稀釋液組成為(每10000ml試劑中所含組份量)氯化鈉50～90g氯化鉀1～5g碳酸氫鈉10～30g肝素1～10萬單位余量為蒸餾水。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的自動血球計數(shù)儀配套試劑，其特征在于該試劑中的溶血劑組成為(每1000ml試劑中所含組份量)十二烷三甲基氯化銨30～60g異丙醇50～200ml吐溫8050～200ml余量為蒸餾水。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的自動血球計數(shù)儀配套試劑，其特征在于該試劑中的儀器管道清潔劑組成為(每1000ml試劑中組份量)權(quán)利要求4所述的血液細(xì)胞稀釋液940～980ml吐溫8010～30ml次氯酸鈉10～30ml全文摘要本發(fā)明是一種與自動血球計數(shù)儀配套的試劑,包括血液細(xì)胞稀釋液、溶血劑和儀器管道清潔劑,本發(fā)明提供了適用于半自動和全自動血球計數(shù)儀的兩個配方的試劑,經(jīng)檢測對比,均達(dá)到國外進(jìn)口試劑要求,其對比試驗七值小2.600、P>0.01,重復(fù)性試驗,SD小于0.6,CV小于4.1%,線性良好,可完全替代進(jìn)口試劑,降低檢驗費(fèi)80%。文檔編號G01N33/48GK1189617SQ9710841公開日1998年8月5日申請日期1997年1月27日優(yōu)先權(quán)日1997年1月27日發(fā)明者石金運(yùn),胡杰申請人:隴縣人民醫(yī)院